全 文 ：用均匀设计法优选参附汤的半仿生提取工艺条件
张兆旺 o修彦凤 o孙秀梅
k山东中医药大学 o山东 济南 uxsstwl
≈摘要 目的 }为参附汤剂改研究优选提取工艺 ∀方法 }以人参二醇 !人参三醇 !总生物碱 !酯型生物碱 !总糖
和干浸膏为指标 o采用均匀设计优选其半仿生提取法k简称 ≥
∞法l的条件 ∀结果 }三煎用水的 ³ 值依次为 v qxs o
z qss o{ qss ~煎煮时间依次为 }u ot os qx «∀结论 }用均匀设计优选 ≥
∞工艺条件 o简便可行 ∀
≈关键词 参附汤 ~半仿生提取法 ~均匀设计 ~工艺条件
≈中图分类号 u{v ≈文献标识码
≈文章编号 tsst2xusvkussslsy2svwx2sv
参附汤出自明代#薛己5正体类要6一书 o具益气
活血 o回阳救脱 o强心生脉功能 ∀用于元气大亏 o阳
气暴脱 o手足厥冷 o呼吸微弱 o脉微等症 o临床上用于
治疗冠心病 !各种原因引起的休克 ∀为对其进行剂
改研究 o依据 ≥
∞法理论≈t ou o以人参二醇 !人参三
醇 !总生物碱 !酯型生物碱 !总糖和干浸膏为指标 o用
均匀设计法≈v 优选其 ≥
∞法工艺条件 ∀
1 仪器与材料
³≥2v≤ 型精密 ³ 计 k上海雷磁仪器厂l ~
tts型电子分析天平k上海第三天平仪器厂l ~
zxt2 • 型分光光度计k上海分析仪器厂l ~≤≥2|vs
型薄层扫描仪k日本岛津l ~÷2 µ型离心沉淀机k上
海医疗器械三厂l ∀
药材经作者鉴定 }人参为五加科植物人参
Παναξ γινσενγ ≤ q q ¼¨ q的干燥根 o生附子为毛茛
科植物乌头 Αχονιτυ µ χαρµιχηαελι ⁄¨ ¥¬q子根的加
工品 ∀
人参二醇 !人参三醇 !乌头碱k中国药品生物制
品检定所l ∀其余试剂均为分析纯 ∀
2 实验设计
2 q1 确定考察因素与水平
根据 ≥
∞法及附子炮制原理 o在药材粒度 !煎
提温度 !煎煮加水量 !滤过 !浓缩等条件相同的前提
下 o确定考察主要因素及水平 ∀
2 q2 选用均匀设计表安排实验
根据中国航天工业总公司第三研究所提供的
|k|t ≅ vvl表安排各因素水平进行实验 o实验方案
见表 t ∀
≈收稿日期 t|||2sw2uz
表 t |k|t ≅ vvl均匀设计表
实验
号
Α
第 t煎
水 ³ 值
Β
第 u煎
水 ³ 值
Χ
第 v煎
水 ³ 值
∆
煎煮
τr«
t u qss z qss | qss v qxs
u w qss y qxs | qss z qss
v u qxs y qxs { qss x qux
w v qss z qxs { qxs z qss
x x qxs z qss { qss z qss
y v qxs z qss { qss v qxs
z w qxs z qxs | qss x qux
{ x qss z qxs { qxs x qux
| y qss y qxs { qxs v qxs
3 实验方法
3 q1 提取液的制备
将处方药材分别粉碎 o取 tu ∗ us目粗粉 o人参
u{ ªo生附子 ut ªo混匀 ∀常压下加热回流提取 v次
k溶剂量分别为药材重量的 ts oy oy倍 ~v次提取时
间比为 uΒtΒs qxl o溶剂水的 ³ 值及提取时间按表 t
规定 o提取液 w层纱布加 tss目筛分别滤过 o离心 o
合并上清液并浓缩定容至 xss °¯ ∀制得 t ∗ |号提
取液k每 t °¯ 相当于原药材 s qs|{ ªl ∀
3 q2 人参二醇与人参三醇的含量测定
3 q2 q1 供试液的制备 精取 3 q1 项下提取液 xs
°¯ o浓缩至约 vx °¯ o加乙醇 tu qx °¯ 和浓硫酸 u qx
°¯ o水浴回流 w «o加水稀释至 zs °¯ o精取 xs °¯ o用
适量氯化钠饱和 o乙醚萃取 x 次kus ous ous otx ots
°¯ l o合并萃取液 o用 s qtux °²¯ #p t的氢氧化钠溶
液kxs ovs °¯ l洗涤乙醚液 u次 o再用少量水洗涤乙
醚液至中性 o用无水硫酸钠脱水 o滤过 o回收乙醚至
干 o残留物用氯仿溶解并定容至 u °¯ o即得k每 t °¯
相当于原药材 t qzx ªl ∀
#xwv#
第 ux卷第 y期
usss年 y月
中 国 中 药 杂 志
≤«¬±¤²∏µ±¤¯ ²© ≤«¬±¨ ¶¨ ¤·¨µ¬¤ §¨¬¦¤
∂ ²¯ qux o²qy
∏±¨ ousss
3 q2 q2 对照液的制备 精密称取人参二醇 t qw
°ªo人参三醇 t qu °ªo分别用氯仿定容至 u °¯ o即
得 ∀
3 q2 q3 标准曲线的制备
3 q2 q3 q1 薄层扫描条件 }人参二醇 Κ¶ xvx ±° oΚ
zss ±° ~人参三醇 Κ¶xvs ±° oΚ zss ±° ~灵敏度 }中 ~
≥÷ v ~狭缝 t qus °° ≅ t qus °° ~双波长反射式锯
齿形扫描 ∀
3 q2 q3 q2 标准曲线的制备 }在 s qv h ≤ ≤¤2硅胶
薄层板上分别点人参二醇对照液 u qs ow qs o{ qs o
tu qs oty qs ous qs Λ¯ ~人参三醇对照液 u qs ow qs oy qs o
{ qs ots qs otu qs Λ¯ o用氯仿2乙醚ktΒtl展开 tx ¦° o挥
干溶剂 o喷 ts h硫酸乙醇 o{s ε 烘 ts °¬±o显色 o扫
描 ∀以点样量为横坐标 o峰面积为纵坐标作图 o二者
均得一不过原点的直线 ∀人参二醇线性范围 t qw ∗
tw qs Λªo回归方程为 Ψ tzzx .syxx Ξ p |xz .twx| ,
ρ s .||{z( ν yl ~人参三醇线性范围 t qu ∗ z qu
Λªo回归方程为 Ψ uwww .wxwu Ξ p tzxy .stzv , ρ
s .||zv( ν yl ∀
3 q2 q4 供试液的含量测定 精取 3 q2 q1 项下供试
液 uw qs Λ¯ o3 q2 q2 项下人参二醇对照液 w qs oy qs Λ¯ o
人参三醇对照液 w qs otu qs Λ¯ o分别点于同一块薄层
板上 o按 3 q2 q3 项下方法展开 o显色 o扫描 o结果见表
u ∀
3 q3 总生物碱的含量测定
按文献≈w 方法 o依法测定 o结果见表 u ∀
3 q4 酯型生物碱的含量测定
3 q4 q1 对照液的制备 精密称取乌头碱对照品
| q{ °ªo置 ts °¯ 容量瓶中 o加无水乙醇溶解并稀释
至刻度 ∀
3 q4 q2 标准曲线的制备 按文献≈w 方法 o依法测
定 o以乌头碱含量为横坐标 o吸收度为纵坐标作图 o
得一不过原点的直线 o乌头碱线性范围s quwx ∗
u qwxs °ªo回归方程为 Ψ s .ttss Ξ p s .sszv , ρ
s .||z|( ν yl ∀
3 q4 q3 含量测定 按文献≈w 方法 o依法测定 o结果
见表 u ∀
3 q5 总糖的含量测定
3 q5 q1 供试液的制备 分别精取 3 q1 项下提取液
u qs °¯ o加 |x h乙醇 o使含醇量达 {x h o静置冷藏 uw
«o抽滤 o取沉淀加适量水溶解 o滤过 o加水定容于
uxs °¯ 容量瓶中 o即得 ∀
3 q5 q2 对照液与显色剂的配制 精密称取干燥至
恒重的葡萄糖 x qs °ªo置 xs °¯ 容量瓶中 o加蒸馏水
溶解并稀释至刻度 o摇匀 o即得对照液 ∀称取蒽酮
s qtu ªo置 tss °¯ 容量瓶中 o加入 |x h硫酸溶解并
稀释至刻度 o冷却至室温 o即得 s qtu h蒽酮显色试
剂k临用现配l ∀
3 q5 q3 标准曲线的制备 精取葡萄糖对照液
s qus os qws os qys os q{s ot qss °¯ o分别置干燥具塞试
管中 o补加蒸馏水使成 u qss °¯ o分别加入 s qtu h蒽
酮试剂 w qss °¯ o混匀 o放至室温 ∀以蒸馏水 u qss
°¯ o加蒽酮试剂 w qss °¯ 为随行空白 o在 yux ±°处
测定吸收度 ∀以葡萄糖含量为横坐标 o吸收度为纵
坐标作图 o得一不过原点的直线 o葡萄糖线性范围
s qsu ∗ s qts °ªo回归方程为 Ψ z .vx Ξ p s .suy , ρ
s .|||u( ν xl ∀
3 q5 q4 含量测定 按 3 q5 q3 项下方法 o精取 3 q5 q1
项下供试液 s qx °¯ o自/分别置干燥具塞试管中0起 o
依法测定 o结果见表 u ∀
3 q6 干浸膏得率的测定 精取 3 q1 项下提取液 xs
°¯ o置已烘干恒重的蒸发皿中 o水浴蒸干 o于 tsx ε
烘至恒重 o计算干浸膏得率 o结果见表 u ∀
4 实验结果的处理
综合人参二醇 !人参三醇 !总生物碱 !酯型生物
碱 !总糖和干浸膏得率结果于表 u ∀并将各个数据
按 Ξ p ΞΣ 公式进行标准化处理 , Ξ 为 |次实验每种
指标成分结果的平均值 , Σ为其标准差 ∀将表 t及
表 u中 Ψ的数据输入计算机 o用 ≠≥≠≥的数据分
析模块处理k贵阳中医学院林亚平教授提供l o经多
元线性逐步回归统计处理 oΦ检验未通过 ,改用二次
多项式逐步回归得回归方程(选入 !剔除阈值均为
s .t) :
Ψ wut .yxwx n tz .us|sx Α p v| .uy{ut Χp tts .w{|t ∆
p u . xtyzsv ΑΑ n v . |wws{x ∆∆ n s . u{|zxyv Α∆ n
z .zu|wy| Χ∆
ρ s .||||{tt , Σ u .z|zv{w Ε p su , Φ vz{s .{yx
查 Φ值表 Φs .sx(z ,t) uvy .{ , Φs .sx(z ,t) Φ,所以 Φ检
验通过 ,回归方程有意义 ∀再将方程在计算机上进
行优化处理( Ψ的期望方向 }大l o得出优化结果 ∀结
合生产实际 o确定优选结果为 }三煎用水的 ³ 值依
次为 v qxs oz qss o{ qss ~煎煮时间为 v qx «∀
#ywv#
第 ux卷第 y期
usss年 y月
中 国 中 药 杂 志
≤«¬±¤²∏µ±¤¯ ²© ≤«¬±¨ ¶¨ ¤·¨µ¬¤ §¨¬¦¤
∂ ²¯ qux o²qy
∏±¨ ousss
表 u 综合各指标成分含量及标准化处理结果 ª#tssªp t
实验号 人参二醇 人参三醇 总生物碱 酯型生物碱 总糖 干浸膏 Ψ
t
s qswzx
k p s q{stsl
s qstxs
k p s qswzyl
s qtyvt
ks q{{zzl
s qstyv
ks qwwwwl
ts qt|uz
k p s qu|vtl
vy q|v{{
kt qtstul k p s qvssyl
u
s qsyts
k p s qttzxl
s qstxu
k p s qssyul
s qtuvt
k p s qutsyl
s qsttw
k p s q{{vxl
tw quww{
kt qw{{tl
vy qvzwt
ks q{uv|l ktt qzt|vl
v
s qswx{
k p s q{{ztl
s qsttu
k p s q{vwwl
s qtuz|
k p s qsz{{l
s qstt{
k p s qzzxtl
ts quxw|
k p s quyx{l
vw qs{{w
k p s qu|{zl k p { qttsxl
w
s qszzw
ks qztu|l
s qstuv
k p s qysyyl
s qtstt
k p s q{twzl
s qstv{
k p s quvvtl
tu qtvxz
ks qxytsl
vy q|ut{
kt qs|u|l ku qyzs|l
x
s qsxuv
k p s qxx{sl
s qstvv
k p s qv||yl
s qsyx{
k p t qz{v|l
s qstux
k p s qx{xwl
tu qzz{|
ks q{wvzl
vw qvtu|
k p s qt{{wl k p ts qtuzsl
y
s qs|{{
kt qz|yxl
s qst{s
ks qxzvxl
s qt{{y
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s qstuy
k p s qxx{vl
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k p t qu{wtl
vu qvwsu
k p t qtxzul kt{ qw{|ul
z
s qswt|
k p t qs{wyl
s qss|v
k p t quuzzl
s qtysx
ks q{tyvl
s qstuu
k p s qyyyzl
ts q|{ts
ks qsxvwl
vw q{uyx
ks qsyv{l k p w qxzs{l
{
s qsx|w
k p s qt|{xl
s qstzs
ks qvyyxl
s qttz|
k p s qvxvwl
s qsus{
kt qyywsl
tu qsyyy
ks qxvsyl
vx qwy|w
ks qvz|yl k p z q{vxul
|
s qs{x{
kt qtv{ul
s qsux{
ku qt{{wl
s qtu{|
k p s qsxtvl
s qsusx
kt qx{uzl
z qtwvt
k p t qyvvzl
vs q||yy
k p t q{tztl k p t q{vsxl
注 }括号中数据为标准化处理后结果
Ψ k人参二醇 n人参三醇 n总生物碱 p酯型生物碱l ≅ y n总糖 ≅ w n干浸膏 ≅ v
5 小结与讨论
5 q1 采用均匀设计法对参附汤 ≥
∞法工艺条件进
行优选 o根据 °kª²²§ ¤¯··¬¦¨ ³²¬±·l法优选结果 o结
合生产实际 o三煎用水³值依次为v qxs oz qss o
{ qss ~煎煮时间依次为 u ot os qx «∀
5 q2 中医用药绝不只是单体成分 o而是多种成分综
合作用的结果 o这种综合作用从化学成分方面考虑
可能是同一种中药共存成分之间或k和l多种中药共
存成分之间的复合作用 o故优选参附汤/ ≥
∞法0工
艺条件时 o根据 ≥
∞法理论和附子炮制原理 o以人参
二醇 !人参三醇 !总生物碱 !酯型生物碱 !总糖和干浸
膏为指标 ∀同时 o根据各指标在工艺选择中的主次 o
给予不同的加权系数 o确定综合评价 Ψ 值的关系
式 : Ψ k人参二醇 n人参三醇 n总生物碱 p酯型生
物碱l ≅ y n总糖 ≅ w n干浸膏 ≅ v ∀并对 y个指标的
数据进行标准化处理 o以消除各指标的单位和量纲
的不同 o以及各指标变量范围相差悬殊所造成的影
响 o以标准化指标加权后求和得 Ψ 值作为综合指
标 o优选出 ≥
∞法较佳的条件 o这样更加科学 !合理 ∀
5 q3 ≥
∞法是模仿口服药物经胃肠道转运吸收过
程 o采用选定 ³ 的酸性水 !中性水和碱性水依次连
续提取 ∀中药成分大多为弱有机酸或弱有机碱 o经
过酸性和碱性的溶剂连续提取 o可以提得含指标成
分更多的/活性混合物0 ∀ / ≥
∞法0与纯化学观点的
/酸碱法0是不能等同的 o/酸碱法0是针对单体成分
的溶解度与酸碱度有关的性质 o在溶液中加入适量
酸或碱 o调节 ³ 值到一定范围 o其目的是使单体成
分溶解或析出 ∀
5 q4 在酯型生物碱的测定中 o人参成分对改良异羟
肟酸铁法测定有干扰 o当加入³ s qx的高氯酸
{ qs °¯ 后出现胶体沉淀 o参考文献≈x o改为/加 tv qs
°¯ 高氯酸铁 o加 ³ s qx的高氯酸 v qs °¯ o加无水乙
醇至 ux °¯ 0后 o获得较满意的测定结果 ∀
≈参考文献
≈t 张兆旺 o孙秀梅 1 试论/半仿生提取法0制备中药口服制剂 1 中
国中药杂志 ot||x ouskttl }yzs q
≈u 张瑞亭 o张兆旺 o孙秀梅 1 思维方式的转换与中药/半仿生提取
法01 中国中药杂志 ot||z ouuk|l }xwu q
≈v 方开泰 1 均匀设计2数论方法在试验设计中的应用 1 应用数学
学报 ot|{s ovkwl }vyv q
≈w 张兆旺 o孙秀梅 o尉小慧 o等 q川乌两种方法提取液的成分比较 q
中成药 ot||| outktl }x q
≈x 李兰芳 o赵淑云 o蓝庆荣 o等 1 附子及其几种制剂中剧毒生物碱
的含量测定 1 中成药研究 ot|{z ok|l }tv q
≈责任编缉 李 禾
#zwv#
第 ux卷第 y期
usss年 y月
中 国 中 药 杂 志
≤«¬±¤²∏µ±¤¯ ²© ≤«¬±¨ ¶¨ ¤·¨µ¬¤ §¨¬¦¤
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