全 文 ：HPLC法测定复方玄参止咳胶囊中哈巴俄苷
刘 　霞 ,冯玛莉 ,李培毅 ,贾力莉 ,牛艳艳 ,武玉鹏
①
　
(山西省中医药研究院 ,山西 太原 　030012)
摘 　要 :目的 　建立复方玄参止咳胶囊中哈巴俄苷的测定方法。方法 　采用高效液相色谱法 , Irregular C18 (250
mm ×416 mm , 10μm) ;乙腈2110 %醋酸 (26 ∶74)为流动相 ;检测波长为 278 nm ;柱温为室温。结果 　哈巴俄苷在
01061～11076μg 线性关系良好 , r = 01999 9 ,平均加样回收率为 9916 % ,RSD 为 2106 %。结论 　该方法简便、快
速、准确 ,为复方中测定哈巴俄苷提供了可靠的方法。
关键词 :复方玄参止咳胶囊 ;哈巴俄苷 ;高效液相色谱
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0120069202
　　复方玄参止咳胶囊由玄参、知母、麦冬等 10 余
味中药组成 ,具有解热润肺、化痰止嗽的功效 ,主治
外感风热引起的咳嗽痰盛 ,口干舌燥 ,腹满便秘等
症。本品以玄参为君药 ,其中哈巴俄苷为玄参的有
效成分。哈巴俄苷具有抗慢性炎症、降压、镇痛、解
痉、抗乙肝病毒以及免疫促进作用 ,且与滋阴功效密
切相关[1 ] 。《中国药典》2005 年版玄参药材中哈巴
俄苷的测定采用梯度洗脱的 HPL C 法测定 ,该方法
用于复方玄参止咳胶囊中哈巴俄苷的测定时 ,稳定
性差 ,哈巴俄苷色谱峰分离度、拖尾因子均达不到规
定要求。因此本实验采用 H PL C 法对复方玄参止
咳胶囊中的哈巴俄苷进行了测定 ,采用固定比例的
流动相稳定性好 ,并经过大孔吸附树脂法进行供试
品的纯化处理 ,方法操作简便、结果准确 ,可用于复
方玄参止咳胶囊的质量控制 ,同时也为复方中测定
哈巴俄苷提供了一定的参考。
1 　仪器与试剂
高效液相色谱仪 :L C —6A 泵、SPD —6AV 紫外
检测器、SIL —6A 自动进样器 ,日本岛津 ; EC2000
色谱数据处理工作站 ,大连依利特科学仪器有限公
司 ;BP211D、BP310P 电子天平 , 德国赛多利斯。
UV —3000 紫外可见光分光光度计 ,日本岛津。
乙腈 ,色谱纯 ,其他试剂均为分析纯。哈巴俄苷
对照品 ,中国药品生物制品检定所 ,批号 1117302
200502。水由 RO240 超纯水机制备。复方玄参止
咳胶囊自制 ,每粒装 015 g。
2 　方法与结果
211 　色谱条件与系统适用性试验 : Irregular C18
(250 mm ×416 mm , 10μm) ;乙腈2110 %醋酸 (26 ∶
74)为流动相 ;检测波长为 278 nm ;柱温为室温。理
论板数按哈巴俄苷峰计算 ,应不低于 3 000。
212 　对照品溶液的制备 :取干燥至恒重的哈巴俄苷
对照品约 215 mg ,精密称定 ,置 10 mL 量瓶中 ,加
70 %乙醇适量 ,使溶解 ,并稀释至刻度 ,摇匀 ,精密吸
取上述溶液 110 mL 置 10 mL 量瓶中 ,加 70 %乙醇
稀释至刻度 ,摇匀 ,即得。
213 　供试品溶液的制备 :取装量差异项下的本品内
容物约 2 g ,精密称定 ,置具塞锥形三角瓶中 ,精密加
入 70 %乙醇 50 mL ,密塞 ,称定质量 ,超声处理 (功
率 250 W ,频率 33 k Hz) 15 min ,放冷 ,再称定质量 ,
用 70 %乙醇补足减失的质量 ,摇匀 ,离心 ,精密量取
上清液 25 mL ,蒸干 ,残渣加水 15 mL 使溶解 ,分次
转移至 D2101 大孔吸附树脂柱 (长 18 cm ,内径 115
cm) 上 ,以水 100 mL 洗脱 ,弃去水液 ,再用 30 %乙
醇 100 mL 洗脱 ,弃去洗脱液 ,继用乙醇 100 mL 洗
脱 ,收集洗脱液 ,蒸干 ,残渣加 70 %乙醇溶解并转移
至 10 mL 量瓶中 ,加 70 %乙醇至刻度 ,摇匀 ,滤过 ,
取续滤液 ,即得。
214 　阴性干扰试验 :处方中去玄参 ,同法制备玄参
阴性样品 ,按供试品溶液制备项下的方法制得相应
的阴性供试品溶液 ,依法进行测定 ,结果阴性不干
扰 ,见图 1。
215 　线性关系的考察 :精密称取哈巴俄苷对照品适
量 , 分别制成 61125、13145、2619、5318、10716
μg/ mL 的溶液 ,各进样 10μL ,依上述色谱条件测定
峰面积。以哈巴俄苷峰面积积分值为纵坐标、进样量
·96·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月
①收稿日期 :2008204202　　　
作者简介 :刘　霞 (1965 —) ,女 ,山西闻喜人 ,主任药师 ,从事中药新药的研究开发工作。
Tel : (0351) 4668091 　E2mail : liuxia650829 @126. com
t/ min3 2哈巴俄苷3 2hapagoside
图 1 　哈巴俄苷对照品( A) 、复方玄参止咳胶囊( B)
和阴性对照( C)的 HPLC图谱
Fi g. 1 　HPLC Chromatograms of hapagoside reference
substance ( A) , Compound Xuanshen Zhike
Capsula ( B) , and negative sample ( C)
(μg)为横坐标 ,计算得回归方程 Y = 619 ×10 - 5 X +
111 ×10 - 3 , r = 01999 9 ,表明哈巴俄苷在 01061 25～
11076μg 时与峰面积具有良好的线性关系。
216 　精密度试验 :精密吸取供试品溶液 10μL ,重
复进 样 6 次 , 结 果 哈 巴 俄 苷 峰 面 积 值 的
RSD 为 1101 %
217 　稳定性试验 :取供试品溶液 ,分别在 015、110、
115、210、410、610 ⋯⋯24 h ,分别进样 10μL ,记录哈
巴俄苷峰面积积分值 ,计算其 RSD 为 1115 %。结
果表明 ,供试品溶液中的哈巴俄苷色谱峰在 24 h 内
稳定性良好。
218 　重现性试验 :取批号 060910 样品 6 份 ,各 2 g ,
精密称定 ,制备供试品溶液 ,分别进样进行测定 ,记
录哈巴俄苷峰面积并计算。结果显示哈巴俄苷平均
质量分数为 011420 mg/ g ,RSD 为 1123 %。
219 　回收率试验 :取批号 060910 样品 6 份 ,各约
110 g ,精密称定 ,分别精密加入约 01189 mg 哈巴俄
苷对照品 ,制备供试品溶液 ,分别进样 ,测定 ,记录峰
面积 并 计 算 , 结 果 平 均 回 收 率 为 9916 % ,
RSD 为 2106 %。
2110 　样品测定 :取 6 批样品 ,依法制成供试品溶
液 ,分别精密吸取哈巴俄苷对照品溶液和供试品溶
液各10μL按上述色谱条件测定 ,以外标一点法计
算样品中哈巴俄苷的质量分数 ,结果见表 1。根据
结果 ,确定本品每粒含玄参按哈巴俄苷计算 ,不得少
于 60μg。
表 1 　复方玄参止咳胶囊中哈巴俄苷的测定结果
Table 1 　Determination of hapagoside in Compound
Xuanshen Zhike Capsula
批 号
哈巴俄苷
/ (μg ·粒 - 1)
RSD/ % 批 号
哈巴俄苷
/ (μg ·粒 - 1)
RSD/ %
20061019 8316 0134 20070301 9616 01 44
20060105 7712 1137 20070302 9912 01 50
20070119 10315 0141 20070303 9810 01 43
3 　讨论
311 　流动相的优选 :采用《中国药典》2005 年版一
部玄参项下哈巴俄苷的测定方法中的流动相 :甲醇2
乙腈2甲酸2水 (20 ∶80 ∶40 ∶60) 20 min 梯度洗脱 ,
结果本品中哈巴俄苷与相邻峰色谱峰基线分离度
差 ;经过调整流动相为乙腈2110 %醋酸 (30 ∶70) 、乙
腈2110 %醋酸 ( 26 ∶74) ,结果用乙腈2110 %醋酸
(26 ∶74)流动相测定 ,本品中哈巴俄苷与相邻峰色
谱峰基线分离效果好 ,阴性不干扰 ,故确定流动相为
乙腈2110 %醋酸 (26 ∶74) 。
312 　供试品的制备方法的优选 :本品所测哈巴俄苷
易溶于水、乙醇、甲醇。供试品的制备方法中 ,对提
取溶媒分别用 30 %甲醇、60 %乙醇、70 %乙醇、80 %
乙醇进行相同时间的超声处理 ,并以上述条件进行
测定 ,结果 70 %乙醇提取效率最高。故确定提取溶
媒采用 70 %乙醇。在确定提取溶媒的前提下 ,与对
不同超声时间 (10、15、20、30 min)进行了比较研究 ,
结果确定提取时间以超声处理 (功率 250 W ,频率
33 k Hz) 15 min 最佳。在上述条件确定以后 ,供试
品中色谱峰较多 ,干扰严重 ,为此又进一步进行了纯
化处理 ,经过采用正丁醇萃取、通过 D2101 大孔吸附
树脂柱等方法比较 ,通过 D2101 大孔吸附树脂柱制
得的供试品 ,能完全除去杂质干扰 ,色谱峰分离度
好 ,具有易操作、重复性好、回收率高等优点 ,最终确
定了上述的供试品制备方法。
参考文献 :
[ 1 ] 　王建华 ,谢丽华 ,刘洪宇 ,等. 玄参不同加工品中哈巴俄苷与
肉桂酸的 HPLC 含量测定 [J ] . 中国药学杂志 ,2000 ,35 (6) :
3752378.
·07· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月