全 文 ：双黄连对 Αu¤2干扰素抗柯萨奇病毒的协同作用
吕海涛t o杨吉成u o袁志昌t o盛伟华u o严文华t
kt1 苏州医学院 附属儿童医院 o江苏 苏州 utxssv ~u1 苏州医学院 基因室 o江苏 苏州 utxsszl
≈摘要  目的 }探讨双黄连对µŒƒ‘2Αu¤抗柯萨奇病毒的影响 ∀方法 }采用微量细胞病变抑制法在 • ¬¶«和 ∂ µ¨²
细胞上进行双黄连 !µŒƒ‘2Αu¤及两者联用抗柯萨奇病毒k≤ ∂ …vl的实验研究 ∀结果 }两药联用抗柯萨奇病毒呈明显
协同作用 ~s qtux °ª# °¯ p t的双黄连可使干扰素kµŒƒ‘2Αu¤l在 • ¬¶«和 ∂ µ¨²细胞上抗柯萨奇病毒的效价提高 u qx{
倍左右 ∀结论 }该结果为临床中西医结合治疗柯萨奇病毒感染提供新的配伍 ∀
≈关键词  双黄连 ~Αu¤2干扰素kµŒƒ‘2Αu¤l ~柯萨奇病毒 …v型k≤ ∂ …vl
≈中图分类号 • u{x qx ~• |y| qu ≈文献标识码 … ≈文章编号 tsst2xvsukusssltt2sy{u2sv
柯萨奇病毒k…组lk简称 ≤ ∂ …l不仅是病毒性心
脏病的最主要病原和呼级道 !肠道感染的常见病原 o
而且宫内柯萨奇病毒感染也是诱发先天性心脏病的
最危险因素之一≈t ou  ∀鉴于国外采用自然干扰素联
合疗法治疗 ≤ ∂ …感染已有实验和临床报道 o收效良
好≈v  o尚未见基因重组干扰素联合中药制剂的研究
报告 ∀为此 o我们在 • ¬¶«和 ∂ µ¨²细胞上研究了不
同浓度双黄连对不同浓度µŒƒ‘2Αu¤抗 ≤ ∂ …v感染的
影响 o其协同作用明显 o现报告如下 ∀
1 材料
111 病毒株 ≤ ∂ …v病毒k‘¤±¦¼株l由卫生部病毒
性心脏病重点实验室杨英珍教授提供 ∀在 • ¬¶«细
胞上增殖 o微量 × ≤Œ⁄xs滴定法测定其效价为 tsp w#
s qt °¯ p t ∀滤泡性口腔炎病毒k∂ ≥∂ l为本院基因室
保存 o在原代鸡胚细胞中增殖 o在 • ¬¶«细胞上测定
其效价为 tsp w# °¯ p t ∀
112 细胞株 人羊膜 • ¬¶«细胞和非洲绿猴肾
∂ µ¨²细胞为本院基因室保存 ∀用含 ts h小牛血清
的 • ° Œtyws培养基传代培养 ∀
113 药品与试剂 双黄连粉针剂购自哈尔滨中药
二厂 oyss °ªr支 o批号 |zsys| ∀µŒƒ‘2Αu¤ v qs ≅
tsy ˜# °¯ p t购自沈阳三生药业有限公司 o批号
|ys{st ∀Œƒ‘标准品为国家卫生部≈|w 卫生标字
ssux ∀ • ° Œtyws培养基kŠŒ…≤ ’产品l ∀
2 方法
211 干扰素效价测定 采用 • ¬¶«细胞r∂ ≥∂2微量
细胞病变抑制法测定效价≈w  o结果用干扰素标
≈收稿日期  usss2st2tz
准品校正 o以国际单位 ˜# °¯ p t表示 ∀
212 µŒƒ‘2Αu¤!双黄连及两者联用抗 ≤ ∂ …v 的半数
有效量k∞⁄xsl≈w ∗ y 
21211 µŒƒ‘2Αu¤抗 ≤ ∂ …v的 ∞⁄xs 将 • ¬¶«细胞kx
≅ tsw个r孔l接种于 |y孔板上 ox h ≤ ’u ovz ε 培养
tu «o去生长液 o每孔加入 tss Λ¯ 递倍稀释的 µŒƒ‘2
Αu¤o培养 tu «o弃 µŒƒ‘2Αu¤o接种 ts × ≤Œ⁄xs
≤ ∂ …vtss Λ¯ o于 vz ε 吸附 t «后 o加入 tss Λ¯ 维持
液继续培养 o待病毒对照组的细胞病变k≤°∞l达/ n
n n n 0时 o判定实验组的 ≤°∞o经加权直线回归
法≈z 计算干扰素的 ∞⁄xs ∀
21212 双黄连抗 ≤ ∂ …v 的 ∞⁄xs • ¬¶«细胞按
21211法培养 tu «o接种 ts × ≤Œ⁄xs ≤ ∂ …v tss Λ¯ o吸
附 t«后 o在实验组各孔中加不同浓度的双黄连 o继
续培养 o待病毒对照组 ≤°∞达/ n n n n 0时 o判定
实验组的 ≤°∞o经加权直线回归法计算双黄连的
∞⁄xs ∀
21213 不同浓度双黄连 !干扰素联用抗 ≤ ∂ …v 的
∞⁄xs • ¬¶«细胞按 21211 法培养 y «o加入 tss Λ¯
µŒƒ‘2Αu¤o浓度分别为 us ots oz qx ox qs ou qx ot qs ˜#
°¯ p t ∀继续培养 tu «o弃 µŒƒ‘2Αu¤o每孔接种 ts
× ≤Œ⁄xs ≤ ∂ …v tss Λ¯ o吸附 t «o加入不同浓度的双黄
连 tss Λ¯ 继续培养 o待病毒对照组 ≤°∞达/ n n n
n 0时 o判定实验组各孔 ≤°∞o经加权直线回归法计
算µŒƒ‘2Αu¤或双黄连所联用药物的 ∞⁄xs o并建立直
角坐标系 ∀以上实验重复 u次取均值 ∀
213 s qtux °ª# °¯ p t双黄连对 µŒƒ‘2Αu¤抗 ≤ ∂ …v
效价的影响≈{  方法大致与测定干扰素效价相同 }
#u{y#
第 ux卷第 tt期
usss年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o‘²qtt
‘²√ qousss
按 21211 法培养 • ¬¶«和 ∂ µ¨²细胞约 y«形成单层 o
用 °…≥洗 v次以除去小牛血清后 o加入 tss Λ¯ 递倍
稀释的µŒƒ‘2Αu¤o继续培养 tu «以上 o弃 µŒƒ‘2Αu¤o
以 ts × ≤Œ⁄xs ≤ ∂ …v tss Λ¯ 攻击后 o设 }ktl独用 Œƒ‘
组 }每孔加入维持液 tss Λ¯ ~kul干扰素联合双黄连
组 }每孔加入 s qtux °ª# °¯ p t双黄连 tss Λ¯ ~另设正
常细胞对照 !病毒对照组和独用双黄连组k病毒对照
组中加入 s qtux °ª# °¯ p t双黄连l ~待病毒对照组达
完全病变时 o判定µŒƒ‘2Αu¤在 • ¬¶«r≤ ∂ …v 和 ∂ µ¨²r
≤ ∂ …v检测系统中的抗病毒效价 o以 ˜# °¯ p t表示 ∀
3 结果
311 不同干扰素检测系统的敏感性比较 同一干
扰素样本在不同的病毒2宿主检测系统中其测定值
会有一定的差别 o在进行本实验前 o先将 • ¬¶«r≤ ∂ …v
和 ∂ µ¨²r≤ ∂ …v 系统与标准的 • ¬¶«r∂ ≥∂ 检测系统
作敏感性比较 ∀在标准检测系统中测定为 v qs ≅ tsy
˜# °¯ p t的干扰素 o在 ∂¬¶«r≤ ∂ …v和 ∂ µ¨²r≤ ∂ …v系统
中所测定的抗 ≤ ∂ …v 病毒效价分别为 u qxx ≅ tsy ˜#
°¯ p t和 u qvw ≅ tsy ˜# °¯ p t o与 • ¬¶«r∂ ≥∂ 系统相
比 o检测值之比分别为 s q{xΒt和 s qz{Βt o该敏感性
说明 • ¬¶«r≤ ∂ …v 和 ∂ µ¨²r≤ ∂ …v 系统可作为参考检
测系统用于下述实验 ∀
312 不同浓度双黄连与 µŒƒ‘2Αu¤联用抗 ≤ ∂ …v 的
效应 经加权直线回归法计算 o为抑制 ts × ≤Œ⁄xs
≤ ∂ …v所致 ≤°∞o单用双黄连或 µŒƒ‘2Αu¤的 ∞⁄xs分
别为 t qwx °ª# °¯ p t和 ts q|x˜# °¯ p t ∀按 Œ¶²¥²¯²2
ªµ¤°≈y 方法将两种联合用药的不同剂量为纵横坐
标 o建立直角坐标图 o两轴末端点为两药单独应用的
∞⁄xs o以直线相连 o如联合用药的抑制曲线在此直线
之上表示相加作用 ~超出此直线表示拮抗作用 ~在直
线之下表示协同效应 ~如图 t可见 s q| °ª# °¯ p t双
黄连联用 t qs ˜# °¯ p tµŒƒ‘2Αu¤可达有效抑制效应 o
联用时所需剂量均低于各自的 ∞⁄xs o图中联合用药
的抑制曲线在直线之下 o表明不同浓度双黄连 !
µŒƒ‘2Αu¤抗 ts × ≤Œ⁄xs ≤ ∂ …v可呈现明显协同效应 ∀
313 s qtux °ª# °¯ p t双黄连对 µŒƒ‘2Αu¤抗病毒效
价的增强作用 s qtux °ª# °¯ p t双黄连远低于其抑
制 ts× ≤Œ⁄xs≤ ∂ …v病毒的 ∞⁄xsk低于 tu倍l o实验中
独用双黄连组 ≤°∞为/ n n n n 0 o故该浓度双黄连
无法有效抑制 ≤ ∂ …v o由表 t可知 }在 • ¬¶«r≤ ∂ …v和
∂ µ¨²r≤ ∂ …v两系统中 o其联合用药组的 µŒƒ‘2Αu¤抗
≤ ∂ …v病毒效价均较独用干扰素组明显提高 o在
• ¬¶«细胞上可提高约 v qvz ∗ v qwx倍 o在 ∂ µ¨²细胞
上提高约 t qyy ∗ t q{w倍 o说明微量双黄连对不同浓
度的µŒƒ‘2Αu¤均可发挥协同作用 ∀
图 t 双黄连 !µŒƒ‘2Αu¤联用抗病毒效应
表 t 不同检测系统中 s qtux°ª# °¯ p t
双黄连对同批 µŒƒ‘2Αu¤抗 ≤ ∂ …v病毒效价的影响
检测系统 独用干扰素组 联合双黄连组 增效率r h
• ¬¶«r≤ ∂ …v t qvvz w qys{ vwx
t qvws w qys{ vww
t qv|z w qzsx vvz
t qv{t w qy{u vv|
∂ µ¨²r≤ ∂ …v t qu|{ u qtx{ tyy
t quxt u qvss t{w
t qvtu u qt{v tyy
t qvvv u quy{ tzs
均值 t qvvt v qwv| ux{
注 }≠每个数据均为 u次实验之均数 独用 s qtux °ª# °¯ p t双
黄连组 ≤°∞均为 n n n n ≈ 增效率k h l €联合双黄连组效价r独
用干扰素组效价 ≅ tss h …单位为 ≅ tsy ˜# °¯ p t
4 讨论
任何药物联合应用 o首先应证实其联合效应为
协同或相加作用 o而拮抗作用则为配伍禁忌≈y  ∀双
黄连是由金银花 !黄芩和连翘 v味中药组成的复方
静脉用制剂 ∀由于其抗病毒 !抗菌 !抗解脲支原体和
衣原体等广谱抗微生物作用 o近年来临床各科应用
日益广泛 o尤其应用于病毒病的预防和治疗≈|  ∀我
们先前的实验报告了双黄连在肠道病毒 ≤ ∂ …v 感染
的 v个环节上均可发挥抗病毒作用 o尤其以直接杀
伤病毒和阻止病毒吸附细胞的作用明显≈ts  ∀
本文结果表明 }双黄连和 µŒƒ‘2Αu¤联合应用 o
抑制 ≤ ∂ …v复制作用显著增强 o协同效应明显 ~如
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第 ux卷第 tt期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o‘²qtt
‘²√ qousss
s qtux °ª# °¯ p t双黄连联合应用 tss 万单位干扰
素 o比单用干扰素增效 u ∗ v倍 o即发挥相当于 uss ∗
vss万单位干扰素的抗病毒效果 ∀其增效作用可能
与双黄连促诱生干扰素有关 o这与徐凯建等的报道
相似≈tt  ∀因此 o本实验研究从不同浓度双黄连 !
µŒƒ‘2Αu¤协同抗 ≤ ∂ …v病毒作用和微量ks qtux °ª#
°¯ p tl双黄连对µŒƒ‘2Αu¤抗病毒效价的增强作用两
方面为两药在临床联合应用提供了实验依据 ∀通过
联用 o不仅加强了彼此抗病毒能力 o而且大大减少药
物用量 o减少发热 !静脉炎等严重副反应 o也减少高
效价干扰素的昂贵费用 o有利于干扰素和双黄连在
临床 !尤其儿科病毒病治疗中的进一步推广应用 ∀
致谢 本文由杨吉成导师资助和指导 ∀
≈参考文献 
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Εφφεχτ οφ Χοµ βινεδ Τρεατµεντ οφ Σηυανγηυανγλιαν ανδ Ρεχοµ βιναντ
Ιντερφερον Αuα ον Χοξσαχκιεϖιρυσ Βv Ρεπλιχατιον ιν ςιτρο
˜ ‹¤¬2·¤²t o≠ „‘Š ¬2¦«¨ ±ªu o ≠ ˜„‘«¬2¦«¤±ªt o
≥‹∞‘Š • ¬¨2«∏¤u o≠ „‘ • ±¨ª2«∏¤t
kt q ׫¨ „©©¬¯¬¤·¨§ ≤«¬¯§µ¨±. ¶‹²¶³¬·¤¯ ²© ≥∏½«²∏  §¨¬¦¤¯ ≤²¯¯¨ ª¨ o≥∏½«²∏ utxssv ¬¤±ª¶∏o≤«¬±¤~
ku q ׫¨ Š ±¨¨ • ¶¨¨¤µ¦« ˜±¬·²©≥∏½«²∏  §¨¬¦¤¯ ≤²¯¯¨ ª¨ o≥∏½«²∏ utxssz ¬¤±ª¶∏o≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε }ײ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨ ©¨©¨ ¦·²©¦²°¥¬±¨ §·µ¨¤·° ±¨·²©≥«¤±ª«¤±ª¯¬¤± k≥‹ ‹l ¤±§µ¨2
¦²°¥¬±¤±·¬±·¨µ©¨µ²± Αu¤²± ≤²¬¶¤¦®¬¨ √¬µ∏¶…v µ¨³¯¬¦¤·¬²±q Μετηοδσ: ¬¦µ²§²¶¨ ¦¼·²³¤·«²ª¨ ±¬¦¬±«¬¥¬·¬²± ©¨©¨ ¦·
¤¶¶¤¼ º¤¶∏¶¨§¬± • ¬¶«¤±§∂ µ¨²¦∏¯·∏µ¨§¦¨¯¯¶qµŒƒ‘2Αu¤ º¤¶¤³³¯¬¨§tu «²∏µ¶¥¨©²µ¨ ≤²¬¶¤¦®¬¨√¬µ∏¶…v¬±²¦∏¯¤2
·¬²± ¤±§≥‹ ‹º¤¶¤³³¯¬¨§t «²∏µ¤©·¨µ≤²¬¶¤¦®¬¨√¬µ∏¶…v ¬±²¦∏¯¤·¬²±qΡεσυλτσ: s qtux °ª# °¯ p t ≥‹ ‹«¤¶¤
¶¼±¨ µª¬¶° º¬·«µŒƒ‘2Αu¤·²¬±«¬¥¬·≤°∞¦¤∏¶¨§¥¼ ≤²¬¶¤¦®¬¨√¬µ∏¶…v ²±·«¨ • ¬¶«¤±§ ∂ µ¨²¦¨¯¯¶ q׫¨ ¤±·¬2¦²¬2
¶¤¦®¬¨√¬µ∏¶¤¦·¬√¬·¼ ²©¦²°¥¬±¨ §·µ¨¤·° ±¨·º¤¶u qx{·¬° ¶¨«¬ª«¨µ·«¤±·«¤·²©µŒƒ‘2Αu¤·µ¨¤·° ±¨·qΧονχλυσιον :
׫¬¶¦²°¥¬±¨ §·µ¨¤·° ±¨·²©§µ∏ª¶°¤¼ ¥¨ ∏¶¨©∏¯ ¬± ³µ¨√ ±¨·¬±ª¤±§·µ¨¤·¬±ª ≤²¬¶¤¦®¬¨ …v ∂¬µ∏¶¬±©¨ ¦·¬²±q
[ Κεψ ωορδσ] ≥«∏¤±ª«∏¤±ª¯¬¤±~µŒƒ‘2Αu¤~≤²¬¶¤¦®¬¨√¬µ∏¶…vk≤ ∂ …vl
≈责任编辑 方文贤 
本刊通知
本刊现存有5中国中药杂志6合订本 o价格 }t|{t ∗ t||v年k其中 {v o{x o{z年无合订本 o有部分缺期散刊l每本 xs qss元 o
t||w年每本 ys qss元 ot||x年以后每本 {s qss元 ∀需购买者请注明邮购何册及册数 o并按以上所需款额及邮费k按书款的
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