全 文 ：　　由于三七药材中淀粉的含量高 ,α2淀粉酶可以
迅速水解淀粉 ,再结合半仿生提取 ,模拟了肠胃环
境 ,为药效成分创造了更好的溶出环境。提取过程
中由于淀粉酶可以很快降低糊化淀粉的黏度 ,不仅
有利于传质溶出 ,还可提高原料药的起始投放浓度 ,
所以半仿生2α2淀粉酶法可以显著节约时间 ,提高生
产效率 ;又由于其直接用弱酸和弱碱溶液提取 ,可以
减少乙醇用量 ;另外 ,α2淀粉酶在食品工业普遍使
用 ,食用安全性良好并且价格低廉 ,所以 ,综合考虑
提取效果及经济效益 ,半仿生2α2淀粉酶提取法是最
佳提取工艺。
　　实验结果分别以提取液中总皂苷得率和干膏收
率为考察指标 ,总皂苷得率可以直接评价该工艺提
取粗三七皂苷的能力。而干膏收率一方面可直观地
表明酶解后产物量增多 ,如酶解产生的小分子 (其他
水溶性物质 ,糖、糊精等) ,但高提取物得率也表明总
提取物中必定存在较多的杂质 ,甚至是非药效成分。
这些通过酶作用后与三七皂苷共同被提取的小分子
化合物 ,是否会与三七皂苷的药效产生协同作用 ,使
传统中药复方多组分更有效 ,这些都有待于进一步
的成分解析及药效学研究。
参考文献 :
[ 1 ] 　中国药典 [ S]1 一部120051
[ 2 ] 　唐红芳 ,毛丽珍 ,徐世芳1 正交试验法研究三七提取工艺[J ]1
中草药 ,2001 ,32 (1) :262281
[3 ] 　周　琳 ,李元波 ,曾 英1 超声酶法提取三七总皂苷的研究[J ]1
中成药 ,2006 ,28 (5) :64226451
[ 4 ] 　陈晓娟 ,周春山1 酶法及半仿生法提取杜仲叶中绿原酸和黄酮
[J ]1 精细化工 ,2006 ,23 (3) : 25722601
HPLC法测定注射用双黄连中黄芩苷、野黄芩苷、黄芩素、
咖啡酸和绿原酸
阎 　姝1 ,田书霞1 ,徐茂玲2 ,李惠芬2 3
(11 天津市南开医院 药剂科 ,天津 　300100 ; 21 天津医科大学药学院 ,天津 　300070)
摘 　要 :目的 　建立同时测定注射用双黄连中黄芩苷、野黄芩苷、黄芩素、咖啡酸和绿原酸 5 种有效成分的方法。
方法 　高效液相色谱法。Phenomenex C18色谱柱 (250 mm ×416 mm ,5μm) ;流动相 :乙腈21 %冰醋酸水溶液 ,作梯
度洗脱 ;检测波长为 327 nm ;体积流量为 1 mL/ min ;柱温为 40 ℃,灵敏度为 01100 0 AU FS。结果 　在筛选色谱条
件下 ,测定了注射用双黄连中的黄芩苷、野黄芩苷、黄芩素、咖啡酸和绿原酸 5 种有效成分。结论 　本方法简便、快
速、准确、可靠 ,可用于注射用双黄连中有效成分的测定。
关键词 :注射用双黄连 ;黄芩苷 ;野黄芩苷 ;黄芩素 ;咖啡酸 ;绿原酸 ;高效液相色谱
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0620907203
　　注射用双黄连由金银花、黄芩和连翘提取精制
而成 ,用于治疗细菌和病毒感染引起的疾病 ,临床应
用广泛[1 ] 。《中国药典》2005 年版一部注射用双黄
连 (冻干)项下采用 3 个不同的色谱条件分别对绿原
酸、黄芩苷和连翘苷进行了测定。另有文献采用
H PL C 法同时测定该制剂中 3 个组分[ 2 ] 。本实验采
用梯度洗脱高效液相色谱法对注射用双黄连中黄芩
苷、野黄芩苷、黄芩素、咖啡酸和绿原酸 5 种有效成
分进行测定 ,方法简单易行 ,测定结果准确可靠 ,为
注射用双黄连的质量控制提供了一种有效的方法。
1 　仪器与试药
　　Agilent1100 全自动液相色谱仪系统 (四元梯度
泵 ,二极管检测器) (美国安捷伦公司) ;注射用双黄
连 (冻干粉针) (哈药集团中药二厂) ;黄芩苷 (批号
71528501) 、野黄芩苷 (批号 1108422200605) 、黄芩素
(批 号 1115952200604 ) 、咖 啡 酸 ( 批 号 1108852
200102) 、绿原酸 (批号 1107532200413) 对照品均由
中国药品生物制品检定所提供 ;水为纯化水 ,乙睛为
色谱纯 ,其他试剂均为分析纯。
2 　方法与结果
211 　色谱条件 : Phenomenex C18色谱柱 (250 mm ×
416 mm ,5μm) ;流动相 :乙腈 ( A)21 %冰醋酸水溶
·709·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
3 收稿日期 :2008212215　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :阎　姝 (1968 —) ,女 ,天津市人 ,副主任药师 ,博士 ,南开医院药剂科副主任 ,研究方向 :中药及中药制剂分析、临床药学。
E2mail : ysyx0234 @1261com3 通讯作者　李惠芬　E2mail : lihuifen @tijmu1edu1cn
液 (B) ,作梯度洗脱 ,0～15 min ,A2B (92 ∶8) ,15～
25 min ,A2B (80 ∶20) ,25～28 min ,A2B (70 ∶30) ,
28～30 min ,A2B (40 ∶60) ,30～40 min ,A2B (55 ∶
45) ,40～45 min , ( A2B 92 ∶8) ;检测波长为 327
nm ;体积流量为 1 mL/ min ;柱温为 40 ℃,灵敏度为
01100 0 AU FS。
212 　对照品溶液的制备 :精密称取黄芩苷对照品
15 mg、野黄芩苷对照品 10 mg、黄芩素对照品 10
mg、咖啡酸对照品 10 mg 和绿原酸对照品 15 mg 分
别置 5 个 10 mL 量瓶中 ,各加 70 %甲醇溶液溶解并
稀释至刻度 ,摇匀 ,即得 5 种对照品储备溶液。分别
精密量取黄芩苷和绿原酸对照品储备液各 5 mL 、咖
啡酸对照品储备液 011 mL ,野黄芩苷、黄芩素、咖啡
酸对照品储备液各 015 mL 置 25 mL 量瓶中 ,加
70 %甲醇稀释至刻度 ,混匀 ,即得混合对照品溶液。
213 　供试品溶液的制备 :精密称取样品 10 mg 置 10
mL 量瓶中 ,加 70 %甲醇稀释至刻度 ,混匀 ,即得。
214 　系统性试验 :在上述色谱条件下 ,黄芩苷、野黄
芩苷、黄芩素、咖啡酸和绿原酸的理论塔板数均大于
2 500 ,见图 1。样品中各指标成分分离良好 ,分离度
大于 210。
图 1 　对照品( A)和注射用双黄连( B)的 HPLC色谱图
Fig11 　HPLC Chromatograms of reference
substances ( A) and Shuanghuangliang
Powder for Injection ( B)
215 　线性关系考察 :精密吸取混合对照品溶液 ,按
对倍稀释的的方法配置一系列溶液 ,取 20μL 在上
述色谱条件下分别进样 ,记录色谱峰面积。以峰面
积为纵坐标 ,质量浓度为横坐标进行线性回归 ,线性
范围和回归方程见表 1。
216 　精密度试验 :精密取混合对照品溶液 20μL ,
重复进样 6 次 ,按峰面积计算黄芩苷、野黄芩苷、黄
芩素、咖啡酸和绿原酸的 RSD 分别为 0180 %、
1177 %、1191 %、1165 %、1191 %。
217 　稳定性试验 :将供试品溶液 (批号 :0711001)室
温下储存 ,分别于 1、2、4、8、12 h 时测定样品中有效
表 1 　各成分的线性范围及回归方程
Table 1 　Linear ranges and regression equation
成　分
线性范围/
(μg ·mL - 1)
回归方程 r
黄芩苷　 10014～7021 8 A = 21774 ×104 C + 31117 01999 7
野黄芩苷 1192～111 5 A = 41487 ×104 C - 17107 01999 5
黄芩素　 1104～8132 A = 51003 ×104 C - 81048 01999 9
咖啡酸　 015～310 A = 91896 ×104 C - 21860 01999 8
绿原酸　 81 9～5314 A = 51289 ×104 C - 41115 01999 9
成分的质量分数 ,结果黄芩苷、野黄芩苷、黄芩素、咖
啡酸和绿原酸的 RSD 分别为 1185 %、1193 %、
1191 %、1153 %、1190 %( n = 3) ,表明供试品溶液在
12 h 内稳定。
218 　重现性试验 :取同一批样品 (批号 :0711001) ,
分别制备 5 份供试品溶液 ,按上述方法测定该样品
有效成分的质量分数 ,结果黄芩苷、野黄芩苷、黄芩
素、咖啡酸和绿原酸的 RSD 分别为 1112 %、
1140 %、1185 %、1148 %、1170 %。
219 　回收率试验 :取注射用双黄连适量 (其中含有
黄芩苷、野黄芩苷、黄芩素、咖啡酸和绿原酸的质量
分别为 2 176、28118、26186、11106、1 802μg) ,分别
加入黄芩苷 2 460μg、野黄芩苷 28180μg、黄芩素
29112μg、咖啡酸 10150μg、绿原酸 18619μg 对照
品 ,制备供试品溶液 ,进样测定 ,计算回收率 ,结果平
均 回 收 率 分 别 为 10013/ %、10019 %、10112、
10017 %、10018 % , RSD 分别为 1127 %、1171 %、
0183 %、1156 %、1100 %( n = 9) 。
2110 　样品测定 :取 3 批样品 ,制备供试品溶液 ,进
行测定 ,采用外标法计算各有效成分的质量分数 ,结
果见表 2。
表 2 　注射用双黄连中有效成分的测定结果( n = 3)
Table 2 　Determination of active components in Shuang2
huanglian Powder for Injection ( n = 3)
批　号
黄芩苷/
(μg ·mg - 1 )
野黄芩苷/
(μg ·mg - 1 )
黄芩素/
(μg ·mg - 1 )
咖啡酸/
(μg ·mg - 1 )
绿原酸/
(μg ·mg - 1 )
0711001 2711 4 31612 31021 11131 2201 2
0711002 2601 1 31373 31491 11257 2071 3
0711003 2511 0 31241 31189 11256 2091 2
3 　讨论
　　注射用双黄连中所含成分复杂 ,其理化性质相
差较大。本实验采用高效液相色谱法同时测定了其
中的黄芩苷、野黄芩苷、黄芩素、咖啡酸和绿原酸 5
种有效成分 ,操作简单易行 ,结果准确可靠 ,为注射
用双黄连的质量控制提供了一种方法。
　　中药材及中药的质量评价是中医药走向世界的
关键问题之一。《中国药典》多采用高效液相色谱法
·809· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
对选定处方中某味药的主要成分定量检测 ,质量评
价覆盖面小 ,应逐渐增加中药复方制剂中多种成分
的测定。本实验通过优化色谱条件 ,同时测定了注
射用双黄连中的 5 种有效成分。
参考文献 :
[ 1 ] 　任玲玲 ,张春枝 ,陈吉平1 黄芩的抗菌活性及 HPL C 分析[J ]1
精细化工 ,2005 ,22 (8) :58925911
[ 2 ] 　胡世林 , 冯学峰1 黄芩研究的某些新进展[J ]1 中国药学杂志 ,
2001 ,36 (11) :72827311
正交试验优化黄芪的乙醇提取工艺
崔红花1 ,赵英日2 ,尹永芹1 ,沈志滨1 3
(11 广东药学院中药学院 ,广东 广州 　510006 ; 21 广州中医药大学国际学院 ,广东 广州 　510405)
摘 　要 :目的 　建立黄芪中黄芪甲苷的 RP2HPLC 测定方法 ,探讨黄芪提取的工艺条件。方法 　以黄芪甲苷作为定
量指标成分 ,采用 HPLC2EL SD 法测定 ,确定乙醇体积分数、乙醇量、煎煮时间及煎煮次数为影响因素 ,并以 L 9 (34 )
正交设计表安排试验。结果　黄芪的最佳工艺条件为 :95 %乙醇常压回流提取 2 次 ,每次为药材量 10 倍 ,每次提取
时间为 3 h 最好。结论　优选的提取条件提取效率高 ,质量稳定 ,重现性好 ,可为确定黄芪提取工艺提供实验依据。
关键词 :蒙古黄芪 ;黄芪甲苷 ;正交设计 ;提取工艺 ; HPLC2EL SD
中图分类号 :R28412 ;R286106 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0620909203
　　黄芪为豆科植物蒙古黄芪 Astragalus membra2
naceus ( Fisch1 ) Bunge var1 mongholicus (Bunge )
Hsiao 或膜荚黄芪 A1 membranaceus ( Fisch1 ) Bunge
的干燥根 ,味甘 ,性微温 ,具有补气固表、利尿托毒、排
脓、敛疮生肌之功效 ,临床上主要用于气虚水肿、痈疽
难溃、久溃不敛、血虚痿黄、内热消渴。黄芪甲苷是黄
芪的主要成分之一 ,具有增强机体免疫功能 ,也是多
种制剂中的定量指标成分。黄芪皂苷的提取方法主
要采用索氏提取、微波提取法和超声波提取法、直接
加热提取法[1～3 ] 。本实验采用L9 (34 )正交设计法 ,以
黄芪甲苷作为检测指标 ,考察影响黄芪乙醇提取工艺
的因素 ,采用高效液相色谱法2蒸发光散射检测法
( HPLC 2ELSD)测定黄芪甲苷 ,优选出黄芪的最佳提
取工艺 ,为生产提供科学依据。
1 　仪器和试药
　　Waters 高效液相色谱仪 ,Alltech 2000 型蒸发
光散色检测器 ,Millennium32色谱工作站 ,SZ—93 自
动双重纯水蒸馏器 (上海亚荣生化仪器厂) 。
　　D101 型大孔吸附树脂柱 (南开大学化工厂) ;黄
芪甲苷对照品 (中国药品生物制品检定所) ;甲醇为
美国 Sigma 公司产品 ,色谱纯 ;其他试剂为分析纯 ,
实验用水为二次蒸馏水。
　　黄芪购自广州市药材公司 ,经广州中医药大学
高幼衡教授鉴定为豆科植物蒙古黄芪 A1 membra2
naceus ( Fisch1 ) Bunge var1 mong hol icus (Bunge)
Hsiao1 的干燥根。
2 　方法与结果
211 　因素水平的确定 :对于从黄芪中提取黄芪甲苷
的工艺 ,根据有关文献和资料 ,采用正交试验设计。
考虑黄芪甲苷极性较大 ,且在黄芪中的量不高 ,故选
取乙醇体积分数 (A) 、乙醇用量 (B) 、提取时间 ( C)
和提取次数 (D)为因素 ,各自取 3 个水平 ,因素与水
平见表 1。
表 1 　因素与水平
Table 1 　Factors and levels
水平
因　素
A/ % B/ 倍 C/ h D/ 次
1 50 8 1 1
2 75 10 2 2
3 95 12 3 3
212 　黄芪甲苷的 HPL C 法测定
21211 　色谱条件 :色谱柱为 Kromasil C18 (200 mm ×
416 mm ,5μm) ;流动相 :甲醇2水 (75 ∶25) ;柱温 :室
温 ;体积流量 :110 mL/ min ;进样量 :20μL ; ELSD 参
数 :漂移管温度为 107 ℃;气体流速为 2185 mL/ min。
21212 　供试品溶液的制备 :黄芪药材经粉碎为粗
品 ,过 60 目筛 ,精密称取 115 g ,加乙醇热回流提取 ,
·909·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
3 收稿日期 :2008211210　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :崔红花 (1976 —) ,女 (朝鲜族) ,讲师 ,博士 ,研究方向为中药及中药制剂的分析研究与开发 ,发表论文 20 余篇。
Tel : 13710768642 　E2mail :honghuacui @1631com3 通讯作者　沈志滨 Tel : (020) 39352179 E2mail :szb8113 @yahoo1com1cn