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第 1 6卷 第 5 期
2014 年 5 月
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 16 No. 5
May，2014
复方黑参颗粒由玄参、麦冬、天冬、射干和北
豆根 5 味中药组成，具有清热解毒、养阴润肺、利
咽消肿之功，在我院临床应用多年，安全可靠，疗
效显著。玄参作为处方中的君药，常见于治疗咽
喉疾病的复方中药制剂中，如建民咽喉片、玄麦
甘桔颗粒等 [1]，地方中药书籍和药物志中也记载
玄参对咽喉肿痛具有良好效果 [2]，其有效成分肉
桂酸和哈巴俄苷常被用作玄参及其复方制剂的
含量测定指标 [3-5]。为了更好的控制复方黑参颗
粒的产品质量，保证临床疗效，本文采用高效液
相色谱法建立复方黑参颗粒中肉桂酸和哈巴俄
苷的含量测定方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Waters 2996 高效液相色谱仪，LIBRORAEL-160
分析天平，DK-98-1 型电热恒温水浴锅。
1.2 试药
肉桂酸对照品（供含量测定用，购自中国药品
生物制品检定所，批号：110805-200508），哈巴俄苷
对照品（供含量测定用，购自中国药品生物制品检
定所，批号：111730-200605），甲醇（色谱纯，天津市
四友精细化学品有限公司，批号：20101213），甲酸
（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：
20101213）。复方黑参颗粒（沈阳军区总医院制剂室，
批号：20120705、20120929、20121023）
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱Dikma Diamonsil-C18（4.6 mm×250 mm，
5 μm），流动相：甲醇 -0.5% 甲酸水溶液（56∶44）
等度洗脱，流速 1.0 mL·min-1，柱温 25 ℃，检测器波
长 278 nm，进样量 20 μL。
2.2 对照品溶液的制备
分别精密称取肉桂酸2.04 mg，哈巴俄苷6.08 mg
对照品于 50 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，
既得混合对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取复方黑参颗粒，研细，取约 5 g，精密称定，精
密加入 100% 甲醇 25 mL，称定重量，加热回流 1 h，
放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，即
得。
2.4 阴性对照品溶液的制备
按照处方工艺，制备不含玄参的阴性样品颗
HPLC 法测定复方黑参颗粒中肉桂酸与哈巴俄苷含量
姚东，何静，于凤斌，安晔
（中国人民解放军沈阳军区总医院，辽宁 沈阳 110000）
摘 要：目的：建立复方黑参颗粒中肉桂酸和哈巴俄苷的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱
柱Dikma Diamonsil-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：甲醇-0.5%甲酸水溶液（56∶44）等度洗脱，流速
1.0 mL·min-1，柱温25 ℃，检测器波长278 nm。结果：肉桂酸和哈巴俄苷进样量分别在1.53~40.80、4.56~121.60
μg·mL-1时，线性关系良好，线性范围依次为Y=190177X-39502 （r=0.9997）；Y=55216X-21379（r=0.9996）。平
均加样回收率分别为99.6%（RSD1.0%），100.8%（RSD1.2%）。结论：样品处理方法简便、结果准确、重复性良好，该
方法可用于复方黑参颗粒的质量控制。
关键词：高效液相色谱法；复方黑参颗粒；肉桂酸；哈巴俄苷
中图分类号：R927.2 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2014) 05- 0055- 02
收稿日期：2013-10-25
基金项目：军队医疗机构制剂标准提高科研专项课题重点项目（13ZJZ02）
作者简介：姚东（1986-），女，辽宁锦州人，药师，硕士，研究方向：药物分析。
通讯作者：安晔（1967-），女，辽宁沈阳人，副主任药师，硕士研究生导师，硕士，研究方向：药物制剂。
Determination of Cinnamic Acid and Harpagoside in Fufang Heishei Granules by HPLC
YAO Dong，HE Jing，YU Fengbin，AN Ye
（General Hospital of Shenyang Military Region，Shenyang 110000，Liaoning，China）
Abstract：Objective：To establish an HPLC method for the determination of Cinnamic acid and
Harpagoside in Fufang Heishei Granules. Method：The Dikma Diamonsil-C18 column was used with a mobile
phase of methanol-0.5% ice acetic（56:44）. The flow rate was 1 mL·min-1. The column temperature
was 25 ℃ . The detection wavelength was at 278 nm. Result：The calibration curves of Cinnamic acid and
Harpagoside were linear in the ranges of 1.53~40.80，4.56~121.60 μg·mL-1 respectively. And the each
average recoveries of the method were 99.6%（RSD1.03%），100.8%（RSD1.25%）. Conclusion：The
method is simple，accurate and repeatable. It can be used for quality control of Fufang Heishei Granules.
Key words：HPLC；Fufang Heishei Granules；Cinnamic acid；Harpagoside
DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2014.05.018
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辽 宁 中 医 药 大 学 学 报 1 6 卷
粒，再按 2.3 项项下方法制备阴性样品溶液，在上述
色谱条件下进行测定。结果表明，阴性无干扰，对照
品、样品及阴性样品色谱图见图 1。
t（min）
1. 肉桂酸，2. 哈巴俄苷
图 1 对照品（A）、复方黑参颗粒（B）、阴性样品（C）色谱图
2.5 线性关系考察
取混合对照品溶液进行稀释，得肉桂酸浓度
为 1.53、3.06、6.12、10.20、20.40、40.80 μg·mL-1；
哈 巴 俄 苷 浓 度 为 4.56、9.12、18.24、30.40、60.80、
121.60 μg·mL-1。 按 2.1 项 下 色 谱 条 件 测 定，
以 峰 面 积 Y 为 纵 坐 标，浓 度 X（μg·mL-1）为 横
坐标，进行回归分析，得肉桂酸和哈巴俄苷的回
归 方 程 依 次 为：Y=190177X-39502 （r=0.9997）；
Y=55216X-21379 （r=0.9996）。 线 性 范 围 依 次 为
1.53~40.80、4.56~121.60 μg·mL-1。
2.6 精密度考察
取供试品溶液（批号：20120705），在 2.1 项色谱
条件下连续进样 6 次，分别计算峰面积。肉桂酸和
哈巴俄苷的 RSD（n=6）分别为 2.81% 和 2.52%，表
明精密度良好。
2.7 重复性考察
取同一供试样品（批号：20120705），平行制备 6
份供试品溶液，在 2.1 项色谱条件下对 2 种成分进行
测定，分别计算峰面积。肉桂酸和哈巴俄苷的 RSD
（n=6）分别为 1.9% 和 2.4%。
2.8 稳定性考察
取供试品溶液（批号：20120705），室温下放置，
在 2.1 项色谱条件下分别于 0、2、4、6、12、24 h 分别进
行测定，计算峰面积。肉桂酸和哈巴俄苷的 RSD 分
别为 2.5% 和 2.4%。
2.9 回收率考察
精密称取已知含量的复方黑参颗粒（批号
20120705）约 2.5 g，共 6 份，分别精密加入等同于
样品含量的肉桂酸和哈巴俄苷对照品适量，按 2.3
项下方法制成供回收率用供试品溶液，在 2.1 项
色谱条件下进行检测，计算各成分加样回收率，
见表 1。
表 1 加样回收率结果（n=6）
成分
样品中含量
（mg）
加入量
（mg）
测定量
（mg）
回收率
（%）
平均回收率
（%）
RSD
（%）
肉桂酸
0.151 0.153 0.305 100.6
99.6 1.0
0.151 0.153 0.304 100.0
0.151 0.153 0.306 100.7
0.151 0.153 0.299 98.3
0.151 0.153 0.230 98.5
0.151 0.153 0.303 99.6
哈巴
俄苷
0.229 0.342 0.574 100.4
100.8 1.2
0.229 0.342 0.566 99.1
0.229 0.342 0.579 101.5
0.229 0.342 0.585 102.5
0.230 0.342 0.571 99.8
0.230 0.342 0.582 101.7
2.10 样品的含量分析
精密称取 3 批次复方黑参颗粒各 3 份，按 2.3 项
下方法制备供试品溶液，在 2.1 项色谱条件下进行分
析，根据标准曲线回归方程计算颗粒中 2 种成分的
含量，结果见表 2。
表 2 复方黑参颗粒中 2 种成分的含量（mg·g-1）
批号 肉桂酸 哈巴俄苷
20120705 60.35 91.62
20120929 61.49 91.42
20121023 59.95 90.79
3 讨 论
3.1 样品制备方法的筛选
本实验采用单因素考察法，分别对提取方式
（超声提取、回流提取）、提取溶媒（甲醇、50% 甲醇、
水）和提取时间（30 min、1 h、1.5 h）进行考察，实验
结果表明甲醇回流提取 1 h，肉桂酸和哈巴俄苷色谱
峰面积最大且干扰最少。
3.2 流动相系统的考察
本实验分别考察了甲醇 - 水和乙腈 - 水系统，
结果发现，肉桂酸和哈巴俄苷在甲醇 - 水系统下可
得到较好分离，同时，由于肉桂酸成一定酸性，加入
适量甲酸可以有效改善峰型，因此本实验最终确定
采用甲醇 -0.5% 甲酸水（56∶44）系统进行色谱分
离，肉桂酸和哈巴俄苷达到基线分离，峰形对称，保
留时间适中。
3.3 检测波长的考察
本实验中通过 PAD 检测器于 190~400 nm 进
行紫外光谱扫描，结果显示，肉桂酸和哈巴俄苷在
278 nm 处有较好吸收，且基线平稳，色谱峰无干扰，
因此本实验选择 278 nm 为检测波长。◆
参考文献
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科技出版社，2010：662.
[ 2 ] 钮正睿，王如峰，荆宇，等 . 玄麦配方颗粒的制备工艺和含量测
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[ 3 ] 张洪霞，宋金玉，赵荣淑，等 .RP-HPLC 法同时测定玄参中肉
桂酸、哈巴酯苷的含量 [ J ] . 沈阳药科大学学报，2006，23 ( 8 )：
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