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Determination of complanatoside A in Semen Astragali Complanati by HPLC

HPLC测定沙苑子中沙苑子苷A的含量



全 文 :‹°≤测定沙苑子中沙苑子苷 „的含量
张建军t 3 o闫兴丽t o张玉杰t o王玉萍u o张秋菊t o曾凤英t o李 伟t o欧丽娜t
kt1 北京中医药大学 o北京 tsssu| ~
u1 中国医学科学院 中国协和医科大学 药用植物研究所 o北京 tsss|wl
≈摘要  目的 }建立沙苑子中沙苑子苷 „的含量测定方法 ∀方法 }运用高效液相色谱法测定 ∀色谱柱为 ’• 2
…„÷ ∞÷×∞‘⁄2≤t{kw1y °° ≅ uxs °° ox Λ°l o流动相乙腈2水2磷酸kusΒ{sΒs1ul o测定波长 uyz ±° ∀结果 }沙苑子苷 „在
s1s{y ∗ s1wvs Λª呈良好的线性关系 o加样回收率为 ||1{ h o• ≥⁄t1s h ∀结论 }本法灵敏 !快速 !准确 o可用于测定沙
苑子中沙苑子苷 „的含量 ∀
≈关键词  沙苑子 ~沙苑子苷 „ ~高效液相色谱法k‹°≤l ~含量测定
≈中图分类号  • u{w qt ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussxls{2syss2sv
≈收稿日期  ussw2tt2sx
≈基金项目  国家 / 九五0重点科技攻关计划项目k||2|u|2st2
su|l
≈通迅作者  3 张建军 oר¯ }kstslywu{y||v o∞2°¤¬¯}½¼¯¤¥us{ ƒ
tyv1¦²°
沙苑子为豆科植物扁茎黄芪 Αστραγαλυσ χοµ2
πλανατυσ • 1…µ的干燥成熟种子≈t  ∀分布于东北 !华
北及西北≈u  ∀本品始载于5神农本草经6 o味甘性温 o
归肝 !肾经 o具有温补肝肾 !固经 !缩尿 !明目等功效 ∀
用于肾虚腰痛 !遗精早泄 !白浊带下 !小便余沥 !眩晕
目昏等病症≈t  ∀文献报道 o沙苑子对血液流变 !免疫
功能 !血压和脑血流量均有影响 o并且还有解热镇
痛 !镇静 !耐寒 !抗疲劳 !抗炎和降脂保肝的作用≈v  ∀
沙苑子中所含的化学成分主要有氨基酸 !黄酮类 !三
萜类 !脂肪酸以及微量元素等≈w  ∀关于沙苑子中黄
酮类化学成分的研究有如下报道 }薛智等从沙苑子
中分离到鼠李柠檬素 v owχ2 Ο2Β2 ∆2双葡萄糖苷 o命名
为沙苑苷 „k¦²°³¯¤±¤·²¶¬§¨ „l o及鼠李柠檬素 v2 Ο2
≈ ∆2Β2 ∆2呋喃芹糖kt ψ ul Β2 ∆2葡萄糖 wχ2 Ο2Β2 ∆2葡
萄糖苷 o命名为沙苑苷 …k¦²°³¯¤±¤·²¶¬§¨ …l≈x  ∀陈妙
华等同时从沙苑子中分得上述前种成分 o命名为沙
苑子苷k¦²°³¯¤±¤·²¶¬§¨ l≈y  ∀崔宝良等分离出沙苑子
新苷 k±¨ ²¦²°³¯¤±²¶¬§¨ l和沙苑子杨梅苷 k °¼µ¬¦²°2
³¯¤±²¶¬§¨l等 {个化合物≈z  ∀但迄今为止还没有关于
沙苑子中黄酮类单一成分 ‹°≤ 含量测定的报道 o
5中国药典6usss年版中沙苑子项下亦未收载该药
的含量测定方法 ∀
本实验以沙苑子苷 „为对照品 o建立了沙苑子
药材中沙苑子苷 „的 ‹°≤ 含量测定方法 o为沙苑
子的质量控制规范化 !标准化提供了依据 ∀
1 仪器与材料
• ¤·¨µ¶高效液相色谱仪 k²§¨¯ xtsl o超声波清
洗机 ×≤± p uxsk北京医疗设备二厂l ∀流动相用水
为双蒸水 o乙腈为色谱纯 o其余为分析纯 ∀不同产地
或收集地的药材沙苑子 o共 tt批 ∀由北京中医药大
学中药学院张玉杰老师鉴定 o确认为 Α1 χοµπλανα2
τυσ∀药材经粉碎机打粉 o过 ws目筛 ∀
沙苑子苷 „对照品自制 o由沙苑子药材中分离
纯化得到 o经红外 !紫外 !核磁 !质谱鉴定为鼠李柠檬
素 v owχ2 Ο2Β2 ∆2双葡萄糖苷 o参考现行版药典的命名
原则及最先报道的命名 o即沙苑子苷 „ 来命名 o并
用 ‹°≤面积归一化法测定 o其纯度为 ||1t h ∀
2 实验方法与结果
211 色谱条件
色谱柱为 ’• …„÷ ∞÷×∞‘⁄2≤t{kw1y °° ≅ uxs
°° ox Λ°l ~流动相乙腈2水2磷酸kusΒ{sΒs1ul ~检测
波长 uyz ±° ~流速 t1s °#°¬±pt ~柱温为室温 ∀
212 对照品与供试品溶液的制备
21211 对照品溶液的制备 精密称取沙苑子苷 „
对照品 o加 xs h乙醇超声溶解 o制成每 t °含 s1v
°ª的溶液 o再稀释成每 ¯ °含 s1ssz x °ª的溶液 o
摇匀 o即得 ∀
21212 供试品溶液的制备 取沙苑子药材 o粉碎 o
过 ys目筛 o精密称取 s1w ªo装入滤纸包 o置沙氏提
#ssy#
第 vs卷第 {期
ussx年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs oŒ¶¶∏¨ {
„³µ¬¯oussx
取器中 o加石油醚 xs °o脱脂 v «o滤纸包挥去石油
醚 o撕开滤纸筒 o连同内容物一起放入 xs °三角瓶
中 o精密加入 ys h 乙醇 ux °o密塞 o超声提取 vs
°¬±o滤过 o取续滤液 o即得 ∀
213 系统适用性试验
依上述色谱条件 o分别精密吸取对照品溶液与
供试品溶液各 us ˏo注入高效液相色谱仪 o记录色
谱图 ∀见图 t ∀理论塔板数按沙苑子苷 „峰计算应
不低于 u sss ∀
通过 „ª¬¯¨ ±·ttss 二极管阵列检测器k⁄„⁄l检
测样品 o对样品中沙苑子苷 „ 峰进行了纯度检查 o
其光谱重叠程度好 o纯度因子 k³∏µ¬·¼ ©¤¦·²µl为
|||1yst o大于设定的阈值k׫µ¨¶«²¯§l||s o结果表明 o
样品中沙苑子苷 „峰纯度较好 ∀
图 t 沙苑子 ‹°≤ 色谱图
„1 沙苑子苷 „对照品 ~…1 沙苑子药材 ~t1沙苑子苷 „
214 线性关系考察
精密称取沙苑子苷 „对照品 o用 xs h乙醇超声
溶解 o配制成 s1sut x °ª#°pt沙苑子苷 „的对照品
溶液 ∀分别精密吸取 w o{ otu oty ous ˏ注入液相色
谱仪 o按上述色谱条件进行分析 o测定峰面积 o绘制
标准曲线 o结果表明沙苑子苷 „在 s1s{y ∗ s1wvs Λª
呈线性关系 o其回归方程为 Ψ€ v wwu n y {uw sss Ξ o
ρ€ s1||| | ∀
215 精密度试验
精密吸取对照品溶液进样 o重复 x次 o求得峰面
积相对标准偏差 • ≥⁄为 s1yx h ∀
216 稳定性试验
取对照品溶液和样品溶液 o于 s ou ow o{ ouw ow{ «
分别依法测定 o其 • ≥⁄分别为 s1yu h ot1v h ∀表明
对照品溶液及样品溶液在 w{ «内稳定 ∀
217 重复性试验
依法对同一产地k陕西渭南l药材进行 x次测
定 o沙苑子苷 „平均含量为 s1|tz y °ª#ªpt ∀求得
相对标准偏差 • ≥⁄为 t1x h o表明重复性良好 ∀
218 回收率试验
精密称取已知含量的同一样品 s1u ªo分别精密
加入沙苑子苷 „对照品 s1tx °ªo依法测定 o并按以
下公式计算回收率 o结果见表 t ∀结果表明本法具
有良好的回收率 ∀
表 t 沙苑子苷 „回收率
测得量rª 回收率r h 平均值r h • ≥⁄r h
s1vuz w tss1|
s1vuu x ||1t
s1vuw y ||1v ||1{ t1s
s1vxt u tss1|
s1vuu w |{1|
注 }加入量均为 s1txs s °ª
219 样品测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 us
ˏo注入高效液相色谱仪 o依上述色谱条件 o对采集
到的 tt种商品沙苑子测定 o以外标法计算含量 o测
定结果见表 u ∀
表 u 不同地区沙苑子中沙苑子苷 „的含量
编号 地区 含量r h
t 青海西宁 s1s{z x
u 天津 s1sxs z
v 内蒙古赤峰 s1sxv t
w 新疆乌鲁木齐 s1sw| v
x 陕西宝鸡 s1syy z
y 浙江缙云 s1sx| {
z 陕西大荔 s1svv x
{ 甘肃平地 s1suv y
| 陕西渭南 s1s|t {
ts 甘肃金昌 s1stw v
tt 宁夏银川 s1swz w
注 }按干燥品计算
3 讨论
311 实验观察沙苑子总黄酮对血脂变化的影响 o表
明沙苑子总黄酮有明显的降低血清胆固醇 o甘油三
脂作用 o有降脂保肝的作用≈{  ∀此外 o还可在不改变
动物心输出量的情况下 o通过降低外周阻力来导致
血压尤其是舒张压的下降 o具有血管紧张素转换酶
抑制剂的类似作用≈|  ∀魏氏等学者研究表明 o沙苑
子还有明显的保肝作用 o黄酮类部位有显著降低
≥Š°× o并增加模型动物降低了的肝糖原≈ts  ∀薛智等
研究发现 o沙苑苷 „ 有较明显的抗血小板聚集作
用≈x  ∀可见 o沙苑子总黄酮是沙苑子中主要的生物
活性部位 o此外 o在已进行的沙苑子的指纹图谱的研
究中 o不同地区商品的沙苑子苷 „ 均表现为强
峰≈tt  o故选择黄酮类成分中含量较高的沙苑子苷 „
作为沙苑子的指标性成分 ∀
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第 vs卷第 {期
ussx年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs oŒ¶¶∏¨ {
„³µ¬¯oussx
312 沙苑子苷 „对照品自制 o分别采用薄层色谱法
ku 种展开系统l !惯效液相色谱法k紫外检测器 !
⁄„⁄检测器l等不同方法对对照品纯度进行检查 o
曾选取了甲醇2水2磷酸及乙腈2水2磷酸不同配比的
流动相进行测定 o结果表明对照品纯度均达到 || h
以上 o可供含量测定用 ∀
313 最佳检测波长的选择 紫外扫描检测沙苑子
苷 „对照品溶液在 utx ouyz ovtx ±°处有最大吸收 o
分别在 v个波长下取 us ˏ注入液相色谱仪 o其峰
面积分别为 yt {zx xvs oyx syy |tt ows {ut ||v ∀结果
表明 }uyz ±°处吸收最大 o故确定测定波长为 uyz
±°∀
314 样品脱脂时间的选择 沙苑子为种子类药材 o
其中含较多的脂溶性成分 o干扰测定 ∀本实验样品
制备采用了石油醚脱脂 o通过对不同脱脂时间的比
较 o结果确定脱脂时间为 v «为佳 ∀
315 样品提取条件的选择 以沙苑子苷 „的含量
为指标 o对提取乙醇的浓度和超声时间进行了选择 o
结果表明 oys h乙醇含量最高 o故采用 ys h乙醇超
声提取 vs °¬±∀
316 为验证本含测方法的耐用性 o本实验除了用
• ¤·¨µ¶k²§¨¯xtsl高效液相色谱仪以外 o还应用岛
津 ≤ p ts„ o „ª¬¯¨ ±·ttss ¶¨µ¬¨¶以及 …¨ ¦®°¤± tts{
高效液相色谱仪等不同仪器对同一沙苑子样品进行
了含量测定 o其含量分别为 s1s|t u h os1s|v t h o
s1s{{ u h os1s|s x h ∀ • ≥⁄为 t1| h ∀结果表明 o该
方法稳定 o准确 o耐用性好 o可操作性强 ∀
317 对收集的 tt个市售品种 o经北京中医药大学
中药学院中药鉴定系鉴定 o确认为正品 ∀以沙苑子
苷 „为指标对其进行含量测定 o根据所测结果 o沙
苑子中沙苑子苷 „的含量在 s1st h ∗ s1s| h ∀沙苑
子又名沙蒺藜 !潼蒺藜 ∀ 5增订伪药条辨6曰 }/按沙
蒺藜七月出新 o陕西潼关外出者 o名潼蒺藜 o色红带
黑 o形如腰子 o饱绽性糯 o味厚气香 o滚水泡之 o有芳
香气者为最佳 ∀0在收集的样品中 o陕西渭南沙苑子
系渭南沙苑种植基地采购 o沙苑子苷 „ 的含量最
高 o与我国古代确认的道地药材相吻合 ∀
≈参考文献 
≈t  中国药典 1 一部 1usss1twx1
≈u  楼之岑 o秦 波 1 常用中药材品种整理和质量研究k北方编l1
第 v册 1 北京 }北京医科大学中国协和医科大学联合出版社 o
t||y1uzz1
≈v  李昌勤 1沙苑子化学成分及药理作用研究进展 1 时珍国医国
药 ousss ottkttl }tswt1
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≈y  陈妙华 o刘凤山 1 沙苑子化学成分的研究 µ1 药学学报 ot|{{ o
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≈z  崔宝良 o陆蕴茹 o魏璐雪 1 沙苑子化学成分研究 1 药学学报 o
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动力学影响 1 中国中药杂志 oussu ouzkttl }{xx1
≈ts  魏德全 1沙苑子煎剂对动物肝脏代谢功能的影响 1 西北药学
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≈tt  张玉洁 o张建军 o闫兴丽 o等 1 不同产地正伪品沙苑子 ‹°≤指
纹图谱鉴别研究 1中国中药杂志 oussv ou{k|l }{us1
∆ετερµινατιον οφ χοµ πλανατοσιδε Α ιν Σεµεν Αστραγαλι Χοµ πλανατι βψ ΗΠΛΧ
‹„‘Š ¬¤±2­∏±t o ≠„‘÷¬±ª2¯¬t o‹„‘Š ≠∏2­¬¨t o • „‘Š ≠∏2³¬±ªu o‹„‘Š ±¬∏2­∏t o∞‘Š ƒ ±¨ª2¼¬±ªt oŒ • ¬¨t o ’˜ ¬2±¤t
(t1 Βειϕινγ Υνιϖερσιτψ οφ Χηινεσε Τραδιτιοναλ Μεδιχινε , Βειϕινγ tsssu| , Χηινα ;
u1 Ινστιτυτε οφ Μεδιχιναλ Πλαντ ∆εϖελοπµεντ , Χηινεσε Αχαδεµψ οφ Μεδιχαλ Σχιενχεσ ανδ
Πεκινγ Υνιον Μεδιχαλ Χολλεγε , Βειϕινγ tsss|w , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ ¶¨·¤¥¯¬¶«·«¨ §¨·¨µ°¬±¤·¬²± ° ·¨«²§©²µ¦²°³¯¤±¤·²¶¬§¨ „ ¬± ¶¨ §¨¶²© „¶·µ¤ª¤¯∏¶¦²°³¯¤±¤·∏¶1 Μετηοδ : „±
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[ Κεψ ωορδσ] ≥¨ ° ±¨ „¶·µ¤ª¤¯¬≤²°³¯¤±¤·¬~¦²°³¯¤±¤·²¶¬§¨ „ ~ ‹°≤ ~¤¶¶¤¼ ≈责任编辑 李 禾 
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第 vs卷第 {期
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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