全 文 ：·1532· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第10期2008年10月
Joris[123首次提出胀亡(oncosis)的概念，将其和凋
亡(apoptosis)相对应，代表细胞受损伤后不可逆
的死亡过程，是细胞死亡过程的功能性定义。在同一
刺激因素下细胞采取何种方式死亡——胀亡或是凋
亡与刺激强度，作用时间以及细胞内ATP水平有
关。强度较弱或作用时间较短时，存在一定水平的
ATP，以凋亡为主；反之，刺激强度大，作用时间长，
细胞损伤相对严重时，能量不能满足，凋亡无法完成
其程序，细胞以胀亡的方式死亡。
本实验结果显示在未用转铁蛋白增加肺腺癌细
胞内铁离子浓度时，青蒿琥酯在24h并不引起多数
细胞有明显形态学改变，48h后，细胞无论从形态
上还是DNA电泳、流式细胞仪检测均出现典型的
凋亡样死亡的改变，与国内学者报道的相一致口3；当
细胞内铁离子浓度增加后，青蒿琥酯在24h时，就
可引起细胞肿胀，细胞质空泡化，DNA电泳出现不
同于凋亡时的“梯状”条带，而是仅仅在1000bp及
2000bp左右出现条带，这点与OhnoM等n朝报道
的细胞胀亡样死亡时电泳的条带相一致。该结果显
示全铁转运蛋白／铁离子增强了青蒿琥酯抗肺腺癌
细胞的作用，加速了其死亡的速度。其原因可能为细
参考文献：
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[123
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度，增加了细胞内自由基浓度，从而加速细胞的
死亡。
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水杨梅和水团花提取物体外抑菌活性的实验研究
白 雪1，林晨”，李药兰2，岑颖洲2，沈伟哉3
(1．暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室，广东广州 510632；2．暨南大学生命科学院
化学系，广东广州 510632I．暨南大学解剖学教研室，广东广州 510632)
摘 要：目的 比较水杨梅和水团花不同提取物的抑菌活性，探寻该两种水团花属植物的有效抑菌成分。方法 用
肉汤稀释法测量水杨梅和水团花的乙醇粗提物、石油醚、醋酸乙酯和正丁醇萃取部位，余水部位以及水杨梅甾体混
合物、水团花单体化合物对6种实验菌株的最低抑菌浓度(MIC)。结果水杨梅各萃取部位及水团花醋酸乙酯萃
取部位在实验质量浓度范围内分别对金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、铜绿假单胞杆菌、枯草芽胞杆菌或猪霍乱沙门
氏菌显示出了不同程度的抑制活性；从水团花醋酸乙酯萃取部位分离出的化合物中，槲皮素一3一O—pD一葡萄糖苷显
示出了较好的抑菌作用。结论 水杨梅和水团花均含有抑制细菌的有效成分，为水团花属抑菌药物的开发提供了
理论依据。
关键词：水杨梅；水团花l抑苗IMIC
中图分类号：R282．71R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)10—1532-04
收稿日期：2008一01—19
基金项目：国家自然科学基金资助项目(20472024，20172020)#广东省自然科学基金资助项目(04010479·010401)
作者简介：白 雪(1980一)。女．吉林长春人，硕士研究生．研究方向为感染免疫学。E·mail：bxl0181018@163．corn
。通讯作者林晨TeJ：(020)85220257E—mail：tlinc@，jnu．edu．cn

万方数据
中革焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第10期2008年10,el·1533·
水团花Adinapilulifera(Lam．)Franch．ex
Drake、细叶水团花(水杨梅，AdinarubellaH nce)
为水团花属茜草科植物，具有抗病毒、抑菌等生物活
性[1]。本实验着重分析了化学分离后的水杨梅与水
团花各萃取物的抑菌活性，为开发新型的植物抗菌
药物提供理论基础。
1材料
1．1菌株：实验菌种均为暨南大学医学院微生物与
免疫教研室保存菌种。其中革兰阳性菌有金黄色葡
萄球菌(Staphylococcusaureus，ATCC6538p)，藤
黄微球菌(Micrococcusluteus，ATCC9341)和枯草
芽胞杆菌(Bacillussubtilis，ATCC6633)；革兰阴性
菌有大肠埃希氏菌(Escherichiacoli，A丁cc8739)，
猪霍乱沙门氏菌(Salmonellacho eraesuis，
DMS4224)和铜绿假单胞杆菌(Pseudomonas
aeruginosa，ATCC9027)。
1．2供试样品：瑶药水杨梅AdinarubellaHance
与水团花A．pilulifera(1ain．)Franch．exDrake
均采自广东韶关始兴县大瑶山，由中国科学院华南
植物研究所标本馆陈炳辉高级工程师鉴定，经暨南
大学化学系天然药物研究室分离提纯得到以下样
品：水杨梅的乙醇粗提物(A)、石油醚萃取部位
(A。)、醋酸乙酯萃取部位(A．)、正丁醇萃取部位
(A．)和余水部位(A。)，以及从水杨梅石油醚萃取
部位分离出的甾体混合物(A_)；水团花的乙醇粗
提取(B)、石油醚萃取部位(B。)、醋酸乙酯萃取部
位(B。)、正丁醇萃取部位(B。)和余水部位(B。)，
以及从水团花醋酸乙酯萃取部位分离得到的6个单
体化合物分别为化合物1(B1)Sarracenin[23；化合物
2(B。)柚皮素；化合物3(B。)圣草酚；化合物4(B4)
柚皮素一7一。一}D一葡萄糖苷；化合物5(B。)圣草酚一
7一O—a—D一葡萄糖苷；化合物6(B6)槲皮素一3—0一pD一
葡萄糖苷。
1．3 试剂：红四氮唑(TTC，北京化学试剂公司)，
二甲基亚砜(DMSO，天津市化学试剂一厂)；新洁
尔灭(黑龙江康新制药有限公司)；青霉素钠(华北
制药股份有限公司，8．0×105U／支，批号：
A0511005)；头孢拉定(上海普康药业有限公司，批
号：060208)。
1．4 培养基：水解酪蛋白胨(MH)琼脂、MH肉
汤，广东省科学院微生物研究所。
2方法
2．1样品的制备：准确称取水杨梅及水团花的各种
样品，溶于DMSO中配制成40mg／mL的溶液，巴
氏消毒后待用。
2．2 菌液的配制[3]：将菌种于MH琼脂平板上分
区划线，37℃培养12～48h。用接种环挑起单个菌
落接种于MH肉汤中，于37℃培养24h。用BaCI：
比浊法确定每种菌的浓度，然后用生理盐水校正含
菌量为1．5×108CFU／mL(ColonyFormingUnits，
CFU，集落形成单位)，再用MH肉汤稀释100倍，
即为1．5×106CFU／mL。
2．3 体外抑菌实验[4]：在塑料离心管里用MH肉
汤将各样品对倍稀释成所需的质量浓度梯度，起始
质量浓度(最大质量浓度)设定为2．5mg／mL。然
后在96孔板中分别加入50弘L稀释好的样品，及
50弘L稀释好的菌液。每个质量浓度梯度设4个复
孔；同时设青霉素、头孢拉定阳性对照组，阴性对照
组(只加菌液和肉汤)和空白对照组(只加肉汤)，
37℃培养24h。培养结束后，每个孔中加入5弘L
质量分数为0．5％的TTC，37℃继续培养1～3
h，肉眼观察细菌的生长，培养孔呈现红色为有细菌
生长，结果判断以不显色的组其样品质量浓度为该
样品对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)。
3结果
3．1 水杨梅各萃取物对实验菌株的抑制作用：水杨
梅粗提物的各溶剂萃取部位(A。、A。、A。、A。)在
实验质量浓度范围内对金黄色葡萄球菌、藤黄微球
菌或铜绿假单胞杆菌有一定的抑制作用。其中醋酸
乙酯萃取部位(A。)对此3个菌种均有不同程度的
体外抑制活性，对金黄色葡萄球菌和藤黄微球菌的
MIC为1．25mg／mL。从水杨梅石油醚萃取部位分
离得到的甾体混合物(Am)的金黄色葡萄球菌、藤
黄微球菌、铜绿假单胞杆菌和枯草芽胞杆菌均表现
出不同的抑制作用，显示了一定的广谱抑菌效果。其
对革兰阳性菌的作用优于革兰阴性菌，对金黄色葡
萄球菌和藤黄微球菌的MIC仅为0．625mg／mL。
见表1。
3．2水团花各萃取物对实验菌株的抑制作用：水团
花各溶剂萃取部位(B、B。、B．、B。)在实验质量浓
度范围内，对大肠埃希菌等6种菌均没有明显的体
外抑菌活性。而水团花醋酸乙醋萃取部位(B。)则
对上述菌种(大肠埃希菌除外)都显示出了不同程
度的抑制活性；其中对金黄色葡萄球菌的MIC为
1．25mg／mL。见表2。
3，3水团花单体化合物对实验菌株的抑制作用：从
水团花醋酸乙酯萃取部位分离出的6个化合物中，
槲皮素一3一O一}D一葡萄糖苷(B。)显示出了较好的抑

万方数据
·1534· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第10期2008年10月
菌作用，对金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌和铜绿假单
胞杆菌的MIC仅为0．125mg／mL。而柚皮素(B：)
和圣草酚(B。)则分别对枯草芽孢杆菌和铜绿假单
胞杆菌有一定的抑制作用(MIC分别为0．125和
0．25rng／mL)。见表3。
寰1 水杨梅各提取部位对6种细菌的体外抑苗作用(厅=4)
Table1 BacteriostasisofextractivesfromA．rubella
againstsixkindsofstrainsnvitro(一=4)
。一”：没有抑菌活性
。一”lnobacteriostasis
表2水团花各提取部位对6种细菌的体外抑菌作用(一=4)
Table2 BaeteriostasisofextractivesfromA．pilulifera
againstsixkindsof trainsvitro(疗一4)
⋯．． MIC／(mg·mL一1)水团花——
提取部位
金黄色葡 藤黄教 枯草芽 大肠埃 猪霍乱抄 铜绿假单
萄球菌 球菌 胞杆菌 希菌 门氏菌 童杆茁
B 一 一 一 一 一 一
B- 一 一 一 一 一 一
BI 1．25 2．5 2．5 — 2．5 2．5
BI 一 一 一 一 一 一
B～ 一 一 一 一 一 一
青霉素0．0098 0．0098 0．0098 一 一0．0098
头孢拉定0．0098 0．0098 0．0098 0．0098 0．0098 0．0098
。一”：没有抑菌活性
。一”．nobacteriostasis
表3水团花单体化合物对6种细菌的体外抑菌作用(厅=4)
Table3 Bacteriostasisofsixmonomercompounds
fromA．piluliferaagainstsixkinds
ofstrainsnvitro(H=4)
“一”：没有抑菌活性
。～”：nObacteriostasis
3讨论
近年来，由于抗生素的不合理使用，引起菌群失
调，菌种变异、产生耐药性等一系列棘手问题。寻找
和研制具有抗菌活性的新型抗菌药物成为当今世界
迫切需要解决的问题。中草药是我国具有悠久历史
的并被证明非常行之有效的医药，深入开发研究中
草药活性成分具有重大现实意义[5’6]。
水杨梅石油醚萃取部位(A。)及从中分离出的
甾体混合物(A皆)、水杨梅醋酸乙酯萃取部位
(A。)、水团花醋酸乙酯萃取部位(B。)及从中分离
出的单体化合物槲皮素一3一O—pD一葡萄糖苷(B。)均
对金黄色葡萄球菌表现出了较好的抑菌效果。其中
两种植物的醋酸乙酯萃取部位对金黄色葡萄球菌的
MIC为1．25mg／mL；A崔的MIC为0．625mg／
mL；而单体化合物槲皮素一3—0一pD一葡萄糖苷的
MIC更低至0．125mg／mL，其对金黄色葡萄球菌
的抑制作用较醋酸乙酯萃取部位提高了10倍。该结
果提示了从水杨梅石油醚萃取部位分离出的甾体混
合物和从水团花醋酸乙酯萃取部位分离出的单体化
合物槲皮素一3—0一pD一葡萄糖苷为主要抗菌成分
之一。
猪霍乱沙门氏菌和大肠埃希菌是肠道感染中常
见的致病菌。本实验结果也显示出，水团花醋酸乙酯
萃取部位对猪霍乱沙门氏菌有较强抑菌作用(MIC
为2．5mg／mL)，而槲皮素一3一O一肛D一葡萄糖苷对大
肠埃希氏菌有很强的抑菌作用(MIC为0．25mg／
mL)。水团花醋酸乙酯萃取部位与从中分离出的6
个单体化合物的抑菌范围发生偏离，这可能是由于：
(1)水团花醋酸乙酯萃取部位中存在其他能抑制猪
霍乱沙门氏菌的活性成分；(2)在水团花醋酸乙酯萃
取部位中槲皮素一3—0一pD一葡萄糖苷可能是由于量
较低，在本实验质量浓度范围内尚不足以抑制大肠
埃希菌增殖。本实验同时也表明水杨梅和水团花的
醋酸乙酯萃取部位及水杨梅甾体混合物对条件致病
菌，如铜绿假单胞杆菌、枯草芽胞杆菌表现出了一定
的抑制活性。
综上所述，本实验对瑶药水团花属植物进行了
探索研究，初步揭示了水杨梅与水团花的有效抑菌
成分。从水团花醋酸乙酯萃取部位分离出的槲皮素一
3一D—pD一葡萄糖苷被证明为有效的抑菌成分之一。
而两者的醋酸乙酯萃取部位以及从水杨梅石油醚萃
取部位分离得到的甾体混合物均表现出较好的广谱
抑菌活性。这为今后对其抑菌活性成分的进一步分
离与分析奠定了基础；对筛选天然药物，促进中药现
代化，合理开发和利用植物资源有一定的指导意义。

万方数据
中草蔼 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第10期2008年lo月·1535·
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葛根素对人小细胞肺癌H446细胞周期和相关周期蛋白表达的影响
李娟，胡永华。
(北京大学医学部公共卫生学院，北京100083)
摘要：目的观察葛根素诱导人小细胞肺癌H446细胞周期的阻滞作用，进一步探讨其作用机制。方法采用
MTT法测定葛根素对H446细胞生长的影响；采用流式细胞术检测处理后H446细胞周期分布和周期蛋白cyclin
D。、CDK．和P27表达水平。结果MTT法表明葛根素对H446细胞生长有较强的抑制作用；流式细胞仪检测结果
发现细胞周期阻滞在Go／G，期，量效关系良好，并检测到细胞周期蛋白cyclinD。、CDK。表达减弱，P27表达增强。结
论葛根素可通过诱导细胞周期阻滞而发挥体外抗肺癌作用。其机制可能涉及细胞周期相关蛋白eyclinDz、CDK．
和P27表达的调控。
关键词：葛根素；H446细胞；cyclinDl蛋白；CDK。蛋白；P27蛋白
中图分类号：R286．91 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)10—1535—03
肺癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，在我国许
多城市已位居全部恶性肿瘤死因的首位口]。长期大
量的临床证明，化学治疗肿瘤副作用大，植物来源抗
癌药物越来越受到人们的青睐。葛根素是豆科多年
生落叶藤本植物野葛Puerarialob ta(Willd．)
Ohwi或甘葛藤P．thomsoniiBenth．的根中葛根异
黄酮的主要有效成分之一[2]。以往研究表明，葛根总
黄酮具有明显的抗肿瘤作用[3]，但其主要成分葛根
素对人小细胞肺癌H446细胞的影响还不清楚。本
实验的目的在于研究葛根素对人小细胞肺癌H446
细胞生长的抑制作用和对细胞周期的阻滞作用，并
初步探讨其作用机制。
1材料
人小细胞肺癌H446细胞株由中国科学院上海
生命科学院营养所提供；RPMI一1640培养基和胎牛
血清为Gibco公司产品；胰蛋白酶和MTT为
Sigma公司产品；鼠抗人cyclinDl、CDK4、P27单克
隆抗体和羊抗鼠IgG抗体均购自武汉博士德生物
工程有限公司；96孔细胞培养板为美国Corning公
司产品；HERAcell150型C0。培养箱为德国
Heraeus公司产品；LH50A型倒置相差显微镜为日
本Olympus产品；流式细胞仪FACSCalibur为美
国BD公司产品。葛根素，棕黄色粉末(质量分数
90％)，中国药品生物制品检定所产品，批号752—
200511，试验时，用含0．1％二甲基亚砜(DMSO)
的RPMI一1640培养基溶解，一次性滤器滤过除菌。
2方法
2．1 H446细胞悬液制备：将H446细胞培养于含
10％灭活胎牛血清，青霉素及链霉素各100U／mL
的RPMI一1640培养基中，置于37℃、饱和湿度、
5％CO。培养箱中培养，隔日换液，待细胞进入对数
生长期后，贴壁细胞弃去上清液，磷酸盐缓冲液
(PBS)冲洗2次，0．25％胰蛋白酶消化，传化细胞。
2．2 MTT法检测葛根素对H446细胞生长的抑制
作用：将1×104／mLH446细胞悬液接种于96孔细
胞培养板中，每孔100弘L，培养24h后细胞贴壁，
弃去原培养液，分别加入不同终质量浓度的葛根素
(40、80、160、320、640pg／mL)各100弘L，另设不加
药物的对照组，培养72h后，每孔加入20pLMTT
溶液，继续孵育4h终止培养，弃去MTT，每孔加
收稿日期：2007-12—1l
作者简介：李娟(198l一)．女．河南安阳人，北京大学医学部在读博士研究生，主要研究方向为营养与疾病。
E—mail：taozilijuan@126．COrn
·通讯作者胡永华Tel／Faxl(OLO)82801189E—mail：yhhu@bjmu．edu．crl

万方数据
水杨梅和水团花提取物体外抑菌活性的实验研究
作者： 白雪， 林晨， 李药兰， 岑颖洲， 沈伟哉
作者单位： 白雪,林晨(暨南大学医学院,微生物学与免疫学教研室,广东,广州,510632)， 李药兰,岑颖
洲(暨南大学生命科学院化学系,广东,广州,610632)， 沈伟哉(暨南大学,解剖学教研室,广
东,广州,510632)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(10)
被引用次数： 7次

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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200810028.aspx