全 文 ：维药罗勒提取物对小鼠巨噬细胞 RAW264. 7 生长及其胞内 5-脂氧酶活
性的影响
米娜瓦尔·哈帕尔1， 阿孜古丽·吐尔逊2， 周文婷1， 程路峰1， 依巴代提·吐乎提1，
娜迪热·热依木3， 艾尼瓦尔·吾买尔1*
(1. 新疆医科大学基础医学院药理教研室，新疆 乌鲁木齐 830011;2. 新疆医科大学第一附属医院细胞生
物学室，新疆 乌鲁木齐 830011;3. 新疆医科大学第二附属医院内科，新疆 乌鲁木齐 830063)
收稿日期:2012-08-27
基金项目:教育部留学回国人员科研启动基金 (LXHG200803) ;国家自然科学基金项目 (XJEDU2006I30)
作者简介:米娜瓦尔·哈帕尔(1985—) ，女 (维吾尔族) ，硕士，研究方向:心血管药理学。E-mail:minawar_ happar@ 126. com
* 通信作者:艾尼瓦尔·吾买尔，男 (维吾尔族) ，教授，博士生导师，研究方向:心血管药理。
摘要:目的 观察罗勒提取物对小鼠腹腔巨噬细胞 (RAW264. 7)生长及其胞内 5-脂氧酶活性的影响。方法 采用
MTT比色法检测罗勒乙酸乙酯提取物或罗勒正丁醇提取物对正常 RAW264. 7 细胞和经脂多糖刺激的 RAW264. 7 细胞
生长的影响，求出其 IC50值;用罗勒乙酸乙酯提取物或罗勒正丁醇提取物分别干预经脂多糖处理的 RAW264. 7 细胞，
采用 ELISA法测定并比较上清液中白三烯 B4 的质量浓度，求出其抑制率。结果 罗勒乙酸乙酯提取物和罗勒正丁醇
提取物对正常 RAW264. 7 细胞的生长有不同程度的抑制作用，给药时间为 24 h 的 IC50值分别为 312. 5 μg /mL、350. 9
μg /mL，具有浓度依赖性;两种提取物对经脂多糖刺激的 RAW264. 7 的生长有一定的增殖作用 (P ＜ 0. 05) ;罗勒乙酸
乙酯提取物和罗勒正丁醇提取物对白三烯 B4 的最大抑制率分别为 42. 78%、38. 63%，其中罗勒乙酸乙酯提取物的作
用强于罗勒正丁醇提取物 (P ＜ 0. 05)。结论 罗勒提取物体外对经脂多糖刺激的 RAW264. 7 细胞生长的最大抑制质
量浓度为 100 μg /mL，对细胞内 5-脂氧酶活性具有抑制作用。
关键词:罗勒;RAW264. 7 细胞;脂多糖;5-脂氧酶
中图分类号:R285. 5 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2013)08-1599-06
doi:10． 3969 / j． issn． 1001-1528． 2013． 08． 003
Effect of extracts of Ocimum basilicum L． on mouse macrophage raw 264. 7 and
5-lipoxygenase
MINAWAR Happar1， ARZIGUL Tursun2， ZHOU Wen-ting1， CHENG Lu-feng1， IBADET Tohti1，
NADIRA Reyim3， ANWAR Umar1*
(1. Department of Pharmacology，Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，China;2. Cellular Biology Lab of No. 1 Affiliated Hospital，Xinjiang
Medical University，Urumqi 830011，China;3. Internal Medicine of No. 2 Affiliated Hospital，Xinjiang Medical University，Urumqi 830063，China)
ABSTRACT:AIM To study the effects of extracts of Ocimum basilicum L． on mouse peritoneal macrophages
RAW264. 7 and 5-lipoxygenase pathway． METHODS Effects of Ocimum basilicum L． extracts on growth of nor-
mal RAW264. 7 cells and lipopolysaccharide-stimulated RAW264. 7 cells by MTT colorimetric assay and the IC50
values were calculated to screen out the dose for administration． The lipopolysaccharide-induced RAW264. 7 cells
were intervened with Ocimum basilicum L． ethyl acetate extract and Ocimum basilicum L． butanol extract respec-
tively． The concentrations of leukotriene B4 in the supernatant were measured by ELISA approach and the inhibition
rate was calculated． RESULTS Ocimum basilicum L． ethyl acetate extract and Ocimum basilicum L． butanol ex-
tract inhibited on the growth of normal RAW264. 7 cells，in which IC50 in 24 h were 312. 5 μg /mL and 350. 9
μg /mL respectively with concentration- dependent model． Both extracts had certain proliferation on growth of li-
popolysaccharide-stimulated RAW264. 7 cells (P ＜ 0. 05 )． The maximal inhibiting ratio were 42. 78% and
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38. 63% respectively，and the inhibiting ratio of Ocimum basilicum L． ethyl acetate extract was stronger than that of
Ocimum basilicum L． butanol extract (P ＜ 0. 05)． CONCLUSION The experiment shows that maximal inhibi-
ting concentration of Ocimum basilicum L． extracts to the growth of RAW264. 7 cells reaches 100 μg /mL in relation
to intracellular 5-lipoxygenase inhibitor in vitro．
KEY WORDS:Ocimum basilicum L．;RAW264. 7 cell;Lipopolysaccharide;5-lipoxygenase
罗勒 Ocimum basilicum L． 是维吾尔医应用历
史悠久的常用药材之一，是唇形科植物罗勒的地上
部分，一年生草本，全国各地均有栽培。罗勒具有
疏风解表、化湿和中、行气活血、强心安神、解毒
消肿等功效［1-2］，主治感冒头疼、发热咳嗽、中暑
等。其主含的化学成分有挥发油类、黄酮及其苷
类、香豆素类，此外还含有三萜类和生物碱类等成
分［3-4］。本课题组前期发现罗勒乙酸乙酯提取物对
环氧合酶途径具有抑制作用［5-8］，本研究旨在检测
罗勒提取物对经脂多糖刺激的 RAW264. 7 细胞生
长以及胞内 5-酯氧酶活性的影响，探讨罗勒提取
物对体内花生四烯酸代谢网络的另一通路———5-酯
氧酶途径的可能影响。
1 材料与方法
1. 1 仪器 倒置荧光显微镜 (OLYMPUS，日本) ;
高速多功能冷冻离心机 (BR4i型，法国) ;生物安
全柜 (Haier，中国) ;CO2 培养箱 (Thermo，美
国) ;全波长酶标仪 (Benchmark PLUS，德国)。
1. 2 试 剂 与 材 料 小 鼠 腹 腔 巨 噬 细 胞
(RAW264. 7)购于中科院上海细胞库 (中国典型
培养物保藏中心 CCTCC) ;罗勒:2010 年 9 月采自
新疆吐鲁番市托克逊县种植基地，品种由新疆医科
大学药学院天药 /生药学教研室帕丽达·阿不力孜
教授鉴定;DMEM 干粉培养基 (GIBCO 公司) ;胎
牛血清 (FBS) (GIBCO 公司) ;四唑蓝 (MTT)
(Sigma公司) ;吲哚美辛 (Sigma 公司) ;脂多糖
脂多糖 (Sigma 公司) ;前列腺素 E2 (PEG2)
ELISA试剂盒 (GBD公司，批号:BA3248) ，花生
四烯酸 (Sigma公司) ;胰蛋白酶 (GIBCO 公司) ;
PBS缓冲液;白三烯 B4 ELISA 试剂盒 (武汉中美
科技有限公司，批号:BA2043) ;NDGA (Sigma
公司)。
1. 3 方法
1. 3. 1 罗勒的提取与分离 将阴干后的罗勒地上
部分剪碎，称取 200 g，在室温条件下用2 600 mL、
75%乙醇密闭浸泡 24 h 后采用超声仪进行提取，
用旋转蒸发仪减压浓缩回收乙醇得到乙醇提取物，
再用适量水分散提取物后，依次用乙酸乙酯，正丁
醇萃取，萃取液挥干后得到罗勒提取物 (罗勒乙
酸乙酯、罗勒正丁醇提取物) ，冷冻干燥。实验时
用适量的二甲基亚砜 DMSO 溶解后，用 DMEM 培
养基稀释成所需的质量浓度，再以 0. 22 μm 滤器
过滤，放置 4 ℃冰箱保存备用。
1. 3. 2 细胞培养 复苏后的 RAW264. 7 细胞转入
细胞培养瓶中，加入含有 10%胎牛血清、青霉素
100 μg /mL、链霉素 100 μg /mL的 DMEM高糖培养
基，37 ℃，5% CO2 培养箱中培养，约 3 ～ 5 d 细
胞铺满 80%瓶底后，用 0. 25%胰蛋白酶消化约3 ～
5 min后传代。根据需要部分细胞继续传代培养，
部分收集计数后冻存备用。
1. 3. 3 绘制 RAW264. 7 细胞的生长曲线 取生长
状态良好的细胞，采用一般的传代方法进行消化，
制成细胞悬液。以 1 × 105个 /mL 的密度将细胞接
种于 96 孔板中，按 MTT 法［9］，于 490 nm 波长处
测定 OD值，每天 1 次，连续 10 d。以培养时间为
横坐标，吸光度为纵坐标，绘制细胞生长曲线。
1. 3. 4 观察罗勒提取物对正常 RAW264. 7 细胞生
长的影响 以适量的二甲基亚砜溶液 DMSO 溶解
罗勒乙酸乙酯和罗勒正丁醇提取物以后，以含
10% FBS和双抗的 DMEM 培养基稀释成所需药物
溶液 (400、200、100、50、25 μg /mL) ，稀释后
的药物溶液中 DMSO的终体积分数控制在 0. 5%以
内 (预试验发现 12. 5 μg /mL的药物溶液在任何一
个时间段对细胞的生长均无明显作用，而细胞加入
600、800 μg /mL的药物溶液后，到 48 h 细胞就会
脱落，导致死亡) ，于 4 ℃ 冰箱备用。按 MTT 法
于 490 nm波长处测定 24、48、72、96 h 时的 OD
值，求出 IC50值，并计算细胞的存活率。
1. 3. 5 罗勒提取物对经脂多糖刺激的 RAW264. 7
细胞生长的影响 采用细胞存活率为 90%左右的
药物浓度，即罗勒乙酸乙酯提取物和罗勒正丁醇提
取物最大给药质量浓度为 100 μg /mL。再设五个梯
度 (公比为 2) ，配置时以 DMEM 培养基稀释，通
过 MTT法检测罗勒提取物对不同时间脂多糖处理
后的 RAW264. 7 细胞生长的影响。实验步骤:将
指数生长期的 RAW264. 7 细胞以1 × 105个 /mL的密
度接种于 96 孔培养板中，每孔 200 μL，设空白
组，模型组 (以脂多糖刺激致炎) ，阳性对照组
(白三烯 B4 终浓度为 100 μmol /L)和给药组 (不
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同质量浓度的罗勒提取物) ，每组 4 个复孔，放置
37 ℃，5% CO2 培养箱中培养 24 h。次日弃去旧培
养基，除空白组外，其余每孔均加入脂多糖溶液
200 μL (1 mg /L) ，于培养箱中孵育 12 h后，弃去
每孔上清液，空白组与模型组加入新鲜培养基，其
它组分别加入配置好的各组药物，每孔 200 μL，
继续培养 12、24、48 h。依照 MTT 法，于 490 nm
波长处测定 OD值，计算细胞的存活率。
1. 3. 6 罗勒提取物在体外对 5-脂氧酶活性的影响
将指数生长期的 RAW264. 7 细胞以 1 × 105个 /mL
的密度接种于 96 孔培养板中，每孔 200 μL，设空
白组，模型组 (以脂多糖刺激致炎) ，阳性对照组
(白三烯 B4 终浓度为 100 μmol /L)和给药组 (不
同质量浓度的罗勒提取物) ，每组 4 个复孔，放置
37 ℃，5% CO2 培养箱中培养 24 h。次日更换旧培
养基，除空白组以外的其它孔均加入终质量浓度 1
mg /L的脂多糖进行干预，继续培养 12 h 后，给药
组分别加入配置好的不同质量浓度的罗勒提取物，
空白组和模型组加入终体积分数为 0. 5%的 DMSO，
放置孵箱中继续孵育。24 h 后每个组加入终浓度
为 10 μmol /L 的底物花生四烯酸，37 ℃孵育 30
min，收集细胞上清液， － 20 ℃ 冻存待测。用
ELISA法 (严格按照试剂盒说明进行操作)测定
细胞上清液中白三烯 B4 的浓度，并计算抑制率。
抑制率 = ［(模型组 OD值 － 给药组 OD值)/
模型组 OD值］× 100%
1. 4 统计学处理 数据采用 x ± s 来表示，组间差
异用 t检验，检验水准 α = 0. 05。
2 结果
2. 1 MTT法绘制 RAW264. 7 细胞的生长曲线 经
过观察 RAW264. 7 细胞 10 d 的基本生长规律，发
现接种后的 24 h 内细胞的吸光度有一定的下降，
再经过 24 h 的滞留期后，细胞将进入一个对数生
长期，从接种后的第 7 天开始细胞的生长保持在一
个比较平稳的状态。所得结果显示，24 h 与 48 h
的 OD值与 0 h的 OD 值相比差异没有统计学意义
(P ＞ 0. 05) ;3 ～ 10 d，OD 值结果与 0 h 组比较，
差异有统计学意义 (P ＜ 0. 05)。根据此结果确定
RAW264. 7 细胞在接种后的第 48 小时开始进入对
数生长期，即视该时间段为干预细胞的最佳时期，
可以较合理地观察说明干预因素对细胞生长规律的
影响。根据 RAW264. 7 细胞生长规律随时间的变
化绘制出细胞生长曲线图，见图 1。
图 1 MTT法绘制 RAW264. 7 细胞生长曲线
Fig. 1 Cell growth curve of RAW2647 by MTT
2. 2 MTT 法确定罗勒提取物对正常 RAW264. 7 细
胞生长的影响
2. 2. 1 罗勒乙酸乙酯提取物对正常 RAW264. 7 细胞
生长的影响 在体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞中加
入终质量浓度为 25、50、100、200、400 μg /mL 的
罗勒乙酸乙酯提取物分别培养 24、48、72、96 h后，
可发现细胞的生长会受到不同的影响。结果表 1。
表 1 罗勒乙酸乙酯提取物在不同时间作用下对 RAW264. 7 细胞增殖的影响 (x ± s，n =3)
Tab. 1 Effect of Ocimum basilicum L． ethyl acetate extract on the proliferation of RAW264. 7 cells in the different
time (x ± s，n =3)
分 组
OD值
24 h 48 h 72 h 96 h
空白组 0. 296 ± 0. 053 0. 381 ± 0. 033 0. 389 ± 0. 019 0. 466 ± 0. 019
模型组 0. 280 ± 0. 021 0. 377 ± 0. 009 0. 379 ± 0. 028 0. 453 ± 0. 022
罗勒乙酸乙酯提取物 25 μg /L组 0. 285 ± 0. 012 0. 379 ± 0. 020 0. 386 ± 0. 010＊＊## 0. 371 ± 0. 018＊＊##
罗勒乙酸乙酯提取物 50 μg /L组 0. 267 ± 0. 013* # 0. 329 ± 0. 029＊＊## 0. 369 ± 0. 021* # 0. 299 ± 0. 011＊＊##
罗勒乙酸乙酯提取物 100 μg /L组 0. 266 ± 0. 018* # 0. 322 ± 0. 044＊＊## 0. 365 ± 0. 017* # 0. 284 ± 0. 019＊＊##
罗勒乙酸乙酯提取物 200 μg /L组 0. 258 ± 0. 037* # 0. 281 ± 0. 019＊＊## 0. 310 ± 0. 023＊＊## 0. 213 ± 0. 013＊＊##
罗勒乙酸乙酯提取物 400 μg /L组 0. 062 ± 0. 011＊＊## 0. 095 ± 0. 022＊＊## 0. 048 ± 0. 025＊＊## 0. 024 ± 0. 012＊＊##
注:与空白组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01;与模型组比较，#P ＜ 0. 05，##P ＜ 0. 01
除 400 μg /mL 以外的其他剂量给药组，在给
药后的 72 h 之前细胞的吸光度会一直升高，72 h
之后会持续下降。组间分析结果表明，细胞的存活
率随着给药质量浓度的增大而不断降低，具有质量
浓度依赖性。24 h 时的 IC50值为 312. 5 μg /mL，给
药质量浓度为 400 μg /mL 时，细胞存活率在 20%
以下，对 RAW264. 7 细胞产生毒性作用。
2. 2. 2 罗勒正丁醇提取物对正常 RAW264. 7 细胞
生长的影响 在体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞中加
入终质量浓度为 25、50、100、200、400 μg /mL的
罗勒正丁醇提取物分别培养 24、48、72、96 h 后，
可发现细胞的生长会受到不同的影响。给药后的
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24 h 内，25、50 μg /mL 的药物质量浓度对
RAW264. 7 细胞具有促进增殖的作用，细胞存活率
为 106%、102%。结果如表 2 所示，在给药后的
72 h 之前，各个给药组细胞的吸光度持续升高，
72 h之后反而下降。组间分析结果表明，细胞的存
活率随着给药剂量的增大而不断下降，具有一定的
剂量依赖性。在 24 h 的 IC50值为 350. 9 μg /mL，达
到 400 μg /mL时，对RAW264. 7细胞产生毒性作用。
表 2 罗勒正丁醇提取物在不同时间作用下对 RAW264. 7 细胞增殖的影响 (x ± s，n =3)
Tab. 2 Effect of Ocimum basilicum L． butanol acetate extract on the proliferation of RAW264. 7 cells in the different time
(x ± s，n =3)
分 组
OD值
24 h 48 h 72 h 96 h
空白组 0. 296 ± 0. 053 0. 381 ± 0. 033 0. 389 ± 0. 019 0. 466 ± 0. 019
模型组 0. 280 ± 0. 021 0. 377 ± 0. 009 0. 379 ± 0. 028 0. 453 ± 0. 022
罗勒正丁醇提取物 25 μg /mL组 0. 313 ± 0. 014 0. 375 ± 0. 016 0. 377 ± 0. 012＊＊## 0. 337 ± 0. 013＊＊##
罗勒正丁醇提取物 50 μg /mL组 0. 302 ± 0. 019* 0. 328 ± 0. 014＊＊## 0. 363 ± 0. 012＊＊## 0. 281 ± 0. 014＊＊##
罗勒正丁醇提取物 100 μg /mL组 0. 287 ± 0. 009* 0. 309 ± 0. 015＊＊## 0. 357 ± 0. 032＊＊## 0. 276 ± 0. 019＊＊##
罗勒正丁醇提取物 200 μg /mL组 0. 219 ± 0. 013* # 0. 277 ± 0. 019＊＊## 0. 333 ± 0. 009＊＊## 0. 261 ± 0. 010＊＊##
罗勒正丁醇提取物 400 μg /mL组 0. 128 ± 0. 007＊＊## 0. 174 ± 0. 016＊＊## 0. 192 ± 0. 011＊＊## 0. 067 ± 0. 017＊＊##
注:与空白组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01;与模型组比较，#P ＜ 0. 05，##P ＜ 0. 01
2. 3 罗 勒 有 效 提 取 物 对 经 脂 多 糖 刺 激 的
RAW264. 7 细胞生长的影响 每个时间段的模型组
与对应的空白组相比较，其差异具有统计学差异
(P ＜ 0. 05) ，说明细胞致炎成功。经脂多糖刺激的
RAW264. 7 细胞受到各组药物作用 12 h 后，各组
药物与模型组相比较，其差异无统计学意义 (P ＞
0. 05)。24 h 和 48 h，除 6. 25 μg /mL 组外，其它
给药组与脂多糖组相比其差异具有统计学差异
(P ＜ 0. 05) ，对经脂多糖刺激的 RAW264. 7 细胞均
有增殖作用。结果见表 3。
表 3 罗勒提取物对经脂多糖刺激的 RAW264. 7 细胞的增殖作用 (x ± s，n =3)
Tab. 3 Proliferation to RAW264. 7 cells of polar extracts of Ocimum basilicum L． stimulated by lipopolysaccharide (x ± s，n =3)
分 组 剂量 12 h 24 h 48 h
空白组 － 0. 682 ± 0. 471 0. 729 ± 0. 056 0. 889 ± 0. 071
模型组 1. 00 μg /mL 0. 307 ± 0. 109# 0. 223 ± 0. 057## 0. 076 ± 0. 001##
吲哚美辛 10 －7 mol /L 0. 531 ± 0. 037 0. 597 ± 0. 022＊＊ 0. 623 ± 0. 012＊＊
阳性对照组 10 －4 mol /L 0. 496 ± 0. 023 0. 538 ± 0. 045＊＊ 0. 551 ± 0. 031＊＊
罗勒乙酸乙酯提取物 6. 25 μg /mL 0. 356 ± 0. 092 0. 335 ± 0. 015 0. 303 ± 0. 044＊＊
罗勒乙酸乙酯提取物 12. 50 μg /mL 0. 374 ± 0. 026 0. 384 ± 0. 003＊＊ 0. 650 ± 0. 158＊＊
罗勒乙酸乙酯提取物 25. 00 μg /mL 0. 456 ± 0. 174 0. 552 ± 0. 137＊＊ 0. 667 ± 0. 114＊＊
罗勒乙酸乙酯提取物 50. 00 μg /mL 0. 545 ± 0. 099 0. 631 ± 0. 048＊＊ 0. 724 ± 0. 077＊＊
罗勒乙酸乙酯提取物 100. 00 μg /mL 0. 555 ± 0. 015 0. 636 ± 0. 036＊＊ 0. 784 ± 0. 091＊＊
罗勒正丁醇提取物 6. 25 μg /mL 0. 487 ± 0. 211 0. 273 ± 0. 011 0. 183 ± 0. 011
罗勒正丁醇提取物 12. 50 μg /mL 0. 528 ± 0. 233 0. 501 ± 0. 042＊＊ 0. 414 ± 0. 001＊＊
罗勒正丁醇提取物 25. 00 μg /mL 0. 496 ± 0. 079 0. 526 ± 0. 132＊＊ 0. 537 ± 0. 131＊＊
罗勒正丁醇提取物 50. 00 μg /mL 0. 522 ± 0. 109 0. 574 ± 0. 041＊＊ 0. 617 ± 0. 014＊＊
罗勒正丁醇提取物 100. 00 μg /mL 0. 525 ± 0. 072 0. 619 ± 0. 151＊＊ 0. 676 ± 0. 019＊＊
注:与空白组比较，#P ＜ 0. 05，#P ＜ 0. 01;与模型组相比，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
2. 4 罗勒有效提取物在体外对 5-脂氧酶活性的影
响 由表 4 得出，模型组与空白组比较，差异具有
统计学意义 (P ＜ 0. 01) ，证明细胞模型建造成功。
各药组与模型组相比，差异具有统计学意义 (P ＜
0. 01) ，可以判断罗勒乙酸乙酯提取物和罗勒正丁
醇提取物均对白三烯 B4 均有抑制作用，罗勒乙酸
乙酯提取物的抑制作用大于罗勒正丁醇提取物。而
对白三烯 B4 的抑制作用随着给药剂量的提高逐渐
增大，存在着一定的量效关系。可见，罗勒提取物
对 5-脂氧酶的活性有抑制作用。
3 讨论
确定有效给药剂量是进行药物干预实验之前的
非常重要的试验步骤。本研究首先通过维药罗勒不
同提取物对正常 RAW264. 7 细胞的干预实验，确
定了不同质量浓度的维药罗勒乙酸乙酯提取物和正
丁醇提取物对正常 RAW264. 7 细胞有不同的影响，
而罗勒乙酸乙酯提取物对细胞增殖的影响大于罗勒
正丁醇提取物，400 μg /mL的罗勒乙酸乙酯提取物
对 RAW264. 7 细胞的毒性大于相同质量浓度的罗
勒正丁醇提取物，俩者均降低了细胞的存活率。显
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表 4 罗勒不同提取物对 5-脂氧酶活性的影响 (x ± s，
n =3)
Tab. 4 Effects on 5-lipoxygenase enzyme activity of differ-
ent extracts of Ocimum basilicum L． (x ± s，n =3)
分 组 剂 量
白三烯 B4 质量浓
度 / (ng·L －1)
抑制率 /
%
空白组 － 121. 69 ± 5. 48 －
模型组 1 μg /mL 293. 45 ± 7. 41## －
阳性对照组 100 μmol /L 133. 24 ± 4. 46＊＊ 54. 59
罗勒乙酸乙酯提取物 100 μg /mL 167. 91 ± 23. 99＊＊ 42. 78
罗勒乙酸乙酯提取物 50 μg /mL 174. 04 ± 16. 91＊＊ 40. 69
罗勒乙酸乙酯提取物 25 μg /mL 186. 83 ± 3. 38＊＊ 36. 33
罗勒正丁醇提取物 100 μg /mL 180. 08 ± 15. 25＊＊+ 38. 63
罗勒正丁醇提取物 50 μg /mL 181. 89 ± 13. 46＊＊+ 38. 02
罗勒正丁醇提取物 25 μg /mL 215. 71 ± 30. 32＊＊+ 26. 49
注:与空白组比较，# P ＜ 0. 05;与模型组相比，* P ＜ 0. 05，
＊＊P ＜ 0. 01;与罗勒乙酸乙酯比较，+ P ＜ 0. 01
微镜下观察发现，药物质量浓度达到 400 μg /mL时，
细胞的形态出现明显的损伤现象 (细胞体积缩小，突
起消失，间隙增大)，这可能与巨噬细胞吞噬了大量
的脂质后转变为泡沫细胞，从而加重细胞的损伤有
关［10］。因此在进行药效学实验时，将此质量浓度排
除在外。在相同的时间段内，罗勒乙酸乙酯提取物和
罗勒正丁醇提取物均随着质量浓度的增大，其对细胞
的毒性也逐渐增大。可以推断罗勒提取物质量浓度与
其对细胞的毒性作用之间有着一定的量效关系。
在进行检测炎症因子水平之前，需要考虑维药
罗勒提取物对被脂多糖刺激致炎后的 RAW264. 7
细胞会有什么样的影响并且确定其给药剂量。脂多
糖是一种重要的致病介质，来源于革兰氏阴性细菌
细胞壁。根据进入机体的剂量不同，会引起不同程
度的炎症和中毒反应［11-12］。脂多糖对天然免疫细
胞表达细胞因子的调节作用是脂多糖致病的核心机
制［13］。本实验所采用的小鼠腹腔巨噬细胞属免疫
细胞，当被脂多糖刺激之后，细胞的生理环境将会
发生变化，细胞的存活率也将随之下降。结合以上
MTT实验结果，选定安全剂量范围，对脂多糖刺
激后的细胞进行了试验观察，发现罗勒提取物对经
脂多糖刺激后的细胞有增殖作用，这可能与其抑制
了脂多糖所致的炎症因子有关。
多不饱和脂肪酸花生四烯酸 (arachidonic
acid)是多种生物活性物质的前提，作为一种重要
的人体必需脂肪酸，它具有重要的生理，病理作
用。花生四烯酸代谢网络是炎症代谢网络中的一个
核心网络［14］。人体的花王四烯酸代谢网络中，主
要有两条代谢路径:①通过环氧酶 (cyclooxygen-
ase，COX)的作用生成各种前列腺素 (prostaglan-
dins，PGs) ;②通过脂氧酶 (5-lipoxygenase)的作
用生成白三烯 (leukotrienes) ，脂质过氧化物［15］，
这些代谢产物可能引起或加重机体的一些炎症反
应。现有研究证明，生物组织细胞膜富含的花生四
烯酸经专一酶催化产生的代谢物除了调控许多生理
过程外，还在炎症反应中起重要作用［16］。
脂氧合酶 (Lipoxygenase，LOX)是一种氧合
酶，作为一种含非血红素铁的蛋白，其代谢产物白
三烯类物质是一种强烈的炎症介质，对哮喘、类风
湿、过敏性鼻炎及癌症等常见多发病的发生发展起
到很大的作用。通过检测罗勒提取物对 5-脂氧酶代
谢产物白三烯 B4 的影响发现，给药组的存活率明显
高于模型组。这是因为罗勒提取物抑制了 5-脂氧酶
活性，炎症因子白三烯 B4 的释放受到限制。罗勒乙
酸乙酯提取物对 5-脂氧酶代谢产物白三烯 B4 的抑制
率明显大于罗勒正丁醇提取物，罗勒乙酸乙酯提取
物可能是罗勒发挥抗炎作用的有效部位。
参考文献:
［1］ 买买提·努尔艾合买提，吐尔洪·艾买尔，吾布力·吐尔
迪． 维吾尔药罗勒的现代研究进展［J］． 中国民族医药杂
志，2007，13(4) :69-72．
［2］ 新疆维吾尔自治区卫生厅． 维吾尔药材标准［S］． 乌鲁木
齐:新疆科技卫生出版社，1993:183-187．
［3］ 依巴代提·吐乎提，玛依努尔·吐尔逊，毛新民，苏巴提·
吐尔地． 罗勒水提物对 ADP、凝血酶诱导的大鼠血小板聚
集的影响［J］． 新疆医科大学学报，2005，28(6) :526-527．
［4］ 帕丽达·阿不力孜，米仁莎，丛媛媛，等． 新疆罗勒化学
成分的分离坚定［J］． 华西药学杂志，2007，22(5) :
489-490
［5］ 蒋 进，依巴代提·吐乎提，艾尼瓦尔·吾买二． 罗勒提取
物对内皮细胞损伤大鼠模型的保护作用［J］． 新疆医科大
学学报，2008，31(9) :1148-1150．
［6］ 江国华，依巴代提·吐乎提，阿布力孜·阿布杜拉，等． 维
吾尔药罗勒对环氧化酶的影响［J］． 亚太传统医药，2009，
5(1) :37-38．
［7］ 何志琴，艾尼瓦尔·吾买尔，阿布力孜·阿布杜拉，等． 维
药罗勒提取物对脂多糖诱导 RAW264. 7 细胞环氧化酶 2 活
性的影响［J］． 时珍国医国药，2010，6(9) :2147-2149．
［8］ 古兰·托来西，依巴代提·吐乎提，胡君萍，等． 维吾尔药
罗勒乙酸乙酯提取物抗炎作用的研究［J］． 海峡药学，
2011，23(2) :23-25．
［9］ 司徒镇强，吴军正． 细胞培养书［M］． 西安:世界图书出
版西安公司，2007．
［10］ Bell J G，SargentJ R． Arachidonic acid in aquaculture feeds:
current status and future opportunities［J］． Aquaculture，2003，
218(1-4) :491．
3061
2013 年 8 月
第 35 卷 第 8 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
August 2013
Vol． 35 No． 8
［11］ Bell J G，Farndale B M，Bruce M P，et al． Effect of brood
stock dietary lipid on fatty acid compositions of eggs from sea
bass (Dicentrarchus labrax) ［J］． Aquaculture，1997，149(1-
2) :107．
［12］ Kadhim H，Tabarki B，Verellen G，et al． Inflammatory cyto-
kines in the pathogenesis of periventricular leukomalacia［J］．
Neurology，2001，56(10) :1278-1284
［13］ 施东魁，胡春柑． 花生四烯酸的主要作用及提取方法［J］．
中国中药杂志，2007，6(32) :11．
［14］ 魏 伟，李晓辉，张洪泉，等． 抗炎免疫药理学［M］． 北
京:人民卫生出版社，2005:182-185．
［15］ 陈 龙，朱祖康，王丙云，等． 花生四烯酸代谢物在炎症中
的作用［J］． 国外畜牧科技，2000，27(4) :31．
［16］ Fiorio Pla A，Genova T，Pupo E，et al． Multiple roles of pro-
tein kinase A in arachidonic acid-mediated Ca2 + entry and
tumor-derived human endothelial cell migration［J］． Mol Cancer
Res，2010，8(11) :1466-1476．
莪术油对人卵巢癌 SKOV3 细胞的影响及铂类耐药逆转作用
李艳芳， 李 敏， 刘首娟， 孔德胜， 李荣霞， 史淑红*
(河北医科大学第二医院妇科，河北 石家庄 050000)
收稿日期:2012-12-20
作者简介:李艳芳 (1987—) ，女，硕士，研究方向:妇科学。E-mail:yf_ lee1987@ 126． com
* 通信作者:史淑红 (1965—)女，博士，硕士生导师。E-mail:sshh3095@ 126． com
摘要:目的 观察莪术油对人卵巢癌 SKOV3 细胞增殖和细胞周期的影响及其铂类耐药细胞 SKOV3 /DPP 的逆转作用。
方法 噻唑蓝比色法观察不同质量浓度莪术油对 SKOV3 细胞增殖抑制作用，计算半数抑制浓度;流式细胞技术
(FCM)检测莪术油对 SKOV3 细胞周期的影响;2 × 2 析因试验分析顺铂联合莪术油对 SKOV3 /DDP的交互作用，以及
增加敏感的作用。结果 莪术油对 SKOV3 细胞的增殖有明显的抑制作用，半数抑制浓度为 34 μg /mL;FCM结果显示
莪术油组较对照组细胞 G1 期比例明显升高，而 G2、S期显著下降 (P ＜ 0. 01) ;析因实验结果表明顺铂和莪术油之间
存在交互作用，莪术油可以增强顺铂对 SKOV3 /DDP细胞的抑制作用。结论 莪术油对人卵巢癌 SKOV3 有显著抑制作
用，可将其细胞周期阻滞于 G0 /G1 期;莪术油可以增加人卵巢癌 SKOV3 /DDP细胞对顺铂的敏感性。
关键词:莪术油;卵巢癌;细胞周期;顺铂耐药
中图分类号:R285. 5 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2013)08-1064-05
doi:10． 3969 / j． issn． 1001-1528． 2013． 08． 004
Effect of zedoary oil on proliferation and platinum resistance of human ovarian
cancer SKOV3 cell line
LI Yan-fang， LI Min， LIU Shou-juan， KONG De-sheng， LI Rong-xia， SHI Shu-hong*
(Department of Gynecology，No. 2 Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050000，China)
ABSTRACT:AIM To observe the effect of zedoary oil on proliferation and the cell cycle in the human ovarian
cell line SKOV3 and the reversal effect of zedoary oil on cisplatin-resistant ovarian cancer cell line SKOV3 /DDP．
METHODS The SKOV3 cells were treated by different concentrations of zedoary oil and MTT was used to detect
the IC50 rates of proliferation inhibition． Flow cytometry (FCM)was used to examine the influence of zedoary oil on
the cell cycles of SKOV3 cells． 2 × 2 factorial designs were used to analyze the interaction of cisplatin and zedoary
oil to SKOV3 /DDP cell and sensitization to cisplatin resistance． RESULTS Zedoary oil inhibited the proliferation
of SKOV3 cells remarkably and the inhibition rate increased with the increase of the concentration of zedoary oil，
and IC50 was 34 μg /mL． FCM showed that the portion of G1 phase in zedoary oil group increased and portion of
both G2 and S phase decreased (P ＜ 0. 01)． 2 × 2 factorial designs trial showed that there existed interaction effect
between the cisplatin and zedoary oil． The latter enhanced sensitivity of cisplatin to the SKOV3 /DDP cell．
4061
2013 年 8 月
第 35 卷 第 8 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
August 2013
Vol． 35 No． 8