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Effects of oxysophoridine on Glu and GABA immuno-reaction positive neurons in cortex and hippocampus of rats

氧化槐定碱对大鼠皮层及海马谷氨酸及γ-氨基丁酸免疫阳性细胞的影响



全 文 :Εφφεχτσ οφ τετραµ ετηψλπψραζινε ον εξπρεσσιον οφ ϖασχυλαρ ενδοτηελιαλγροωτη
φαχτορ ανδ ηψποξια2ινδυχεδ φαχτορ2tΑ βψ ρατ περιτονεαλµ αχροπηαγεσ
÷˜ ÷¬¤²2¼∏t o ≠ ∞ ¤±u o ≤‹∞‘Š¤±ªv o ƒ∞‘Š ∏±2§²±ªu o ≤‹∞‘ • ¬¨2«¤¬u o ‹˜ ≠¬2¼²±ªw
(t1 Χολλεγε οφ ΤραδιτιοναλΧηινεσε Μεδιχινε ανδ Πηαρµ αχψ, Σουτηωεστ Υνιϖερσιτψ, Χηονγθινγ wssztx, Χηινα;
u1 ∆επαρτµ εντ οφ Πηαρµ αχψ, Χηονγθινγ ΜεδιχαλΥνιϖερσιτψ, Χηονγθινγ wsssty, Χηινα;
v1 Ρεσεαρχη Χεντεροφ Πηαρµ αχευτιχαλΧηεµ ιστρψ & Χηεµ οβιολογψ, Χηονγθινγ Τεχηνολογψ
ανδ ΒυσινεσσΥνιϖερσιτψ, Χηονγθινγ wsssyz, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨ ·«¨ ©¨©¨¦·¶²©·¨·µ¤° ·¨«¼¯ ³¼µ¤½¬±¨ ²± ¬¯³²³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ ¶k°≥l2¬±§∏¦¨§ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©
√¤¶¦∏¯¤µ ±¨§²·«¨ ¬¯¤¯ ªµ²º·«©¤¦·²µk∂ ∞Šƒl ¤±§«¼³²¬¬¤2¬±§∏¦¨§©¤¦·²µ2tΑ k‹ Œƒ2tΑl ¬± °¤¦µ²³«¤ª¨ ¶1Μετηοδ : • ¤·³¨ µ¬·²± ¤¨¯ °¤¦µ²2
³«¤ª¨ ¶º µ¨¨ ·µ¨¤·¨§º¬·«°≥o ¤±§¤··«¨ ¶¤°¨·¬°¨ª¬√ ±¨ §¬©©¨µ¨±·§²¶¨¶²©·¨·µ¤° ·¨«¼¯ ³¼µ¤½¬± 1¨×«¨ ¶¨¦µ¨¤·¬²± ²©∂ ∞Šƒ º¤¶§¨ ·¨µ2
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‹Œƒ2tΑ1Ρ εσυλτ: tss Λª# °pt ¤±§ts Λª# °pt ·¨·µ¤° ·¨«¼¯ ³¼µ¤½¬±¨§¨ ¦µ¨¤¶¨§·«¨ ¶¨¦µ¨·¬²± ²©∂ ∞Šƒ ¤±§¤¯¶²¬±«¬¥¬·¨§·«¨ ¬¨³µ¨¶2
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σιον: × ·¨µ¤° ·¨«¼¯ ³¼µ¤½¬±¨¦²∏¯§¬±«¬¥¬··«¨ ¶¨¦µ¨·¬²± ²©∂ ∞Šƒ ¥¼ °≥2¬±§∏¦¨§°¤¦µ²³«¤ª¨ ¶o ¤±§·«¨ ° ¦¨«¤±¬¶° °∏¶·¥¨ ¤¶¶²¦¬¤·¨§
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[ Κεψ ωορδσ] «¼³²¬¬¤2¬±§∏¦¨§©¤¦·²µ~ √¤¶¦∏¯¤µ ±¨§²·«¨ ¬¯¤¯ ªµ²º·«©¤¦·²µ~ ·¨·µ¤° ·¨«¼¯ ³¼µ¤½¬±¨
≈责任编辑 刘  
氧化槐定碱对大鼠皮层及海马谷氨酸及
Χ2氨基丁酸免疫阳性细胞的影响
余建强 o蒋袁絮 3
k宁夏医学院 基础学院 o宁夏 银川 zxssswl
≈摘要   目的 }探讨氧化槐定碱 k²¬¼¶²³«²µ¬§¬± o¨ ’≥• l对大鼠皮层和海马谷氨酸 kŠ ∏¯l和 Χ2氨基丁酸 kŠ„…„l
免疫阳性神经细胞的影响 ∀方法 }采用免疫组织化学方法 k≥„…≤l和显微图像分析技术 o检测 ’≥• 对大鼠皮层 !海
马谷氨酸和 Χ2氨基丁酸免疫阳性神经细胞的变化 ∀结果 }侧脑室注射氧化槐定碱 ts °ªo大鼠皮层 !海马 Š„…„免
疫阳性神经细胞数明显增加 oŠ ∏¯免疫反应阳性细胞数显著下降 kΠ  s1sxl∀结论 }’≥• 引起中枢神经系统 Š ∏¯及
Š„…„的平衡变化可能是导致中枢抑制作用机制之一 ∀
≈关键词   氧化槐定碱 ~谷氨酸 ~Χ2氨基丁酸 ~中枢神经系统 ~大鼠
≈中图分类号   • u{x1x ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukussylt|2tytt2sw
≈收稿日期   ussy2st2sy
≈基金项目   宁夏回族自治区自然科学基金项目资助项目
k≤tsvl ~宁夏回族自治区教育厅科研项目 kussx2txvl
≈通讯作者   3 蒋袁絮 o ר¯} ks|xtl wszysyvo ∞2°¤¬¯} ­¬¤±2
ª¼∏¤±¬∏vvƒ «²·°¤¬¯1¦²°
氧化槐定碱是从豆科植物苦豆子 Σοπηορα αλοπε2
χυροιδλεσ1中提得的主要生物碱之一 ≈t  ∀有关氧化
槐定碱 k’≥• l药理作用的研究显示其具有抗心律失
常 !保护心肌 !抗病毒等作用 ≈u2w  ∀以往的研究表明 o
’≥•具有明显的中枢抑制作用 ≈x  o但其作用机制尚不
清楚 ∀本实验应用免疫组织化学方法 k≥„…≤l和显微
#ttyt#
第 vt卷第 t|期
ussy年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vtoŒ¶¶∏¨ t|
’¦·²¥¨ µoussy
图像分析技术 o观察 ’≥• 对大鼠大脑皮层 !海马谷氨
酸和 Χ2氨基丁酸免疫阳性神经细胞的影响 o探讨 ’≥•
中枢抑制作用的神经化学机制 ∀
1 材料和方法
111 动物
成年 ≥⁄大鼠 o雄性 o体重 t{s ∗ uus ªo≥°ƒ级 o
由宁夏医学院实验动物中心提供 ∀
112 药品 !试剂
氧化槐定碱 k宁夏药物研究所 lo氨基甲酸乙
酯 k北京化学试剂公司 lo多聚甲醛 k北京益利精细
化学品有限公司 louxh 甲醛 k中国医药集团上海
化学试剂公司 lo过氧化氢 k北京益利精细化学品
有限公司 lo„±·¬2Š„…„o„±·¬2Š ∏¯·¤°¤·¨ k≥¬ª°¤公
司 lo≥„…≤试剂盒 k武汉博士德生物工程有限公
司 lo⁄„…k≥¬ª°¤o武汉博士德生物工程有限公司分
装 l∀
113 仪器
立体定位仪 k吉林 l~ ‹≥ p v数显酸度计 k上
海 lo冰冻切片机 k德国 lo培养箱 k上海 lo Œ„≥多媒
体彩色病理图像分析系统 k深圳 l∀
114 方法
11411 分组及给药 ≥⁄大鼠 us只 o随机分为 u
组 o每组 ts只 ∀ uxh乌拉坦 t1x ª# ®ªpt ¬√麻醉 o俯
卧位固定于脑立体定位仪上 o沿头顶正中线做矢状
切口 o采用大鼠脑立体定位图谱 …系统 ≈y 行侧脑室
定位 }° € p s1{ °°o • r€ t1y °°o ‹ € p v1{
°°∀ ’≥• 组 ¬¦√ ’≥• ts °ªrus ˏr只 ∀对照组 ¬¦√
生理盐水 us ˏ∀
11412 脑组织的固定和切片 给药 u «后 o将大鼠
固定在大鼠板上 o置于灌注盘中 ∀经剑突剪开胸腔 o
暴露心脏 ∀从心尖剪一小口 o经左心室插管入主动
脉内 o血管钳固定 o剪开右心耳 o迅速灌注 w ε 预冷
生理盐水 tss ∗ uss °o待从右心房流出液体变淡
红或肝脏由红变白时 o灌入 wh多聚甲醛 n th丙二
醛混合液 xss °o维持 t1x «∀开颅取出完整脑组
织 o去除脑干及小脑 o将修整后的脑块放入不含戊二
醛的固定液中 x ∗ y «后转入 uxh蔗糖 !wh甲醛固
定液 o直至沉底 ∀用置冷箱 k p tx ε l切片机 o做厚
ux Λ°冠状切片 os1st °²¯ # pt °…≥接片 o选取顶
叶皮层组织和含背侧海马结构的切片供免疫组织化
学染色 ∀
11413 t免疫组化染色 k≥„…≤ l法 切片用 s1st
°²¯# pt °…≥冲洗 x °¬± ≅ v次 ~室温下 os1uh
·µ¬·²± ≅ tss浸泡 vs °¬±~ °…≥冲洗 x °¬± ≅ v次 ~
s1vh ‹u ’u和 s1th甲醛液 o室温下灭活内源性过
氧化物酶 vs °¬±~ °…≥冲洗 x °¬± ≅ v次 ~ tΒus正常
羊血清 ovz ε 封闭 t «~ tΒt uss的 Š ∏¯抗体或 tΒt
uss Š„…„抗体 o°…≥ w ε 反应 zu «∀每天在 vz ε
摇床中摇动 us °¬±~ °…≥冲洗 { °¬± ≅ w次 ~ tΒus二
抗 vzε 培养箱中反应 t «~ °…≥冲洗 { °¬± ≅ x次 ~
tΒ us ≥„…≤液 vz ε 反应 t «~ °…≥冲洗 { °¬± ≅ w
次 ~ ⁄„…液显色 us °¬±~ °…≥冲洗 x °¬± ≅ u次 ~用
沾有多聚赖氨酸的载玻片贴片 ~ vz ε 烘烤 vs °¬±o
或自然晾干 ~脱水 o透明 o明胶封片 ∀
11414 显微照相及图象分析 所有切片放大 tss
倍 o进行图象分析 o每只动物取 u张切片 o分别对大
脑皮层 !海马部位 Š ∏¯及 Š„…„阳性细胞进行分析 ∀
每部位取 u个视野 ∀
115 资料统计分析
实验结果以 cξ ? σ表示 ∀数据用 ≥°≥≥软件包进
行统计学处理 o两样本均数间比较采用 Œ±§¨ ³¨ ±§¨ ±·2
¶¤°³¯ 检¨验 oΠ s1sx为存在统计学差异的界限 ∀
2 结果
211 ’≥• 对大鼠中枢 Š„…„免疫阳性细胞的影响
Š„…„免疫阳性反应细胞散在分布于大脑皮
层 !海马回 !齿状回各层 o阳性细胞呈圆形 o卵圆
形 !三角形等 o有的细胞有 t个至多个突起 ∀与正
常组相比 o’≥• 组大鼠大脑皮层 !海马部位的阳性
细胞数增多 o大脑皮层尤其明显 kΠ  s1stlk表 to
图 tl∀
表 t ’≥• 对大鼠皮层 !海马的 Š„…„oŠ ∏¯免疫阳性反应神经细胞数的影响 kcξ ? σ, ν € |l
组别
Š„…„ Š ∏¯ Š„…„ rŠ ∏¯
≤²· ‹¬³ ≤²· ‹¬³ ≤²· ‹¬³
对照 yy ? tt xw ? tw |u ? tz zz ? { sqzu sqzs
’≥• tsx ? uzul {t ? uvul zw ? uwtl yt ? t|tl tqwu tqvv
注 }与正常组比较 tl Π  s1sx, u) Π  s1st
212 ’≥• 对 Š ∏¯免疫阳性细胞的影响 Š ∏¯免疫反应阳性细胞广泛分布于大脑皮层 !
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第 vt卷第 t|期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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’¦·²¥¨ µoussy
海马回 !齿状回等部位 ∀阳性细胞体呈锥形 !圆形 !
椭圆形 o有 t个或多个突起 o有些突起有分支 ∀ ’≥•
组与正常组相比 o大脑皮层 !海马免疫阳性细胞数减
少 kΠ s1sxlk表 to图 tl∀
图 t 大鼠皮层 !海马 Š„…„oŠ ∏¯免疫阳性细胞 k ≅ tssl
„1对照组 k皮层 Š„…„l~…1’≥• 组 k皮层 Š„…„ l~ ≤1对照组 k海马 Š„…„ l~ ⁄1 ’≥• 组 k海马 Š„…„ l~∞1对照组 k皮层 Š ∏¯l~
ƒ1’≥• 组 k皮层 Š ∏¯l~ Š1对照组 k海马 Š ∏¯l~‹1 ’≥• 组 k海马 Š ∏¯l
3 讨论
Š„…„是中枢最重要的抑制性递质 ∀ ≤‘≥大约
有 ush ∗ wsh的中枢突触主要是以 Š„…„作为神经
递质 ≈z  ∀ Š„…„对神经系统的神经元具有普遍性抑
制作用 o在兴奋抑制调节中起重要作用 ≈z  ∀ Š ∏¯作为
哺乳动物脑内最重要的兴奋性递质 o分布遍及 ≤‘≥o
几乎所有的神经元都具有 Š ∏¯受体 o中枢神经元之间
的兴奋性突触传递主要由 Š ∏¯受体所介导 ∀脑和脊
髓中 o任何引起胞外兴奋性氨基酸浓度异常增高的变
化 o都会引起兴奋性功能改变 ≈z  ∀ Š„…„和 Š ∏¯对于
维持神经细胞抑制与兴奋功能平衡的稳定具有极为
重要的作用 ≈{2ts  ∀ ’≥• 的中枢抑制作用是否与 Š„2
…„或 Š ∏¯有关 o尚未见文献报道 ∀本项研究结果显
示 o ¬¦√ us ˏ’≥• kts °ªl后 o大鼠大脑皮层 !海马
Š„…„免疫阳性细胞数目明显上升 kΠ  s1stloŠ ∏¯
免疫阳性细胞数下降 kΠ s1sxlo提示 ’≥• 的中枢抑
制作用可能与其引起 Š„…„释放增多及 Š ∏¯释放减
少有关 ∀推测 ’≥•中枢抑制作用的靶标可能是中枢
Š„…„oŠ ∏¯等氨基酸类神经递质 o至于其是否具有多
靶标作用尚需设计新的实验进一步研究证实 ∀
≈参考文献  
≈t  钟仁山 q苦豆子的研究及应用 ≈  q银川 }宁夏人民出版社 o
t|{x}uq
≈u  张红梅 o闫 琳 o李汉青 q槐定碱和氧化槐定碱对豚鼠心率
的影响 ≈ q宁夏医学院学报 o t||{o uskwsl}wq
≈v  黄秀梅 o李 波 q六种苦豆子生物碱对炎症介质的白三烯的
影响 ≈ q中成药 o ussvo uxktsl}{uwq
≈w  杨志伟 o周 娅 o曹秀琴 q苦豆子生物碱体外抗柯萨奇病毒
的作用 ≈ q四川中医 o ussvo utkvl}twq
≈x  余建强 o蒋袁絮 o彭建中 q氧化槐定碱的中枢抑制作用 ≈ q
华西药学杂志 oussto tykwl}uzzq
≈y  包新民 o舒斯云 q大鼠脑立体定位图谱 ≈  q北京 }人民卫生
出版社 o t||t}tq
≈z  朱长庚 q神经解剖学 ≈   q北京 }人民卫生出版社 o ussu}
uyvq
≈{  宋秀祖 o刘庆莹 o朱长庚 o等 q地塞米松对谷氨酸钠致痫大
鼠脑电图及 Š„…„免疫反应的影响 ≈ q神经解剖学杂志 o
ussuo t{kvl}uxtq
≈|  王心如 o吴建平 o肖 杭 o等 q氰戊菊酯和辛硫磷对大鼠中
枢谷氨酸及 Χ2氨基丁酸免疫阳性细胞的影响 ≈ q卫生研
究 o ussso u|ktl}tq
≈ts  ≥¬¨ª«¤µ·• q ≥·µ∏¦·∏µ¨ ¤±§ ³«¤µ°¤¦²¯²ª¼ ²©Χ2¤°¬±²¥∏·¼µ¬¦¤¦¬§
µ¨¦¨³·²µ¶∏¥·¼³¨ ¶≈ q °«¤µ°¤¦²¯ • √¨o t||xo wzkwl} t{tq
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第 vt卷第 t|期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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Εφφεχτσ οφ οξψσοπηοριδινε ον Γ λυ ανδ Γ ΑΒΑ ιµ µ υνο2ρεαχτιον ποσιτιϖε
νευρονσ ιν χορτεξ ανδ ηιπποχαµ πυσ οφ ρατσ
≠˜ ¬¤±2´ ¬¤±ªo Œ„‘Š ≠∏¤±2¬∏
(∆επαρτµ εντ οφ Πηαρµ αχολογψ, Νινγξια ΜεδιχαλΧολλεγε, Ψινχηυαν zxsssw, Χηινα )
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¶·∏§¼ ·«¨ ©¨©¨¦·²©²¬¼¶²³«²µ¬§¬±¨k’≥• l ²± ª¯∏·¤°¤·¨ kŠ ∏¯l ¤±§ª¤°°¤¤°¬±²¥∏·¼µ¬¦¤¦¬§kŠ„2
…„l ¬°°∏±²2µ¨¤¦·¬²± ³²¶¬·¬√¨± ∏¨µ²±¶¬± ·«¨ ¦²µ·¨¬ ¤±§«¬³³²¦¤°³∏¶²©µ¤·¶q Μετηοδ : Œ°°∏±²«¬¶·²¦«¨ °¬¶·µ¼ ° ·¨«²§ k≥„…≤ l ¤±§
·«¨ °¬¦µ²ªµ¤³«¬¦¤±¤¯¼¶¬¶·¨¦«±¬´∏¨ º µ¨¨ °¨³¯²¼¨ §·²°²±¬·²µ·«¨ ©¨©¨¦·²©’≥• ¬± ·«¨ √¤µ¬¤·¬²±¶²©Š ∏¯¤±§Š„…„ ¬°°∏±²µ¨¤¦·¬²± ³²¶2
¬·¬√¨± ∏¨µ²±¶¬± ·«¨ ¦²µ·¨¬¤±§«¬³³²¦¤°³∏¶²©µ¤·¶q Ρ εσυλτ: ’≥• ¤§°¬±¬¶·µ¤·¨§¬¦√ kts °ªl ¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ ¬±¦µ¨¤¶¨§·«¨ ±∏°¥¨ µ²©Š„2
…„ ¬°°∏±²2µ¨¤¦·¬²± ³²¶¬·¬√¨± ∏¨µ²±¶º«¬¯¨ §¨ ¦µ¨¤¶¬±ª·«¨ ±∏°¥¨ µ²©ª¯∏¬°°∏±²µ¨¤¦·¬²± ³²¶¬·¬√¨± ∏¨µ²±¶¬± ¦²µ·¨¬¤±§«¬³³²¦¤°³∏¶¬±
µ¤·¶kΠ  s1sxlq Χονχλυσιον: • ¶¨∏¯·¶¶«²º §¨·«¤··«¨ ¦«¤±ª¨ ²©Š ∏¯ ¤±§ Š„…„ ¦¤∏¶¨§ ¥¼ ’≥• °¤¼ µ¨¶³²±¶¬¥¯¨ ©²µ¬·¶¬±«¬¥¬·²µ¼
©¨©¨¦·¶²± ·«¨ ¦¨±·µ¤¯ ± µ¨√²∏¶¶¼¶·¨°q
[ Κεψ ωορδσ] ²¬¼¶²³«²µ¬§¬± ~¨ ª¯∏·¤°¤·¨~ ª¤°°¤¤°¬±²¥∏·¼µ¬¦¤¦¬§~ ¦¨±·µ¤¯ ± µ¨√²∏¶¶¼¶·¨°~ µ¤·¶
≈责任编辑 刘  
≈收稿日期   ussy2su2s|
≈通讯作者   3 杨欣 oר¯}ksxztl{t{{|vsso∞2°¤¬¯} «½¬¼¤±ªƒ
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巴戟天水提物对人精子膜功能氧化损伤的保护作用
杨 欣 3 o张永华 o丁彩飞 o颜志中 o杜 静
k浙江省中西医结合医院 o浙江 杭州 vtsssvl
≈摘要   目的 }观察巴戟天水提物对人精子膜结构和功能氧化损伤的干预作用 o探讨巴戟天治疗弱精子症男
性不育的作用机制 ∀方法 }采用 ° µ¨¦²¯ 梯¯度离心法优选具有正常功能的精子悬液分为正常组 o模型组 o阳性药对照
组 k维生素 ≤组 l和巴戟天水提物小 !中 !大剂量组 o应用次黄嘌呤 2黄嘌呤氧化酶 k‹ ÷ 2÷ ’l体系产生活性氧 k• ’≥lo
在有氧环境下 o• ’≥!不同剂量 ks1tuxos1uxos1x ª# °pt l的巴戟天水提物与精子悬液共同孵育后 o检测精子膜脂
质过氧化损伤程度 o通过精子低渗膨胀试验评估精子膜功能 o并与已知的抗氧化剂维生素 ≤对照 ∀结果 }巴戟天水
提物小 !中 !大剂量组 ks1tuxos1uxos1x ª# °pt l在相同的条件下均可提高精子悬液 ≥’⁄活力 o降低  ⁄„含量 o对
• ’≥所致精子膜的氧化损伤均具有不同程度的干预作用 o对精子膜功能具有一定的保护作用 ∀其中 s1tux ª#
°pt的巴戟天水提物组与维生素 ≤组 ks1ux °ª# °pt l无明显差别 os1uxos1x ª# °pt的巴戟天水提物组明显优
于维生素 ≤组 kΠ  s1stoΠ  s1sstl∀且巴戟天水提物的作用呈剂量依赖性 o大剂量 ks1x ª# °pt l时对精子膜功
能的保护作用最显著 ∀结论 }巴戟天水提物对人精子膜的脂质过氧化损伤具有明显的干预作用 o对精子膜结构和
功能具有明显的保护作用 ∀
≈关键词   巴戟天 ~活性氧 ~精子 ~脂质过氧化作用
≈中图分类号   • u{x1x ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukussylt|2tytw2sw
活性氧类 k ¤¨¦·¬√¨²¬¼ª¨ ± ¶³¨ ¦¬¨¶o• ’≥l的过氧
化损伤作用对人精子功能的影响已被关注 ∀中药巴
戟天具有补肾阳 !强筋骨 !祛风湿功效 ≈t  o是临床治
疗男性不育的常用药物 ∀临床观察和实验研究表
明 o巴戟天水提取物能显著改善精子运动功能 ∀本
实验采用体外培养精子模型 o在有氧环境下 o观察巴
戟天水提物对 • ’≥所致人精子膜结构和功能氧化
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第 vt卷第 t|期
ussy年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vtoŒ¶¶∏¨ t|
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