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* 2升麻素苷
* 2prim2O2glucosylcimifygin
图 4 升麻素苷对照品( A)、辛夷鼻炎丸(B)和空白样品
(C)的 HPLC图
Fig1 4 HPLC Chromatograms of pr im2O2glucosylcimifygin
reference substance (A) , Xinyi Biyan P ill ( B) ,
and negative sample ( C)
甲醇制成含升麻素苷 51 02、101 04、251 10、501 20、
751 30、1001 40 Lg/ mL 的溶液, 分别进样 10 LL, 测
定。以质量浓度为横坐标,峰面积为纵坐标进行回
归,得回归方程 Y= 1 5521 987 03 X+ 21 653 00, r=
01 999 86,结果表明升麻素苷在 501 02~ 10041 0 Lg
与峰面积呈良好的线性关系。
21 41 6 稳定性试验: 取同一供试品溶液 (批号
H00035)于 0、01 5、1、11 5、2、21 5、31 5、24 h进样,按
升麻素苷的峰面积计算, RSD为 01 73%, 表明升麻
素苷在 24 h内基本稳定。
21 41 7 重现性试验:取批号 H00035样品 6份,制备
供试品溶液,按上述色谱条件测定,根据峰面积计算
升麻素苷质量分数为11 21 mg/ g, RSD为11 17%。
21 41 8 加样回收率试验: 取辛夷鼻炎丸 (批号
H00035,含升麻素苷 11 21 mg/ g)约 1 g,精密称定,分
3组,分别精密加入 01236 8 mg/ mL升麻素苷对照品
溶液 41 5、51 0、515 mL,制备供试品溶液, 测定, 计算
得平均回收率为 1011 4%, RSD为1103%(n= 9)。
21 41 9 样品的测定:取10批辛夷鼻炎丸,制备供试
品溶液。分别精密吸取升麻素苷对照品溶液及供试
品溶液各 10 LL,进行 HPLC分析,测定结果见表 1。
表 1 辛夷鼻炎丸中升麻素苷的测定结果( n= 2)
Table 1 Determination of pr im2O2glucosylcimifygin
in Xinyi Biyan P ills ( n= 2)
批 号 升麻素苷/ ( mg# g- 1) 批 号 升麻素苷/ ( mg# g- 1 )
F00095 01 78 G00203 1101
F00080 01 92 H 00028 1136
F00090 11 02 H 00034 1143
G00111 11 11 H 00036 1122
G00131 11 13 J00022 0196
3 讨论
31 1 本品薄层色谱鉴别不受样品中其他药味的干
扰,专属性强,操作简便, 可作为本品定性鉴别。
31 2 测定波长的选择:取升麻素苷对照品溶液在
190~ 400 nm波长扫描,结果在 214、246、300 nm处
有最大吸收,参考5中国药典62005年版一部防风项
下的测定波长, 采用 254 nm为检测波长。
31 3 提取条件的选择:选用甲醇和丙酮作提取溶剂
进行比较,结果表明采用甲醇提取,样品中升麻素苷
的量明显比采用丙酮提取的高, 故选用甲醇作提取
溶剂。在试验中采用超声 15、20、30、40 min进行比
较,结果表明 20 min 以后, 延长超声时间对提取方
法基本无影响, 为了提高效率,故选择超声 20 min。
31 4 流动相的选择: 曾试用水2甲醇( 60 B 40) [ 3]、
01 04 mol/ L乙酸钠2甲醇( 70B30)作为流动相, 结果
发现采用流动相水2甲醇( 60 B 40)时,样品色谱中主
峰与杂峰很难达到基线分离, 以采用流动相 01 04
mol/ L乙酸钠2甲醇( 70B30)时样品色谱峰分离好,故
采用 0104 mol/ L乙酸钠2甲醇( 70B30)作为流动相。
参考文献:
[ 1] 尹靖先,邓晓鸿,车晓彦,等1 苍耳子的薄层层析鉴别研究[ J]1
华西药学杂志, 2005, 20( 1) :672691
[ 2] 中国药典[ S]1 一部1 20051
[ 3] 丘文珍1 HPLC法测定辛夷鼻炎丸中升麻素苷和 52O2甲基维
斯阿米醇苷的含量[ J]1中草药, 2003, 34( 5) : 42224241
HPLC2ELSD法测定补血颗粒中黄芪甲苷
朱虹云1 ,徐文峥1* , 刘帅英2
( 11 丽水市中心医院, 浙江 丽水 323000; 21 丽水市食品药品检验所,浙江 丽水 323000)
摘 要:目的 建立补血颗粒中黄芪甲苷的测定方法。方法 应用超声提取和高效液相色谱2蒸发光散射检测器
( HPLC2ELSD)检测, 采用 H ypersil ODS色谱柱 ( 250 mm@41 6 mm, 5 Lm) ;柱温 30 e ;流动相:乙腈2水( 35B 65) ;
#1247#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 8 期 2009年 8月
* 收稿日期: 2009201209 作者简介:朱虹云( 1961 ) ) ,女,浙江丽水人,主管药师,研究方向为医院药学。
* 通讯作者 徐文峥 Tel: ( 0578) 2681481 E2mail: lsxwz67@yahoo1 com1 cn
体积流量: 11 0 mL/ min;蒸发光散射检测器检测参数 :漂移管温度 1001 6 e ,氮气流量 21 7 L/ min。结果 黄芪甲苷
在 21 0~ 121 2 Lg时, 其线性关系良好( r= 01 999 4) ;平均加样回收率为 961 01% ( RSD 为 11 34% )。结论 该方法
快速简便、精密度好、灵敏度高, 可用于补血胶囊中黄芪甲苷的测定。
关键词:补血颗粒;黄芪甲苷;高效液相色谱2蒸发光散射检测器( HPLC2ELSD)
中图分类号: R2861 02 文献标识码: B 文章编号: 025322670(2009) 0821247203
补血颗粒是一种根据中西医结合研制的补血补
气类中成药。其中黄芪为方中主药, 其活性成分有
黄芪多糖和黄芪甲苷。黄芪甲苷的测定有薄层扫描
法、高效液相色谱法等[ 1~ 3]。由于黄芪甲苷在紫外
区仅有末端吸收并且十分不稳定,因此,本实验采用
高效液相色谱2蒸发光散射检测器(H PLC2ELSD)法
测定该制剂中黄芪甲苷,为补血颗粒质量标准的制
定提供参考。
1 仪器与试药
Agilent1100 高效液相色谱仪(美国安捷伦公
司) , Agilent1100色谱工作站; A lltech22000ES型蒸
发光散射检测器(美国奥泰科技公司)。
补血颗粒(自制) , 黄芪甲苷对照品(中国药品生
物制品检定所,批号 07812200607) ;乙腈、甲醇为色
谱纯,纯净水,其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
21 1 色谱条件: Hyper sil ODS 色谱柱 ( 250 mm @
41 6 mm, 5 Lm) ;柱温 30 e ;流动相:乙腈2水( 35B
65) ;体积流量: 110 mL/ min;蒸发光散射检测器检测
参数:漂移管温度 1001 6 e ,氮气流量 21 7 L/ min。
21 2 对照品溶液的制备:精密取黄芪甲苷对照品
101 39 mg,置 10 mL 量瓶中, 加甲醇溶解并加至刻
度,摇匀, 即得。
21 3 供试品溶液的制备:取补血颗粒样品 10袋, 精
密称定,研细,精密称取细粉 25 g, 加 2% KOH 甲醇
80 mL,冷浸过夜,超声提取 40 min, 提取液浓缩至
干,残渣加水 10 mL, 微热使溶解,用水饱和的正丁
醇振摇提取 5次,每次 40 mL。合并正丁醇液,用氨
试液充分洗涤 3次,每次 40 mL, 弃去氨液, 正丁醇
液蒸干, 残渣加水 5 mL 使溶解, 放冷, 通过 D2101
型大孔树脂(内径 11 5 cm, 长 12 cm) , 以水 30 mL
洗脱,弃去水液, 再用 40 %乙醇 50 mL 洗脱, 弃去
洗脱液, 继用 70 %乙醇 60 mL 洗脱, 收集洗脱液,
蒸干,用甲醇溶解并转移至 50 mL 量瓶中, 加甲醇
至刻度,摇匀,即得。同法制备缺黄芪药材的阴性供
试品溶液。
21 4 系统适用性试验及阴性对照试验:分别取黄芪
甲苷对照品溶液、补血颗粒供试品溶液和缺黄芪的
阴性供试品溶液各 10 LL 注入色谱仪中, 记录色谱
图,见图 1。可见对照品中黄芪甲苷峰峰形对称, 柱
效良好,而阴性供试品在黄芪甲苷峰相应的保留时
间处无干扰。
t/ min
* 2黄芪甲苷
* 2ast ragalosid e IV
图 1 黄芪甲苷对照品( A)、补血颗粒( B)和阴性样品( C)的 HPLC图谱
Fig1 1 HPLC Chroma tograms of astraga loside Ô reference substance ( A) , Buxue Granula ( B) , and negative sample ( C)
21 5 标准曲线的制备: 精密称取黄芪甲苷对照品
501 055 4 mg, 置 50 mL量瓶中, 加甲醇稀释并加至
刻度。分别精密量取 2、4、6、8、10 mL 置 10 mL 量
瓶中,甲醇稀释至刻度。精密量取溶液各 10 LL 注
入色谱仪,测定峰面积值。以黄芪甲苷峰面积积分
值的自然对数为纵坐标,进样质量的自然对数为横
坐标, 得回归方程为: Y= 8381 95X - 1 1701 6, r =
01 999 4。结果表明, 黄芪甲苷在 21 0~ 121 2 Lg 与
峰面积积分值呈良好的线性关系。
21 6 精密度试验:精密吸取供试品溶液 (批号
20080317) ,连续进样5次,每次进样10 LL,测定峰面
积,计算黄芪甲苷峰面积积分值的 RSD为01 53%。
21 7 稳定性试验: 取同一供试品溶液 ( 批号
20080317) ,分别在 0、4、6、24、48 h 进样 10 LL,记录
色谱图, 计算得黄芪甲苷峰面积值的 RSD 为
01 99%,表明溶液中黄芪甲苷在 48 h内稳定, 可以
满足实验要求。
21 8 重现性试验:取批号 20080317样品 5份,制备
供试品溶液,依法操作, 计算黄芪甲苷的质量分数,
结果其 RSD为 01 67%。
#1248# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 8 期 2009年 8月
21 9 回收率试验:采用加样回收率方法。精密称取
批号 20080317样品细粉适量,分别加入黄芪甲苷对
照品 01 420 1、01 504 0、01 588 0 mg, 制备供试品溶
液,进样,依法测定,计算回收率。结果表明,本方法
的平均回收率为 961 01% , RSD为 11 34% (n= 9)。
21 10 样品测定:取 3个不同批号的补血颗粒样品,
每批 6 份, 依法测定, 用回归方程计算, 得批号为
20070911、20080119、20080317 补血颗粒中黄芪甲
苷的质量分数分别为 111 62、111 86、121 07 mg/袋。
3 讨论
本品为复方中药颗粒剂, 许多成分干扰黄芪甲
苷的测定。根据实践工作发现, 薄层色谱法对薄层
条件要求比较苛刻, 重现性不理想;同时, 黄芪甲苷
无特征紫外吸收, 在紫外 203 nm处有末端吸收,采
用 HPLC2UV 检测时, 受流动相影响大, 基线不理
想,检测灵敏度较低。本次研究中,采用的蒸发光散
射检测器为通用型质量检测器, 检测时流动相在检
测器内挥发成气体, 样品组分形成气溶胶,进入检测
器产生响应,从而获得理想的基线和检测灵敏度, 克
服了紫外末端检测的不足。
试验中曾对黄芪甲苷的提取溶剂进行考察, 表
明在 2% KOH 甲醇中略溶。在供试品溶液的制备
中,采用超声 10、20、30、40、60 min 溶解, 结果显示
超声 40 min能使黄芪甲苷完全溶出,其他色谱条件
的优化还有待进一步的探索性试验工作。
参考文献:
[ 1] 中国药典[ S]1 一部1 20051
[ 2] 吴玉强,罗 轶1 HPLC2ELSD 法测定复方扶芳藤合剂中黄
芪甲苷 [ J]1中草药, 2006, 37( 9) : 1353213541
[ 3] 梁瑞雪,张新军,贾元印,等1 薄层扫描法测定尘肺清颗粒中
黄芪甲苷的含量[ J]1时珍国医国药, 2006, 9( 17) : 1689216901
苁黄补肾胶囊质量标准的研究
侯 峰, 刘 芳,莫启武*
(广州美晨药业有限公司,广东 广州 510075)
摘 要:目的 建立苁黄补肾胶囊的质量标准。方法 采用 TLC法鉴别处方中的肉苁蓉、熟地黄、菟丝子、五味子;
用 HPLC法测定肉苁蓉中的松果菊苷。其中 H PLC法采用 Kromasil2C18柱( 250 mm@41 6 mm, 5 Lm) ;柱温: 30 e ;流
动相为甲醇2乙腈21%醋酸溶液( 13B 10B 77) ;体积流量: 1 mL/min;检测波长为 334 nm。结果 TLC鉴别色谱特
征斑点明显;松果菊苷在 01 48~ 11 92 Lg 存在良好的线性关系, 平均回收率为 991 1% , RSD为 11 52%。结论 所建
立的 T LC和 HPLC法专属性强, 重复性好,可用于苁黄补肾胶囊的质量控制。
关键词:苁黄补肾胶囊;肉苁蓉;熟地黄;菟丝子;五味子;松果菊苷;薄层色谱;高效液相色谱
中图分类号: R2861 02 文献标识码: B 文章编号: 025322670(2009) 0821249204
苁黄补肾胶囊由肉苁蓉、熟地黄、菟丝子、五味
子(酒蒸)制成,丸剂标准收载于5国家药品监督管理
局国家中成药标准汇编6内科肾系分册,具有滋补肾
阴、强筋壮骨的功效。为了提高该药质量的可控性
和检验方法的专属性, 本研究建立了熟地黄、菟丝
子、五味子的薄层色谱鉴别方法,改变了肉苁蓉鉴别
供试品溶液的制备方法。通过试验, 发现检测本品
的毛蕊花糖苷存在比较大的干扰, 所以改为测定肉
苁蓉另一活性成分松果菊苷, 并建立了 H PLC检测
方法。
1 仪器和材料
紫外点样仪(上海安亭电子仪器厂) ; SPD )
10Avp 紫外检测仪(日本岛津公司) ; P4000四元泵
(美国热电公司) ; AT - 130色谱柱恒温箱(天津市
恒奥科技发展有限公司) ; HN1006超声清洗机(华
南超声设备厂) ; HM202 电子分析天平(日本 AND
公司) ; 4K15C高速冷冻离心机(德国 Sigma公司)。
硅胶 G(青岛海洋化工有限公司) ;甜菜碱(批号
8942200202)、52羟甲基糠醛(批号 1116262200402)、
五味子乙素(批号 7652200104)、山柰酚(批号 08612
200002)、松果菊苷(批号 1116702200502)对照品由
中国药品生物制品检定所提供;苁黄补肾胶囊( 450
mg/粒,批号 070701、070702、070703)及缺肉苁蓉、
熟地黄、菟丝子、五味子阴性样品为广州美晨药业有
#1249#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 8 期 2009年 8月
* 收稿日期: 2008210225 作者简介:侯 峰( 1976 ) ) ,男,湖北安陆人,工程师,毕业于西北大学,从事中成药的研发工作。
Tel: ( 020)37662297 E2mail: smal lhome@1631 com