全 文 ：莲多糖SBP,后两者均为中性杂多糖,三者在单糖组
成中基本相同, 但单糖的物质的量比以及相对分子
质量大小均存在一定的差异。据此推测 SBPs为半
枝莲中又一多糖组分。
已发现大量不同来源的多糖在各种体内、体外
实验体系中均表现出良好的抗氧化作用[ 7] , 还可对
已有多糖化合物的结构修饰提高其抗氧化活
性[ 8, 9] , 因此多糖是极具开发潜力的一类天然抗氧
化剂。在研究抗氧化多糖的过程中,不少研究提示,
多糖的抗氧化性可能是多糖抗衰老、降血糖、抗肿
瘤、抗辐射、增强免疫等功效的药理基础之一。多糖
的抗氧化作用与其组成和化学结构有关, 也与药物
的质量分数、剂量有关,虽然目前对多糖的抗氧化机
制已有一些解释, 但仍不是很清楚。本实验提取得
到的 SBPs为一水溶性酸性杂多糖, 具较好抗氧化
活性,含糖量达 96%, 不含蛋白, Superdex 200凝胶
过滤柱色谱和聚丙烯酰胺凝胶电泳均表明 SBPs 组
成均一且质量分数较高。这为进一步抗氧化机制和
构效关系的研究打下了基础。
参考文献:
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HPLC法测定丹皮酚制剂在犬体内血药浓度及生物利用度
智红英1 ,孙丽芳1 ,宋吉伦1 ,李桂生1, 2* ,刘 珂1, 2
( 1. 山东绿叶天然药物研究开发有限公司, 山东 烟台 264003; 2. 烟台大学药学院, 山东 烟台 264003)
摘 要:目的 研究丹皮酚 3 种制剂在犬体内的药动学及生物利用度。方法 6 条犬采用三制剂三周期随机交叉
试验设计,分别单剂量口服对照制剂丹皮酚片( R) 40 mg; 被试制剂丹皮酚软胶囊( T 1 ) ; 被试制剂丹皮酚滴丸( T 2 ) ;
HPLC 测定血药浓度。结果 T 1、T 2 与 R 的主要药动学参数: tmax分别为( 11 42 ? 01 38)、( 01 96 ? 01 10)、( 11 08 ?
01 20) h; Cmax分别为( 21 23 ? 01 50)、( 21 56 ? 01 58)、( 11 94 ? 01 40) Lg / mL ; t1/ 2(ke) 分别为( 31 09 ? 01 40)、( 21 88 ?
01 51)、( 21 62 ? 01 52) h; AUC0~ 12分别为( 111 62 ? 11 07)、( 121 57 ? 11 80)、( 101 32 ? 11 63) h # Lg/ mL ; AUC0~ ] 分
别为( 141 56 ? 11 41)、( 151 41 ? 11 70)、( 121 70 ? 21 12) h # Lg/ mL。相对生物利用度为: T 1 ( 1141 1 ? 141 3) % 和
( 1161 3? 151 1) % , T 2 ( 1221 6 ? 121 4)%和( 1221 8? 131 9)%。结论 药动学参数经多因素方差分析显示 AUC0~ 12、
AUC0~ ] 、Cmax和 tmax在药物间有显著的统计学差异 ( P < 01 05) , 双单侧 t检验表明, 两种被试制剂与参比制剂不
等效。
关键词:丹皮酚; 生物利用度;高效液相色谱法
中图分类号: R286. 02 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2009) 05 0731 04
丹皮酚是牡丹根皮和徐长卿全草的有效成分,
具有镇静、催眠、镇痛、解热、抗炎、抗过敏、抗菌、降
压、止血、抑制血小板聚集等多种药理作用 [ 1, 2]。其
在小鼠、大鼠、家兔、人体内的药动学研究文献已有
报道[ 3~ 6] 。为了探讨药物剂型对丹皮酚体内代谢过
程的影响,本实验采用反相高效液相色谱法测定了
丹皮酚片、丹皮酚软胶囊以及滴丸在犬体内的药-时
曲线,据此了解三者在犬体内的药动学特征和差异,
测算丹皮酚软胶囊和滴丸的相对生物利用度。
1 仪器与材料
#731#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
* 收稿日期: 2008- 11-22 作者简介:智红英( 1973 ) ) ,女,山东郓城人,主管药师,硕士,从事药代和毒代方面工作。
T el : (0535) 2128672 E-mail: zhihongyin g@ 126. com
* 通讯作者 李桂生 T el: ( 0535) 2108899 E- mail: gu isheng@ luye-ph arm. com
11 1 试验动物: 健康 Beag le 犬, 雌雄各半, 体质量
101 5~ 121 5 kg, 南海市科金实验动物科技有限公
司,合格证号: Scxk(粤) 2003-0006。
11 2 仪器与试药:美国安捷伦公司生产的 Agilent l
100高效液相色谱仪(在线脱气机, 四元泵, 自动进
样器,柱温箱, U V 检测器, Chemstat ions色谱工作
站) , 飞鸽牌 Anke DC-6000B低速冷冻离心机(上海
安亭科学仪器厂)。丹皮酚对照品购自中国药品生
物制品检定所, 批号 0708-9704; 内标: 对乙氧基苯
乙酮(美国) ;参比制剂丹皮酚片(批号: 030603) , 广
西亿康药业股份有限公司生产; 丹皮酚软胶囊(批
号: 040928)、丹皮酚滴丸(批号: 040228) , 山东绿叶
天然药物研究开发有限公司提供; 二氯甲烷、甲醇为
色谱纯;水为重蒸馏水,其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
21 1 给药方案:本实验采用三制剂三周期随机交叉
试验设计,将 6只受试动物随机分成甲、乙、丙 3组,
每组两只,雌雄各半, 分三期交叉给药, 每次给药间
期 7 d,给药总剂量分别为: 对照制剂丹皮酚片 ( R)
40 mg/只( 1 片) ; 被试制剂丹皮酚软胶囊 ( T 1 ) 40
mg/只( 2 粒) ; 被试制剂丹皮酚滴丸( T 2 ) 40 mg/只
( 4粒)。
21 2 样品采集与处理:于试验前 1 d晚 7B 00开始
禁食,试验当日晨 7B 00空腹按规定的剂量给药, 给
药 2 h 后统一给以清淡饲料, 试验期间自由饮水。
于给药前及给药后 01 25、01 5、01 75、1、11 5、2、3、
41 5、6、8、10、12 h 由犬前或后肢静脉取血 2 mL,并
立即移入经肝素处理过的离心管中, 离心 10 min
( 3 000 r/ min)分离血浆,于- 20 e 冰箱中保存待测。
血浆样品的预处理: 取肝素抗凝血浆 500 LL,
加内标溶液 (对乙氧基苯乙酮的甲醇溶液 01 5
Lg/ mL) 100 LL, 甲醇 100 LL 和 11 0 mo l/ L 盐酸
100 LL, 混匀; 加入 2 mL 乙醚-二氯甲烷-异丙醇
( 100B 50B 10) , 涡流混合 3 m in, 往复振荡 10 min
( 200次/ min) , 离心 10 m in( 4 000 r/ min)取上层有
机相于另一试管中, 再加入乙醚-二氯甲烷-异丙醇
( 100B50B10) 1 mL 重复上述操作, 合并上层有机相
并在30 e 水浴缓和氮气流下吹干溶剂,残渣加入流
动相 100 LL,涡旋溶解, 离心 5 m in( 4 000 r/ m in) ,
吸取上清液 20 LL 注入液相色谱仪,记录色谱图。
21 3 色谱条件: 色谱柱为 Waters Symmert ry C18
( 150 mm @ 31 9 mm, 5 Lm) , 流动相: 甲醇-水-磷酸
( 50B50B 01 2) ; 检测波长: 275 nm; 柱温: 35 e ; 体
积流量: 01 8 mL/ m in。
21 4 方法专属性:分别取 6只受试犬的空白血浆( 0
h) 500 LL,按/血浆样品的预处理0项下方法操作,
HPLC 进样 20 LL; 将一定质量浓度的丹皮酚对照
品溶液和内标溶液加入空白血浆中, 依同法操作;取
受试犬给药后收集的血浆样品, 依同法操作。色谱
图见图 1。结果表明, 空白血浆中的内源性物质不
干扰丹皮酚与内标的测定。
21 5 标准曲线的绘制: 空白血浆 500 LL, 加入丹皮
1-丹皮酚 2-对乙氧基苯乙酮(内标)
1-paeonol 2-ethoxyacetophenone( internal standard)
图 1 空白血浆( A)、加丹皮酚和内标血浆(B)、给药丹皮酚滴丸 2 h后取样血浆( C) ,及丹皮酚与内标溶液( D)的 HPLC图谱
Fig. 1 HPLCChromatograms of blank plasma ( A) , blank plasma spiked with paeonol and 4-ethoxyacetophenone ( B) ,
a plasma sample 2 h after oral administration paeonol soft capsules ( C) , and paeonol and 4-ethoxyacetophenone
standard solution ( D)
酚系列对照品溶液 100 LL,配制成相当于丹皮酚质
量浓度为 01 05、01 1、01 25、11 0、21 5、51 0 Lg/ mL 的
血浆样品。除不加甲醇 100 LL 外, 其他按照/血浆
样品的预处理0项下方法操作, 进样 20 LL, 记录色
谱图。以血浆中待测物的质量浓度为横坐标, 待测
物与内标物的峰面积之比为纵坐标, 用加权( W =
1/ x 2)最小二乘法进行回归运算 [ 7] ,求得的直线回归
方程即为标准曲线, 回归方程为 Y = 11 692 5 X +
01 161 7, r> 01 991 8。根据标准曲线,本方法的线
性范围为 01 05 ~ 51 0 Lg/ mL, 定量下限为 01 05
Lg/ mL。
21 6 方法的准确度和精密度: 取空白血浆 500 LL,
分别取低、中、高 3个水平(含丹皮酚质量浓度分别
为 01 05、01 25、21 5 Lg/ mL)的样品各 6份。按/标准
曲线的绘制0项下方法操作,连续测定 3 d,随行标准
曲线,以当日的标准曲线计算样品的测定浓度, 与配
#732# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
制质量浓度比较,求得本法的准确度和精密度,结果
见表 1。
表 1 精密度和准确度试验结果
Table 1 Results of precision and accuracy
质量浓度
/ ( Lg#mL- 1 )
测定值( x+ s)
/ ( Lg#mL- 1 )
日内精密度
RSD/ %
日间精密度
RSD/ %
准确度
/ %
0. 05 0. 048 0 ? 0. 001 8 7. 9 3. 6 - 5. 1
0. 25 0. 240 0 ? 0. 011 0 1. 7 12. 1 - 3. 5
2. 5 2. 490 0 ? 0. 110 0 0. 6 13. 3 - 0. 3
21 7 提取方法回收率试验: 取空白血浆 500 LL, 按
/标准曲线的绘制0项下方法操作, 分别取低、中、高
3个水平(含丹皮酚质量浓度分别为 01 05、01 25、21 5
Lg/ mL)的样品各 3份。记录被测物的峰面积,与未
经处理的相同浓度的标准溶液峰面积比较, 测得提
取回收率分别为 811 1%、851 9%、781 5% ( n = 6)。
内标物经相同提取过程处理, 其回收率为 821 4%。
21 8 稳定性试验: 取空白血浆 500 LL, 分别取低、
中、高 3 个水平 (含丹皮酚质量浓度分别为 01 05、
01 25、21 5 Lg/ mL)的样品各 2份,按/标准曲线的绘
制0项下方法操作, 即时测定浓度, 室温放置 10 h
后,重复测定一次,并以当日的标准曲线计算质量浓
度,将两次测定结果对照,计算 RSD,分别是 31 0%、
- 31 9%、21 4% ,表明血浆样品经过处理后室温放置
10 h, 仍可被准确测定。血浆样品在冷冻-融溶循环
3次试验中的相对标准偏差均小于 15%。
21 9 药动学研究:采用梯形法计算 AUC0~ 12值, 根
据对数血药浓度-时间曲线末端直线部分的斜率求
算消除速率常数( K e ) , 消除半衰期 t1/ 2可由 t1/ 2 =
01 693/ K e 计算。峰浓度( Cmax )和达峰时间 tmax用实
测值表示。6条受试犬单剂量口服 40 mg T 1、T 2、R
后的平均血药浓度-时间曲线见图 2,由血药浓度求
得的主要药动学参数见表 2。
图 2 血药浓度-时间曲线
Fig. 2 Mean plasma concentration-time curves
21 10 生物等效性分析
21 101 1 生物利用度:根据 AU C0~ 12和 AUC0~ ] 计
算得到的 T 1 的相对生物利用度分别为( 1141 1 ?
141 3) %和( 1161 3 ? 151 1) %, T 2 相对生物利用度分
表 2 单剂量给药丹皮酚后主要药动学参数(x ? s)
Table 2 Main pharmacokinetic parameters of paeonol
af ter a single oral dose (x ? s)
参 数 丹皮酚制剂丹皮酚片 丹皮酚软胶囊 丹皮酚滴丸
AUC0~ 12 h#Lg#mL- 1 10. 32 ? 1. 63 11. 62 ? 1. 07 12. 57 ? 1. 80
AUC0~ ] h#Lg#mL- 1 12. 70 ? 2. 12 14. 56 ? 1. 41 15. 41 ? 1. 70
Cmax Lg#mL- 1 1. 94 ? 0. 40 2. 23 ? 0. 50 2. 56 ? 0. 58
tmax h 1. 08 ? 0. 20 1. 42 ? 0. 38 0. 96 ? 0. 10
t 1/ 2( Ke) h 2. 62 ? 0. 51 3. 09 ? 0. 40 2. 88 ? 0. 51
别为( 1221 6 ? 121 4) %和( 1221 8 ? 131 9) %。
21 101 2 方差分析: 6 只受试犬单剂量随机交叉服
用丹皮酚 3种制剂后, 总方差分析结果显示, 3种制
剂的主要药动学参数 AUC0~ 12和 AUC0~ ] , Cmax在
制剂间和个体间有显著的统计学差异( P< 01 05) ,
在给药顺序间无显著的统计学差异( P> 01 05) ; tmax
在制剂间有显著的统计学差异( P< 01 05) , 在个体
间和在给药顺序间无显著的统计学差异 ( P <
01 05)。
21 101 3 双单侧 t检验和( 1- 2A)置信区间法分析:
T 1 与 R 相比, T 1 的 AU C0~ 12的 90% 可信限为
( 1021 7% ~ 1251 2% ) , AU C0~ ] 的 90% 可信限为
( 1041 5%~ 1271 7%) , Cmax 90%可信限为( 981 5% ~
1321 7% ) ; T 2 与 R 相比, T 2 的 AU C0~ 12的 90%可
信限为( 1101 6% ~ 1341 9%) , AUC0~ ] 的 90%可信
限为 ( 1101 6% ~ 1341 9%) , Cmax 90% 可信限为
( 1131 4%~ 1521 7%) , 参数均拒绝生物等效假设
( P> 01 05) ,说明 T 1 与 R, T 2 与 R 不具生物等效
性。由此可以看出丹皮酚滴丸、软胶囊均具有血药
浓度和生物利用度高的特点。
3 讨论
国内外文献 [ 4~ 6]均用苯乙酮( acetophenone)作
为内标,相同色谱条件下, 苯乙酮出峰快, 保留时间
小于丹皮酚,易受溶剂峰和内源性物质的干扰, 本实
验采用对乙氧基苯乙酮,避免了上述缺点。
本实验对文献报道 [ 3]所考察的二氯甲烷、乙醚、
乙腈和甲醇的提取效率,认真进行了考察,二氯甲烷
的提取效率最高, 由于二氯甲烷位于下层, 操作不
便,因此采用乙醚-二氯甲烷-异丙醇( 100B 50 B 10)
作提取溶剂,结果离心后提取溶剂位于上层,操作方
便,易挥发, 避免了高温下挥发溶剂丹皮酚随之挥发
的缺点,萃取回收率也令人满意。
本研究显示犬个体差异较大, 仅为以后的临床
生物利用度提供参考。
#733#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
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气相色谱法测定牡荆油胶丸中 B-丁香烯
魏惠珍1 ,陈燕军2 ,张红红1 ,金浩鑫1 ,饶 毅1* ,杨世林1
( 1.中药固体制剂制造技术国家工程研究中心,江西 南昌 330006; 2.江西中医学院,江西 南昌 330004)
摘 要:目的 建立气相色谱法测定牡荆油胶丸中B-丁香烯的方法。方法 用气相色谱法。色谱条件: 色谱柱为
HP-5 石英毛细管柱( 301 0 m @ 320Lm @ 01 25 Lm) ; 进样口温度: 230 e ; 恒流: 1 mL / min; 分流比 10B 1; 检测口温
度: 260 e ; 进样量 1 LL; 程序升温, 起始温度 80 e , 以 8 e / min 升至 200 e , 保持 5 min。结果 B-丁香烯在
01 002~ 01 16 mg/ mL 呈良好的线性关系,回归方程为 Y= 01 055 1 X - 01 008, r= 01 999 9,平均回收率为 991 32% ,
RSD为 11 56%。结论 采用气相色谱法对牡荆油胶丸中B-丁香烯进行测定,方法简便、快速、准确、重复性好。
关键词:牡荆油胶丸;B-丁香烯;气相色谱
中图分类号: R286. 02 文献标识码: B 文章编号: 0253 2670( 2009) 05 0734 02
牡荆油胶丸是牡荆油与适量稀释剂经加工制成
的胶丸 [ 1] , 临床上用于治疗慢性支气管炎, 疗效确
切。牡荆油主要含有 A-蒎烯、芳樟醇、B-丁香烯和丁
香烯氧化物等成分[ 2] ,其中 B-丁香烯的量较高,是牡
荆油治疗慢性支气管炎的重要成分[ 3, 4]。因此本研
究以B-丁香烯为指标成分,采用气相色谱法对 10批
牡荆油胶丸中的 B-丁香烯进行了测定方法学研究,
证明该方法简便、准确、重现性好,可作为牡荆油胶
丸的质量控制方法。
1 仪器与材料
Agilent 6890N 型气相色谱仪( 美国 Agilent 公
司) , 氢火焰离子化检测器( F ID)。B-丁香烯对照品
购于 Sigma 公司, 批号 1321406, 质量分数 981 5%。牡荆油胶丸为市售样品, 分别来源于江西
天海药业股份有限公司 (批号: 070121、070707、
080122) , 广州星群 (药业) 股份有限公司 (批号:
EF50002、EF50004、EF50005、EF50007、EF50008、
FF50001、FF50003) , 规格均为 20 mg/粒。醋酸乙
酯,正十八烷等均为分析纯试剂。
2 方法与结果
21 1 色谱条件: 色谱柱为 HP-5 石英毛细管柱
( 301 0 m @ 320 Lm @ 01 25 Lm) ; 进样口温度: 230
e ;恒流: 1 mL/ m in; 分流比 10 B 1; 检测口温度:
260 e ;进样量 1 LL;程序升温, 起始温度 80 e ,以
8 e / min升至 200 e ,保持 5 min。
21 2 内标溶液的制备: 取内标物正十八烷溶液适
量,加醋酸乙酯制成 01 15 mg/ mL 的内标溶液,即得。
21 3 供试品溶液的制备: 取胶丸内容物, 约 01 1 g,
精密称定, 置 50 mL 量瓶中, 用醋酸乙酯稀释至刻
度,摇匀。从中精密吸取 1 mL 置 10 mL 量瓶中,再
精密加入内标溶液 1 mL, 用醋酸乙酯稀释至刻度,
摇匀,即得。
21 4 对照品溶液的制备: 取 B-丁香烯对照品约 20
mg,精密称定,置 100 mL 量瓶中, 用醋酸乙酯溶解
稀释至刻度,摇匀。从中精密吸取 1 mL 置 10 mL
量瓶中,再精密加入内标溶液 1 mL, 用醋酸乙酯稀
释至刻度,摇匀,即得。
21 5 专属性试验: 按牡荆油胶丸生产工艺处方比
#734# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
* 收稿日期: 2008- 10-14 作者简介:魏惠珍( 1965 ) ) ,女,江西南昌人,副主任药师,主要从事药物质量控制研究工作。
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* 通讯作者 饶 毅 T el: ( 0791) 7119609 E- mail: raoyi99@ 126. com