全 文 ：·1196· 中草蔼 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月
PHA首先通过T细胞受体引起胞内钙库释放
Ca2+，形成[Ca2+]。快速升高，Ca2+释放进一步激活
了细胞膜CRAC通道(Ca2+releaseactivatedC 2+
channel，CRAC)，Ca绊由胞外流入胞内，形成持续
高Caz+状态[-“，此外T细胞上还存在类似电压依赖
性钙通道的通道，参与Ca2+内流，与CRAC通道共
同形成高Ca抖状态[15]。当细胞内Ca2+升高到一定
程度后，细胞膜和内质网上的钙泵被激活，Ca2+被泵
出细胞或泵入钙池中，使[Ca2+]。达到稳定状态Eli。
由于芦荟大黄素使PHA引起的[-Ca2+]i下降至基础
值附近，但不会使[Ca2+]j低于基础值，提示芦荟大
黄素降低[Ca2+]，可能不是通过提高钙泵的活性来
实现的，而是通过抑制钙升高途径实现的，结果也显
示芦荟大黄素对PHA引起的胞内Ca2+释放和胞外
Ca2+内流均有抑制作用，芦荟大黄素作用具体的靶点
和分子机制还需要进一步的研究。
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积雪草苷对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的影响
章卓，万敬员，罗福玲，李洪钟，周岐新，吴柯
(重庆医科大学药学院药理教研室，重庆400016)
摘要：目的观察积雪草苷对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)小鼠的保护效应。方法56只Balb／c小鼠
随机分为对照、假手术、模型、溶媒、积雪草苷(5、15、45mg／kg)7组，每组8只。LPS(2．5mg／kg)气管滴注造
ALl模型，24h后HE染色观察小鼠肺组织病理改变，计算肺湿质量／干质量值；收集支气管肺泡灌洗液(BALF)
后行白细胞计数和分类，BCA法检测其蛋白的量I化学法检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性。结果积雪草苷
各剂量组呈剂量依赖性减轻LPS所致ALI模型肺组织病变情况，减轻肺水肿，减轻中性粒细胞的浸润，抑制蛋白
渗出。抑制肺组织中MPO活性。结论积雪草苷对LPS诱导ALI有保护效应。
关键词：积雪草苷；脂多糖；急性肺损伤；髓过氧化物酶
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)08—1196一04
收穑日期：2007—10一23
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30500463)
作者简介：章卓(1979一)，男，四川泸州人，讲师．硕士，泸州医学院药学院药理教研室工作，主要从事免疫和神经药理研究。
Tel：(023)68485038E—mail：zhhuozhangl00@163．com
*通讯作者万敬员Tel：(023)68485038
万方数据
中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月·1197·
Effectofasiaticosideonacutelunginjuryofmiceinducedbylipopolysaccharide
ZHANGZhuo，WANJing—yuan，LUOFu—ling，LIHong—zhong，ZHOUQi—xin，WUKe
(DepartmentofPharmacology，CollegeofPharmac uticalSc ence，ChongqingUniversity
ofMedicalSciences，Chonqing400016，China)
Abstract：ObjectiveToobservethprotectiveeffectofasiaticoside(AS)onacutelunginjury(ALI)
ofmiceinducedbylipop01ysaccharide(LPS)．MethodsBalb／cmice(56)wererandomlydividedinto
control，Shamoperation，model，model+vehicle，andmodel+asiatieoside(5，15，and45mg／kg)groups．
ThemodelofALlwasestablishedbyintratraehealinstillationofLPS20弘L(2．5mg／kg)．Micewer
killed24hlater，pathologicalchangesoflungwereobservedwithHEstaining，thera ioofpulmonarywet
weighttOdryweight(W／D)ofthelungweremeasured，thenumberandclassificationofleucocyteof
bronchoalveolaravagefluid(BALF)，werecounted，theprot inofBALFwasdetectedbyBCA，the
activityofm eloperoxidase(MPO)inlungwasdetectedbyMPOkit．ResultsAsiaticosidecouldalleviate
thedamageoflungcausedbyLPSthroughdecreasingalveolarinterstitialtissueedema，leucocyte
infiltrationin．andreducingtheactivityofMPOoflungina dose—dependentman er．Conclusion
AsiaticosidehastheprotectiveeffectsagainstALIofmiceindueedbyLPS．
Keywords：asiaticoside(AS)；1ipopolysaccharide(LPS)；acutelunginjury(ALI)；myeloperoxidase
(MPO)
急性肺损伤(acutelunginjury，ALI)是以肺
血管内皮细胞及肺泡上皮细胞广泛损伤为病理特征
的一种失控的炎症反应n]，是急性呼吸窘迫综合征
(acuterespiratorydistresssyndrome，ARDS)的早
期阶段，临床上表现为肺部弥漫性渗出和难以纠正
的低氧血症。ALI发病急而严重，甚至发展为
ARDS和多器官障碍综合征(multipleorgan
dysfunctionsyndrome，MODS)甚至多器官衰竭
(multipleorganfaliture，MOF)，国内发病率和病
死率为20％～40％，尤其在ICU病房中更是高达
50％左右，因此是目前研究的热点[2]。尽管对其机
制和治疗研究较多，但仍无有效手段治疗ALI。积
雪草作为药物已有数千年历史，广泛分布于长江流
域以南各地；民间主要用于外感风热、胸膜炎、小便
短赤、泌尿系感染、断肠草中毒、脱肛等。积雪草苷为
积雪草Centellaasiatica(L．)Urban提取物三萜皂
苷的主要成分之一[3]。积雪草苷对革兰阴性菌所致
感染有抑制作用“]，并抑制NO等炎症因子[5]，因此
能否用于治疗ALl值得研究。本研究通过复制脂多
糖(LPS)诱导ALI小鼠模型，观察积雪草苷对
ALI防治作用，为其用于ALI治疗提供理论参考。
1材料与方法
1．1材料：Balb／e小鼠，18～22g，10周龄，重庆医
科大学动物中心提供，合格证号：SYXK(渝)
2002007。积雪草苷，广西昌洲天然产物开发有限公
司，批号20061478，质量分数95％，LPS(Esche—
richcacoliendotoxin055：B5，Sigma，L2880)，瑞氏
染液(上海试剂三厂)，水合氯醛，中国医药(上海)
集团化学试剂有限公司，BCA试剂盒(Pierce公
司)，髓过氧化物酶(MPO)试剂盒(南京建成生物
工程研究所)。
1．2分组和给药：将56只Balb／c小鼠随机分为对
照组、假手术组、溶媒组、模型组(LPS2．5mg／
kg)，积雪草苷(5、15、45mg／kg)组，每组8只。积
雪草苷溶解于0．5％羧甲基纤维素钠中。药物组造
模前连续ig给药7d，对照组、假手术组和模型组给
予等量蒸馏水。
1．3 急性肺损伤模型的建立和支气管肺泡液收
集[6]：3％水合氯醛(O．3g／kg，ip)麻醉小鼠，颈部
正中切口2am，分离气管，微量注射器由气管向肺
方向滴注LPS溶液(2．5mg／kg)，1min内滴注完
毕，消毒缝合切口。小鼠保温护理。24h后相同方法
麻醉小鼠，用生理盐水灌洗支气管，0．5mE／次，连
续抽吸5次，精确回收支气管肺泡灌洗液
(bronchoalveolarlavagef uid，BALF)约2．0mL，
用于白细胞分类、计数和蛋白定量的测定。
1．4 BALF白细胞计数和分类：将BALF用破红
液处理掉红细胞，250Xg离心10min，弃上清，再
重悬于1mLPBS液中，倒置显微镜下计数板计数。
外周16小格记白细胞，细胞数=(计数数目／4)X
5×104。将重悬液滴于干净玻片上推平凉干，再将瑞
氏染液滴于涂片上，加入等量的瑞氏缓冲液，室温下
染色5～10min。然后用细小流水自片端冲去染液。
甩干或晾干玻片，封片。光学显微镜下计数不同视野
100个白细胞，按单核细胞、淋巴细胞进行分类，计
算百分率。
万方数据
·1198· 中草喃ChineseTraditionalandtlerbalDrugs第39卷第8期2008年8月
1．5 BALF蛋白的定量测定：将BALF用破红液
处理多余红细胞，250×g离心10rain，收集上清，
二甲基喹啉酸(BCA)法测BALF上清中蛋白浓
度，评价肺渗出程度和药物作用。
1．6肺组织病理切片和HE染色：造模24h后，取
肺左上叶放入10％甲醛固定24h，石蜡切片，HE
染色观察病理改变情况。
1．7肺湿质量及干质量测定：造模24h后，取右上
肺叶称湿质量，80℃恒温箱烤48h至肺干质量恒
定，称干质量，计算肺湿质量／干质量值。
1．8 MPO活性检测：准确称取肺组织50mg于生
理盐水50肛L中匀浆，按照MPO试剂盒操作，酶标
仪460nm检测。
1．9统计学处理：实验数据以z土s表示，数据分析
组内比较采用单因素方差分析，组间比较采用g
检验。
2 结果
2．1 积雪草苷对LPS致ALI小鼠的BALF白细
胞计数和分类的影响：结果显示对照组和假手术组
几乎无细胞吸出，同对照组比较，模型组和溶媒组白
细胞数目明显增加，中性粒细胞比例明显增加，达
80％以上，有显著性差异(P较，积雪草苷各组白细胞数目明显低于模型组(P<
0．01)，但积雪草苷5mg／kg组中性粒细比例无统
计学意义，积雪草苷15、45mg／kg组较模型组低，
有统计学意义(尸2．2 积雪草苷对BALF蛋白定量的影响：同对照
组比较，模型组和溶媒组蛋白量明显增加，有显著性
差异(P<0．01)。同模型组比较，积雪草苷5、15
mg／kg蛋白量少于模型组(Pmg／kg组蛋白量显著减少(P2．3积雪草苷对肺组织HE染色病理切片影响：结
果显示，对照组无损伤，假手术组损伤轻微，两组肺
泡小叶结构完整，肺泡腔干净，肺泡壁无水肿，肺泡
间质无炎性细胞浸润，纤维结缔组织无增生，肺泡壁
无增厚。模型组和溶媒对照组镜下见肺组织充血明
显，大量多核白细胞浸润、肺泡壁增宽、肺泡完整性
破坏，肺泡腔内可见出血和渗出，肺呈现急性炎症表
现，病理形态证实急性肺损伤炎症模型建立成功。积
雪草苷5mg／kg组肺间质中度水肿，肺泡壁增宽，
有白细胞浸润，但较模型组轻。积雪草苷15mg／kg
组肺泡可见白细胞浸润，肺泡壁充血但结构完整。积
雪草苷45mg／kg组肺组织小叶结构清晰，可见白
细胞浸润，炎症程度较轻。结果见图1。
图1 积雪草苷对ALl小鼠肺组织损伤的影响(HE染色)
Fig．1EffectofasiaticosideOninjuryoflungtissueinALlmice(HEstainning)
2．4 积雪草苷对肺组织湿质量／干质量的影响：同 同模型组比较，积雪草苷5、15mg／kg组MPO活
对照组比较，模型组和溶媒组肺湿质量与干质量比 性下降(P<0．05)，积雪草苷45mg／kg组MPO
值明显高于对照组，有显著意义(P部水肿明显。同模型组比较，积雪草苷各组肺湿质 3讨论
量／干质量值低于模型组，有显著意义(P结果见表1。 急而严重，发病率和死亡率都较高，目前尚无有效手
2．5积雪草苷对肺组织中MPO活性量的影响：同段治疗和特效药。积雪草始载于《神农本草经》，列为
对照组比较，模型组和溶媒组MPO明显上升(P<中品，具有清热利湿、解毒消肿的功效，临床上多用
0．01)，提示LPS刺激后体内中性粒细胞明显增加。于治疗跌打损伤、皮肤病等。目前积雪草苷在治疗抑
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月·1199·
表1 积■草苷LPS致ALl小鼠相关指标的影响(；士$，库一8)
Table1 EffectofasiaticosideonrelateddataofALlmiceinducedbyLPS(；士s，一一8)
与对照组比较：”P<0·05。4P<0·01I与棂型组比较；。P4P<0．0544P<0．017J$controlg upI。P<0．05。。P<0．01wmodelgroup
郁和伤口瘢痕愈合上研究较多，研究显示，积雪草苷 量少于模型组(P可抑制革兰氏阴性菌感染，在lOmg／kg即可抑制白的量显著减少(PNO等炎症因子表达[5]，本课题组前期工作也证实积量／干质量值低于模型组，有显著意义(P雪草苷对LPS诱导的大鼠发热有明显解热效应，其 提示积雪草苷可以通过减轻LPS致ALI的水肿程
解热作用与抑制前列腺素E。(PGE：)和环氧合酶一2度，减轻病理损伤，减轻白细胞和蛋白渗出，减少中性
(COX一2)等炎症因子有关。基于此，本实验复制经典粒细胞渗出比例，降低MPO的活性发挥对LPS致
的LPS致ALI动物模型，采用积雪草苷干预，探讨ALI的保护效应，其机制值得进一步研究。
积雪草苷对LPS诱导的ALI是否有保护效应。 参考文献：
内毒素致ALI模型包括尾iv给药，ip给药和[1]钱桂生·急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征研究现状与展望
雾化或气管滴入。本实验选择气管滴入，因此病变偏 [2]罢：：置淼：芸Z釜纛现97-状101叽．．小儿急救医
重于肺部，以肺局部炎症或组织损伤为主要特征，能 学，2000，7(3)。159．160．
够很好模拟ALI炎症指标和病理生理过程，但是对 [3]肖隽，车镇涛，毕开顺，等·柱前衍生化HPLC法测定积
氧和指数下降不能很好模拟‘7J。研究显示LPS致大 雪草及三金片中积雪草苷的含量[J]．药学学报，2000,35
鼠ALI水肿和渗出在感染LPS后24h最为严重， [4]张矗华，余兰香，甄瑞贤，等．积雪草苷的抗菌作用及对小
MPO活性则可以判断中性粒细胞在组织中浸润情 鼠实验性泌尿系统感染的治疗作用[J]．中国新药杂志，
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注致ALI模型，24h后处死动物，取肺标本和 [53三uoi，S’(}h：“g
cL’KooM
y‘．17hi6}?‘78ff：协．．of
BALF检测相关指标，从而判断积雪草苷对肺损伤 。it，icoxid。。y。th。。eduri。ggast，i。。1。。，heali。gin，；t。[J]．
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白细胞浸润、肺泡壁增宽、肺泡完整性破坏，肺泡腔 [6]金胜威，张力，姚尚龙，等·脂氧素A4对内毒紊诱导小鼠
可见出血和渗出，肺呈现急性炎症表现，证实本实验 竺愍症反应的影响[J]·中国急救医学，2006，26‘8’：
急性肺损伤炎症模型建立成功。同模型组比较，积雪 [7]Matsud。H，Mo，ik。。。T，U。d。H，矗。1．M。di。i。。1food
草苷各组病理损伤均较模型组轻。同模型组比较，积 stuffs，XXVII．saponinconstituentsofGotuKola,struc一
雪草苷各组白细胞数目明显降低(P草苷15、45mg／kg组中性粒细胞比例较模型组低 。=￡三。。lti，。t。di。s：L。。k。[J]．饥。P^。。B“z，
(P 万方数据
积雪草苷对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的影响
作者： 章卓， 万敬员， 罗福玲， 李洪钟， 周岐新， 吴柯
作者单位： 重庆医科大学药学院药理教研室,重庆,400016
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(8)
被引用次数： 4次

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