全 文 ：山柰酚拮抗血小板活化因子与其受体结合的作用
臧宝霞 3 o金 鸣 o吴 伟 o陈文梅 o朴永哲 o李金荣
k北京市心肺血管疾病研究所 首都医科大学 附属北京安贞医院 药理研究室 o北京 tsssu|l
≈摘要  目的 }观察山柰酚对氚标记的血小板活化因子与血小板膜上受体结合作用的影响 o试图证明该药为一
新型血小板激活因子k°„ƒl受体拮抗剂 ∀方法 }以放射配基结合试验观察≈v‹ °„ƒ与家兔血小板受体的特异性结合 ~
分光光度法测定 °„ƒ诱发的血小板黏附强度 ~ƒ∏µ¤2u 荧光分光光度法测定 °„ƒ介导的兔多形核白细胞k°‘¶l内钙离
子浓度的升高 ∀结果 }山柰酚可浓度依赖地抑制 t ou ow ±°²¯#pt≈v‹ °„ƒ与血小板受体的特异性结合 oŒ≤xs分别为 vs q{ o
zw qy o|u qs Λ°²¯#pt ~该药可明显抑制 °„ƒ诱发的兔血小板黏附及 °‘¶内游离钙升高 o且均呈明显的量效关系 o其抑
制血小板黏附的 Œ≤xs为 yx Λ°²¯#pt ∀结论 }山柰酚具抗 °„ƒ的作用 o为一新的 °„ƒ受体拮抗剂 ∀
≈关键词  山柰酚 ~血小板活化因子 ~受体结合试验 ~血小板黏附 ~白细胞内游离钙
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswls{2sz{|2sv
山柰酚k®¤¨ °³©¨µ²¯ oŽ¤¨ l为黄酮醇类化合物 o是
红花成分之一≈t  ∀本研究室曾报道 o山柰酚等红花
黄酮醇可抑制血小板活化因子k³¯¤·¨¯ ·¨¤¦·¬√¤·¬±ª©¤¦2
·²µo°„ƒl介导的兔血小板聚集 !x2‹× 释放及胞浆内
钙离子浓度升高≈u  ∀为进一步探讨 Ž¤¨ 抗 °„ƒ作用
机理 o本研究观察了该药竞争性拮抗 °„ƒ与血小板
膜受体特异性结合的作用 o结合生理功能实验试图
从细胞到分子水平阐明其抗 °„ƒ的机理 ∀
1 材料
1 q1 药品与试剂
Ž¤¨ o纯度  |{ h o购自中国药品生物制品检定
所 o批号 s{yt2||st o以二甲基亚砜k⁄≥’l配成所需
浓度 ~≈v‹ °„ƒ购自 „°¨ µ¶«¤°公司 o批号 usstsuuy o
比活度 x qx| ≅ tsv Š…´ #°°²¯ p t o为浓度 y qyu ≅ tsp y
°²¯#pt的甲苯2乙醇ktΒtl液 o加 v倍体积无水乙醇
配成储备液 p vs ε 保存 o临用前加缓冲液≈v 配成所
需浓度 ∀°„ƒ !明胶kª¨ ¤¯·¬±l均购自 ≥¬ª°¤公司 o°„ƒ
储存液 p us ε 保存 ~牛血清白蛋白k¥²√¬±¨ ¶¨µ∏° ¤¯2
¥∏°¬±o …≥„l为上海丽珠东风生物技术有限公司生
产 o批号 |{s|s| ~ ƒ∏µ¤2u r„ o购自 ≥¬ª°¤公司 o以
⁄≥’配成 t °°²¯#pt溶液分装 op vs ε 保存 o×µ¬2
·²± ÷2tss为 ƒ¤µ¦² ≤«¨ °¬¦¤¯ ≥∏³³¯¬¨¶产品 ~四氯四碘
≈收稿日期  ussv2ts2ts
≈基金项目  北京市自然科学基金项目kzstvsvwl
≈通讯作者  3 臧宝霞 oר¯ } kstslywwxyvs{ o ∞2°¤¬¯}­¬±½¤±ªƒ
³∏¥¯¬¦v q¥·¤q±¨ ·q¦±q
荧光素钠k·¨·µ¤¦«¯²µ²·¨·µ¤¬²§²©¯∏²µ¨¶¦¨¬± §¬¶²§¬∏° ¶¤¯·l
为北京化工厂产品 ~u ox2二苯基 唑ku ox2§¬³«¨ ±¼¯²¬2
¤½²¯¨ o°°’l为香港 ƒ¬¶«¨µ科学有限公司产品 ~t ow2双2
≈u2kx2苯基 唑l 2苯 ≈t ow2¥¬¶2kx2³«¨ ±¼¯2u2²¬¤½²¯¼¯ l2
¥¨ ±½¨ ±¨ o°’°’° 为 ƒ¯ ∏®¤公司产品 ~其他试剂均为国
产分析纯 ∀
1 q2 动物
新西兰家兔 o体重 u ∗ v ®ªo⎯ o购自中国药品生
物制品检定所 o为一级合格动物 ∀
1 q3 仪器
美国Ž… • ¤¯ ¤¯¦tut| • „≤Ž…∞ׄ型液体闪烁计
数器 ~日本 ‹Œ×„≤‹Œ ƒ p usss 型荧光分光光度计 ~
≤«µ²±²p ²¯ª型血小板聚集仪 ~zxx …型分光光度计 o
上海分析仪器总厂 ~uw 孔聚苯乙烯细胞培养板 o
≤²µ±¬±ª≤²¶·¤µ公司 ∀
2 方法
2 q1 Ž¤¨ 抑制≈v‹ °„ƒ与兔血小板受体的特异性结
合实验
参照本研究室方法进行 Ž¤¨ 抑制≈v‹ °„ƒ与血
小板受体结合实验≈w  ∀血小板浓度为 v ≅ tstt# pt o
药物实验管加入不同浓度的 Ž¤¨2ts h ⁄≥’溶液 o
空白对照管加 ts h ⁄≥’溶液 o≈v‹ °„ƒ v 个终浓
度分别为 t ou ow ±°²¯#pt o非特异性结合管中未标
记 °„ƒ浓度为 ≈v‹ °„ƒ 浓度的 ts sss倍 ∀vz ε 反
应 tx °¬±后 o以红光 Šƒ系列玻璃纤维滤纸为分离
材料 o抽滤 !冲洗 !烘干 !检测并计算不同浓度 Ž¤¨ 抑
制≈v‹ °„ƒ与其受体特异性结合的抑制率k ´l ∀
#|{z#
第 u|卷第 {期
ussw年 {月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ {
„∏ª∏¶·oussw
Œ€ ≈k…´ 空总 p …´ Ž¤¨总lrk…´ 空总 p …´ Ž¤¨非特l  ≅ tss h
…´ 空总为空白总结合管计数 o…´ Ž¤¨总为 Ž¨¤总结合管计
数 o…´ Ž¤¨非特为 Ž¤¨ 非特异性结合管计数 ∀
2 q2 Ž¤¨ 抑制 °„ƒ诱发兔血小板的黏附
参照文献≈x 方法制备家兔洗涤血小板k • ¤¶«¨ §
µ¤¥¥¬·³¯¤·¨¯ ·¨o • • °l悬液 o缓冲液为 ×µ¬¶2牛血清白蛋
白台氏液k简称 ×ׅ≥„ o³‹ z qw l o调整血小板浓度
为 | ≅ tstt#pt ∀血小板黏附实验参照文献≈y 方法
进行改进 ∀取 uw孔细胞培养板 o°„ƒ损伤孔加 °„ƒ2
×ׅ≥„溶液及 ⁄≥’各 ts ˏo°„ƒ n 药物孔加不同
浓度药物的 ⁄≥’溶液与 °„ƒ2×ׅ≥„溶液各 ts ˏo
溶剂空白孔加 ⁄≥’及 ×ׅ≥„溶液各 ts ˏo最后各
孔分别加入 • • °悬液 w{s ˏ∀除四氯四碘荧光素
钠k别名玫瑰红l染色液浓度改为 s qux h外 o均按照
文献≈y 方法温育 !染色 !清洗 !破膜 !比色 o并计算
Ž¤¨ 对血小板黏附的抑制率k ´l ∀
Œ€ ≈t p k药物保护管吸光度值 p空白管吸光度值lrk°„ƒ损
伤管吸光度值 p空白管吸光度值l  ≅ tss h
2 q3 Ž¤¨ 抑制兔多形核白细胞k³²¯¼°²µ³«²±∏¦¯ ¤¨µ
¯¨ ∏®²¦¼·¨¶o°‘¶l内游离 ≤¤u n浓度的升高
°‘¶悬液制备参照文献≈z 方法进行改进 ∀全
血与 v h明胶盐水溶液以 vΒt 混匀沉降红细胞 o取
上清 t sssµ#°¬±pt离心 x °¬±o得 °‘¶沉淀 o将其中
红细胞低渗破膜后 t sssµ#°¬±pt再次离心 x °¬±o沉
淀洗涤后用 ‹ ³¨¨¶缓冲液混悬并调整细胞数为 u qx
≅ ts|#pt ∀改进文献≈u 方法测定胞内游离 ≤¤u n浓
度 ∀°‘¶ƒ∏µ¤2u负载改为室温 ws °¬±o负载后 t sss
µ#°¬±pt离心 x °¬±∀测定时取 ƒ∏µ¤2u负载的 °‘¶2
‹ ³¨¨¶悬液 xxs ˏo依次加入 ≤¤≤¯ u溶液 !⁄≥’k°„ƒ
对照管l或不同浓度的 Ž¤¨2⁄≥’ 溶液k°„ƒ n药物
管l !t q| ≅ tsp y °²¯ #pt °„ƒ2‹ ³¨¨¶液 !×µ¬·²±2tss及
∞Š×„ o总体积 yss ˏ∀使用 ƒ2usss ‹Œ×„≤‹Œ荧光分
光光度计测定 °‘¶内游离 ≤¤u n浓度的变化 o参照
文献≈u 方法计算 °‘¶内≈≤¤u n  ¬∀
2 q4 数据处理
以方差分析法及 θ检验法分析各组均值差异的
显著性 o统计软件为 ≥°≥≥ ts qs ∀
3 结果
3 q1 Ž¤¨ 抑制≈v‹ °„ƒ与兔血小板受体的特异性结
合
表 t结果表明 Ž¤¨ 可明显拮抗 ≈v‹ °„ƒ与兔血
小板受体的特异性结合 o并有明显的量效关系 ∀
≈v‹ °„ƒ浓度为 t ou ow ±°²¯#pt时 o与受体结合抑制
率为xs h 所对应的Ž¤¨ 浓度kŒ≤xsl分别为vs q{ o
zw qy o|u qs Λ°²¯#pt ∀
3 q2 Ž¤¨ 抑制 °„ƒ诱发的兔血小板黏附
表 t Ž¤¨ 对≈v‹ °„ƒ与兔血小板受体特异性
结合的抑制作用k ξ ? σ, ν € vl
≈v‹ °„ƒ
r±°²¯#pt
Ž¤¨
rΛ°²¯#pt
总结和
r…´
非特异性结合
r…´
抑制率
r h
t p yxw ? tz wtv ? u|
x qw yt| ? ty v{x ? uu tu q{
ts q| xzx ? uutl vzy ? vz u{ qv
ut q{ xv| ? uxul vzw ? vx ws q|
wv qz w{u ? vxul vyu ? w| x{ q|
{z qw wuy ? uxul vv| ? tu zu qu
u p tvuy ? ts yuw ? |
ts q| tuv| ? w{tl x{u ? tx tt q{
ut q{ ttyu ? tsul xyx ? ut ut qx
wv qz |{z ? vzul xvu ? xv wu qz
{z qw {{u ? vuul xvs ? vw xx q{
tzw qz zyx ? vuul wx{ ? ty yw qy
w p uvuv ? {| ttxs ? tyt
ut q{ us{{ ? tys tsyv ? tu{ t{ qz
wv qz t|st ? uustl tswu ? tvz vv qs
{z qw tzyz ? ttvul tsyz ? yw ww qu
tzw qz twzs ? twyul tsus ? tuy yx qw
vw| qw tt{{ ? uwul |wy ? |v {u qw
注 }与对照组比较tl Π s qst oul Π s qsst ~≈v‹ °„ƒ浓度为 t ou o
w ±°²¯#pt时 oŽ¤¨ Œ≤xs分别为 vs q{ ozw qy o|u qs Λ°²¯#pt
表 u Ž¤¨ 对 °„ƒ k v q{ ≅ tsp | °²¯#ptl
诱发 • • °黏附的抑制作用 k ξ ? σ, ν € vl
组别rΛ°²¯#pt • • °黏附rΑxzs 抑制率r h
空白组 s qs{s ? s qssx
°„ƒ损伤组 s qvwv ? s qssw
°„ƒ n Ž¤¨ u{ s qvs{ ? s qsswtl tv qv
°„ƒ n Ž¤¨ wu s quyw ? s qssutl vs qs
°„ƒ n Ž¤¨ yv s qusu ? s qststl xv qy
°„ƒ n Ž¤¨ |w s qtz| ? s qssxtl yu qw
°„ƒ n Ž¤¨ twt s qtuw ? s qsswtl {v qv
注 }与 °„ƒ损伤组比较tl Π s qsst ~Ž¤¨ Œ≤xs为 yx Λ°²¯#pt
表 u结果表明 Ž¤¨ 可浓度依赖地抑制 °„ƒ诱发
的兔血小板的黏附 o其 Œ≤xs为 yx Λ°²¯#pt ∀
3 q3 Ž¤¨ 抑制 °„ƒ 引发的兔 °‘¶内 ≤¤u n浓度的
升高
Ž¤¨ 可抑制 °„ƒ引发的兔 °‘¶内游离 ≤¤u n浓
度的升高且呈明显的量效关系 ∀结果见表 v ∀
4 讨论
°„ƒ为一重要的炎症介质 o是迄今所知最强的
血小板聚集激活剂 ∀它可由血小板 !白细胞 !内皮细
#s|z#
第 u|卷第 {期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ {
„∏ª∏¶·oussw
胞等多种细胞合成 o作用于多种细胞受体 o产生广泛
的生物效应 ∀ °„ƒ 参与许多病理生理变化 o与缺血
再灌注 !炎症反应 !动脉粥样硬化等诸多心 !脑血管
疾病的发病过程密切相关 ∀ °„ƒ作用于靶细胞膜上
的 Š蛋白偶联受体 o激活磷脂酶 ≤k°≤l o可催化细
胞膜磷脂水解 o产生三磷酸肌醇kŒ°vl和二酰基甘油
k⁄Šl ∀Œ°v可诱导细胞内钙库释放 ≤¤u n并促使胞外
≤¤u n内流 o引起细胞内 ≤¤u n浓度升高 ~⁄Š可激活蛋
白激酶 ≤ o使靶蛋白磷酸化 o触发血小板 !白细胞的
黏附 !聚集与释放反应 o导致血液循环障碍 ∀
表 v Ž¤¨ 对 °„ƒk w q{ ≅ tsp { °²¯#ptl引发的兔 °‘¶内
游离 ≤¤un浓度升高的抑制作用k ξ ? σ, ν € v l
组别rΛ°²¯#pt ≈≤¤u n  ¬r±°²¯#pt
°„ƒ 对照组 vuw ? tz
°„ƒ n Ž¤¨ vy qw ux{ ? txtl
°„ƒ n Ž¤¨ zu q{ t|x ? tvtl
°„ƒ n Ž¤¨ twx qy |{ ? tutl
°„ƒ n Ž¤¨ u|t qt uw ? ytl
注 }与 °„ƒ对照组比较tl Π s qsst
本试验结果表明 oŽ¤¨ 可浓度依赖地拮抗 °„ƒ
与兔血小板膜受体的特异性结合 o抑制 °„ƒ诱发的
兔血小板黏附与兔多形核白细胞内钙离子浓度的升
高 o表明作为红花抗 °„ƒ的有效成分之一 oŽ¤¨ 可阻
断 °„ƒ的反应 o缓解血小板及白细胞活化 o为一 °„ƒ
受体拮抗剂 ∀
笔者观察了多种红花成分的抗 °„ƒ作用 o发现
红花醇提物的抗 °„ƒ作用比水溶性成分强 o从红花
醇提取物中得到的几种红花黄酮醇中 oŽ¤¨ 抗 °„ƒ
的作用较强 ∀红花为一常用的活血化瘀药 o其提取
物具抗血栓 !抗心肌缺血 !改善微循环 !抗氧化等多
方面的心血管药理作用 ∀研究红花成分抗 °„ƒ的作
用对探讨其活血化瘀作用机理具重要意义 ∀
≈参考文献 
≈t  ¤¶¤² ‹¤·²µ¯o÷¬±2¬ ‹∏¤±ªo ±¬±ª2¬±ª ≤«¨ o ετ αλq y2‹¼§µ²¬2
¼®¤¨ °³©¨µ²¯ ¤±§¬·¶ª¯¼¦²¶¬§¨¶©µ²° Χαρτηαµυσ τινχτοριυσ q³¨·¤¯¶q
Πηψτοχηεµιστρψot||u ovtkttl }wsst q
≈u  陈文梅 o金 鸣 o吴 伟 o等 q红花黄酮成分抑制血小板激活
因子介导的血小板活化作用 q药学学报 ousst ovyktul }{{t q
≈v  ‹ µ¨¥¨µ· o¤³¯¤¦¨  ≤ o ¤©©µ¤±§° q…¬±§¬±ª²©≈v‹ ≥• uzwtz o
¤±²√¨¯ ³¯¤·¨¯ ·¨2¤¦·¬√¤·¬±ª©¤¦·²µk°„ƒl µ¨¦¨³·²µ¤±·¤ª²±¬¶·o·²µ¤¥¥¬·
¤±§ «∏°¤± ³¯¤·¨¯ ·¨¶ ¤±§ ³²¯¼°²µ³«²±∏¦¯ ¤¨µ ¯¨ ∏®²¦¼·¨¶q Βιοχηεµ
Πηαρµ ot||v owxktl }xt q
≈w  臧宝霞 o金 鸣 o司 南 o等 q羟基红花黄色素 „ 对血小板活
化因子的拮抗作用 q药学学报 oussu ovzk|l }y|y q
≈x  金 鸣 o吴 伟 o陈文梅 o等 q红花总黄色素体外抑制血小板
激活因子受体结合作用的研究 q中国药学杂志 ousst ovykvl }
tyz q
≈y  吴 伟 o李金荣 o陈文梅 o等 q几种红花黄酮醇体外抑制 °„ƒ
诱导 °‘聚集及黏附作用 q中国药学杂志 oussu ovzktsl }zwv q
≈z  陈文梅 o金 鸣 o吴 伟 o等 q槲皮素抑制血小板活化因子介
导的血小板 !白细胞内钙升高 q中国药学杂志 oussu ovzkyl }
wxx q
Ινηιβιτιορψ εφφεχτ οφ καεµ πφερολ αγαινστ βινδινγ οφ πλατελετ
αχτιϖατινγ φαχτορ το ιτσ ρεχεπτορ
„‘Š …¤²2¬¬¤oŒ‘ ¬±ªo • ˜ • ¬¨o≤‹∞‘ • ±¨2° ¬¨o°Œ„’ ≠²±ª2½«¨ oŒ¬±2µ²±ª
k ∆επαρτµεντ οφ Πηαρµαχολογψ, Βειϕινγ Ινστιτυτε οφ Ηεαρτ , Λυνγ ανδ Βλοοδ ςεσσελ ∆ισεασεσ2Ανζηεν Ηοσπιταλ, Βειϕινγ tsssu| , Χηιναl
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ²¥¶¨µ√¨·«¨ ³¯¤·¨¯ ·¨¤¦·¬√¤·¬±ª©¤¦·²µk°„ƒl ¤±·¤ª²±¬¶·¬¦ ©¨©¨¦·²©®¤¨ °³©¨µ²¯ q Μετηοδ : ׫¨ ¶³¨¦¬©¬¦¥¬±§¬±ª
²©≈v‹ °„ƒ ·²µ¤¥¥¬·³¯¤·¨¯ ·¨µ¨¦¨³·²µº¤¶¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨§º¬·«µ¤§¬² ¬¯ª¤±§¥¬±§¬±ª¤¶¶¤¼ k• …„l q°¯ ¤·¨¯ ·¨¤§«¨¶¬²±¬±§∏¦¨§¥¼ °„ƒ º¤¶° ¤¨2
¶∏µ¨§º¬·«¶³¨¦·µ²³«²·²° ·¨µ¼q׫¨ ¨¯ √¨¤·¬²± ²©¬±±¨ µ©µ¨¨¦¤¯¦¬∏° ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ¬± µ¤¥¥¬·³²¯¼°²µ³«²±∏¦¯ ¤¨µ¯¨ ∏®²¦¼·¨¶k°‘¶l ¬±§∏¦¨§¥¼
°„ƒ º¤¶§¨·¨µ°¬±¨ §º¬·«ƒ∏µ¤2u ©¯∏²µ¨¶¦¨±··¨¦«±¬´∏¨ q Ρεσυλτ : ׫¨ t ou ²µw ±°²¯#pt≈v‹ °„ƒ ¶³¨¦¬©¬¦¥¬±§¬±ª·²µ¤¥¥¬·³¯¤·¨¯ ·¨µ¨¦¨³·²µ
º¤¶¬±«¬¥¬·¨§¥¼ Ž¤¨ §²¶¤ª¨ §¨ ³¨ ±§¨ ±·¯¼ ¤±§·«¨ Œ≤xs º µ¨¨ vs q{ ozw qy ¤±§|u qs Λ°²¯#pt oµ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ q׫¨ °„ƒ ¬±§∏¦¨§µ¨¤¦·¬²±¶²©µ¤¥2
¥¬·³¯¤·¨¯ ·¨¤§«¨¶¬²± ¤±§°‘¶¬±±¨ µ©µ¨¨¦¤¯¦¬∏° ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ¨¯ √¨¤·¬²± º µ¨¨ ¬±«¬¥¬·¨§¥¼ Ž¤¨ ¬± ¤§²¶¨2§¨ ³¨ ±§¨ ±·°¤±±¨ µq׫¨ Œ≤xs ²©Ž¤¨
·²¬±«¬¥¬·³¯¤·¨¯ ·¨¤§«¨¶¬²± º¤¶yx Λ°²¯#pt qΧονχλυσιον : Ž¤¨ ¬¶ ©¨©¨¦·¬√¨¬±¬±«¬¥¬·¬±ª·«¨ ¤¦·¬²± ²©°„ƒ ¤±§¬·¬¶¤±¨ º °„ƒ µ¨¦¨³·²µ¤±·¤ª2
²±¬¶·q
[ Κεψ ωορδσ] ®¤¨ °³©¨µ²¯ ~³¯¤·¨¯ ·¨¤¦·¬√¤·¬±ª©¤¦·²µ~µ¨¦¨³·²µ¥¬±§¬±ª¤¶¶¤¼~³¯¤·¨¯ ·¨¤§«¨¶¬²±~³²¯¼°²µ³«²±∏¦¯ ¤¨µ¯ ∏¨®²¦¼·¨¶¬±±¨ µ©µ¨¨
¦¤¯¦¬∏°
≈责任编辑 古云侠 
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第 u|卷第 {期
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