全 文 ：0. 5 mm 的高 ,但从脱毒的角度考虑 ,还是以 0. 5
mm 长的茎尖为宜 ,本实验结果与郭运玲等[14 ] 在苎
麻茎尖的实验结果一致。
3. 2 　植物生长调节剂对茎尖分化成苗的影响 :培养
基中的植物生长调节剂的种类和浓度是影响茎尖分
生组织分化不定芽和不定根的主要因素[15 ] 。在本
试验中 ,以 MS 为基本培养基 ,通过 62BA、KT 和
NAA 浓度及配比试验 ,结果表明 ,对于茎尖分化成
不定芽 , KT 与 NAA 组合的效果优于 62BA 与
NAA 组合的效果 ;而对于不定芽生根 ,NAA 的效
果优于 IBA ,这与杨贤松等[15 ] 在紫色甘薯茎尖培养
中的实验结果不一致 ,可能是植物种类不同的缘故。
3. 3 　不同脱毒检测方法的评价 :实验[14 ,15 ] 表明 ,指
示植物法和症状学法是病毒鉴定的传统方法 ,操作
简便易行 ,成本低 ,无须贵重的设备和试剂 ,而且由
于其结果观察的直观性和能准确地反映病毒的生物
学特性 ,目前仍有广泛应用。但指示植物法和症状
学法费工费时 ,检测周期长 ,重复性差。因此 ,这两
种方法可以作为植物病毒病诊断的辅助方法。而
R T2PCR 病毒检测技术具有简单、快速、灵敏、特异
性强、重复性好等优点 ,应用微量感病组织汁液即可
灵敏地检测到病毒的存在。本研究首次将该方法成
功地应用到黄独病毒的检测中 ,并对大田带毒株系
以及脱毒苗进行了检测 ,从而为黄独脱毒苗的推广
和开发奠定资源和技术基础。
参考文献 :
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聚乙二醇对望江南种子萌发的影响
何家庆1 ,王 　兴1 ,2 ,姚晴晴1 3
(11 安徽大学生命科学学院 ,安徽省资源植物研究中心 ,安徽 合肥 　230039 ;
21 中国农业大学资源与环境学院 ,北京 　100193)
摘 　要 :目的 　以 PEG 6000 溶液处理望江南种子 ,研究 PEG对望江南种子萌发的影响。方法 　分别用 5 %和
10 % P GE 6000 处理望江南种子 ,对种子发芽率、超氧化物歧化酶 (SOD) 、过氧化物酶 ( POD) 活性和脂质过氧化产
物丙二醛 (MDA)的量进行测定。结果 　与同期对照相比 ,5 % PEG 6000 浸种 5 h ,提高 SOD 活性和 POD 活性 ,降
低脂质过氧化产物 MDA 的量 ,减少自由基积累 ,减轻浸种吸胀对膜系统的损伤。结论 　5 % PEG浸种 5 h 提高望
江南种子的发芽率。
关键词 :聚乙二醇 ;望江南 ;种子 ;萌发
中图分类号 :R28212 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0921466204
·6641· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 9 期 2009 年 9 月
3 收稿日期 :2008212212　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (30040027) ;安徽省星火计划资助项目 (04053051)
作者简介 :何家庆 (1949 —) ,男 ,安徽安庆人 ,教授 ,长期从事资源植物及植物分类学的教学、科研工作 ,已发表论文 40 余篇 ,出版专著 6
部 ,发明专利 4 项。　Tel : (0551) 5106222 　E2mail :hejq1949 @126. com
Effects of polyethylene glycol on seed germination of Cassia occidentalis
H E Jia2qing1 , WAN G Xing1 ,2 , YAO Qing2qing1
(11 Research Center of Source Plant in Anhui Province , School of Life Science , Anhui University , Hefei 230039 , China ;
21 College of Resources and Environmental Sciences , China Agriculture University , Beijing 100193 , China)
Abstract : Objective 　To simulate t he solution drought st ress conditions wit h polyet hylene glycol
( PEG) 6000 for st udy on the seed germination of Cassi a occi dent al is1 Methods 　The seed of C1 occi den2
t al is was t reated wit h 5 % and 10 % PEG 6000 , respectively , t hen the germination rate , t he activity of su2
peroxide dismutase (SOD) , peroxidase ( POD) , and content of malondialdehyde (MDA) were measured1
Results 　Compared wit h t he same period of the cont rol , soaking wit h 5 % PEG 6000 for 5 h could increase
t he activity of SOD and POD , decrease t he content of MDA1 PEG Pret reat ment could decrease f ree radical
accumulation and make cell membrane system less damaged in t he course of absorbing water in seed1 Con2
clusion 　Soaking wit h 5 % PEG 6000 for 5 h could increase the seed germination rate of C1 occi dent al is1
Key words : polyet hylene glycol ( PEG) ; Cassi a occi dent al is Linn1 ; seed ; germination
　　望江南 Cassi a occi dent al is Linn1 ,别名金豆
子、羊角豆等 ,是豆科 (Leguminosae) 的一种药用植
物 ,性味苦、寒 ,中医学上常用来肃肺、清肝、和胃、消
肿解毒等。其叶、根、种子中含有挥发油 ,对多种细
菌有抑制作用 ,其水提取物对某些真菌有抑制作用。
《福建民间草药》记载 ,望江南还具有杀虫解毒的功
效 ,常用来治疗虫、蛇咬伤[1 ] 。现代药理研究表明 ,
望江南种子含有大黄素、柯桠素及毒蛋白等 ,对肿瘤
细胞有直接破坏作用 ,能轻度降低血压并有致泻解
热作用[2 ] 。聚乙二醇 ( PEG) 作为一种渗透调节剂 ,
能促进种子萌发 ,缩短发芽时间 ,使发芽出苗齐一 ,
并在种子萌发阶段能起到抗寒作用[ 3 ,4 ] 。目前 PEG
已在牧草、栝楼等种子萌发较为困难的植物中得到
了应用[5 ,6 ] ,但尚未见 PEG 对望江南种子萌发影响
的研究。为此 ,本实验采用 PEG 6000 对望江南种
子进行浸泡处理 ,观察其发芽情况 ,检测萌发过程中
过氧化物酶 ( POD) 、超氧化物歧化酶 ( SOD) 和丙二
醛 (MDA)量的动态变化 ,解析 PEG 对种子萌发的
作用机制 ,旨在探索望江南种子萌发技术 ,以期解决
种子萌发齐一 ,提高发芽率 ,促进望江南产业发展。
1 　材料与方法
1. 1 　材料 :望江南种子采自安徽界首市栽培区 ,并
种植于安徽大学生命科学学院试验园 ,采收当年生
成熟荚果 ,自然晾干。
1. 2 　PEG处理 :望江南种子先用 0. 1 % HgCl2 消
毒 10 min ,再用 70 %酒精冲洗 3 次 ,用无菌水清洗
干净后分装。再用 5 %和 10 % PEG 6000 浸种 ,取
出后用蒸馏水漂洗 4～5 次 ,整齐排列在培养皿中 ,
置于 25 ℃恒温培养箱中避光培养萌发 ;以蒸馏水浸
种培养作为对照 (C K) 。
1. 3 　发芽率测定 :按照公式发芽率 = 发芽的种子
数/ 供试种子总数 ×100 %计算发芽率。
1. 4 　POD 测定 :参照张立军的愈创木酚法测定
POD 活性[6 ] ,以 1 min 内 A 470变化 0. 01 为 1 个酶活
性单位 (U) 。
1. 5 　SOD 测定 :采用氯化硝基四氮唑蓝 (NB T) 法
测定[7 ] 。
1. 6 　MDA 量测定 :参照张立军的硫代巴比妥酸
( TBA)法测定 MDA 活性[6 ] 。
2 　结果与分析
2. 1 　PEG 6000 处理对种子发芽率的影响 :取消毒过
的望江南种子 50 粒以蒸馏水分别浸种 1、3、5、7、9 h
后整齐排列在培养皿中 ,置于 25 ℃恒温培养箱中培
养 ,逐日观察发芽情况。结果以浸种 5 h 的望江南种
子发芽整齐。取消毒过的望江南种子分别用 5 %和
10 % PEG 6000 及蒸馏水浸种 5 h ,以上述同样方法
培养 ,试验结果表明浓度为 5 % PEG 6000 处理种子
发芽率高 ,为 67. 58 %(图 1) 。其发芽率明显高于同
期对照 ,达到显著水平 ( P < 0. 05) ,由此确立 PEG
6000 处理望江南种子时间 5 h ,处理浓度 5 %。
图 1 　PEG处理对望江南种子发芽率的影响
Fig. 1 　Effect of EPG treatment on germination
rate of C1 occidentalis seeds
2. 2 　POD 活性的变化 :图 2 所示 ,种子萌发的 0 d ,
·7641·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 9 期 2009 年 9 月
由于种子还在休眠期 ,种子中积累的活性氧较多 ,
POD 的活性也较高。随着种子的逐渐萌发 ,植物细
胞内各种生理生化反应逐渐活跃起来 ,活性氧量下
降。在种子萌发的 0～1 d , POD 的活性呈下降趋
势 ,此后 , POD 的活性逐渐升高 ,第 3 天时到达峰
值 ,然后降低。与对照相比 ,经 5 % PEG 6000 处理
后的望江南种子 ,其 POD 活性高于同期对照 ,在
1～4 d达到显著水平 ( P < 0. 05) ,由此可见 5 %
PEG 6000 处理可提高 POD 活性。
图 2 　望江南种子萌发过程中 POD 活性的变化
Fig. 2 　Activity of POD in C1 occidentalis
seeds during germination
2. 3 　SOD 活性的变化 :图 3 所示 ,测定初始 5 %
PEG 6000 处理组与对照组 SOD 活性几乎在同一水
平 ,以后随萌发时间的延长 ,SOD 活性逐渐升高 ,第
3 天达到最高水平 ,与对照相比较 ,处理组 SOD 活
性在 1～4 d 显著 ( P < 0 . 05) 高于对照。
图 3 　望江南种子萌发过程中 SOD 活性的变化
Fig. 3 　Activity of SOD in C1 occidentalis
seeds during germination
2. 4 　MDA 量的变化 :植物细胞膜系统的主要组成
成分是脂质和蛋白质。脂质氧化产生的自由基可使
膜质过氧化而造成细胞膜损伤。MDA 是脂质过氧
化反应的产物 ,与自由基活性氧的量关系密切 ,其形
成的速率在一定程度上反应机体内清除自由基能力
的大小和活性氧代谢的水平[4 ] 。结果表明 : 0 d 时
种子中 MDA 的量比发芽的第 1 天高 ,萌发的第 1
天 ,细胞内的 MDA 的量比第 0 天下降很大 ,随着种
子的逐渐发芽 ,自由氧量的增加 ,MDA 的量是逐渐
升高的。用 PEG处理望江南种子 ,可降低种子同期
脂质过氧化反应 (图 4) 。
图 4 　望江南种子萌发过程中 MDA量的变化
Fig. 4 　Content change of MDA in C1 occidentalis
seeds during germination
3 　讨论
研究发现 ,在种子萌发过程中氧自由基会对质
膜、酶系统、蛋白质合成造成一定的伤害作用 ,使种
子发芽率降低[8 ] 。种子引发是在控制条件下使种子
缓慢吸水 ,为萌发提前进行生理准备的播前种子处
理手段 ,能有效提高种子活力 ,加速种子萌发 ,提高
种子萌发率 ,增强种子抗逆、抗老化[9 ]能力。本实验
中 ,随着 PEG浓度的增加 ,望江南的发芽率下降 ,这
与梁国玲等[10 ]对羊茅的研究结果基本一致。可见 ,
一定浓度的 PEG胁迫能刺激望江南种子活性的提
高 ,当超过植物种子对渗透胁迫的承受限度时 ,种子
就不能萌发。目前 ,国内外对于种子引发的研究报
道多集中于大田作物[11 ] 、经济作物[12 ] 等方面 ,在药
用植物[ 13 ]方面的研究报道较少。已知对种子做渗
透处理 ,有利于提高种子的活力。
近年来 ,随着自由基生物学的发展 ,逐步形成共
识 :抗氧化酶体系是植物体内重要的调节保护机制。
植物 SOD 是一种典型的诱导酶 ,通过改变植物外部
环境条件可影响 SOD 活性水平。在某种意义上 ,
PEG处理对种子萌发来说 ,起到一种水分胁迫的作
用 ,如果这种胁迫是在植物体耐受范围之内 ,便会激
活体内包括抗氧化酶在内的一系列保护机制的启
动[5 ] ,从而引起机体内抗氧化活动的增强 ,加速活性
氧自由基的清除 ,减低对种子萌发过程中的不利因
素 ,提高种子活力水平。PEG是较为理想的渗透调
节剂 ,PEG 处理的实质是限制水分进入种子的速
率 ,可能减少了种子吸胀过程中膜系统的损伤 ,也有
利于膜系统损伤的修复。PEG 的浓度对种子的萌
发亦有影响。PEG 的浓度过高对种子的萌发有抑
制作用。国外学者多采用低渗透势、长时间对种子
进行处理 ,而国内研究人员则多倾向于高渗透势、短
期的处理。本研究表明 : 5 % PEG 6000 处理 5 h
后 ,望江南萌发过程中 SOD 等抗氧化物酶活性的升
高较对照更明显 , 在萌发的第 3 天是对照的
·8641· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 9 期 2009 年 9 月
129. 8 % ,MDA 的量也仅为对照的 83. 2 % ,幼苗的
发芽率比对照高出 2. 7 %。因此推断 , PEG 处理抑
制望江南种子萌发过程中活性氧引起的过氧化反
应 ,有利于种子的萌发 ,也从减少种子萌发中自由基
伤害的角度映证了 Dhindsa[ 8 ]的研究。
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枳实的高效液相色谱指纹图谱研究
黎 　阳1 ,刘素香2 ,张铁军2 3 ,陈常青2 3
(11 天津中医药大学 ,天津 　300193 ; 21 天津药物研究院 ,天津 　300193)
摘 　要 :目的 　建立枳实药材 HPL C 指纹图谱分析方法。方法 　采用 Diamonsil C18柱 (250 mm ×4. 6 mm , 5μm) ,
以乙腈20. 01 %磷酸二氢钠水溶液梯度洗脱 ,测定了 36 批枳实药材的指纹图谱。应用相似度分析、聚类分析和主成
分分析 ,对枳实药材进行分类 ,建立枳实药材指纹图谱的共有模式 ,并应用主成分分析对共有模式进行研究。结果
在选定的色谱条件下 ,得到两类枳实药材 HPLC 指纹图谱 ;根据相似度分析、聚类分析和主成分分析的结果 ,将 36
批药材分为 2 类 ,分别建立指纹图谱。结论 　应用本方法评价枳实药材的质量是可行的。
关键词 :枳实 ;高效液相色谱 ;指纹图谱
中图分类号 :R28217 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0921469206
HPLC Fingerprint of F ructus Aura ntii Immaturus
L I Yang1 , L IU Su2xiang2 , ZHAN G Tie2jun2 , CH EN Chang2qing2
(11 Tianjin University of Traditional Chinese Medicine , Tianjin 300193 , China ; 21 Tianjin Institute
of Pharmaceutical Research , Tianjin 300193 , China)
Abstract : Objective 　To establish HPL C fingerp rint for Fruct us A uranti i I m m at urus1 Methods 　The
H PL C met hod was used wit h Diamonsil2C18 column (250 mm ×4. 6 mm , 5μm) , and a mixt ure liquid of
acetonit rile20. 01 % Na H2 PO4 as mobile p hase in a gradient elution1 The HPL C fingerp rint for 36 batches
of Fruct us A uranti i I m m at urus was st udied on t heir similarity , cluster , and principal component s analy2
ses1 The common HPL C fingerp rint of Fruct us A uranti i I m m at urus was established , which was st udied
with p rincipal component s analyses1 Results 　Under t he selected spect rum condition , t he 36 batches of
Fruct us A uranti i I m m at urus were classified into two group s based on t he result of similarity , cluster , and
principal component s analyses1 Conclusion 　This met hod is reasonable and reliable to t he quality cont rol of
Fruct us A uranti i I m m at urus1
Key words : Fruct us A uranti i I m m at urus ; HPL C ; fingerp rint
·9641·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 9 期 2009 年 9 月
3 收稿日期 :2009201205　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :“十一五”国家科技支撑计划项目 (2006BAI06A01202) ;2007 天津市科技创新专项项目3 通讯作者　张铁军　Tel : (022) 23006848 　E2mail :tiejunzh2000 @yahoo. com. cn