全 文 ：仲景三方对大鼠肝纤维化不同时期
胶原 ´ o¶ o·影响的观察
任小巧t o卢跃卿t o陈永旭t o李 伟t o高 寒u
kt q河南中医学院 o河南 郑州 wxsssv ~u q河南省中医药研究院 o河南 郑州 wxssssl
≈摘要  目的 }探讨小柴胡汤 !大黄 虫丸 !鳖甲煎丸治疗肝纤维化机理之异同 ∀方法 }用 ≤≤ w¯ 制造肝纤维化
模型 o分别于造模第 t天 !第 x周 !第 |周时分别加入上述三方制成的混悬液 o用药时间均为 w周 o处死取材后 ‹∞
及免疫组化染色 o观察三方在肝纤维化不同时期对胶原 ´ o¶ o·的影响 ∀结果 }小柴胡汤预防组及治疗 ´组肝脏
病理变化不明显 o胶原 ´ o¶ o·阳性程度轻 ~治疗 ´组 !治疗 µ组以大黄 虫丸 !鳖甲煎丸组病变程度轻 o胶原 ´ o
¶ o·阳性程度轻 o但 µ¬§¬·¨分析治疗 ´组大黄 虫丸优于鳖甲煎丸 ~治疗 µ组鳖甲煎丸优于大黄 虫丸 ∀结论 }小
柴胡汤治疗肝纤维化当早期用药 ~轻度肝纤维化大黄 虫丸疗效最优 o亦可用鳖甲煎丸 ~较重的肝纤维化鳖甲煎丸
疗效最优 o亦可用大黄 虫丸 ∀
≈关键词  小柴胡汤 ~大黄 虫丸 ~鳖甲煎丸
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号 tsst2xvsukusstlsw2suzu2sv
小柴胡汤乃仲景5伤寒杂病论6治疗少阳病证之
主方 ∀少阳病证属半表半里证 o证见口苦 !咽干 !目
眩 !往来寒热 !胸胁苦满 !默默不欲饮食 !心烦喜呕 !
舌苔薄白 !脉弦 o乃少阳枢机不利所致 ∀大黄 虫丸
乃5金匮要略6治干血劳之主方 ∀干血痨属血瘀证 o
证见形体羸瘦 !腹满不能食 !肌肤甲错 !两目黯黑 o此
乃五劳虚极 !瘀血内留 !日久而成干血 o瘀血内停 o新
血不生 o阴血不足 o筋脉肌肤失养 o诸症随生 ∀治宜
祛瘀生新 o方不致瘀祛正伤 o徒劳无功 o反致病重 o故
设大黄 虫丸为治 ∀鳖甲煎丸为5金匮要略6治疟母
之主方 ∀疟母之成乃疟邪久踞少阳 o正气日衰 o气血
运行不畅 o寒热痰湿之邪与气血搏结 o聚而成形 o留
于胁下所致 ∀治当攻补兼施 o寒温并用 o对于疟母内
结 o实有攻邪不伤正 !气畅血行 ! 积内消之功 ∀综
观三方之功效 !证治 o实有显著差别 o而临证均将此
三方用于肝纤维化治疗≈t ∗ v  o其机理当有所不同 ∀
但目前对其作用机理的研究报道尚少 o特别是三方
在肝纤维化不同时期作用机理是否相同 o未见报道 ∀
鉴此 o我们从实验研究方面探讨肝纤维化不同时期
肝脏病理学变化 o并用免疫组化方法探讨肝脏胶原
´ o¶ o·k≤²´ o≤²¶ o≤²·l的变化 o以探明三方的
作用机制 o为中医辨证治疗肝纤维化提供依据 ∀
≈收稿日期  usss2ts2s{
1 材 料
1 q1 实验动物 选用雄性 • ¬¶·¤µ大鼠 txs只 o体重
uux ∗ uys ªo由河南省中医药研究院实验动物中心
提供 o将大鼠饲养在 uv ∗ ux ε 室内 o自由进食 !进
水 ∀
1 q2 药物及制备 小柴胡汤按仲景原方药物组成
成分及剂量购药 o本组药材购自河南省药材公司 o全
部药材经我院中药教研室专家鉴定为上等药材 ~每
vss ª煎成汤液 tuy °¯ 的混悬液装瓶待用 ~大黄
虫丸 o北京同仁堂集团公司 o北京中药五厂生产 o批
号 |ys|st o每丸 v ªo每 y丸配成 t{s °¯ 药液待用 ~
鳖甲煎丸 o武汉市中联制药厂生产 o批号 |{svsu o每
瓶 xs ªo配成 |ss °¯ 药液待用 ~≤≤ w¯分析纯 o北京化
工厂生产 o批号 |zszs{ ~花生油购自河南省粮油公
司 o经分析化学教研室专家提纯 !精炼 !消毒后待用 ∀
2 方 法
2 q1 动物分组 !造模及给药方法 取雄性 • ¬¶·¤µ
大鼠 txs只 o按随机数字法分成 x组 o即正常组 !造
模组 !预防组 !治疗 ´组k造模 w周开始给予药物治
疗l !治疗 µ组k造模 {周开始给予药物治疗l各 vs
只 ~其中预防组 !治疗 ´组 !治疗 µ组各又分成 v组 o
每组各 ts只 o分别于造模第 t天 !第 w周末 !第 {周
末分别以小柴胡汤 !大黄 虫丸 !鳖甲煎丸予以预防
或治疗 ∀
#yyu#
第 uy卷第 w期
usst年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quy o‘²qw
„³µqousst
除正常组外 o其余 w组大鼠于实验第 t周即开
始皮下注射 ux h ≤≤ w¯花生油溶液 o按 u qs °¯ #®ªp t
体重 o每周 t上午 !周 w下午各注射 t次 o分别于给
药 w周 !{周 !tu周末各处死动物 ts只 o正常组于同
一时间分别处死 ts只 ~预防组于实验第 t天起各组
分别每天灌胃给予小柴胡汤混悬液 w qzy ª#®ªp t体
重 o大黄 虫丸混悬液uª#®ªp t体重 o鳖甲煎丸
t qtt ª#®ªp t体重k上述给药剂量按体表面积计算l o
给药至满 w周处死 ~治疗 ´组于造模 w周后在造模
给药k周 t上午 t次l同时按上述剂量方法灌胃给药
至满 {周处死 ~治疗 µ组于造模 {周按治疗 ´组方
法灌胃给药至满 tu周处死动物 o断头取血k备测其
他指标l o剖腹取肝脏 ∀取肝右叶 ts h福尔马林固
定 o石蜡包埋 o切片厚 w Λ° ∀肝脏纤维化程度按文
献≈w 分级 ∀
2 q2 免疫组化方法 按 ≥„…试剂盒说明程序进
行 o略作改进 ∀具体步骤如下 }常规脱蜡入水 ov h过
氧化氢室温孵育 us °¬±o清除内源性过氧化物酶活
性 o蒸馏水冲洗 o浸入 ³‹y qs枸缘酸缓冲液 o微波抗
原修复 { ∗ ts °¬±o室温冷却 ~°…≥ 冲洗 v °¬± ≅ v
次 o滴加 tΒus山羊血清 o室温孵育 us °¬±o封闭非特
异位点 ~倾去血清 o加入适当稀释的一抗k ´ o¶ o·
型胶原稀释度均为 tΒxslw ε 过夜 ~滴加适当稀释的
二抗k稀释度为 tΒuxsl o室温孵育 wx ∗ ys °¬±o滴加
与二抗稀释度相同的三抗k‹ • °标记亲和素l o室温
孵育 wx ∗ ys °¬±os qst h ⁄„…k含 s qsv h过氧化氢l
显色 o显微镜下控制 ∀胶原阳性程度按文献≈x 分
级 ∀
2 q3 统计学处理 µ¬§¬·¨分析 ∀
3 结 果
3 q1 常规病理结果 实验第 w周末 o模型组大鼠肝
小叶中心区及小叶周边区均可见到严重的脂肪变
性 !水样变性及灶性坏死 o肝细胞崩解后邻近血窦扩
张串连 o并由小叶向内外延伸 o形成/血管间隔0 o在
小叶区可见轻度组织纤维化k ´级l o小柴胡汤预防
组仅个别大鼠可见极轻微的脂肪变性 o余无明显变
化 o而大黄 虫丸预防组 !鳖甲煎丸预防组可见到与
模型组相似之变化 o程度似较轻 o大黄 虫丸组程度
更轻 ∀实验第 {周末时 o血管间隔内除基质增多外 o
还可见细胞大量增生 o主要为纤维母细胞 o其阳性部
位主要在汇管区与肝小叶 o此外还见新生小胆管 o这
种纤维间隔不完全分隔肝小叶 o组织纤维化程度为
t ∗ v级 ~治疗 ´组大黄 虫丸 !小柴胡汤 !鳖甲煎丸
组上述改变明显较模型组轻 ~造模 tu周末 o模型组
上述变化进一步加重 o纤维间隔完全分隔肝小叶 o组
织纤维化程度多为 u ∗ v级 ~治疗 µ组中大黄 虫
丸 !鳖甲煎丸组汇管区 !小叶内均有较重的阳性着
色 o但未见假小叶形成 ~小柴胡汤治疗 µ组组织纤维
化程度仍较重 o已形成假小叶 ∀
3 q2 免疫组化结果
3 q2 q1 预防组肝脏 ≤²´ o≤²¶ o≤²·结果 从表 t
可知 o造模第 w 周末时 o模型组大鼠肝脏 ≤²´ o≤²
¶ o≤²·已经开始沉积 o以 ≤²¶为主 o小柴胡汤预防
组与模型组相比肝脏 ≤²´ o≤²¶ o≤²·阳性程度明
显较轻 o说明小柴胡汤能阻止或减少胶原纤维在肝
脏内沉积而保护肝脏 ~预防性给予大黄 虫丸对 ≤²
·作用不明显 o但可明显降低 ≤²´ o≤²¶的阳性程
度 ~预防性给予鳖甲煎丸对 ≤²¶ o≤²·作用不明显 o
可明显降低 ≤²´的阳性程度 ∀
表 t 预防组大鼠肝脏 ≤²´ o≤²¶ o≤²·结果 只
组 别 例数
≤²´
s级 ´级 µ级 ¶级
≤²¶
s级 ´级 µ级 ¶级
≤²·
s级 ´级 µ级 ¶级
正 常 组 ts ts s s s ts s s s ts s s s
模 型 组 ts s x x s s v z s s z v s
小胡汤 ts y w s s z v s s y w s s
大黄 虫丸 ts x x s s w y s s v z s s
鳖甲煎丸 ts v z s s v x u s u y u s
3 q2 q2 治疗 ´组肝脏 ≤²´ o≤²¶ o≤²·结果 从表
u可知模型组大鼠第 {周末肝脏 ≤²´ o≤²¶ o≤²·沉
积量已增加 o其阳性程度以 µ级为主 o在造模第 x周
开始分别给予小柴胡汤 !大黄 虫丸 !鳖甲煎丸混悬
液予以治疗后 o各组 ≤²´ o≤²¶阳性程度均明显降
低 oµ¬§¬·¨分析可知对 ≤²´的作用 o大黄 虫丸优于
小柴胡汤 o优于鳖甲煎丸 ~对 ≤²¶的作用 o小柴胡汤
与鳖甲煎丸相当 o均优于大黄 虫丸 ~对 ≤²·的作
用 o小柴胡汤优于大黄 虫丸与鳖甲煎丸 oµ¬§¬·¨分
析有显著统计学意义 ∀结合 ‹∞结果在轻度肝损伤
#zyu#
第 uy卷第 w期
usst年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quy o‘²qw
„³µqousst
的治疗方面小柴胡汤优于大黄 虫丸 o优于鳖甲煎 丸 ∀
表 u 治疗 ´组大鼠肝脏 ≤²´ o≤²¶ o≤²·结果 只
组 别 例数
≤²´
s级 ´级 µ级 ¶级
≤²¶
s级 ´级 µ级 ¶级
≤²·
s级 ´级 µ级 ¶级
正 常 组 ts ts s s s ts s s s ts s s s
模 型 组 ts s u { s s w y s s w y s
小柴胡汤 ts w y s s y w s s w y s s
大黄 虫丸 ts y v t s w y s s u { s s
鳖甲煎丸 ts v y t s y w s s s { u s
3 q2 q3 治疗 µ组肝脏 ≤²´ o≤²¶ o≤²·结果 从表
v可知 o造模至第 tu周末时 o模型组大鼠肝脏 ≤²´ o
≤²¶ o≤²·均大量沉积 o其阳性程度均以 ¶级为主 o
在造模第 |周时分别给予小柴胡汤 !大黄 虫丸混
悬液治疗后 o小柴胡汤组各型胶原阳性程度仍较重 o
与模型组比较无显著差异 ~大黄 虫丸 !鳖甲煎丸治
疗组 ≤²´ o≤²¶ o≤²·阳性程度明显较模型组轻 o有
显著统计学意义 oµ¬§¬·¨分析知鳖甲煎丸对 ≤²´ o≤²
¶的作用均明显优于大黄 虫丸组 o但从大鼠一般
情况知鳖甲煎丸组k治疗 µ组l大鼠精神状态差 !体
重不增或减轻 o实验全程死亡 u只 ∀
表 v 治疗 µ组大鼠肝脏 ≤²´ o≤²¶ o≤²·结果 只
组 别 例数
≤²´
s级 ´级 µ级 ¶级
≤²¶
s级 ´级 µ级 ¶级
≤²·
s级 ´级 µ级 ¶级
正 常 组 ts ts s s s ts s s s ts s s s
模 型 组 { s s u y s s u y s s t z
小胡汤 | s s u z s s x w s s y v
大黄 虫丸 ts s y w s u y u s t y v s
鳖甲煎丸 { t y t s y t t s s t y t
4 结论与讨论
一般认为肝纤维化时 o⁄¬¶¶¨ 间隙细胞外基质成
分合成增加 o降解减少 o纤维组织沉积增加 o´ o¶ o
·型胶原大量沉积 o肝纤维化时细胞外基质增加 w ∗
z倍 o并且基质内 x种胶原蛋白比例失调 ~其中主要
是 ≤²´ o≤²¶增加 o它们广泛分布于肝脏的间质 o肝
纤维化早期 ¶型胶原增加多 o后期以 ´型胶原增加
为主 o´r ¶  u ∀ ´型胶原主要分布在纤维间隙 o¶
型胶原主要与网状纤维有关 ∀肝纤维化早期 o间质
胶原沉积于 ⁄¬¶¶¨ 间隙皮下 o使 ·型胶原的功能性基
底膜破坏 o导致肝窦壁毛细血管化 o是肝纤维化的分
子病理学基础 ∀
本实验证明小柴胡汤预防给药能减缓肝纤维化
的发生 o轻度肝损伤时给药能减轻各型胶原的阳性
程度 o同时能降低血清 ‘o‹„ o°¦¶的含量 o重度肝
损伤时给药对各型胶原无明显逆转作用 o对血清
‘o‹„ o°¦¶无显著影响k另文l ∀此作用说明小柴
胡汤能直接抑制肝纤维化 o或改善因应用 ≤≤ w¯ 引起
的细胞持续性炎性坏死而间接抑制了肝纤维 o与文
献报道一致≈y  o但对已形成的胶原的降解作用似不
明显 o提示临床应用小柴胡汤治疗肝纤维化时应早
期用药 ∀
实验结果还可见到大黄 虫丸对各期胶原及血
清 ‹ „ o‘o°¦¶均有明显影响 o鳖甲煎丸在预防肝
纤维化发生方面似无明显效果 o然在轻度肝损伤或
重度肝损伤时给药 o均能明显减轻各型胶原的阳性
程度 o同时血清 ‹ „ o‘o°¦¶含量明显降低k另文l ∀
然两方作用的胶原主要类型似有差异 o说明两方对
贮脂细胞或肝细胞基因表型的作用可能不同 o从而
增加不同类型胶原的降解 o或其可通过影响细胞外
基质等纤维化调节因子而治疗肝纤维化 ∀
总之小柴胡汤 !大黄 虫丸可预防或减缓肝纤
维化的发生 ~对轻度肝纤维化的疗效小柴胡汤优于
大黄 虫丸优于鳖甲煎丸 ~对重度肝纤维化鳖甲煎
丸优于大黄 虫丸 o小柴胡汤无效 o然当注意鳖甲煎
丸的攻逐伤正之弊端 ∀以上结论充分体现中医学辨
证论治思想在疾病治疗中的指导价值 o为中医药学
辨证论治理论提供了重要的科学依据 ∀
≈参考文献 
≈t  卢集森 q小柴胡汤新用 q新中医 ot||y oktl }xw q
≈u  赵希锋 q大黄 虫丸治疗肝纤维化 w{ 例 q甘肃中医 ot||z ots
ktl }ut q k下转第 uzw页l
#{yu#
第 uy卷第 w期
usst年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quy o‘²qw
„³µqousst