全 文 ：陕西安康葛根药材的HPLC指纹图谱研究
宋丽明1, 2 ,王文燕1* ,张智超2X
( 1. 天津药物研究院 分析测试中心,天津　300193; 2. 南开大学 元素有机化学国家重点实验室, 天津　300171)
摘　要: 目的　采用高效液相色谱法建立陕西安康产葛根药材的HPLC 指纹图谱。方法　选用 I ner tisil C18色谱柱
( 250 mm×4. 6 mm, 5 Lm) , 甲醇-乙腈-0. 25%醋酸水溶液梯度洗脱,体积流量1. 0 mL / min,检测波长为250 nm。结
果　10批药材中各共有峰相对保留时间和峰面积的RSD 均小于10% ,相似度均符合规定。结论　此方法可用于控
制葛根药材和注射用冻干剂的质量。
关键词: 葛根药材; HPLC 指纹图谱; 质量控制
中图分类号: R282. 7　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253- 2670( 2008) 03- 0435- 03
HPLC fingerprint of Radix Puerariae from Ankang, Shaanxi Province
SONG Li-m ing
1, 2
, WANG Wen-yan
1
, ZHANG Zhi-chao
2
( 1. Analy zing and Testing Centr e, T ianjin Institute of Pharmaceutical Resear ch, T ianjin 300193, China; 2. St ate Key
Labo rat or y o f Elemento-or g anic Chemist ry , Nankai Univ ersit y, T ianjin 300171, China)
Abstract: Objective　 To establish HPLC finger print of Radix Puerariae fr om Ankang, Shaanxi
Pro vince. Methods　Inert isil C18column ( 250 mm×4. 6 mm, 5 Lm) w as used, w ith methanol-acetonit rile-
0. 25% acet ic acid solut ion as mobile phase in a gradient elution. Flow r ate w as 1. 0 mL/ min. The w ave-
leng th was 250 nm . Results　For the relat ive retent ion t ime and r elat ive area of common peaks, the RSD
of ten batches of cr ude drug samples w ere below 10% . T he sim ilarities accor ded w ith the regulation. Con-
clusion　The analyt ical method can be used fo r the quality cont rol of Radix Puerariae and of it s sterilized
powder for inject ion.
Key words : Radix Puerar iae ; HPLC fingerpr int ; quality cont rol
　　葛根为常用中药, 《神农本草经》中列为中品,为
豆科植物野葛Puerar ia lobata( Willd. ) Ohwi 或粉
葛(甘葛藤) P. thomsonii Benth. 的干燥根。葛根具
有解肌退热, 生津,透疹,升阳止泻之功效。用于外感
发热头痛,项强,口渴, 消渴, 麻疹不透,热痢, 泄泻;
高血压颈项强痛等 [ 1]。葛根素注射剂具有扩张外周
血管,降低血黏稠度,抑制血小板聚集,阻断B受体,
促进冠状动脉侧支循环的形成和开放,因而对缺血
性心肌或脑组织有保护和修复作用。目前广泛用于
缺血性心脑血管病、突发性耳聋等疾病的治疗。
陕西安康为葛根药材的主要产区。本实验选用
陕西省安康产的野葛, 建立原药材的高效液相指纹
图谱,对葛根原药材及制剂进行质量控制。并使用国
家药典委员会指定的《中药色谱指纹图谱相似度评
价系统》软件,将10批药材的谱峰自动匹配,进行谱
峰差异性评价和整体相似度评价, 使色谱图对比结
果更直观,相似度计算结果更准确。
1　仪器与试剂
HP1100 高效液相色谱仪, Chemstat ions 色谱
工作站。甲醇、乙腈为色谱纯(天津康科德科技有限
公司) ,其他试剂为分析纯。葛根素对照品购于中国
药品生物制品检定所(批号110752-200511)。用于指
纹图谱研究的 10批野葛药材采自陕西安康市葛根
药材种植基地。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱 Inert isil C18( 250 mm×4. 6
mm, 5 Lm) (迪马公司) ;流动相为A(甲醇-乙腈40∶
60) -B( 0. 25%醋酸水溶液) , 梯度洗脱;体积流量为
1. 0 mL/ min;检测波长为250 nm;进样量为20 LL。
梯度洗脱程序为: 0～18 min 为19%A ,至40 min 换
为 45% A, 至 50 min 换为 80%A, 至 60 m in 换为
100% A。
·436· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第39卷第 3期 2008 年3 月
X 收稿日期: 2007-06-10基金项目:国家科技支撑计划项目( 2006BAI06A01-02)作者简介:宋丽明( 1977—) ,女,大学本科,天津人,助理研究员,主要从事药品研究与开发。
T el: ( 022) 23006881　E-mail: s onnysong @hotm ail . com
* 通讯作者　王文燕　Tel: ( 020) 23006878张智超　Tel: ( 022) 23504741　E-mail: zczhang@ nankai. edu . cn
2. 2　对照品溶液的制备:精密称取葛根素对照品适
量,用流动相溶解制成8 Lg / mL 的对照品溶液。
2. 3　供试品溶液的制备:取葛根药材粗粉5 g, 置圆
底烧瓶中,精密加入 80%乙醇 100 mL,加热回流提
取30 min,共提取3次。趁热滤过,合并滤液,定容至
500 mL 量瓶中, 作为药材提取液。取该溶液1 mL 用
流动相稀释至25 mL。
2. 4　测定方法: 取供试品溶液、对照品溶液各 20
LL,注入高效液相色谱仪,记录色谱图。
2. 5　方法学考察
2. 5. 1　精密度试验:取药材供试品溶液( 1号药材)
连续进样6次, 测得共有峰11个,其中> 3%的共有
峰 7个, 各共有峰相对保留时间和相对峰面积的
RSD< 2% ,表明精密度良好。
2. 5. 2　重现性试验: 取1号药材6份,按2. 3项下方
法制备药材溶液, 分别进样, 测得各共有峰相对保留
时间和相对峰面积的RSD< 5%,表明重现性良好。
2. 5. 3　稳定性试验: 取药材供试品溶液 ( 1 号药
材) ,分别在0、2、4、8、12、24 h 进样, 测得各共有峰
相对保留时间和相对峰面积的RSD< 5%, 表明溶液
在24 h 内稳定。
2. 6　指纹图谱分析及评价
2. 6. 1　共有指纹峰的指定:在葛根药材的HPLC
色谱中共分离出约20个色谱峰, 根据10批药材供试
品溶液HPLC谱的比较,选取其中> 3%的7个共有
峰作为指纹图谱的特征峰。见图1。
t / min
图1　葛根药材HPLC指纹图谱( 2-葛根素峰)
Fig. 1　HPLC Fingerprint of Radix Puerariae
( 2-puerarin)
2. 6. 2　共有峰的相对保留时间、相对峰面积比: 葛
根素为葛根中主要成分, 以其作为参照峰, 计算>
3%的 7 个共有峰相对保留时间和相对峰面积(表
1)。由计算结果看出10批药材中各共有峰相对保留
时间和相对峰面积RSD均小于10%,符合指纹图谱
的有关规定。
2. 6. 3　相似度评价:将测试数据导入国家药典委员
会指定的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软
件,经选参照峰,设定匹配参数, 将10批药材的谱峰
自动匹配, 进行谱峰差异性评价和整体相似度评价
(图2,表2)。
表1　10 批药材相对保留时间和相对峰面积计算结果
Table 1　Relative retentions times and relative areas of ten batches of Radix Puerariae
批号 相对保留时间
1 s 3 4 5 6 7
相对峰面积
1 s 3 4 5 6 7
1 0. 541 1 1. 153 1. 334 1. 563 2. 329 2. 554 0. 200 1 0. 228 0. 158 0. 195 0. 094 6 0. 083 7
2 0. 543 1 1. 153 1. 337 1. 578 2. 357 2. 590 0. 202 1 0. 230 0. 161 0. 196 0. 077 0 0. 077 7
3 0. 538 1 1. 154 1. 335 1. 556 2. 312 2. 533 0. 168 1 0. 196 0. 146 0. 175 0. 076 6 0. 076 0
4 0. 538 1 1. 153 1. 334 1. 558 2. 316 2. 537 0. 194 1 0. 238 0. 152 0. 191 0. 077 8 0. 080 6
5 0. 537 1 1. 154 1. 334 1. 556 2. 312 2. 532 0. 201 1 0. 247 0. 158 0. 202 0. 090 3 0. 078 1
6 0. 537 1 1. 153 1. 333 1. 551 2. 302 2. 521 0. 170 1 0. 209 0. 148 0. 193 0. 079 0 0. 073 8
7 0. 537 1 1. 152 1. 333 1. 554 2. 308 2. 528 0. 201 1 0. 226 0. 153 0. 196 0. 084 7 0. 090 8
8 0. 546 1 1. 173 1. 357 1. 582 2. 351 2. 574 0. 190 1 0. 214 0. 155 0. 191 0. 080 5 0. 070 7
9 0. 538 1 1. 152 1. 334 1. 559 2. 319 2. 540 0. 166 1 0. 187 0. 137 0. 185 0. 072 6 0. 070 1
10 0. 538 1 1. 153 1. 334 1. 557 2. 320 2. 540 0. 185 1 0. 215 0. 153 0. 186 0. 086 4 0. 084 6
RSD/ % 0. 57 0. 55 0. 55 0. 66 0. 78 0. 85 7. 8 8. 46 4. 60 4. 26 8. 39 8. 27
t/ min
图2　10 批药材HPLC指纹图谱比较
Fig. 2　HPLCFingerprint of ten batches
of Radix Puerariae
表 2　样品相似度
Table 2　Similarity of samples
批次 相似度 批次 相似度
1 0. 991 6 0. 999
2 0. 991 7 1. 000
3 1. 000 8 0. 997
4 1. 000 9 0. 999
5 0. 999 10 0. 999
3　讨论
　　色谱指纹图谱将常规的以单一指标成分或活性
成分为质量控制指标提升到通过指纹图谱得到的量
·437·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第39卷第 3期 2008 年3 月
化参数,以判断产品质量是否稳定和一致。在中药新
药研制工作中,指纹图谱可以在很大程度上将新药
研制所用的药材、工艺、贮存过程中化学成分的变化
情况通过指纹图谱表达,更有效地进行新药研究的
全程跟踪,使研制的新药质量更趋于稳定和一致,从
而减少不良反应的发生。
　　文献中报道的液相色谱条件多采用甲醇-水、乙
腈-水梯度洗脱 [ 2～4] , 本试验采用甲醇-乙腈-0. 25%
醋酸水溶液梯度洗脱系统,使葛根药材主要黄酮类
成分能在 50 min 内得到较好的分离和较完整的指
纹图谱。从方法学考察结果看,本色谱条件精密度和
重现性好,可用来评价葛根药材和制剂的质量。
陕西安康为葛根药材的主要产区。本实验所用
药材来自陕西安康葛根种植基地, 从指纹图谱结果
分析, 10批样品具有较好的相似性, 平均共有峰总
面积在95%以上。因此建立野生药材种植生产基地
能很好地保证药材质量稳定。通过对原药材指纹图
谱的研究与监控,可避免只以有效成分的量为定性、
定量评价的片面性。对提高中药质量,降低不良反应
发生率具有较大的意义。该方法也为国际公认的控
制天然药物质量的最有效手段。
参考文献:
[ 1]　郑虎占, 董泽宏,佘　靖 . 中药现代研究与应用[ M ] . 第五
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应用近红外光谱技术鉴别红参药材
王钢力,聂黎行, 张　继,梁锡猛X ,徐纪民, 林瑞超
(中国药品生物制品检定所,北京　100050)
摘　要: 目的　应用近红外光谱( N IRS )技术鉴别红参及其伪品。方法　收集 300 份中国红参及多种红参伪品的近
红外漫反射光谱, 采用判别分析法对其进行定性鉴别。结果　近红外光谱法可正确鉴别红参与其伪品。结论　该方
法快速、准确,可用于红参类药材的鉴别。
关键词: 近红外光谱( N IRS) ;红参药材; 判别分析
中图分类号: R282. 7　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253- 2670( 2008) 03- 0438- 03
Identification of Radix Ginseng Rubra by near infrared spectroscopy
WANG Gang-li, NIE Li-x ing , ZHANG Ji, LIANG Xi-meng, XU Ji-m in, LIN Rui-chao
( National Instit ut e for Contr ol of Pharmaceutical and Biolo gical Pr oducts, Beijing 100050, China)
Abstract: Objective　T o indent ify Radix G inseng Rubra f rom its counterfeit by near infr ar ed spec-
tr oscopy ( NIRS) . Methods　Dif fuse ref lectance spect ra o f Radix Ginseng Rubra f rom China and the coun-
terfeit w ere collected and then ident if ied by discriminant analy sis. Results　Radix Ginseng Rubra was dis-
tinguished from its counterfeit by NIRS. Conclusion　NIRS M ethod is rapid, accurate, and can be used
fo r the identif icat ion and quality cont rol of Radix Ginseng Rubr a.
Key words : near inf rared spect rum ( NIRS) ; Radix Ginseng Rubra; discr im inant analy sis
　　人参系 五加科植物人 参 Panax ginseng
C. A. M ey. 的根和根茎, 为传统名贵药材[ 1]。红参是
由人参经蒸制加工而成。由于价格和销量的原因,市
场上常见其伪品, 主要有栌兰、华山参、山莴苣、桔
梗、野豇豆、商陆等。目前红参及其伪品的鉴别主要
采用经验鉴别和理化鉴别的方法[ 2]。近红外光谱技
术是一种最近发展起来的新型分析技术。该法操作
方便,样品不必经过提取、稀释等预处理过程, 可直
接进行分析;且漫反射技术可直接测定固体样品, 无
须破坏样品或进行样品溶液的制备, 操作简便、快
速,是一种理想的质量控制和质量保证的方法 [ 3]。此
法已运用在高丽参药材鉴别研究中[ 4]。本实验采集
·438· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第39卷第 3期 2008 年3 月
X 收稿日期: 2007-06-13
* 桂林医学院 2007级本科毕业实习生。T el : 13901380612