全 文 ：中草稿ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9,El·1411·
o 5 lO 15 20
0 5 10 15 20
t／nan
图1 冒公藤乙素(A)和雷公藤(B)的色谱图
Fig·1Chromatogramsft ipdiolide(A)
andT．willfordii(B)
美国健康研究所对其在福建省泰宁县的雷公藤
药材种植基地出产的雷公藤药材要求检测雷公藤甲
素和雷公藤乙素，以此作为衡量雷公藤药材质量标
准的依据。
本实验对两个活性成分采用同一提取方法、同
一色谱柱、同一体系、同一波长进行测定，方法简便，
而且在《中国药典》中雷公藤药材仅有鉴别项。对雷
0 5 lo 15 20
t|min
图2雷公藤甲素(c)和雷公藤(D)的色谱图
Fig．2Chromatogramsft itolide(C)
andT．willfordii(D)
公藤药材定量测定方法的研究可作为雷公藤药材质
量标准建立的重要参考。
参考文献：
[1]苏维广。孟江．雷公藤的临床应用[J]．辽宁中医杂志，
2003，30(10)：845—846．
[z]许静亚，杨峻，李乐真，等．雷公藤抗肿瘤的实验研究
[J]．中国中西医结合杂志，1992，12(3)：161—164．
[3]KupchanSM，CourtWA，DaileyRG．eta1．Triptolideand
tripdiolide．novelantil ukeniediterpenoidtriepoxidsfrom
Tripterygiumwillfordii[J]．JAmClaimS∞，I972，94：
7194．
[4]邓思珊，张韬，阙慧卿，等．雷公藤药材含量测定方法的
研究D]．中草药，2004，35(增刊)Ir198—199，
RP—HPLC同时测定枇杷叶中4种三萜酸
陈龙胜，忻呖，许舒雯
(安徽省分析测试中心，安徽合肥230031)
摘 要：目的建立同时测定枇杷叶中4种三萜酸成分2a一羟基齐墩果酸(I)、2a一羟基熊果酸(I)、齐墩果酸(I)
和熊果酸(IV)高效液相色谱。方法采用反相高效液相色谱法，使用Phenomenex—C。s柱(250mmX4．6mm，
pm)，流动相为甲醇一1．O％醋酸溶液(88，12)，体积流量0．8mL／min，柱温25℃，检测波长215nm。结果成分
I～IV在进样量1．O～6．0弘g均有良好线性关系．r=0．9999(雄一6)，I～IV的平均加样回收率分别为96．2％、
99．0％、101．4％、98．2％，RSD分别为0．64％、0．36％、0．31％、0．44％。结论该方法方便快速，结果准确可靠。
关键词：枇杷叶；三萜酸；反相高效液相色谱法
中图分类号：R282．6 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)09—14“一03
枇杷叶为蔷薇科植物枇杷Eriobotryajaponica
(Thunb．)Lindl．的干燥叶，是常用中药材之一，具
有止咳化痰、降气和胃之效，常用于支气管炎、肺热咳
嗽m2。。文献研究表明枇杷叶中三萜酸类化合物种类
丰富 其中齐墩果酸和熊果酸具有显著的抗炎、抗肿
瘤、促进免疫、保肝、强心等药理作用‘引。随着药理研
收稿日期：2007—12—15
基金项目：国家星火基金项目(2006EA710024)I合肥市人才发展基金项目
作者简介：陈龙胜(1980～)，男，硕士．主要研究方向为天然产物提取、分离和生物转化。
Tel：(0551)5145209E—mail：formatsky@tom．corn
万方数据
·1412· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9月
究进一步深入，发现2a-羟基齐墩果酸对人口腔鳞状
癌细胞(HSC一2)和人唾液腺癌细胞(HSG)具有抑制
生长的功能；2Q一羟基熊果酸对I型糖尿病和肥胖症
有着确切疗效，被称为“植物胰岛素，，[3。。目前文献只
报道了枇杷叶中齐墩果酸和熊果酸的高效液相色谱
法[“副，未见2a一羟基齐墩果酸、2n一羟基熊果酸定量分
析方法报道。因此，本实验建立了同时测定枇杷叶2a一
羟基齐墩果酸、2a一羟基熊果酸、齐墩果酸和熊果酸的
高效液相色谱法，并利用该方法测定安徽黄山产枇杷
叶中4种三萜酸量，结果表明该方法快速准确。
1仪器与试药
Angilentll00系列高效液相色谱仪，配备HP
化学工作站；GKCll4数显控温水浴锅，上海浦东新
区电理仪器厂。
2a一羟基齐墩果酸(I)、2a一羟基熊果酸(I)对
照品(本实验室自制，质量分数大于98％)，齐墩果酸
(Ⅲ)、熊果酸(Ⅳ)(质量分数95％，北京百灵威试剂
公司)，甲醇(色谱纯，美国天地公司)，二次蒸馏水，
冰醋酸、乙醇(分析纯，中国医药集团)。
枇杷叶样品采自安徽省黄山，为大红袍品种。由
鲍丽仙鉴定。
2方法与结果
2．1 色谱条件：色谱柱为Phenomenex—C18(250mm×
4．61Tim，5弘m)；柱温：27℃；流动相：甲酷1．O％醋酸
水溶液(88。12)；检测波长：215nm；体积流量：0．8
mL／min；进样方式：自动进样；柱温：25℃。
2．2对照品溶液的配制：将I～Ⅳ对照品放入烘箱，
在105℃干燥至恒质量，分别准确称取10．0mg对照
品，置入10．0mL量瓶中，以甲醇超声溶解，定容。
2．3供试品溶液制备：新鲜枇杷叶干燥至恒重后粉
碎过60目筛。取2．0g枇杷叶粉，加入90％乙醇溶液
20mL于90℃提取3h，提取3次，自然冷却后将所
得提取液合并用90％乙醇溶液定容至100mL。取
20．0mL提取液浓缩至5．0mL，加入40．0mL二次
蒸馏水滤过，将沉淀物干燥后甲醇溶解定容至25．0
mL，备用。
2．4线性关系的考察：将I～Ⅳ对照品溶液分别进
样1、2、3、4、5、6_uL，按照色谱条件测定峰面积，以峰
面积为纵坐标，以对照品进样量为横坐标，绘制标准
曲线，Y=3．342+350．371X，r=0．99999；
y=一1．411+325．538X，r=0．999；Y=
一19．153+417。334X，r=0．999；y=一3．249+
368．621X，，．=0．9999。
该色谱条件下，I～Ⅳ进样量在1．O～6．0pg，
线性关系良好。
2．5精密度试验：将4种三萜酸对照品5止各进样
6次，测定峰面积，结果4种三萜酸成分RSD分别为
I1．2％，I1．6％，10．8％，Tv0．9％。
2．6重现性试验：取编号为050106的样品按“2．3”
项下方法平行制备6份供试液，在“2．1”项色谱条件
下进样20pL分析，I～】＼『质量分数分别为7．20、
8．56、3．47、9．56mg／g，RSD分别为3．0％、2．6％、
2．7％、1．2％。
2．7 回收率试验：取5个已测定的枇杷叶样品各
1．0g，分别加入I～Ⅳ对照品5．0mg，按供试液制
备方法操作，并按上述色谱条件测定峰面积，4种成
分平均回收率分别为I96．2％(RSD=0．64％)、I
99．0％(RSD=0．36％)、I101．％(RSD=0．31％)、
Ⅳ98．2％(RSD=0．44％)。
2．8样品测定：在“2．3”项下供试样制备方法下，对
黄山所送5个批次枇杷叶中4种三萜酸的量进行测
定，结果见表1，其色谱图见图1。
裹1枇杷叶样品中4种三萜酸测定(一=3)
Table1 Determinationoffourtriterpeneacids
inE．japonicaleaves抽一3)
0 5 10 】5 20 25
t，min
卜2a-羟基齐墩果酸2—2a一羟基熊果酸3一齐墩果酸4一熊果酸
卜2a—hydroxyoleanolicac d2-2a—hydroxyursolicacid
3-oleanolicacid4-ursolicac d
图l对照品(A)与样品(B)色谱图
Fig．1Chromatogramofreferencesubstances
(A)andsamples(B)
万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9月·1413·
3讨论
3．1 提取条件的优化：通过正交设计实验考察了乙
醇浓度、温度、时间和料液比4个因素对有效成分转
移率的影响，结果发现当乙醇为90％，提取温度为90
℃，料液比为1 z 10时，提取3h为最优。在此条件下
提取3次后4种三萜酸有效成分转移率均在96．2％
以上，能够满足测定要求。
3．2水洗涤对测定效果的影响：在供试液制备中曾
将提取液直接进行HPLC分析测定，结果发现，由于
大量水溶性杂质的存在严重干扰了2a一羟基齐墩果
酸和2a一羟基熊果酸色谱峰的分离，增加测定结果不
确定性。通过洗涤可以去除水溶性杂质的干扰，使得
基线飘逸得到改善，测定效果准确性增强。对洗涤前
后样品中4种三萜酸定量测定结果表明，洗涤过程
不会造成成分损失。
3．3本实验建立的枇杷叶中4种三萜酸RP—HPLC
测定方法，具有操作简单、快速、准确的优点，为枇杷
叶质量控制提供了一个可靠的测定方法，同时也为
枇杷叶在治疗糖尿病和抗癌方面的研究提供了一个
定量分析方法。
参考文献：
El-IJudyWV．SivaP．Antidiabeticctivityofastandardized
extract(GlucosolTM)fromLagerstroemiaspeciosaleavesin
typeI diabeticsadose—dependencestudy口]．JEthno-
pharmacol·2003·87(4)：115·
[2]TaniguchiaS，ImayoshiY，KobayashiE．Productionof
bioactivetriterpenesbyEriobotryajaponicacalli[J]．
Phytochemistry，2002，59(3)l315．
[3]胡长平，陈龙胜，忻晒．反相高效液相色谱法测定枇杷叶
中的科罗索酸[J]．色谱，2006，24(5)：492．
[4]罗晓清，郭小仅．俞学炜．RP—HPLC法测定枇杷叶中熊果酸
和齐墩果酸的含量[J]．中国野生植物资源，2004，23(5)：
50．
[53任秀莲，魏琦峰，周春山．沉淀吸附法提取苦丁茶中的熊果
酸口]．中南大学学报，2004，35(4)·599．
附子中3种双酯型生物碱的定量分析
简 晖h2，董宁霞1，郑晗1，冯育林1’2，龚千锋1’¨，杨世林1’2
(1．江西中医学院，江西南昌 330006}2．中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，江西南昌330004)
摘 要：目的 建立附子中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的定量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法，选择
HypersilODS2色谱柱(250mm×4．6mm，5弘m)，以40rnmol／L乙酸铵溶液一乙腈为流动相梯度洗脱。检测波长
235nm。结果乌头碱、次乌头碱、新乌头碱均得到较好分离，分别在0．170～85、0．319～159．5、0．218～109腿呈
良好的线性关系，平均回收率为102．1％(RsD=1．84％)、97．7％(RSD一1．92％)、96．4％(RSD=2．51％)。结论
该方法简便、灵敏、准确，可用于附子的质量控制。
关键词：附子I乌头碱；次乌头碱；新乌头碱；高效液相色谱
中图分类号：R282．6 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)09—1413一02
附子为毛茛科植物乌头Aconitumcar ichaeli
Debx．根的加工品，具有回阳救逆、补火助阳等功
效[1]，是lf6i床常用的重要中药。附子生品有大毒，其
中所含的二萜双酯型生物碱既是有效成分，又是毒
性成分[2]，为保证I临床用药的安全有效，须严格控制
附子中此类生物碱的量。附子所含的二萜双酯型生
物碱中，较重要和量较高的有乌头碱、次乌头碱、新
乌头碱[3]，本实验采用高效液相色谱法同时测定这3
种双酯型生物碱的量，操作简便，准确度高，对附子
的质量控制和药效评价具有重要意义。
1仪器与材料
DionexU3000(T一3XOO柱温箱、PDA一3000
检测器、P一3400A分析泵、WPS自动进样器)，
KQ一100型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限
公司)。
乙腈、甲醇为色谱纯，乙酸铵、乙醚、氯仿等试剂
均为分析纯。盐附子购于四川江油恒源药业集团有限
公司，经本院生药教研室赖学文教授鉴定为正品附
子。乌头碱对照品(批号110720—200410)、新乌头碱对
照品(批号110799—200404)、次乌头碱对照品(批号
110798—200404)购于中国药品生物制品检定所。
2方法与结果
2．1色谱条件：HypersilODS2色谱柱(250mm×
4．6mm，5pm)I流动相：40mmol／L乙酸铵溶液一
收稿日期：2007—12—06
*通讯作者龚千锋Tell(0791)7118852E—mail,gongqf2002@163．corn
万方数据
RP-HPLC同时测定枇杷叶中4种三萜酸
作者： 陈龙胜， 忻旸， 许舒雯
作者单位： 安徽省分析测试中心,安徽,合肥,230031
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(9)
被引用次数： 2次

参考文献(5条)
1.Judy W V;Siva P Antidiabetic activity of a standardized extract(Glucosol TM)from Lagerstroemia
speciosa leaves in type Ⅰ diabetics a dose-dependence study[外文期刊] 2003(04)
2.Taniguchia S;Imayoshi Y;Kobayashi E Production of bioactive triterpenes by Eriobotrya japonica
calli[外文期刊] 2002(03)
3.胡长平;陈龙胜;忻旸 反相高效液相色谱法测定枇杷叶中的科罗索酸[期刊论文]-色谱 2006(05)
4.罗晓清;郭小仅;俞学炜 RP-HPLC法测定枇杷叶中熊果酸和齐墩果酸的含量[期刊论文]-中国野生植物资源
2004(05)
5.任秀莲;魏琦峰;周春山 沉淀吸附法提取苦丁茶中的熊果酸[期刊论文]-中南大学学报 2004(04)

本文读者也读过(10条)
1. 鞠建华.周亮.郑瑞霞.王春兰.杨峻山 高效液相色谱法测定中药枇杷叶中熊果酸的含量[期刊论文]-中国药学杂
志2003,38(9)
2. 何晓文.满铭辉.纵伟.HE Xiao-wen.MAN Ming-hui.ZONG Wei 分光光度法测定枇杷叶总三萜物质含量[期刊论文
]-郑州轻工业学院学报（自然科学版）2007,22(1)
3. 张锋.宋粉云.ZHANG Feng.SONG Fen-yun 枇杷叶中齐墩果酸和熊果酸含量的毛细管电泳高频电导法测定[期刊论
文]-时珍国医国药2010,21(8)
4. 张守梅.许奇志.张立杰.胡文舜.张丽梅 不同基因型枇杷叶片总黄酮含量的比较[会议论文]-2008
5. 韩小龙.陈开勋 薄层扫描法测定枇杷叶中熊果酸[期刊论文]-中草药2005,36(7)
6. 吕寒.陈剑.李维林.张涵庆.L(U) Han.CHEN Jian.LI Wei-lin.ZHANG Han-qing 枇杷叶中三萜酸类成分的提取工
艺研究[期刊论文]-时珍国医国药2007,18(11)
7. 胡长平.陈龙胜.忻旸.蔡群兴.HU Changping.CHEN Longsheng.XIN Yang.CAI Qunxing 反相高效液相色谱法测定
枇杷叶中的科罗索酸[期刊论文]-色谱2006,24(5)
8. 冷桂华.黄宏伟.叶文峰.王芳 枇杷叶中黄酮类化合物提取方法的研究[期刊论文]-安徽农业科学2007,35(25)
9. 李跃中.纵伟.董海丽 枇杷叶中熊果酸的提取、分离工艺研究[期刊论文]-广西轻工业2008,24(3)
10. 陈龙胜.蔡群兴.忻旸.陈涛.戴莹琦.CHEN Long-sheng.CAI Qun-xing.XIN Yang.CHEN Tao.DAI Ying-qi 正交试
验法优选枇杷叶中科罗索酸提取工艺的研究[期刊论文]-林产化学与工业2006,26(3)

引证文献(2条)
1.蔡雪萍.李松林.华俊磊.吕寒.李维林.鞠建明 HPLC-ELSD同时测定枇杷叶中6种三萜酸成分的含量[期刊论文]-中
国实验方剂学杂志 2013(1)
2.王晓燕.李多伟.何斌 枇杷叶中熊果酸及其衍生物的研究进展[期刊论文]-西北药学杂志 2012(1)


本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200809043.aspx