全 文 ：14 位羟基进行修饰 ,并对衍生物进行了体外细胞毒
活性测试 ,其中 1 位羟基氧化后的衍生物在 MCF27
中显示出较高的活性 ,提示 1 位羟基对冬凌草甲素
的抗肿瘤活性起到一定的作用。具体的构效关系研
究正在进行中。
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龙血竭小鼠灌胃给药后血中移行成分的分析
陈 　旭1 ,雍克岚1 ,吕敬慈2 ,张天宝1 3
(11 上海大学生命科学学院 ,上海 　200444 ; 21 上海大学理学院 ,上海 　200444)
摘 　要 :目的 　对龙血竭进行中药血清药物化学研究 ,为确定龙血竭的药效成分奠定基础。方法 　在建立龙血竭
高效液相色谱指纹图谱的基础上 ,通过比较龙血竭提取物、含药血清和空白血清的 HPLC 指纹图谱 ,结合 LC2MS/
MS 检测技术确定龙血竭给药后的血中移行成分。结果 　在龙血竭含药血清中发现 6 个入血成分 ,其中 5 个都属
原型成分 ,分别为 3 ,4′2二羟基252甲氧基二苯乙烯、剑叶龙血素 B、4′2羟基24 ,2′2二甲氧基2二氢查耳酮 (新化合物) 、
剑叶龙血素 A 和龙血素 B ;1 个可能为原型成分或代谢产物。结论 　6 个入血成分是龙血竭在体内主要直接作用
物质 ,有助于阐明龙血竭的药效物质基础。
关键词 :龙血竭 ;血清药物化学 ; HPLC ;LC2MS/ MS
中图分类号 :R28411 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 2670 (2009) 03 0352 04
Analysis on migrating constituents absorbed into blood of mice after ig
administration of Resina D raconis
CH EN Xu1 , YON G Ke2lan1 , L U··J ing2ci2 , ZHAN G Tian2bao1
(11 School of Life Sciences , Shanghai University , Shanghai 200444 , China ; 21 College of Sciences ,
Shanghai University , Shanghai 200444 , China)
Abstract : Objective 　Serum p harmacochemist ry was performed to screen the bioactive constit uent s of
Resi na D raconis1 Methods 　Based on HPL C fingerp rint s of Resi na D raconis , t he migrating constit uent s
absorbed into blood were determined by comparing the H PL C fingerp rint s of ext raction of Resi na D raconis
( ERB) , herb serum sample , and cont rol serum sample , and wit h t he help of L C2MS/ MS1 Results 　Six
compounds absorbed into blood were detected , five of t hem were original in form which were 3 , 4′2di2
hydroxy252met hoxystilbene , cochinchinenin B , 4′2hydroxy24 , 2′2dimet hoxy2dihydrochalcone (a new com2
pound) , cochinchinenin A , and loureirin B , respectively. The other might be t he original constit uent or
t he metabolite1 Conclusion 　The six constit uent s absorbed into blood are possible bioactive component s of
Resi na D raconis i n v i vo1 Further research will help clarify t he bioactive constit uent s and mechanisms of
Resi na D raconis1
Key words : Resi na D raconis ; serum p harmacochemist ry ; HPL C ; L C2MS/ MS
·253· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 3 期 2009 年 3 月
3 收稿日期 :2008208208
基金项目 :上海市科委基础研究重点项目 (08J C1409500) ;上海大学优秀青年教师基金项目 (A1 07201122072002)
作者简介 :陈　旭 (1978 —) ,女 ,江西人 ,工程师 ,主要从事生物活性物质的研究。　Tel : (021) 66134592 　Fax : (021) 66132177 　
E2mail :xuchen @staff1 shu1 edu1cn
　　血竭为百合科植物剑叶龙血树 D racaena
cochi nchi nensis (Lour1 ) S1 C1 Chen 的含脂木材经
提取得到的树脂 ,1999 年国家药品监督管理局标准
WS32082 ( Z2016) 99 ( Z) 将其正式定名为“龙血竭”。
国内外研究血竭的重点主要体现在植化成分的分
离 ,以及在活血化瘀、抗炎止痛、抑菌、抗肿瘤等方面
的生物功能 ,而在治疗糖尿病方面仅少量报道 ,且停
留在初步动物实验和临床经验性医疗使用方
面[1 ,2 ] 。本研究组通过现代药学实验证明龙血竭及
其提取物具有显著的降血糖作用[3 ] 。研究龙血竭活
血化瘀和降血糖作用的药效物质 ,进行中药血清移
行成分研究 ,是开发多靶点治疗糖尿病及其并发症
的新药的快速、准确的捷径。
中药血清药物化学的方法是通过分析口服给药
后血清中的移行成分 ,从血清中分离确定靶向效应
成分群 ,进而确定中药体内直接作用物质[4～6 ] 。鉴
于此 ,本研究在龙血竭 H PL C 指纹图谱的基础上 ,
通过比较龙血竭提取物、含药血清和空白血清的
H PL C 指纹图谱 ,以及采用 L C2MS/ MS 检测技术 ,
对小鼠灌服龙血竭提取物后的血中移行成分进行分
析 ,为最终筛选出确切的龙血竭药效成分奠定基础。
1 　仪器与材料
111 　仪器 :高效液相色谱 Agilent 1100 系列 (美国
Agilent 公 司 ) , 四 极 杆2飞 行 时 间 质 谱 ( Q —
TOFMS)仪 Qultima 系列 (美国 Micromass 公司) ,
T GL —16 G型高速台式离心机 (上海安亭科学仪器
厂) ,N —EVA P Ⅲ恒温氮气吹干仪 (Organomation
Associates 公司) ,N —1001 旋转蒸发仪 (上海爱朗
仪器有限公司) ,DZF —6020 真空干燥箱 (上海益恒
实验仪器有限公司) 。
112 　药品和试剂 :龙血竭 (购于广西中医学院制药
厂 ,批号 :20050307) ;剑叶龙血素 B、剑叶龙血素 A、
龙血素 B 对照品均购于中国药品生物制品检定所
(批号 :1116602200301) 。甲醇 (色谱纯) ,乙腈 (色谱
纯 ,德国 Merk 公司) ,冰醋酸 (优级纯) 。
113 　动物 :动物为昆明小鼠 ,6 周龄 ,体质量 (25 ±
2) g ,雌雄各半 ,上海第二军医大学动物中心提供 ,
生产许可证号 :SCXK(沪) 200222006。
2 　实验方法
211 　龙血竭提取物的制备 :采用超临界 CO2 萃取 ,
萃取条件 :压力为 15 MPa ,温度为 40 ℃,时间为 2
h ,CO2 流量 30 kg/ h ,收集萃取残留物 ,并将其放入
回流装置中 ,用适量的丙酮 ,在 80 ℃下抽提 ,抽提液
浓缩后真空干燥 ,所得物即为龙血竭提取物。
212 　供试品溶液的制备 :提取物用蒸馏水配成质量
浓度为 50 mg/ mL 的混悬液 ,供小鼠灌胃用。提取
物用甲醇配成质量浓度为 011 mg/ mL 溶液 ,过
0145μm 滤膜 ,供高效液相色谱分析或液质联用分
析用。剑叶龙血素 B、剑叶龙血素 A、龙血素 B 对照
品用甲醇配制成质量浓度分别为 2010、2010、510
μg/ mL 的混合对照品溶液 ,过 0145μm 滤膜 ,供高
效液相色谱分析或液质联用分析。
213 　含药血清的制备[7 ] : 20 只小鼠分成空白组与
给药组 ,每组 10 只 ,给药组每天以 500 mg/ kg 的剂
量 ,按 011 mL/ 10 g 灌胃给药 ,每日 1 次 ,连续 7 d ,
末次给药前禁食 12 h ,末次给药 115 h 后眼眶静脉
窦取血 ,分别滴置于离心管中 ,空白组不给药其余同
上处理。离心管于3 000 r/ min 离心 10 min 后取其
上清液。取 1 mL 上清液于离心管中 ,加适量的乙
腈 ,快速混匀 ,超声后 ,3 000 r/ min 离心 10 min 后
取上清液 ,加入等量的醋酸乙酯萃取 3 次 ,合并萃取
液后 ,在氮气下吹干后 ,残渣用 1 mL 甲醇溶解 ,过
0145μm 滤膜备用。
214 　液相色谱条件 : 色谱柱为 Zorbax Eclip se
XDB2C18 (250 mm ×416 mm ,5μm) ;柱温 40 ℃;流
动相 :乙腈2水 (含体积分数为 011 %冰醋酸) (33 ∶
67) ;检测波长 :280 nm ;体积流量 :1 mL/ min。
215 　液质联用条件 :色谱条件为 Zorbax Eclip se
XDB2C18 (150 mm ×211 mm ,315μm) ,柱温 40 ℃;
流动相 : 乙腈2水 (含体积分数为 011 %冰醋酸 )
(33 ∶67) ;检测波长 : 280 nm ;体积流量 : 012 mL/
min。
质谱条件为电喷雾正离子模式检测 ,毛细管电
压和锥电压分别为 312 kV、50 V ,源温度为 105 ℃,
喷雾温度为 250 ℃,雾化气 45 L/ h ,喷雾气 480 L/
h ,Q2TOFMS 检测过程碰撞电压为 6 V 和 9 V。
3 　结果与讨论
311 　H PL C 分析结果 :通过龙血竭提取物、含药血
清和空白血清的 H PL C 指纹图谱比较 (图 12a～c) ,
可以发现检测到的含药血清样品中与提取物的色谱
保留时间相对应的为 1～6 号峰 ,初步肯定上述的 6
个峰为提取物入血的原型成分。2、5、6 号峰与混合
对照品的保留时间相对应 ,初步判定 2、5、6 号峰分
别为剑叶龙血素B、剑叶龙血素 A 和龙血素B (图 12
b～d) 。
312 　液质联用分析结果 :从含药血清中分析检测到
6 个成分 ,其中 5 个成分与龙血竭中相应成分的保
留时间的比较见表1 。根据文献报道[8 ,9 ] ,如果所
·353·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 3 期 2009 年 3 月
t/ min
a2空白血清　b2含药血清 　c2提取物 (011 mg/ mL) 　d2混合
对照品　22剑叶龙血素 B 　52剑叶龙血素 A 　62龙血素 B
a2cont rol serum 　b2herb serum 　c2ERB (011 mg/ mL ) 　d2
mixture reference substances 　22cochinchinenin B 　52co2
chinchinenin A 　62loureirin B
图 1 　给药后血清样品及对照品的高效液相色谱图
Fig11 　HPLC Chromatograms of serum after ig adminis2
tration of ERB and reference substances
测定的目标化合物与相比较的样品中相应化合物的
保留时间之间的 RSD 小于 2 % ,可以认定这两者为
同一物质。表 1 可知 ,含药血清与提取物相应成分
1、2、4、5、6 号峰的保留时间的 RSD 均小于 2 % ,因
此进一步判定 2、5 和 6 号峰分别为剑叶龙血素 B、
剑叶龙血素 A 和龙血素 B。
表 1 　含药血清与 ERB中相应成分保留时间( tR)的比较
Table 1 　Comparison of retention time of correspon2
ding peak in rerum containing drug and ERB
峰号
混合对照品
tR/ min
含药血清中
相应成分
tR/ min
提取物中
相应成分
tR/ min
含药血清与提
取物相应成分
tR 的 RSD/ %
1 121 92 13109 1130
2 14141 141 19 14133 1152
4 341 27 34153 0175
5 37121 371 10 37115 0129
6 41109 411 01 41105 0119
313 　给药后血中原型成分的确定 :在得到待测物的
[ M + H ] + 准分子离子峰后 ,再对产生的准分子离子
进行碰撞诱导解离 (collision induced dissociation ,
CID)分析 ,获得相应的子离子质谱图 ,从而获取有
关化合物的信息。由图 2 可知 ,混合对照品溶液中
2 号峰[ M + H ] + 的准分子离子峰m/ z为 287 ,产生
m/ z为 147、153 的子离子 (图 22c) ;5 号峰[ M + H ] +
的准分子离子峰m/ z为 287 ,产生m/ z为 151 的子离
子 (图 22b) ;6 号峰 [ M + H ] + 的准分子离子峰m/ z
为 317 ,产生m/ z为 181 的子离子 (图 22a) 。含药血
清中 2、5、6 号峰的准分子离子峰以及子离子的m/ z
与对照品的基本一致 (图 2) ,3 种物质的质谱断裂方
式见图 3 ,因此可以认为小鼠服用提取物后 ,剑叶龙
血素B、剑叶龙血素A 、龙血素B以原型成分吸收入
m/ z
图 2 　龙血素 B(a) 、剑叶龙血素 A( b)和剑叶龙血树素 B( c)对照品以及血清样品中
3 个目标化合物(a 3 、b3 、c 3 )的子离子质谱图
Fig12 　Product ion mass spectra of loureirin B (a) , cochinchinenin A ( b) , and cochinchinenin B ( c) ,
and three target compounds ( a 3 , b3 , c 3 ) in serum sample
·453· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 3 期 2009 年 3 月
血 ;进而确定了含药血清中 2、5、6 号峰分别为剑叶
龙血素 B、剑叶龙血素 A 和龙血素 B。
4 　结论
通过比较龙血竭提取物、含药血清和空白血清
的 H PL C 指纹图谱 ,及结合 L C2MS/ MS 检测技术
确定龙血竭给药后的血中移行成分。在龙血竭含药
血清中发现 6 个入血成分 ,5 个属原型成分 (1 号、2
号、4 号、5 号和 6 号峰) ,分别为 3 ,4′2二羟基252甲氧
基二苯乙烯、剑叶龙血素 B、4′2羟基24 ,2′2二甲氧基2
二氢查耳酮、剑叶龙血素 A 和龙血素 B。2 号、5 号
和 6 号峰通过对照品定性 ,1 号峰与 4 号峰是龙血
竭原粉经硅胶柱色谱、Sep hadex L H220 凝胶柱色谱 分离、制备色谱的分离纯化 ,并通过 IR、MS ( EI) 、1 H2NMR、13 C2NMR以及二维核磁 ( HMQC , HMBC和 D EP T)波谱分析及结构鉴定而确定的 ,其中 1 号峰已有人从龙血竭中分离得到鉴定为 3 ,4′2二羟基252甲氧基二苯乙烯[10 ] ;4 号峰是一新化合物 ,鉴定为4′2羟基24 , 2′2二 甲 氧 基2二 氢 查 耳 酮[ 11 ,12 ] , 经SciFinder 检索 ,在天然资源提取物与化学合成中都未见报道 ,结构式见图 4。3 号峰可能是原型成分也可能是原型成分的代谢产物 ,还有待进一步考证。在含药血清中发现的 6 个入血成分可能是龙血竭在体内主要直接作用物质 ,对其进行深入研究 ,有助于阐明龙血竭的药效物质基础及药效机制。
图 3 　3 个目标化合物的质谱断裂方式图
Fig13 　Fragmentation patterns in mass spectrum of three target compounds
　3 ,4′2二羟基252甲氧基
二苯乙烯 (1 号峰)
　　　　
4′2羟基24 ,2′2二甲氧基2二氢
查耳酮 (4 号峰)
图 4 　1 号峰和 4 号峰化合物的结构式
Fig14 　Chemical stuctures of compounds
( 1 # and 4 # peaks)
　　致谢 :上海出入境检验检疫局方晓明研究员在
实验方面的大力支持。
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