全 文 ：超临界流体萃取法测定六应丸中的
冰片和丁香酚的含量
陈 斌t o陈 伟u o方慧生t o杨根金t o吴玉田t
kt1 第二军医大学 药学院 o上海 usswvv ~
u1 中国人民解放军福州医学高等专科学校 o福建 福州 vxsssxl
≈摘要 目的 }建立用超临界流体萃取k≥ƒ∞l技术和毛细管气相色谱k≤ ≤l的联用技术测定中成药六应丸中
主要成分冰片和丁香酚的含量的方法 ∀方法 }采用正交设计法考察了影响超临界流体萃取因素的主效应及最佳萃
取条件 o并以毛细管气相色谱法进行定量分析 ∀结果 }≥ƒ∞的最佳萃取条件为 }压力 w{1u °¤o温度 ys ε o改性剂
量 s1u °¯ o静态萃取时间 ts °¬±∀结论 }≥ƒ∞2≤ ≤ 法测定六应丸中冰片和丁香酚快速 !简便 !准确 !灵敏 ∀
≈关键词 超临界流体萃取法 ~冰片 ~丁香酚 ~六应丸 ~毛细管气相色谱法 ~正交设计法
六应丸由冰片 !公丁香 !蟾酥 !珍珠等组成 o具有
清热解毒 !消炎退肿 !止痛等功效 o用于乳娥 !疖痛疮
疡 !咽喉炎以及牙痛口疳等症 ∀超临界流体萃取
k≥ƒ∞l技术具有传质速度快 !萃取效率高 !无毒 !经
济 !操作简便 !选择性好等优于传统溶剂萃取法的特
点 o特别适应于当前环保意识不断增强的国际大气
候 ∀然而 o由于影响 ≥ƒ∞的因素较多 o摸索最佳萃
取条件存在一定的困难≈t o我们利用正交设计首次
对 ≥ƒ∞萃取六应丸中冰片和丁香酚的萃取条件的
选择进行了实验≈u o用方差分析法确定了主效应和
次效应 o摸索出了最佳萃取条件 o并将 ≥ƒ∞与传统
的溶剂萃取法≈v 进行了对比 ∀
1 仪器与试药
⁄ tss注射泵 o≥ƒ÷ u2ts萃取器k美国 ≥≤
公司l o气相色谱仪 °2x{|s ≥ µ¨¬¨¶ µ oƒ⁄检测器 o
ux ° ≅ s1vu °° os1xu Λ° o°2x柱k¦µ²¶¶¯¬±®¨ §x h
°« ¨ ≥¬¯¬¦²±¨ l ∀ °2vvyx 化学工作站 k美国
º¨¯¨··2°¤¦®¤µ§公司l ∀
冰片 !丁香酚和麝香草酚k中国药品生物制品检
定所l ~六应丸k上海中药一厂l ~甲醇 !环己烷 !氯仿 !
乙酸乙酯均为分析纯 ∀
标准溶液 }精密称取冰片和丁香酚适量 o分别用
乙酸乙酯配成 x1uu °ª# °¯ p t和 w1{z °ª# °¯ p t溶液 o
置 w ε 冰箱放置 ∀
≈收稿日期 t|||2su2tt
≈基金项目 国家自然科学基金资助项目kv|zzs|swl
内标液配制 }精密称取麝香草酚适量 o用乙酸乙
酯配成 {1|u °ª# °¯ p t溶液 o置 w ε 冰箱放置 ∀
2 样品分析
211 ≥ƒ∞萃取 精称粉碎后过 tss目筛的六应丸
粉末 tss °ª置萃取池中 o按最佳萃取条件操作 o用
适量乙酸乙酯吸收 o精取内标 s1x °¯ o定容至 ts °¯ o
备用k提取液 tl ∀
212 超声溶剂法萃取1≈v 精称上述粉末 tss °ªo
加入适量乙酸乙酯 o超声提取 ys °¬±o冷却后精确加
入内标溶液 s1x °¯ o乙酸乙酯定容至 ts °¯ 量瓶中
k提取液 ul ∀
213 索氏提取法萃取 精称上述粉末 s1x ªo置 xs
°¯ 索氏提取器中 o加乙酸乙酯 zx °¯ o水浴加热提取
y «o过滤于 tss °¯ 量瓶中 o用乙醇清洗残渣 o精密取
内标溶液 x °¯ o加乙酸乙酯至刻度备用k提取液 vl ∀
2 1 4 色谱条件 气化温度uxs ε o检测器温度
uzs ε o柱温 tys ε o载气 u o柱头压 xx ®°¤o分流比
tssΒt o内标为麝香草酚 o进样量 t Λ¯ ∀色谱图见图 t
∗ 图 v ∀
215 标准曲线制备 分取标准液 s1t os1u os1w o
s1{ ot1u °¯ 于 ts °¯ 量瓶中 o注入内标溶液 s1x °¯ o
稀释至刻度 o进行气相色谱分析 ∀以峰面积比k Ψ)
对含量( Ξl作回归计算 o得回归方程 }冰片 Ψ
u1ttx Ξ p |1|u{ ≅ tsp v , ρ s1|||| ,线性范围 xu .u
∗ yuy .w νγ ,丁香酚 Ψ u1txv Ξ n t1xuy ≅ tsp w , ρ
s1|||| o线性范围 w{1z ∗ x{w1w ±ª∀
216 含量测定 提取液 t直接进样 t Λ¯ o提取液 u !
#xtu#
第 ux卷第 w期
usss年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o²qw³µqousss
提取液 v因杂质干扰较严重 o均以氧化铝柱净化样
品后再进样 t Λ¯ o结果见表 t ∀
表 t 不同提取方法的冰片 !丁香酚的含量测定结果
提取方法
冰片
r°ª#ªp t
ΡΣ∆
r h
丁香酚
r°ª#ªp t
ΡΣ∆
r h
超临界流体萃取 vv1zw u1xy ws1yz u1uv
超声波提取 uz1|t u1yv vs1{w u1tw
索氏提取 u{1wv u1wz vu1zz v1vu
注 }ν v
217 ≥ƒ∞加样回收率试验 在药材中定量加入标
准液 s1{ °¯ o挥干 o测定方法相同 o测得加样回收率
为冰片 tst1|v h o ΡΣ∆ t1xy% ( ν v) ;丁香酚
|{1wv% , ΡΣ∆ u1uy%( ν vl ∀
218 萃取条件的选择 采用正交设计法和方差分
析 o选正交设计表 |kvwl o四因素为温度k Α) !改性
剂量( Β) !压力( Χ) !静态萃取时间( ∆) ,见表 u ∀正
交试验结果见表 v ∀经极差分析 ,由冰片和丁香酚
的极差来看 ,对萃取程度的影响次序依次为 Β , Χ,
Α , ∆ o两者结果是一致的 ∀此外对正交设计还进行
了方差分析 o见表 w和表 x ∀方差分析的结果显示了
改性剂量对冰片和丁香酚的 ≥ƒ∞影响特别显著 o是
影响 ≥ƒ∞的主效应 o对于冰片 o压力影响显著 o为次
效应 o温度具有一定的影响 o静态萃取时间对 ≥ƒ∞
没有什么影响 ~而对于丁香酚 o压力的影响显著 o为
次效应 o而温度和静态萃取时间具有一定的影响 ∀
由于改性剂的加入量影响最大 o我们又做了 t份萃
取条件为 }Α ys ε oΒ s1v °¯ oΧ w{1u °¤o∆ ts
°¬±o结果冰片和丁香酚的含量均和下列条件 }Α ys
ε oΒ s1u °¯ oΧ w{1u °¤o∆ ts °¬±的含量相近 o
且改性剂量加大后 o在色谱中杂质峰也增加 o因此 o
我们以后者作为最佳萃取条件 ∀
219 改性剂的选择 固定萃取条件 o分别以氯仿 !
乙酸乙酯 !环己烷 !甲醇为改性剂 o以乙酸乙酯所得
效率最高 o本实验选择乙酸乙酯 ∀
2110 冰片对照品中龙脑 !异龙脑的测定 冰片为
龙脑和异龙脑的混合物 o在柱温为 tys ε 时 o两者为
表 u |kvwl正交设计因素水平表
水平
Α
温度
r ε
Β
改性剂量
r °¯
Χ
压力
r °¤
∆
静态萃取时间
°¬±
t ws s1t w{1u x
u ys s vt1s ts
v {s s1u tv1{ tx
表 v 正交实验设计结果
序号
峰面积比
冰片 丁香酚
t s qxz s qx|
u s qwt s qwv
v s qys s qyu
w s qyw s qy{
x s qvy s qvx
y s q{v s q{|
z s qxz s qx{
{ s qxs s qw{
| s qy| s qzt
表 w 冰片方差分析表
变异来源 差方和 均方 Φ 临界值
温度k Α) s1stsy s1ssxv v1tyt) Φs1sx(u ,w) y1|w
改性剂( Β) s1tutx s1syszx vy1uyv) Φs1ts(u ,w) w1vu
压力( Χ) s1suuw s1sttu y1y{u) Φs1ux(u ,w) u1ss
时间( ∆l s1sswy
误差效应 s1ssut s1sstyzx
注 }≠自由度均为 u tl因素对指标有一定影响 ul因素影响显
著 vl因素影响特别显著k表 x同l
表 x 丁香酚方差分析表
变异来源 差方和 均方 Φ 临界值
温度k Α) s1stvt s1ssyxx x1|xt) Φs1sx(u ,u) t|1ss
改性剂( Β) s1txyv s1sz{tx zt1swv) Φs1ts(u ,u) |1ss
压力( Χ) s1svs| s1stxwx tw1swu) Φs1ux(u ,u) v1ss
时间( ∆l s1stsx s1ssxux w1zztl
误差效应 s1ssuu s1ssz{zx
一个峰 o为了快速分析并使其与内标尽量靠近 o作者
以测二者的总量对冰片进行定量 ∀龙脑和异龙脑在
对照品中相对含量采用面积归一化法 o色谱条件为
把上述柱温改为 |s ε o其他条件不变 o此时两者能
够达到基线分离 ∀结果为 }异龙脑 wv1xu h oΡΣ∆
s1yz%( ν v) ;龙脑 xw1{x% , ΡΣ∆ s1v|%( ν vl ∀
见图 t ∗ 图 v ∀
τr°¬±
图 t 对照品加内标气相色谱图
t q冰片 u q丁香酚 v q麝香草酚k图 u o图 v同l
#ytu#
第 ux卷第 w期
usss年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o²qw³µqousss
τr°¬±
图 u 未加内标的 ≥ƒ∞提取液气相色谱图
τr°¬±
图 v 加内标的 ≥ƒ∞提取液气相色谱图
3 结论
≥ƒ∞在萃取冰片和丁香酚时 o萃取效率显著高
于传统的溶剂萃取法 o≥ƒ∞操作简便 o快速 o整个过
程仅需 ts几分钟 ~≤ u 价格低廉 o且无毒 o不可燃 o
化学惰性 o易挥发 ~此外 o≥ƒ∞具有良好的选择性 o在
色谱过程中杂质干扰少 o样品萃取后无须预处理可
直接进样 o节约了大量时间和精力 o≥ƒ∞在中药质量
控制上具有广阔的应用前景 ∀
≈参考文献
≈t ²∏ ÷¬¤±2º ±¨ o¤±¶¶¨± ¤±¶2¤±¶2 µ¨§o≤µ¤° µ¨¶≤¤µ¨¯ q ≤²µ2
µ¨ ¤¯·¬²± ²© ≥∏³¨µ¦µ¬·¬¦¤¯ 2ƒ¯ ∏¬§ ∞¬·µ¤¦·¬²± ¦¨²√ µ¨¬¨¶ º¬·« ≥∏³¨µ2
¦µ¬·¬¦¤¯2ƒ¯ ∏¬§ ≤«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦ ·¨¨±·¬²± ⁄¤·¤} ƒ∏±§¤° ±¨·¤¯
≥·∏§¼1 ¬ª« ¶¨²¯∏·≤«µ²°¤·²ªµ1 t||x ot{k{l }w{v q
≈u 郑用熙 1 分析化学中的数理统计方法 1 北京 }科学出版社 o
t|{y1t{s q
≈v 常丽萍 o倪坤仪 o王新堂 o等 o六应丸中冰片 !丁香酚的毛细管气
相色谱分析 1 中国药科大学学报 ot|{| ouskxl }u|z q
∆ετερµινατιον οφ Μαϕορ Χοµ πονεντσιν Λιυψινγ ωαν Πιλλσ
βψ Συπερχριτιχαλ Φλυιδ Εξτραχτιον(ΣΦΕ)
≤ ∞
¬±t o≤ ∞ • ¬¨u oƒ ∏¬2¶«¨ ±ªt o ≠ ±¨ª2¬±t o • ≠∏2·¬¤±t
kt q≥¦«²²¯ ²© °«¤µ°¤¦¼ o≥ ¦¨²±§ ¬¯¬·¤µ¼ §¨¬¦¤¯ ±¬√ µ¨¶¬·¼ o≥«¤±ª«¤¬ usswvv ~
u qƒ∏½«²∏ §¨¬¦¤¯ ¦¤§¨ °¬¦≥¦«²²¯ oƒ∏½«²∏ vxsssv oƒ∏¬¤±o≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ±·«¨ ¥¤¶¬¶²©≥ƒ∞ ¤±§≤≤ ·² ¶¨·¤¥¯¬¶«¤ ° ·¨«²§©²µ©«¨ ∏´¤¯¬·¤·¬√¨¤±§ ∏´¤±·¬·¤2
·¬√¨¤±¤¯¼¶¬¶²© °¤²µ¦²°³²±¨ ±·¶¬± ¬∏¼¬±ªº¤± ³¬¯¯¶1 Μετηοδ : µ·«²ª²±¤¯ §¨¶¬ª± ¤±§√¤µ¬¤±¦¨ ¤±¤¯¼¶¬¶ º µ¨¨
∏¶¨§·²²³·¬°¬½¨ ·«¨ ©²∏µ√¤µ¬¤¥¯ ¶¨k·¨°³¨µ¤·∏µ¨ o³µ¨¶¶∏µ¨ o √²¯∏°¨²© °²§¬©¬¨µ¤±§¶·¤·¬¦ ¬¨·µ¤¦·¬²± ·¬° l¨²©
≥ƒ∞o¤±§·«¨ ∏´¤±·¬©¬¦¤·¬²± º¤¶¦²°³¯ ·¨¨§¥¼ ≤ ≤1 Ρεσυλτ : ׫¨ ²³·¬°¬½¨ §¦²±§¬·¬²±¶¤µ¨ ¤¶©²¯ ²¯º¶}³µ¨¶¶∏µ¨
w{1u °¤o·¨°³¨µ¤·∏µ¨ ys ε os1u °¯ ·¨«¼¯ ¤¦¨·¤·¨ ¤¶°²§¬©¬¨µ¤±§¶·¤·¬¦ ¬¨·µ¤¦·¬²± ts °¬±1 ׫¨ µ¨¦²√ µ¨¬¨¶²©
¥²µ±¨ ²¯ ¤±§ ∏¨ª¨ ±²¯ ¤µ¨ tst1|v h k ΡΣ∆ t1xy h l¤±§|{1wv h k ΡΣ∆ u1uy h lµ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼1 Χονχλυσιον : ≤²°2
³¤µ¨§ º¬·«¦²±√ ±¨·¬²±¤¯ ° ·¨«²§¶o≥ƒ∞¬¶µ¤³¬§o¦²±√ ±¨¬¨±·¤±§¤¦¦∏µ¤·¨¬± §¨·¨µ°¬±¬±ª¥²µ±¨ ²¯ ¤±§ ∏¨ª¨ ±²¯1
[ Κεψ ωορδσ] ¶∏³¨µ¦µ¬·¬¦¤¯ ©¯∏¬§ ¬¨·µ¤¦·¬²±~¬∏¼¬±ªº¤± ³¬¯¯¶~¥²µ±¨ ²¯ ~ ∏¨ª¨ ±²¯ ~≤ ≤ ~²µ·«²ª²±¤¯ §¨¶¬ª±
≈责任编缉 李 禾
本刊通知
本刊对来稿收取处理费k每篇 tsss字以下 vs元 otsss字以上 xs元l o请作者在寄发稿件的同时将处理费通过邮局寄汇
本刊k请勿在稿件中夹带现金l ∀汇单上请注明论文题目及第一作者姓名 ∀收款地址 }北京东直门内北新仓 t{号中国中药杂
志社 o邮编 tsszss ∀
#ztu#
第 ux卷第 w期
usss年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o²qw³µqousss