全 文 ：解于 N , N2二甲氧基甲酰胺中 ,再加入琥珀酸酐及
二甲氨基吡啶反应 ,经过一系列处理、纯化等过程 ,
才能得到 72琥珀酰基紫杉醇 ,操作相当繁琐而费
时。在本实验中 ,选用了 72木糖基紫杉醇 ,这是一
种天然存在的紫杉醇衍生物 ,市场有商品供应 ,可直
接利用高碘酸氧化法 ,将其与载体蛋白联接。此方
法较前述文献方法省略了衍生物合成步骤 ,更加简
便易行 ,且具有较高的合成效率 (在每个 BSA 分子
上可成功联接约 4～5 个 72木糖基 TAX 分子) 。
制备单克隆抗体使用的实验动物可为家兔或小
鼠。日本九州大学正山和田中实验室获得了近 40
种针对生药中生理活性成分的单克隆抗体 ,建立了
酶联免疫吸附反应检测法 ,几乎全部是使用 BALB/
c 小鼠作为免疫对象[7 ,10 ] 。本实验使用两只小鼠 ,均
产生了明显的免疫反应 ;但由于动物个体差异 ,抗血
清效价也有所不同。测得效价较高的小鼠抗血清效
价为 1 ∶3 200 ,竞争 EL ISA 结果显示抗血清能够特
异性识别游离 TAX ,证明了合成的人工抗原 TA X2
BSA 有较好的免疫原性 ,可为 TAX 的单克隆抗体
的制备及后续应用提供技术基础 (抗体的交叉反应
性一般于单克隆抗体制备过程中检测) 。
本实验使用 MALDI2TO F2MS 法测定了 TA X2
BSA 中结合的半抗原 TA X 分子数目。与传统的鉴
定方法 (紫外光谱扫描法、标记抗原示踪法和凝胶电
泳等)相比 ,该技术具有高灵敏度 ,供试品用量少 ,结
果直观、准确[ 11 ] ,是比较理想的抗原复合物中半抗
原数目的测定方法。
参考文献 :
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三种海龙中甾醇类成分的 GC2MS分析
陶 　莉1 ,王有为2 3
(11 浙江海洋学院食品与药学学院、医学院 ,浙江 舟山 　316004 ; 21 武汉大学药学院 ,湖北 武汉 　430072)
　　海龙为我国常用名贵中药材 ,其性温 ,味甘 ,归
肝肾经 ,具温肾壮阳、散结消肿之功效。用于阳痿遗
精 ,瘰疬痰核 ,跌扑损伤等症[ 1 ] 。《本草纲目拾遗》记
载 ,海龙功同海马而力倍之[2 ] 。《中国药典》历版均
收载海龙 ,并确定来源为海龙科动物刁海龙 S o2
lenognat hus hardw icki i ( Gray ) 、拟 海 龙 S y n2
gnat hoi des bi aculeat us ( Bloch ) 和尖海龙 S y n2
gnat hus acus Linnaeus 的干燥体。现代研究表明 ,
海龙含有大量甾醇类[ 3 ] 、脂肪酸[ 4 ] 、蛋白质[ 5 ] 等成
分 ,具有抗肿瘤[6 ] 、激素样[7 ]等药理作用。本实验通
过对 3 种海龙中甾醇类成分的 GC2MS 测定 ,比较
分析了 3 种海龙的甾醇类成分。
1 　仪器和材料
111 　实验材料 : 3 种海龙均购自河北安国药材市
场 ,经浙江海洋学院赵盛龙教授分别鉴定为刁海龙
S olenognat hus hardw icki i ( Gray) 、拟海龙 S y n2
gnat hoi des bi aculeat us ( Bloch ) 、尖 海 龙 S y n2
gnat hus acus Linnaeus。药材晾晒干燥后粉碎 ,过
·8401· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 7 期 2009 年 7 月
3 收稿日期 :2008212202　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :浙江省卫生厅中医药青年基金项目研究计划 (2005 Y011)
作者简介 :陶　莉 (1980 —) ,女 ,湖北襄樊人 ,讲师 ,研究方向为天然药物化学。
30 目筛 ,备用。
112 　试剂和仪器 :石油醚、乙醚、甲醇、氢氧化钾、无
水硫酸钠、氯化钠均为分析纯 ; Waters GCT Premi2
er (美国沃特斯公司) 。
2 　方法
211 　样品处理方法[8 ] :取 3 种海龙粗粉各 5 g ,置索
氏提取器中 ,加石油醚冷浸过夜 ,回流提取 6 h ,回
收溶剂得石油醚提取物。提取物中加 10 % KO H
甲醇溶液 ,剧烈振摇 2 min ,置 60 ℃水浴中皂化 ,每
隔 15 min 振摇一次 ,待溶液澄清后再反应 1 h。皂
化物加水稀释 ,乙醚萃取 3 次 ,饱和 NaCl 溶液洗
涤。合并乙醚萃取液 ,无水 Na2 SO4 脱水干燥 ,回收
溶剂 ,即得非皂化物。非皂化物用乙醚溶解 ,定容至
25 mL ,待测。
212 　分析条件
21211 　色谱条件 :毛细管色谱柱 DB25MS (30 m ×
250 mm ,0125μm) ;载气 :氦气 ,恒流 ,流量 : 1 mL/
min ;进样口温度 :290 ℃;检测器温度 :280 ℃;分流
比 :1/ 150 ;柱温 280 ℃;进样量 :1μL 。
21212 　质谱条件 : EI 源 ,电子能量 70 eV ,源温 230
℃;谱库 :N IST2005 标准质谱图库。
3 　结果
经 GC2MS 分析后 ,3 种海龙中检测的甾体化合
物及其相对质量分数见表 1。
表 1 　3 种海龙中甾醇类成分分析
Table 1 　Analysis of sterols in extracts
from three kinds of sea dragons
样品 化合物 分子式
相对保留
时间/ min
质量分数
/ %
拟海龙 胆甾醇 C27 H46O 101 01 981 25
胆甾242烯232酮 C27 H44O 121 68 11 75
刁海龙 胆甾醇 C27 H46O 101 01 981 73
胆甾242烯232酮 C27 H44O 121 71 11 27
尖海龙 胆甾烷醇 C27 H48O 91 44 21 44
表胆甾醇 C27 H46O 91 66 11 73
胆甾醇 C27 H46O 101 01 901 42
胆甾242烯232酮 C27 H44O 121 71 51 41
　　可以看出 ,拟海龙、刁海龙和尖海龙中均含有胆
甾醇和胆甾242烯232酮 ,拟海龙和刁海龙成分和量极
为相似。胆甾醇在 3 种海龙中量都很高 ,质量分数
均超过 90 % ,胆甾242烯232酮作为胆固醇的主要氧
化产物 ,量较少。尖海龙中除含有上述两种甾醇成
分外 ,还含有其还原产物胆甾烷醇和异构体表胆甾
醇 ,但量也很少。
4 　讨论
在人体或哺乳动物体内 ,胆固醇是雄性激素、雌
性激素、黄体激素、副肾皮质激素等类固醇激素的转
化前体。同时在鱼体内 ,也证明了胆固醇会合成类
固醇激素 ,并大量分布于多数器官尤其是生殖器官
中。又由于海龙明显的激素样作用 ,据此可以推测 ,
在所检 3 种海龙中也可能含有此类激素成分 ,进而
能对人体产生激素样作用。但由于量过低 ,导致未
被检测到。事实上 ,张朝辉等[3 ] 的研究也证明了这
一点。
此外 ,在对 3 种海龙的 GC2MS 分析中 ,还发现
3 种海龙中存在微量的粪甾烷 (cop ro stane) 、粪甾醇
(coprostanol) 、粪甾烷酮 (coprostanone) 等成分 ,根
据胆甾醇在鱼体内的代谢特点 ,认为这些成分为海
龙肠内细菌还原胆甾醇的产物。
参考文献 :
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