全 文 ：作者在实验中发现 o大鼠禁食 uw«后进行
动物实验 o其切口处出血及鼻腔分泌液少 o造模
成功率高 ∀也有文献≈y 认为每一大鼠模型可反
复使用 o但作者在本实验中发现 o同一大鼠模型
反复使用 o使药物的吸收减少 ∀
312 药物的鼻粘膜吸收受药物的理化性质 !药
液浓度 !³‹ !渗透压 !粘度 !吸收促进剂等多种
因素的影响 o本实验研究了药液浓度对吸收的
影响 o结果表明补骨脂素和异补骨脂素的鼻粘
膜吸收存在饱和现象 o提示在开发补骨脂鼻腔
给药制剂时要选择恰当的浓度 ∀
313 对实验结果 o分别进行了直线拟合和指数
曲线拟合 o结果表明直线拟合较优 ∀
4 参考文献
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作用的动物实验和临床观察 q广东医学 ot|{w oxkttl }u|
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t||{2sz2u|收稿
女贞子多糖免疫调节作用研究 3
阮红 吕志良 k浙江大学生物科学与技术系 杭州 vtssuzl
摘要 目的 }探讨祖国补益中药女贞子的有效物质基础和免调节机理 ∀方法 }采用四甲基偶氮唑盐
k  × ×l比色分析法 o对其多糖成分进行了小鼠体内外免疫活性观察 ∀结果 }女贞子多糖对正常小鼠和
肾上腺皮质激素造型的阴虚小鼠的脾 × 淋巴细胞增殖有显著促进作用 ∀结论 }女贞子多糖对正常小鼠
及阴虚小鼠有免疫调节作用 ∀
关键词 女贞子多糖 免疫活性 淋巴细胞增殖 阴虚
女贞子有效成分为多糖及果酸等 o据报
道≈t ∗ v 具有滋阴补肝肾作用 o能增加免疫功能 o
对心血管疾病治疗及癌症防治也有一定的作
用 ∀而多糖作为当前发现的一类主要生物反应
调节剂 o在免疫调节 !抗肿瘤等方面的研究已受
到广泛重视 ∀本文观察了女贞子多糖体内外刺
激后对正常小鼠免疫细胞增殖反应的影响以及
对/阴虚0小鼠的免疫调节现象 o揭示了女贞子
多糖作用的免疫调节机理并进一步探讨中药的
阴阳平衡理论 ∀
1 材料与方法
1 q1 实验动物和材料 Œ≤ • 雄性小鼠 oy ∗ {
周龄 o由浙江省实验动物中心提供 ~°• Œ2tyws
培养液 o美国 ŠŒ…≤ ’公司生产 ~小牛血清 o杭州
四季青生物材料公司提供 ~ × × o≥ŒŠ  „ 产
品 ~°‹ „ o≤²±„ o°≥ o中科院生物化学所提供 ~
|y孔培养板 o丹麦 ‘˜‘≤ 公司产品 ~氢化可的
松 o扬州制药厂生产 ∀
1 q2 女贞子多糖kƒ°≥l提取 将女贞子粉
碎后依次用乙醚 o丙酮浸泡去除脂溶性色素及
部分水溶性色素 o然后加水煎煮 o过滤浓缩 o加
u ∗ v倍体积的无水乙醇沉淀 o离心取沉淀 o透
析 o用 ≥„ ∂ „Š∞液k氯仿2异戊醇 € wΒtl萃取去
除杂蛋白 o冷冻干燥得棕色粉末为女贞子粗多
糖 o粗多糖经 ⁄∞„∞2≥ ³¨«¤§¨ ¬ „2ux 层析和
≥ ³¨«¤§¨ ¬ Š2xs 分子筛过柱 o洗脱液用硫酸2苯
酚法测定≈w  ’⁄w|s值分析多糖含量 o收集 ’⁄w|s
峰值部分 o经冷冻干燥得女贞子多糖成分 ∀
3 国家自然科学基金资助课题 ‘²qv|vsstzw
#t|y# 中国中药杂志 t|||年第 uw卷第 tt期
1 q3 脾淋巴细胞的制备 参照马宝骊≈x 方法 o
将小鼠断颈处死 o无菌操作下取出脾脏 o经 uss
目钢网揉挤过筛 o离心后取上清 o用 s q{z h
‘‹w≤¯液裂解红细胞后 o离心洗涤两次后 o将细
胞悬浮于完全 • ° Œtyws 培养液k• ° Œ2tyws
含 ts h胎牛血清 o谷氨酰胺 uss°°²¯ #pt o丙
酮酸 tss°°²¯#p t o并加入适量青霉素及链霉
素l o分别制成脾细胞悬液 ∀台酚蓝染液进行活
细胞计数并调整至细胞浓度 u ≅ tsy# °¯ p t ∀
1 q4  × × 法测定脾淋巴细胞的增殖反应 参
照 ²¶¶°¤±≈y 及有关文献≈z 改进 o在 |y孔培养
板上 o进行脾脏淋巴细胞的培养 ∀每孔k作三复
管 o下同l中 o脾淋巴细胞悬液k浓度为 u ≅ tsy#
°¯ p tl各加 tssΛ¯ o多糖体外刺激时还需加入不
同浓度女贞子多糖以及适量植物血凝集素
k°‹ „l或刀豆球蛋白k≤²±„l或脂多糖k°≥l o
由不完全 • ° Œ2tyws液调整至每孔 ussΛ¯ o于
vz ε x h ≤ ’u培养箱培养 zu«∀结束前 w«左右
时 o加入 ts°ª# °¯ p t的  × × 溶液 tsΛ¯ ∀培养
结束后 o弃上清 o每孔加入 tssΛ¯ s qsx°²¯ #p t
的盐酸异丙醇kxs °¯ 异丙醇加 t°²¯ # °¯ p t盐酸
u qx °¯ l o旋涡混合器上轻微振荡混匀 o待结晶充
分地溶解后 o在 ⁄Š2vsuu型酶联免疫检测仪上
测定 xzs±°的吸光值 ’⁄xzs ∀
1 q5 小鼠 / 阴虚0模型的建立 根据有关文
献≈v  o每日皮下注射氢化可的松 t°ªr只 o连续
w§o进行选型 o建立/阴虚0动物模型 ∀
2 结果与分析
2 q1 女贞子多糖体外刺激对正常小鼠脾淋巴
细胞增殖反应的影响 取正常小鼠脾淋巴细
胞 o加入不同浓度 ƒ°≥进行体外培养 o观察
ƒ°≥单独刺激淋巴细胞增殖的效果 ~进行适
量 °‹ „ o≤²±„ o°≥同时刺激 o观察协同刺激淋
巴细胞增殖情况 ∀从表 t 结果可以看出 }
ƒ°≥单独刺激能明显促进脾淋巴细胞增殖 o
而且这种增殖效果随 ƒ°≥浓度的变化而有
所改变 o在 vsΛª# °¯ p t浓度下增殖作用最明显 o
’⁄值是对照的 t qw倍左右 o而后随浓度增高 o
这种增殖效应下降 ~ƒ°≥可对 ≤²±„ o°‹ „诱
导的脾 × 淋巴细胞增殖有显著促进作用 o加入
vsΛª# °¯ p t ƒ°≥ 的 ’⁄值可达到单独使用
°‹ „ 或 ≤²±„ 诱导时的 t qx 倍左右 o但对由
°≥激活的 …淋巴细胞增殖反应 oƒ°≥未见
有明显协同效果 ∀
表 t ƒ°≥体外刺激对正常小鼠脾淋巴细胞增殖反应k’⁄值l的影响
有丝
分裂原
剂量
Λª# °¯ p t
ƒ°≥
s Λª# °¯ p t ts Λª# °¯ p t vs Λª# °¯ p t ws Λª# °¯ p t ys Λª# °¯ p t
• ° Œ2tyws s qvt ? s qsw s qvx ? s qsw s qww ? s qsy s qws ? s qsz s qv{ ? s qsx
≤²±„ u s qxs ? s qs{ s qxy ? s qsw s q{w ? s qts s qzw ? s qs| s qyx ? s qsv
°‹ „ u s qw{ ? s qsy s qyw ? s qs{ s qyx ? s qs| s qxx ? s qsy s qw{ ? s qsv
°≥ xs s qvw ? s qsx s qvw ? s qsw s qvx ? s qsy s qvy ? s qsu s qvv ? s qsv
注 }ξ ? σ ν € vk下同l
2 q2 女贞子多糖体内刺激对正常小鼠脾淋巴
细胞增殖反应的影响 每天对正常小鼠以灌胃
方式进行 ƒ°≥ 体内刺激 o给以不同量的
ƒ°≥ ts ovs oxs o{s°ª#®ªp tk每浓度下各 x
只l连续 w§o生理盐水组kx只l为对照 o然后处
死动物 o各组进行脾淋巴细胞增殖反应测定比
较k其中加入 ≤²±„至浓度 uΛª# °¯ p tl ∀结果如
表 u 显示 }ƒ°≥ 体内刺激能明显促进 ≤²±„
诱导的淋巴细胞增殖 o其中以 vs°ª#®ªp t的给
药浓度效果最好 ∀
表 u ƒ°≥体内刺激对正常小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响
ƒ°≥ °ª#®ªp t s ts vs xs {s
’⁄xzs s qwv ? s qsy s qxt ? s qsz s qy| ? s qs{ s qxz ? s qsx s qwu ? s qsu
注 }ν € x
#u|y# 中国中药杂志 t|||年第 uw卷第 tt期
2 q3 女贞子多糖体内刺激对/阴虚0小鼠脾淋
巴细胞增殖反应的影响 把小鼠随机分成 v组
进行饲养 o/阴虚0组kx只l }每日皮下注射氢化
可的松 t°ªr只 o连续 w§~多糖给药的/阴虚0组
ktx只l造型前一天开始每 x只每天女贞子多糖
分别灌胃 ts ovs oxs°ª#®ªp t小鼠 o共 x§~以生理
盐水组kx只l为对照 o然后获取脾细胞悬液 o进
行脾淋巴细胞增殖反应测定 o采用  × × 法检测
xzs±°吸光值 ∀图中看到 o小鼠 / 阴虚0组的
’⁄xzs值较对照组明显降低 o经多糖灌胃刺激后
的 ƒ°≥/阴虚0组虽然不能使/阴虚0小鼠恢复
正常水平 o但对/阴虚0型小鼠有较好的免疫上
调作用 o其中以 vs°ª#®ªp t剂量给药效果最好 ∀
图 t ƒ°体内刺激对/阴虚0
小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响
3 讨论
本实验采用  × × 法测定小鼠脾淋巴细胞
增殖反应 o这种方法简便可行 o并且能克服v ‹
掺入法带来的放射性问题 o通过女贞子多糖体
外刺激和体内灌胃两种途径发现 o在体内外女
贞子多糖刺激在一定浓度范围内能直接刺激小
鼠脾 × 淋巴细胞的增殖或协同刺激有丝分裂原
°‹ „或 ≤²±„促进小鼠脾 × 淋巴细胞的增殖 o
但是多糖的作用呈现为剂量依赖的双向调节作
用 o即低浓度下激活增殖 o高浓度时抑制作用增
强 o这与文献≈v o{ ∗ tt 报道的免疫活性多糖如黄
芪多糖枸杞子多糖类似 o与当归多糖等不同 ∀
本文根据有关文献≈v otu  o模拟中医临床上
的/阴虚0证候 o应用短程大剂量皮下注射氢化
可的松的方法建立/阴虚0动物模型 o在此基础
上研究了滋阴中药女贞子多糖对/阴虚0小鼠的
免疫调节作用 o发现女贞子多糖对/阴虚0状况
有上调作用 ∀以上实验结果体现了古代中医理
论的精萃 ) ) ) 阴阳平衡学说的治病道理 o
中医提倡/固本培元0 o/虚则补之0 o对虚证病人
施用补益中药进行治疗 ∀目前认为中医的虚证
患者很可能是由于免疫功能失调 o引起免疫信
息传导中如 Β2受体 o¦„  °系统等环节出现了
功能变化 o造成这种免疫病理现象 o根据资料认
为氢化可的松等肾上腺皮质激素能导致胞内
¦„  °水平的降低 o因此猜想女贞子多糖有可
能通过调节胞内 ¦„  °的水平途径来调节体内
的阴阳平衡 o从而使机体逐渐恢复正常的免疫
功能 o在这方面 o我们正在进行进一步的工作 o
主要围绕多糖参与刺激后免疫细胞的 ¦„  °水
平测定 o争取在多糖对免疫细胞的调节机理上
能有所突破 ∀
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