全 文 :#研究论文#
滇白珠提取物抗细菌活性的筛选
马小军t o赵 玲 3 o杜程芳t o宫毓静t o郑俊华t o陈新滋u
kt q北京大学 药学院 天然药物学系 o北京 tsss{v ~
u q香港理工大学 应用生物及化学科技学系l
≈摘要 目的 }筛选滇白珠抗菌成分 o为更全面的评价和开发滇白珠提供依据 ∀方法 }成分提取用萃取 !层析
等常规方法 ∀抗菌力测定用纸片扩散法 ∀结果和结论 }在滇白珠不同部位 !不同极性的 uu个提取物中有 v个提取
物有较显著的抑制金黄色葡萄球菌作用 o且根与茎的提取物作用一致 ~u个提取物有一定的抑制大肠杆菌和绿脓杆
菌作用 o说明滇白珠根水提物 !乙酸乙酯和正丁醇萃取物均有一定的抑菌作用 ∀首次证明滇白珠非挥发部分也有
抗细菌作用 ∀
≈关键词 滇白珠 ~抗细菌活性 ~筛选
≈中图分类号 u{x qx ~ |z{ qt ≈文献标识码
≈文章编号 tsst2xvsukusstlsw2suuv2sw
滇白珠 Γαυλτηερια λευχοχαρπα
¯ ∏°¨√¤µq ψυν2
νανενσισkƒµ¤±¦«ql × q q¶∏ i q≤ qƒ¤±ª是西南
地区许多少数民族广泛应用的一种民间草药≈t o主
要用于治疗风湿性关节炎 o也用于治疗皮肤湿疹 !皮
肤瘙痒 !疮疖 !阿米巴痢疾等病症≈u ∀
滇白珠的抗菌作用已有一些研究 o据报道滇白
珠油对金黄色葡萄球菌 !副伤寒杆菌丙 !志贺氏 ´型
大肠杆菌有轻度敏感 o对不凝集弧菌 µ型 !炭疽杆菌
有中度敏感作用 ~tΒts浓度滇白珠油对黄色八叠球
菌 !白色葡萄球菌 !枯草杆菌有中度敏感作用≈v ∀
滇白珠根提取的挥发油和挥发油饱和液对金黄色葡
萄球菌 !绿脓杆菌 !大肠杆菌和变形杆菌均有抑制作
用≈w o但滇白珠地上部分和非挥发成分的抗菌活性
尚未见报道 ∀为了更全面地筛选滇白珠抗菌部位和
成分 o我们对滇白珠地上部分的非挥发成分的抗菌
活性进行了初步筛选 ∀
1 实验材料与方法
1 q1 实验用菌种
金黄色葡萄球菌 Σταπηψλοχοχχυσ αυρευσ k× ≤≤
ux|uxl !绿脓杆菌 Πσευδοµ ονασ αερυγινοσαk× ≤≤
uz{xvl !大肠杆菌 Εσχηεριχηια χολιk× ≤≤ ux|uul o
由北京大学第三附属医院细菌室提供 ∀
≈收稿日期 usss2ts2vs
3 北京职工医学院 usss届实习生
1 q2 待测样品k表 tl
表 t 样品来源及其编号
编号 待测样品
t 滇白珠根 |x h乙醇提取物
u t号样石油醚萃取物
v t号样乙酸乙酯萃取物
w t号样正丁醇萃取物
x t号样萃取后剩余水物
y 滇白珠茎 |x h乙醇提取物
z y号样石油醚萃取物
{ y号样乙酸乙酯萃取物
| y号样正丁醇萃取物
ts y号样萃取后剩余水物
tt 滇白珠叶 |x h乙醇提取物
tu tt号样石油醚萃取物
tv tt号样乙酸乙酯萃取物
tw tt号样正丁醇萃取物
tx tt号样萃取后剩余物
ty 滇白珠根水提取物
tz 滇白珠茎水提取物
t{ 滇白珠叶水提取物
t| tw号样大孔树脂 vs h乙醇洗脱部分
us tw号样大孔树脂水洗脱部分
ut tw号样大孔树脂 |x h乙醇洗脱部分
uu t|号样中得到 ⁄t⁄u⁄v混合单体tl
注 }tl ⁄t o⁄u o⁄v 分别为k n l2¼²±¬µ¨¶¬±²¯2u¤22Α22¤µ¤¥¬±²³¼µ¤2
±²¶¬§¨ ok p l2xχ2 ·¨«²¬¼¬¶²¯¤µ¬2¦¬µ¨¶¬±²¯2u2¤22Β2⁄2¬¼¯ ²³¼µ¤±²¶¬§¨ ok n l
p ¼²±¬µ¨¶¬±²¯2u¤22Β2⁄2ª¯∏¨ ²³¼µ¤±²¶¬§¨ o比例为 zw qy h ouu h和 v h
每一样品共测试 w个浓度 o每个浓度样品均做
#vuu#
第 uy卷第 w期
usst年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quy o²qw
³µqousst
空白对照 o以二甲亚砜助溶 o将样品分别用灭菌蒸馏
水稀释至终浓度为 tss ots ou os qw °ª# °¯ p t o并将其
做二甲亚砜抗菌对照 ∀
1 q3 抗菌力检定方法≈x
用纸片扩散法检测 t ∗ uu号待测样品 ∀
培养基 水解酪蛋白k 2l平板 o直径 | ¦°平
皿 o琼脂厚 w °° ∀药敏纸片的制备 }选用新华 t号
定性滤纸 o用打孔机制作 x °°的小圆片 o置平皿内
高压灭菌ktsv qw ®°¤ous °¬±l o取出后置于烘箱内
烘干 o分装于灭菌小瓶内备用 o每片药敏纸片含药液
z Λ¯ ∀
操作方法 用棉试子蘸取菌液k菌液浓度为
t qx ≅ ts{¦©∏# °¯ p tl均匀涂布整个培养基表面 o反复
几次 ∀在用镊子分别挟取含有不同药物的滤纸片 o
贴在已接种细菌的琼脂平板表面 o每个平板上贴 w
∗ y片 o各纸片中心相距约 uw °° o纸片距平皿缘约
tx °° o各纸片间距离相等 ∀vz ε 培养 uw «o观察
抑菌圈的有无 ∀
2 结果与讨论
滇白珠不同提取部位抗细菌筛选结果k表 ul ∀
表 u 滇白珠提取物抗细菌筛选结果
编号 Σ . αυρευσ Π. αερυγινοσε Ε . χολι 编号 Σ . αυρευσ Π. αερυγινοσε Ε . χολι
t2ttl n n n n n n n n tu2t p p p
t2u n n p p tu2u p p p
t2v n p p tu2v p p
t2w p p tu2w p p p
u2t n n n p tv2t n n p
u2u p p p tv2u p p p
u2v p p p tv2v p p p
u2w p p p tv2w p p p
v2t n n n n n n n n tw2t n n n p
v2u n n n p p tw2u p p p
v2v n n p p tw2v p p p
v2w p p p tw2w p p p
w2t n n n n n n n n tx2t p p p
w2u n n p p tx2u p p p
w2v n p p tx2v p p p
w2w p p p tx2w p p p
x2t n n p ty2t n n n n
x2u p p p ty2u n p p
x2v p p p ty2v p p p
x2w p p p ty2w p p p
y2t n n n n n n n n tz2t n p n
y2u n n p p tz2u p p p
y2v n p p tz2v p p p
y2w p p p tz2w p p p
z2t n n p t{2t n n n
z2u p p p t{2u p p p
z2v p p p t{2v p p p
z2w p p p t{2w p p p
{2t n n n n n n n n n t|2t n n n n n n n n
{2u n n p n n t|2u n n n p p
{2v n p p t|2v n n p p
{2w p p p t|2w p p p
|2t n n n n n n n us2t p p p
|2u n n n n n us2u p p p
|2v n p p us2v p p p
|2w p p p us2w p p p
ts2t n p p ut2t n p p
ts2u p p p ut2u p p n
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第 uy卷第 w期
usst年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quy o²qw
³µqousst
续表 u
编号 Σ . αυρευσ Π. αερυγινοσε Ε . χολι 编号 Σ . αυρευσ Π. αερυγινοσε Ε . χολι
ts2v p p p ut2v p p p
ts2w p p p ut2w p p p
tt2t n n n n n uu2t p p p
tt2u p p p uu2u p p p
tt2v p p p uu2v p p p
tt2w p p p uu2w p p p
二甲基亚砜对照 p p p
注 }tl前 u位数字代表样品的编号 o后 t位数字代表药物浓度k°ª# °¯ p tl }t qtss ~u qts ~v qu ~w qs qw 所有样品均做平行实验
表 u中样品的抑菌作用表现出明显的规律性 }
≠在 uu个滇白珠提取物样品中 ot ov ow oy o{ o| ot|
号等 z个样品均有较显著的抑制金黄色葡萄球菌的
作用 ∀其中 t ov ow号样品正好是根和茎相对应的提
取部位 o即滇白珠根 |x h乙醇提取物及其正丁醇和
乙酸乙酯萃取物与滇白珠茎 |x h乙醇提取物及其
正丁醇和乙酸乙酯萃取物 o这说明根和茎中同一提
取部位可能含有相同的抗细菌成分 o这种规律性也
表明了实验结果的可靠性 ∀ ty号样品有一定的
抑制金黄色葡萄球菌作用 o{和 |号样品分别有一
定的抑制大肠杆菌和绿脓杆菌的作用 o说明滇白珠
根水提物 !乙酸乙酯和正丁醇提取物均有一定的抑
菌作用 o但因样品浓度较高其作用需进一步验证 ∀
≈浓度问题 }本实验抑菌药量偏大 o抑菌作用随着浓
度稀释而消失 o可能因样品抗菌成分纯度不够 !杂质
较多所致 o今后有必要做进一步分离和筛选 ∀
在以前的报道中 o集中筛选了滇白珠药材挥发
油的抗细菌活性 o作用强而明显 o抑菌浓度 t ∗ u Λª#
°¯ p t o推测水杨酸甲酯是抗细菌成分 o因为它在挥
发油中含量高达 |v qvy h ∀本实验证明滇白珠非挥
发成分也有一定抗细菌作用 o今后在开发滇白珠的
抗细菌成分时应予重视 ∀同时本实验还初步证明地
上部茎也有与根相同的抗细菌活性 o为今后非破坏
性开发滇白珠抗菌资源提供了一定的依据 ∀
我们还首次用滇白珠相同的 uu个提取物 o用半
固体培养基稀释法对白色念珠菌 !啤酒酵母 2z
和威克海姆原藻 v 种真菌进行了抗真菌活性筛
选≈y ∀结果表明滇白珠没有明显的抗真菌作用 ∀
≈参考文献
≈t 马小军 o郑俊华 o陈新滋 q民间药滇白珠资源研究 q中国中药杂
志 qusst ouykul }{x q
≈u 江苏中医学院 q中药大辞典 q上册 q上海 }上海人民出版社 o
t|zz qt{z| q
≈v 卫生部药品生物制品鉴定所 q中国民族药志 q´ q北京 }人民卫
生出版社 ot||u qxxy q
≈w 张治针 o果德安 o小汝一男 o等 q滇白珠抗菌抗炎和镇痛活性
的实验研究 q西北药学杂志 ot||| otwkul }ys q
≈x 张卓然 q医学微生物实验学 q北京 }科学出版社 ot||{ q
≈y 马小军 q民族药滇白珠资源学的研究 q博士后研究工作报告 q
北京 }北京大学 ousss qx| q
Σχρεενινγ οφ Αντι2βαχτερια Αχτιϖιτψ οφ Εξτραχτσ οφ
Γαυλτηερια λευχοχαρπα ϖαρ . ψυννανενσισ
÷¬¤²2∏±t o ¬±ªo⁄ ≤«¨ ±ª2©¤±ªt o ²±ª ≠∏2¬±ªt o ∞ ∏±2«∏¤t o≤ ∞ ÷¬±2½¬u
kt q⁄¨ ³¤µ·° ±¨·²© ¤·∏µ¤¯ §¨¬¦¬±¨ ¶o≥¦«²²¯ ²© °«¤µ°¤¦¨∏·¬¦¤¯ ≥¦¬¨±¦¨ o
¨ ¬¬±ª ±¬√ µ¨¶¬·¼ o
¨ ¬¬±ª tsss{v o≤«¬±¤~
u q⁄¨ ³¤µ·° ±¨·²© ³³¯¬¨§
¬²¯²ª¼ ¤±§≤«¨ °¬¦¤¯ × ¦¨«±²¯²ª¼ o
²±ª ²±ª °²¯¼·¨¦«±¬¦±¬√ µ¨¶¬·¼ o²±ª ²±ªl
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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³µqousst
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ©∏µ·«¨µ§¨ √¨¯²³ Γαυλτηερια λευχοχαρπα √¤µq ψυννανενσισ,¤±·¬2¥¤¦·¨µ¬¤ ¦²±2
¶·¬·∏¨ ±·¶¬±¬·º µ¨¨ ¶¦µ¨¨¨ ±¨ §q Μετηοδ : ׫¨ ¦²±¶·¬·∏¨ ±·¶º µ¨¨ ¬¨·µ¤¦·¨§¥¼ ¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦³µ²¦¨¶¶q׫¨ ¤±·¬2
¥¤¦·¨µ¬¤·¨¶·º¤¶°¤§¨ º¬·«µ¨ª∏¯¤·²µ¼ ° ·¨«²§²©¤±¤¯¼¶¬¶q Ρεσυλτ ανδ χονχλυσιον : ±·¬2¥¤¦·¨µ¬¤·¨¶·º¬·« ¬¨2
·µ¤¦·¶²© º¤·¨µo¤¦¨·¬¦ ¶¨·¨µ¤±§ ν2¥∏·¤±²¯ ¶«²º §¨·«¤·v ¬¨·µ¤¦·¶©µ²° uu ¶¤°³¯ ¶¨«¤§¤±·¬2 Σταπηψλοχοχχυσ αυ2
ρευ󤦷¬²±o¤±§·«¨ ¬¨·µ¤¦·¶©µ²° µ²²·¤±§¶·¨° ¶«²º §¨·«¨ ¶¤°¨µ¨¶∏¯·qu ¬¨·µ¤¦·¶¦²∏¯§®¬¯¯ Εσχηεριχηια χολι
¤±§ Πσευδοµ ονασ αερυγινοσαq ׫¨ ²¯º µ¨·«¨ ¦²±¦¨±·µ¤·¨ o·«¨ ¯¨ ¶¶·«¨ ¤±·¬2¥¤¦·¨µ¬¤¤¦·¬²± º¤¶q ׫¨ ¶¨ µ¨¶∏¯·¶
¶∏ªª¨¶·¨§·«¤·±²·²±¯ ¼ ¶¨¶¨±·¬¤¯ ²¬¯ ¥∏·²·«¨µ¬±ªµ¨§¬¨±·¶©µ²° q¯ ∏¨¦²¦¤µ³¤√¤µq¼∏±±¤±¨ ±¶¬¶«¤√¨¤±·¬2¥¤¦·¨µ¬¤
¤¦·¬√¬·¼ q±·¬2©∏±ª¬·¨¶·²©·«¨ ¶¤°¨ ¬¨·µ¤¦·¶§¬§±. ·¬±§¬¦¤·¨ µ¨ °¤µ®¤¥¯¨¤¦·¬²±q
[ Κεψ ωορδσ] ¤∏¯·«¨µ¬¤¯¨ ∏¦²¦¤µ³¤√¤µq¼∏±±¤±¨ ±¶¬¶~¤±·¬2¥¤¦·¨µ¬¤¤¦·¬√¬·¼ ~¶¦µ¨ ±¨
≈责任编辑 袁桂京
长白山蜜源植物花粉形态
张静敏t o丛登立t o金向群u
kt q白求恩医科大学 药学院 o吉林 长春 tvssut ~ u q吉林省中医中药研究院 o吉林 长春 tvssutl
≈摘要 目的 }长白山是我国东北高山植物代表区 o蜜源植物资源极为丰富 o为更好的开发利用长白山蜜源植
物和峰产品 ∀方法 }利用光学显微镜和电子显微镜对蜜源植物花粉形态进行了观察和研究 ∀结果 }其花粉多为扁
球形 !近球形 !三角形 !四角形等 ~萌发孔为三孔沟 !三沟 !散沟等 ~外壁纹饰多为网状纹饰 !条状纹饰 !刺状纹饰 ∀结
论 }为长白山蜜源植物资源开发和蜂产品的检验提供了鉴别花粉的依据 ∀
≈关键词 蜜源植物 ~花粉 ~扫描电镜
≈中图分类号 u{u qx ≈文献标识码
≈文章编号 tsst2xvsukusstlsw2suuy2sz
1 前言
蜜源植物的花粉营养丰富 o蛋白质 !氨基酸的含
量比牛肉多 x ∗ z倍 o所含芸香苷与维生素为延年益
寿抗衰老成分≈u ow ox ∀
蜂蜜是蜜蜂吸采百花甜汁酿造而成的 o蜜蜂在
采集花蜜的同时 o还要采花粉供幼虫饲料之用 ∀在
酿造过程中 o各种花粉都不可避免地混入蜂蜜中 o因
此蜂蜜中含有各种各样的花粉 o如果花粉含量过多
会影响蜂蜜的质量和色泽 o也是蜂蜜发酵变质的主
要原因之一 o但适当地保持花粉的含量 o对提高其营
养价值和准确地鉴别蜂蜜的种类 !纯度以及该种蜂
蜜的产地和来源提供重要的依据≈t ov ∀有关长白山
蜜源植物花粉形态研究报道较少≈t ov ow o尚无较系统
的资料 o本文对吉林省长白山产 ut种蜜源植物的花
≈收稿日期 usss2sv2tw
粉进行观察 !研究 o为长白山蜜源植物资源开发 !利
用 !蜂产品检验等方面提供基本资料 ∀
2 材料和方法
本文所用的材料采自笔者在长白山调查时采到
的标本 o这些标本已存放在东北师大标本室 ∀
本文处理花粉的方法采用 q° q• ²§¨ «²∏¶¨ 整
体封片法和 q∞µ§·°¤±醋酸酐硫酸分解法 o其中醋
酸酐分解的花粉用来测量 !观察 !照相 ~整体封片的
花粉仅作对照 o目的是考虑到鉴定蜂蜜的实际需要 o
用甘油胶制片 o加拿大树胶封边 o花粉粒大小测量是
在显微镜下放大 wss倍进行 o一般测 us粒 o取其最
大值及最小值作为变化幅度 o并算出平均值 ∀
电镜材料的制备是从花上取花药 o弄破后直接
把花粉粘到双面透明胶带上 o在镀膜机上镀金 o然后
在电镜下观察 !照相 ∀本实验用日本产 ≥2xzs扫描
电子显微镜拍照 ∀
3 实验结果k表 t o图 tl
#yuu#
第 uy卷第 w期
usst年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quy o²qw
³µqousst