全 文 ：菝葜不同工艺提取物对慢性盆腔炎大鼠的治疗作用
仇 萍1, 2 ,盛孝邦1 , 邱赛红3
收稿日期: 20100412
作者简介:仇 萍( 1965 ) ,女,湖南省怀化市人,高级工程师,在读博士,湖南正清制药集团股份有限公司总工程师, 长期从事药品的研
发、工艺技术及生产管理工作,先后获得新药证书 6个,发明专利 11个,获得省科技进步奖,省优秀发明人称号,研究方向为药
用植物种质资源研究与利用。Tel: 13973161359 Fax: ( 0731) 88807044 Email: qiu _zq@ vip. 163. com
( 1 湖南农业大学, 湖南 长沙 410128; 2 湖南正清制药集团股份有限公司,湖南 长沙 410018;
3 湖南中医药大学,湖南 长沙 410007)
摘 要:目的 对菝葜不同工艺提取物治疗妇科盆腔炎的药理作用进行对比研究, 为确定菝葜的最佳提取工艺提
供参考。方法 采用不同工艺制备菝葜提取物,观察其对常见妇科感染菌的体外抑菌作用; 子宫注射混合菌液法
制备大鼠盆腔炎模型,观察菝葜不同工艺提取物对子宫炎症、组织病理学及血液流变学各指标的影响。结果 不
同工艺菝葜提取物对多种妇科感染菌均有一定的抑菌作用; 对子宫内膜炎症均有较好抑制作用, 能减轻子宫肿胀
及组织的病变程度,并能降低模型大鼠全血黏度和全血还原黏度。结论 不同工艺制备的菝葜提取物均对妇科盆
腔炎症有一定的治疗作用,以水提醇沉工艺制备的提取物作用最为明显。
关键词:菝葜; 慢性盆腔炎;抑菌
中图分类号: R286 1 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2010) 12 2046 04
菝葜 Smilax china L. 为 中国药典!2010 年
版收载品,具有祛风利湿, 解毒散瘀的功效, 用于筋
骨酸痛, 小便淋漓,带下量多, 疔疮痈肿等。其叶外
用治疗疔疮、烫伤。临床上被广泛用于妇科炎症, 也
用于肿瘤治疗 [ 1]。菝葜化学成分复杂, 主要含有黄
酮和二苯乙烯类等成分[ 23] 。目前,以菝葜提取物为
主要组分的妇科炎症治疗药品有金刚藤糖浆、金刚
藤颗粒、金刚藤片、金刚藤胶囊、三金片、金鸡胶囊、
复方菝葜颗粒等。但对金刚藤治疗妇科炎症的药效
学研究未见报道,本实验研究了菝葜不同工艺提取
物 水提物、水提醇沉物及其残渣、金刚藤糖浆的
体外抑菌试验和对盆腔炎模型的治疗作用。
1 材料
1 1 药材:菝葜由湖南省怀化正好制药有限公司提
供,经湖南中医药大学刘塔斯教授鉴定,系百合科植
物菝葜 Smilax china L. 的干燥根茎。
1 2 受试药物的制备
1 2 1 菝葜水提物: 取菝葜药材, 粉碎后过 20 目
筛备用,称取 1 000 g 粗粉,加 12倍量水提取 2 h,
11 倍量水再提取 2 h,合并滤液, 减压浓缩得浸膏,
每克浸膏相当于原药材 3 623 g (含黄酮以芦丁计
为 14 6%)。
1 2 2 菝葜水提醇沉物: 取菝葜水提物适量, 加 5
倍量 95% 乙醇,静置,滤过, 滤液减压浓缩得浸膏,
每克浸膏相当于原药材 13 807 g (含黄酮以芦丁计
为 31 7%)。
1 2 3 菝葜水提醇沉残渣:即水提醇沉后所得沉淀
物,每克残渣相当于原药材 6 879 g (含黄酮以芦丁
计为 3 6% ) ;
1 2 4 金刚藤糖浆 (湖南正好制药有限公司) : 称
取菝葜 1 000 g 粗粉,加水提取 2次, 12倍量水提取
2 h, 11 倍量水再提取 2 h,合并滤液,减压浓缩至生
药 0 25 g/ g , 40% 乙醇醇沉,静置 24 h, 滤过,减压
回收乙醇至无醇味, 每克浸膏相当于原药材 6 556
g (含黄酮以芦丁计为 18 9%)。
1 3 对照药物: 甲硝唑 (批号 051108 1) ,广东康
美药业 股份 有 限公 司; 左氧 氟 沙星 ( 批号
1060001) ,广州白云山制药股份有限公司;地塞米松
(批号 060238) , 天津药业集团有限公司。
1 4 菌株: 金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏杆菌、铜绿
假单胞菌、奇异变形杆菌、白色念珠菌均为湖南省疾
病控制中心提供的试验标准菌株, 由湖南中医药大
学微生物教研室保种繁殖。
1 5 动物: SD 大鼠,雌性,购自上海西普尔必凯实
验大鼠有限公司, 使用许可证号: SYXK ( 湘)
20030001。
2 方法
2 1 不同工艺菝葜提取物对常见妇科感染菌的体
外抑菌作用: 采用平板抑菌试验。制备普通肉汤琼
脂和沙氏培养基 (白色念珠菌培养用) 无菌平板,
平皿内培养基厚约 4 mm; 将以上各菌株用适宜的
液体培养 18 h后做 1 ∀100稀释。分别取稀释菌液
#2046# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
1 mL 均匀涂布于平板表面。每种菌设 2 个平板;
用直径为 6 mm 的无菌打孔器垂直并等距离在平板
上打孔 4个;每个孔内加入 0 2 mL 不同工艺制备
的菝葜提取物, 质量浓度均为含生药 2 g / mL; 将平
皿置 37 ∃ 培养 24 h 后取出,测量各药物抑菌环直
径 ( mm) 和给药孔周围细菌生长情况。
2 2 不同工艺菝葜提取物对盆腔炎大鼠的治疗作
用:参照文献方法[ 45] ,取 200 g 左右的成年健康雌
性大鼠,造模大鼠分别从左、右子宫向卵巢方向注入
含大肠杆菌 6 % 106 CFU/ mL 的菌液 0 4 mL;假手
术组大鼠仅暴露子宫, 不做宫内注射。术后第 10
天,将造模大鼠随机分为 6 组, 即模型组、菝葜水提
物组、水提醇沉物组、金刚藤糖浆组、甲硝唑组、左氧
氟沙星+ 地塞米松组; 另设正常大鼠对照组。造模
后第 11天开始给药,不同给药组分别给予相当于生
药量 10 g/ kg 的菝葜提取物。每天 ig 给药 1次, 连
续给药 15 d。末次给药后 24 h, 颈总动脉采血, 测
各血液流变学指标。采血后的大鼠打开腹腔,从左、
右子宫向卵巢方向注射美蓝溶液,观察输卵管开口
处美蓝溶液流出情况, 以有无美蓝液流出判断其是
否通畅,计算输卵管通畅率。取出子宫称质量,计算
子宫指数, 然后用 4% 甲醛液固定, 供病理组织形
态学检查。病理学检查的病变程度按以下标准判
断: ( 1) 上皮细胞变性、坏死: & - ∋无变性、坏死;
& + ∋< 1/ 3 的少许细胞变性或脱落; & + + ∋明显的
上皮变性、坏死或脱落; & + + + ∋上皮细胞变性、坏
死几乎遍及全层。( 2)炎细胞浸润: & - ∋无炎细胞浸
润; & + ∋少量散在或灶性炎细胞; & + + ∋较多的炎细
胞; & + + + ∋全层弥漫性炎细胞浸润。( 3)宫腔粘
连、闭塞: & - ∋无粘连、闭塞; & + ∋粘连< 1/ 3; & + + ∋
粘连 1/ 3~ 2/ 3; & + + + ∋严重粘连甚至闭塞。( 4)
结缔组织增生: & - ∋无增生; & + ∋黏膜层成纤维细胞
增多; & + + ∋结缔组织增生深及肌层; & + + + ∋全层
结缔组织增生。
3 结果
3 1 对常见妇科感染菌的体外抑菌作用比较:平板
抑菌环结果见表 1。结果表明,菝葜生药质量浓度
为 2 g / mL 时,水提醇沉物的抑菌谱最广,对金黄色
葡萄球菌有明显抑制作用,对大肠埃希氏杆菌、铜绿
假单胞菌、奇异变形杆菌均有一定的抑制作用。水
提物和金刚藤糖浆对金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏
杆菌也有一定的抑制作用。水提醇沉物残渣部分对
4种细菌均无抑菌作用。各样品对白色念珠菌 (真
菌) 均无抑制作用。
表 1 4 种菝葜提取物平板抑菌试验结果
Table 1 Bacteriostatic test of four extracts
f rom rhizome of S. china
菝葜提取物
抑菌环直径/ mm
金黄色葡萄球菌 大肠埃希氏杆菌 铜绿假单胞菌 奇异变形杆菌 白色念珠菌
水提物 8 1~ 82 69~ 70 ( ( -
水提醇沉物 11 9~ 12 0 94~ 95 6 4~ 6 5 75~ 76 -
水提醇沉残渣 - - - - -
金刚藤糖浆 6 9~ 70 64~ 65 ( ( -
& ( ∋ :加药孔周围菌落数减少,但未形成明显抑菌环; & - ∋ : 菌
落生长无变化
& ( ∋ indicates that dosing reduces the n umber of colonies
around th e hole, but no obvious inh ibit ion zone formed; & - ∋ indi
cates no change in colony grow th
3 2 对盆腔炎模型治疗作用的比较:水提物、水提
醇沉物及金刚藤糖浆 3种菝葜提取物均能减轻炎症
肿胀带来的子宫质量增加, 使子宫指数增加;输卵管
通畅率较模型组均提高, 不同工艺菝葜提取物的作
用经比较无明显差异。结果见表 2。
表 2 不同菝葜提取物对盆腔炎大鼠子宫指数
及输卵管通畅率的影响
Table 2 Effect of dif ferent extracts f rom rhizome
of S. china on uterine index and tubal
patency of pelvic inflammatory rats
组 别 剂量/ (g # kg- 1 ) 动物 /只 子宫指数 /% 输卵管通畅率/%
对照 - 10 021 ( 007 100 0
假手术 - 7 024 ( 006 100 0
模型 - 10 044 ( 010) ) 40 0
水提物 40 9 023 ( 004* * 55 6
水提醇沉物 40 9 025 ( 008* * 66 7
金刚藤糖浆 40 9 026 ( 011* * 77 8
甲硝唑 0 04 9 026 ( 012* * 66 7
左氧氟沙星+ 地塞米松003+ 0001 9 022 ( 005* * 88 9
与对照组比较: ) )P< 0 01; 与模型组比较: * * P < 0 01
) )P < 0 01 v s cont rol group; * * P < 0 01 v s model group
子宫病理学检查结果显示, 对照组和假手术组
大鼠子宫壁各层结构清晰,除偶见散在的上皮细胞
脱落及内膜轻度充血外,未见其他异常;模型组大鼠
可见子宫上皮细胞损伤严重,内膜有较多以淋巴细
胞和嗜酸性粒细胞为主的炎细胞浸润, 并有纤维结
缔组织增生,个别腔壁无法分清结构层次,部分管腔
粘连或闭塞;服用菝葜提取物和采用左氧氟沙星治
疗的大鼠,病变程度与模型组比较均有较明显减轻,
上皮细胞坏死情况明显好转,内膜中炎性细胞数量
减少,管腔粘连、狭窄的情况也有较大的改善;服用
甲硝唑虽然病变程度有所减轻, 但作用不及其他药
物。将病变程度& - 、+ 、+ + 、+ + + ∋分别计分为
& 0、1、2、3∋进行统计学分析, 结果表明, 菝葜提取物
和左氧氟沙星组大鼠的病变程度计分均较模型组显
#2047#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
著下降 ( P< 0 05、0 01) ,而甲硝唑组的差异则无显
著性。从病理组织学改变来看, 水提物和水提醇沉
物强于金刚藤糖浆。见表 3。
3 3 对盆腔炎大鼠血液流变学的影响:与对照组比
较,模型组的全血黏度、血浆黏度和全血还原黏度均
明显增加, 表明大鼠存在血液流变学异常。与模型
组比较,菝葜水提物、水提醇沉物及金刚藤糖浆均有
降低模型大鼠全血黏度及全血还原黏度的作用, 但
对血浆黏度及红细胞压积的影响不明显。左氧氟沙
星加地塞米松对改善血液流变学各指标的作用非常
明显。甲硝唑的作用则明显不及其他药物。不同工
艺的菝葜提取物改善模型大鼠血液流变学的作用均
明显强于甲硝唑, 其改善血液流变学的作用主要表
现在影响全血黏度, 而对血浆黏度及红细胞压积作
用不明显,各提取物对血液流变学影响作用强度比
较,以水提醇沉物略有优势。结果见表 4。
表 3 子宫病理学检查结果
Table 3 Test results of uterine pathologiy
组 别 动物/只
上皮细胞变性坏死
- + + + + + +
炎细胞浸润
- + + + + + +
宫腔粘连、阻塞
- + + + + + +
结缔组织增生
- + + + + + +
P 值
对照 10 9 1 0 0 10 0 0 0 10 0 0 0 10 0 0 0 < 0 01
假手术 7 6 1 0 0 5 1 0 0 7 0 0 0 7 0 0 0 < 0 01
模型 10 0 4 4 2 0 3 5 2 2 5 3 0 1 6 3 0 -
水提物 9 2 5 2 0 1 7 1 0 2 7 0 0 2 7 0 0 < 0 05
水提醇沉物 9 2 5 2 0 1 6 2 0 2 7 0 0 2 7 0 0 < 0 05
金刚藤糖浆 9 1 6 2 0 1 5 3 0 2 6 1 0 2 6 1 0 < 0 05
甲硝唑 9 0 7 2 0 1 6 2 0 2 6 1 0 2 5 2 0 -
左氧氟沙星+ 地塞米松 9 2 5 2 0 3 6 0 0 8 1 0 0 7 2 0 0 < 0 01
表 4 不同菝葜提取物对盆腔炎大鼠血液流变学指标的影响 ( x( s, n= 10)
Table 4 Effect of different extracts from rhizome of S. china on hemorheological index of pelvic inflammatory rats ( x( s, n= 10)
组 别 剂量/ ( g # kg- 1 ) 全血黏度/ ( mPa # s)低切 ( 5 s- 1) 中切 ( 10 s- 1 ) 高切 ( 120 s- 1 )
血浆黏度/ ( m Pa # s)
( 120 s- 1 )
对照 - 15 09 ( 1 56 10 91( 251 4 69 ( 0 32 1 31 ( 022
模型 - 24 44 ( 4 10 ) ) 17 15( 322 ) ) 6 55 ( 0 89 ) ) 1 58 ( 021 ) )
假手术 -
水提物 40 18 22 ( 4 06* * 12 29( 229* * 4 74 ( 0 43* * 1 44 ( 010
水提醇沉物 40 15 66 ( 2 41* * 11 38( 200* * 4 57 ( 0 29* * 1 55 ( 032
金刚藤糖浆 40 16 88 ( 2 01* * 11 77( 178* * 5 51 ( 0 80* * 1 48 ( 020
甲硝唑 0 04 22 00 ( 2 56 15 01( 162* 5 42 ( 0 92* * 1 64 ( 014
左氧氟沙星+ 地塞米松 0 03+ 0001 18 58 ( 2 33* * 13 21( 110* * 5 20 ( 0 47* * 1 34 ( 010*
组 别 剂量/ ( g # kg- 1 ) 全血还原黏度/ ( mPa # s)低切 ( 5 s- 1) 中切 ( 10 s- 1 ) 高切 ( 120 s- 1 ) 红细胞压积/ %
对照 - 29 98 ( 2 69 21 86 ( 5 46 8 31 ( 081 45 6 ( 43
模型 - 50 69 ( 11 57 ) ) 35 10 ( 7 58 ) ) 12 09 ( 230 ) ) 46 4 ( 45
假手术 - 35 45 ( 6 20 23 55 ( 3 73 8 01 ( 224 46 5 ( 42
水提物 40 38 78 ( 13 16* * 25 41 ( 8 02* * 8 38 ( 185* * 45 6 ( 59
水提醇沉物 40 32 43 ( 5 36* * 22 82 ( 3 52* * 7 91 ( 082* * 45 3 ( 30
金刚藤糖浆 40 37 24 ( 7 50* * 25 21 ( 5 80* * 10 26 ( 234* * 43 2 ( 47
甲硝唑 40 45 77 ( 5 32 30 54 ( 3 27 9 65 ( 204 45 9 ( 18
左氧氟沙星+ 地塞米松 0 03+ 0001 36 05 ( 5 86* * 25 11 ( 2 71* * 8 64 ( 110 48 8 ( 20
与对照组比较: ) )P < 0 01; 与模型组比较: * P< 0 05 * * P< 0 01
) )P< 0 01 v s cont rol gr ou p; * P < 0 05 * * P < 0 01 v s model group
4 讨论
盆腔炎系指女性子宫颈以上盆腔生殖器 (包括
子宫体部、输卵管、卵巢) 和盆腔腹膜及其邻近结缔
组织感染引起的临床综合征, 为妇科常见病, 其病因
较为复杂。现代医学则认为此症与细菌感染有关,
链球菌、葡萄球菌和大肠杆菌为常见的主要致病菌。
目前认为,慢性盆腔炎的药物治疗仍主要以抗菌消
炎、改善病灶周围血氧供应和增强机体免疫力为
主[ 4 ]。本研究结果表明不同工艺制备的菝葜提取物
在抑菌、改善血液流变学及减轻子宫炎症方面具有
一定作用,表明菝葜制剂用于治疗妇科炎症具备较
好的药理学基础。
对菝葜不同提取物药理作用结果进行对比分析
显示,在抑菌、改善血液流变学及减轻子宫炎症及病
理改变方面,均以水提醇沉物的作用更为明显,这一结
果可为菝葜制剂在进行工艺的改进与提高时提供参
#2048# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
考。对不同工艺菝葜提取物总黄酮定量测定结果也显
示以水提醇沉物总黄酮的量最高,故由此推测,总黄酮
有可能是菝葜用于治疗妇科炎症的主要有效部位。
参考文献:
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性的研究 [ J ] 中草药, 2008, 39( 7) : 975977
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[ 5] 张小丽, 张静云, 陈瑞明, 等 盆炎宁对混合菌液致大鼠慢
性盆腔炎治疗作用的实验研究 [ J] 中药药理与临床, 21
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人参皂苷 CK 对心脏蛋白激酶 C信号转导通路的影响
高 艳,刘汉清, 苗宁舒,陈方芳,李桂生*
收稿日期: 20100830
基金项目:山东省优秀中青年科学家科研奖励基金资助 ( 2007BS02022)
作者简介:高 艳( 1984 ) ,女,山东日照人,烟台大学药学院 2008级药理学研究生,研究方向为抗损伤药物的筛选及其机制研究。
* 通讯作者 李桂生 ( 1967 ) ,男,烟台大学药学院副教授,研究方向为药物化学和新药开发。
T el : ( 0535) 2108899 Email: guish eng@ lu ye. cn
(烟台大学药学院, 山东 烟台 264005)
摘 要:目的 观察人参皂苷 CK 对心脏蛋白激酶 C 信号转导通路的影响, 并探讨其作用机制。方法 采用 oligo
GEArray 基因芯片技术观察人参皂苷 CK 对心脏基因表达的影响;采用放射免疫法观察人参皂苷 CK 对体外培
养的新生 SD 大鼠心肌细胞蛋白激酶 C 活性的影响;采用 St raub∗ s 蛙心灌流法观察人参皂苷 CK 对蟾蜍离体心
脏心肌收缩力的影响。结果 人参皂苷 CK 可使小鼠心脏基因表达谱发生明显改变, 明显上调 P rkc 、Prkc 基
因表达;可明显增加心肌细胞蛋白激酶 C 活性, 并促进其从细胞浆向细胞膜移位,佛波醇酯和白屈菜赤碱分别能加
强和抑制该作用;能够明显增强蟾蜍离体心脏的心肌收缩力, 肾上腺素能受体阻断剂拉贝洛尔能抑制该作用。
结论 人参皂苷 CK 可激活心脏蛋白激酶 C 系统, 可能是肾上腺素能受体激动剂。
关键词:人参皂苷 CK; 蛋白激酶 C; 肾上腺素能受体; 心肌收缩力
中图分类号: R285 5 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2010) 12 2049 03
人参皂苷是人参及其同属植物 (三七、西洋参
等) 的主要药理活性成分, 具有多种药理活性 [ 12]。
按照传统中医主治病症分析, 心血管系统是人参皂
苷主要生物学效应器官之一。人参皂苷 CK 属二
醇型皂苷,是人参皂苷在体内发生作用的主要成分
之一[ 35] 。蛋白激酶 C ( protein kinase C, PKC) 是
一组富含丝氨酸和苏氨酸残基的蛋白激酶, 激活后
可使目标蛋白的丝氨酸和苏氨酸残基磷酸化, 参与
心脏多条信号转导通路[ 68] 。关于人参皂苷 CK 对
心脏 PKC 信号转导通路的影响目前尚未见报道。
本实验旨在观察人参皂苷 CK 对心脏 PKC 信号转
导通路的影响并探讨其作用机制。
1 材料
1 1 药物、试剂与仪器: 人参皂苷 CK (质量分
数> 98% ) 由山东绿叶天然药物研究开发有限公司
提供, oligo GEArray 基因芯片 (上海康成生物技术
有限公司) , PKC 检测试剂盒 ( Gibco 公司) , DMEM
培养液 ( Sigma 公司) , 胶原酶 ( Sigma 公司) , 盐酸
拉贝洛尔注射液 (江苏天禾迪赛诺制药有限公司) ,
其他常用试剂均为国产分析纯。肌张力换能器, 多
道生理记录仪 ( RM 6240C, 成都仪器厂制造)。
1 2 动物: 蟾蜍 ( 15~ 22 g) 购自烟台师范学院;昆
明种小鼠 ( 18~ 22 g ) ,新生 SD 大鼠 ( 1~ 3 d) 由山
东绿叶制药有限公司动物中心提供, 动物生产许可
证号: SCXK (鲁) 20090009。
2 方法
2 1 人参皂苷 CK 对心脏 PKC 基因表达的影响:
o lig o GEArray 基因芯片测定由上海康成生物技术
有限公司完成,过程简述如下: 健康雄性小鼠 6 只,
体质量 20~ 25 g, 随机分为对照组(给予溶剂)和人
参皂苷 CK ( 5 mg / kg, 由前期实验确定) 组, 尾 iv
给药,连续给药 3 d,末次给药后 30 m in, 脱臼处死
动物,取出心脏,冰生理盐水中挤出心室内余血后立
即投入液氮中备用。Trizo l试剂法抽提 RNA, 获得
的 RNA 溶液 - 70 ∃ 保存。紫外分光光度法测定
浓度和纯度,变性琼脂糖凝胶电泳检测 RNA 的完
整性。探针合成芯片杂交、洗膜严格按照试剂盒说
明书进行,使用芯片配套软件对原始数据进行分析,
#2049#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月