全 文 ：丹皮炭止血作用有效部位及作用机制研究
李 　娴 ,张 　丽 ,丁安伟 3
(南京中医药大学 江苏省方剂研究重点实验室 ,江苏 南京 　210046)
摘 　要 :目的 　首先确定丹皮炭止血作用的主要活性部位 ,进而探讨丹皮炭止血作用的机制。方法 　首先对丹皮
炭按不同溶剂极性及不同化学成分类型提取 ,以小鼠的出血时间 (B T) 和凝血时间 (CT) 为筛选指标对各部位进
行筛选 ;在此基础上以 Wistar 大鼠为研究对象 ,观察丹皮炭及其止血活性部位对大鼠血浆复钙时间 ( PRT) 、凝血
酶时间 ( TT) 、凝血酶原时间 ( PT) 、活化部分凝血活酶时间 (A PTT) 的影响。结果 　丹皮炭鞣质部位、醋酸乙酯
部位均可缩短小鼠的 B T 和 CT ;丹皮炭及其鞣质、醋酸乙酯部位均有缩短大鼠 PRT、TT、PT、A PTT 的作用。结
论 　确定丹皮炭鞣质部位、醋酸乙酯部位为丹皮炭饮片止血作用的主要活性部位 ;丹皮炭及其止血活性部位通过
激活内源性和外源性凝血系统中的多种凝血因子 ,发挥其止血、凝血作用 ,且丹皮炭饮片作用强于其活性部位。
关键词 :丹皮炭 ; 活性部位 ; 止血
中图分类号 :R28611 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0821278203
　　牡丹皮为毛茛科植物牡丹 Paeoni a su f f ruti2
cosa Andr . 的干燥根皮 ,是中医临床常用中药之
一 ,始载于《神农本草经》,列为中品 ,已有两千余年
的药用历史。元代始即将牡丹皮制炭后用于临床 ,
以治疗各种出血性疾病。长期的临床实践证明丹皮
炭具有明显的止血作用 ,可用于吐血、崩漏及其他多
种出血病症 ,疗效确切[1 ] 。然而目前国内外对丹皮
炭止血机制的研究尚不深入。本实验首先对丹皮炭
止血作用主要活性部位进行筛选研究 ,在此基础上
进一步探讨丹皮炭止血作用的机制。
1 　材料
111 　动物 : 小鼠 ( ICR 种 ) , 雌雄各半 , 体质量
(18 ±2) g ,购自扬州大学比较医学中心 ,许可证号 :
SCXK (苏) 2007 —0001。Wistar 大鼠 ,雄性 ,体质
量 (180 ±20) g ,购自扬州大学比较医学中心 ,许可
证号 :SCXK (浙) 2003 —0001。
112 　药品与试剂 :云南白药 :云南白药集团股份有
限公司 (批号 :20080112) ; CMC2Na :中国医药 (集
团) 上海化学试剂公司 ;氯化钙 :南京化学试剂厂 ;
枸橼酸钠 :天津市科密欧化学试剂开发中心。试剂
盒 :凝血酶时间 ( T T ,批号 ST G10301225) 、凝血酶
原时间 ( P T ,批号 ST G20102236) 、活化部分凝血活
酶时间 (A P T T ,批号 ST20201229) ,均为北京世帝
科学仪器公司生产。
113 　仪器 :L G—PAB ER 凝血仪 (北京世帝科学仪
器公司) 、离心机 (上海安亭科学仪器厂) 、电热恒温
水浴锅 (上海精宏实验设备有限公司) 。
114 　供试品制备 :云南白药临床用量为 2 g ,实验
动物按临床用量 20 倍给药 ,即 01667 g/ kg。取云
南白药粉末 81004 g 加入 240 mL 0. 5 % CMC2Na
研磨均匀即得。牡丹皮药材购自安徽亳州 ,经南京
中医药大学中药鉴定教研室吴启南教授鉴定为毛茛
科植物牡丹 P. su f f ruticosa Andr . 的干燥根皮。
丹皮炭 (十灰散) 临床用量为 9 g ,实验动物按
临床用量 20 倍给药 ,即 3 g/ kg。取适量生品牡丹
皮 ,280 ℃炒制 20 min ,制成牡丹皮炭品。适当粉
碎后 200 目筛。取丹皮炭粉末 36 g ,加入 240 mL
015 % CMC2Na 研磨均匀即得。
取 36 g 丹皮炭粉末 ,按《中国药典》2005 年版
中鞣质的提取方法进行提取 ,将提取液浓缩到 1 g/
mL 后加入 240 mL 015 % CMC2Na 混匀即得。
取适量丹皮炭粉末 ,石油醚索氏提取 2 h 后 ;药
渣再以 70 % 乙醇回流提取 2 h ,回收乙醇后 ;制备
成丹皮炭的 70 % 乙醇提取部位浸膏。取 2134 g 浸
膏 (相当于 36 g 丹皮炭粉末) 加入 240 mL 0. 5 %
CMC2Na 混匀即得。
取适量丹皮炭粉末 ,以 95 % 乙醇回流提取 2 h
回收乙醇 ;用 1 % HCl 酸化 ,抽滤 ;滤液用氨水碱
化 ,使 p H 值约等于 10 ;氯仿少量多次萃取后 ,回收
氯仿 ;制备成丹皮炭的氯仿部位浸膏。取 2152 g 浸
膏 (相当于 36 g 丹皮炭粉末) 加入 240 mL 0. 5 %
CMC2Na 混匀即得。
·8721· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 8 期 2009 年 8 月
3 收稿日期 :2008210214　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家“十一五”科技攻关项目 (2006BAI09B006202) ; 江苏省研究生培养创新工程 (CX08B 200Z)
作者简介 :李　娴 (1980 —) ,女 ,博士研究生 ,主要从事中药炮制与复方研究。Tel : 13611517960 　E2mail : lixian0813 @126. com3 通讯作者　丁安伟　Tel : (025) 85811523
取适量丹皮炭粉末 ,以 70 % 乙醇回流提取 2
次 ,每次 2 h ;回收乙醇 ,用醋酸乙酯少量多次萃取
后 ,回收醋酸乙酯 ;制备成丹皮炭的醋酸乙酯部位浸
膏。取 11896 g 浸膏 (相当于 36 g 丹皮炭粉末) 加
入 240 mL 0. 5 % CMC2Na 混匀即得。
取适量生品牡丹皮 ,适当粉碎后过 200 目筛 ,
取生丹皮粉末 45 g (相当于 36 g 丹皮炭粉末) 加入
240 mL 0. 5 % CMC2Na 研磨均匀即得。
2 　方法与结果
211 　对小鼠出血时间 (B T) 的影响[ 2 ] :取小鼠 80
只 ,雌雄各半 ,随机分为 8 组 ,每组 10 只 ,分别为对
照组 (015 % CMC2Na) 、云南白药组、丹皮生品组、
丹皮炭品组、丹皮炭鞣质组、丹皮炭 70 % 乙醇提取
部位组、丹皮炭氯仿部位组、丹皮炭醋酸乙酯部位
组。将各供试品分别按 014 mL/ 20 g 每天 ig 给药
1 次 ,连续 5 d。于第 5 天给药后 1 h ,剪去鼠尾 3
mm ,在有血液流出时开始计时 ,每隔 10 s 用滤纸轻
轻拭血 1 次 ,直到拭后不再出血为止 ,从开始出血至
停止出血 ,所历时间即为小鼠 B T ,结果见表 1 (结果
统计用 t 检验 ,下同) 。实验结果表明 ,丹皮炭及其
鞣质部位、70 % 乙醇提取部位、醋酸乙酯部位均可
缩短小鼠出血时间 ,其中丹皮炭醋酸乙酯部位止血
作用尤佳。
21 2 　对小鼠凝血时间 ( CT) 的影响[2 ] :取小鼠80
表 1 　各丹皮炭提取物对小鼠 BT及 CT的影响 ( x±s , n = 10)
Table 1 　Effects of extracts from carbonized Cortex Moutan
on BT and CT of mice ( x ±s , n = 10)
组别 剂量/ (g ·kg - 1 ) BT/ s CT/ s
对照 - 192170 ±34128 165170 ± 26160
云南白药 01667 140181 ±21130 3 117100 ± 31147 3 3
丹皮生品 3100 269120 ±30141 152100 ± 10143
丹皮炭品 3100 112110 ±26192 3 42160 ± 9120 3 3
丹皮炭鞣质 3100 133150 ±29137 3 80122 ± 30162 3 3
丹皮炭 70 %乙醇提取部位 3100 120100 ±31169 3 106133 ± 33135 3
丹皮炭氯仿部位 3100 188100 ±27120 113100 ±27112
丹皮炭醋酸乙酯部位 3100 109160 ±37133 3 3 93150 ± 27151 3 3
　　与对照组比较 : 3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01
　　3 P < 0105 　3 3 P < 01 01 vs cont rol group
只 ,雌雄各半 ,分组及给药方法同 211 项。于第 5 天
给药后 1 h ,用眼科弯镊迅速摘取一侧眼球 ,即有血
液流出 ,在洁净载玻片的两端各滴 1 滴直径约 5
mm 的血滴 ,立即计时 ,每隔 10 s 用清洁大头针自
血滴边缘向里轻轻拨动 1 次 ,并观察有无血丝挑起。
从采血开始至挑起血丝 ,所历时间即为小鼠 CT 。
另一滴血供最后复验。结果见表 1。结果表明 ,丹
皮炭及其鞣质部位、醋酸乙酯部位、70 % 乙醇提取
部位均可缩短小鼠凝血时间 ,其中丹皮炭、丹皮炭鞣
质部位、丹皮炭醋酸乙酯部位凝血作用尤佳。
213 　对大鼠血浆复钙时间 ( PR T) 的影响[2 ] :取大
鼠 60 只 ,雄性 ,随机分为 6 组 ,每组 10 只 ,分别为对
照组 (015 CMC2Na) 、云南白药组、丹皮生品组、丹
皮炭品组、丹皮炭鞣质组、丹皮炭醋酸乙酯组。将各
供试品分别按 2 mL/ 100 g 每天 ig 给药 1 次 ,连续
5 d。于第 5 天给药后 1 h ,颈动脉插管取血 415
mL ,加入放有枸橼酸钠 (318 %) 溶液 015 mL 的离
心管内抗凝 ,以 3 000 r/ min 离心 10 min ,分离血浆
备用。取试管 5 支 ,每管加入混合血浆 011 mL ,放
入 37 ℃水浴中温育 1 min ,然后各加入氯化钙 011
mL 。混匀后再放入 37 ℃水浴中 ,同时开始计时。
1 min 后每隔 15 s 缓慢倾斜试管 1 次。记录自加
Ca2 + 至纤维蛋白形成 ,液面不动所需时间 ,计算 5
支试管平均值 ,即为该供试品组大鼠 PR T。结果见
表 2。实验结果表明丹皮炭品 ,丹皮炭鞣质部位以
及醋酸乙酯部位均有缩短大鼠 PR T 的作用 ,表明
它们均有一定的凝血作用。其中丹皮炭品较其鞣质
提取部位以及醋酸乙酯部位凝血作用强。
214 　对大鼠 T T、P T、A P T T 的影响[ 2 ] :取大鼠 60
只 ,雄性 ,随机分为 6 组 ,每组 10 只 ,分组及给药方
法同 213 项。于第 5 天给药后 1 h ,颈动脉插管取血
415 mL ,加入放有枸橼酸钠 (318 %) 溶液 015 mL
的离心管内抗凝 ,以 3 000 r/ min 离心 10 min ,分离
血浆备用。按各指标试剂盒的要求进行 T T、P T、
A P T T 的测定 ,结果见表 2。
表 2 　各丹皮炭提取物对大鼠 PRT、TT、PT、APTT 的影响 ( x ±s , n = 10)
Table 2 　Effects of extracts from carbonized Cortex Moutan on PRT, TT, PT, and APTT of rats ( x ±s , n = 10)
组别 剂量/ (g ·kg - 1) PR T/ s T T/ s P T/ s AP T T/ s
对照 - 112100 ± 8101 371 30 ±31 60 171 30 ±1131 14139 ±1191
云南白药 01 667 80101 ±13107 3 3 351 72 ±11 55 141 82 ±1100 3 3 13161 ±1114
丹皮生品 31 00 168139 ±31115 361 85 ±11 94 161 54 ±1179 15127 ±3146
丹皮炭品 31 00 70164 ±16197 3 3 321 88 ±21 95 3 3 151 71 ±0198 3 3 12103 ±1162 3 3
丹皮炭鞣质 31 00 80132 ±17152 3 3 331 19 ±31 86 3 151 99 ±1140 3 12125 ±2147 3
丹皮炭醋酸乙酯 31 00 83130 ±21129 3 3 341 30 ±21 68 3 161 43 ±0175 12109 ±0103 3
　　与对照组比较 : 3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01
　　3 P < 0105 　3 3 P < 01 01 vs cont rol group
·9721·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 8 期 2009 年 8 月
　　实验结果表明丹皮炭品、丹皮炭鞣质部位及醋酸
乙酯部位均有缩短大鼠 TT 的作用。说明三者均能
较好地提高凝血过程中纤维蛋白原的利用度 ,但丹皮
炭的鞣质部位以及醋酸乙酯部位对凝血过程中纤维
蛋白原利用度的提高作用没有丹皮炭整体效果好。
实验结果表明丹皮炭品、丹皮鞣质部位均有缩短
大鼠 PT 的作用。说明丹皮炭品以及丹皮炭的鞣质
部位均能通过影响外源性凝血系统以及血浆中凝血
因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的活性产生凝血作用 ,但是丹皮炭
品作为一个整体比丹皮炭的鞣质部位作用强。
实验结果表明丹皮炭品、丹皮炭鞣质部位及醋
酸乙酯部位均有缩短大鼠 A P T T 的作用。说明丹
皮炭品以及丹皮炭的鞣质部位、醋酸乙酯部位均能
通过影响内源性凝血系统以及血浆中凝血因子 Ⅷ、
Ⅸ、Ⅺ、ⅩⅡ的活性产生凝血作用 ,但是丹皮炭品作
为一个整体比丹皮炭的鞣质部位以及醋酸乙酯部位
作用强。
3 　讨论
　　目前国内外对牡丹皮药理作用的研究多集中于
生品 ,牡丹皮的炮制作用及丹皮炭止血机制还没有
深入研究。为探讨丹皮炭止血的机制 ,本实验首先
对丹皮炭止血作用主要活性部位进行筛选研究。结
果表明丹皮炭具有一定的止血、凝血作用 ,并初步确
定了其止血作用主要活性部位为丹皮炭鞣质部位以
及醋酸乙酯部位。通常炭药是通过以下途径发挥止
血作用 :首先饮片炒炭后炭素增加 ,加强吸附作用 ,
使局部止血作用增强[3 ] ;其次炒炭后炭药中的鞣质
相对增多 ,而鞣质具有止血和收敛作用 ,能达到止
血、凝血的目的[4 ] ;再次饮片炒炭后钙离子增多 ,而
钙离子是凝血系统中的重要离子 ,它对内源性、外源
性凝血系统和血小板有激活作用 ,使纤维蛋白原转
化为纤维蛋白 ,使血小板聚集 ,从而起到促进止血、
凝血的作用[5 ] 。
PR T 能反映内源性凝血系统的活性 , T T 可以
反映内源性凝血过程第三期中纤维蛋白原的利用
度 ;而 A P T T 反映了内源性凝血系统诸因子如凝血
因子 Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、ⅩⅡ的活性。本实验结果表明 ,丹皮
炭品、丹皮炭鞣质部位及醋酸乙酯部位均有缩短大
鼠 PR T、T T、A P T T 的作用 ,说明三者均能影响内
源性凝血系统 ,加速纤维蛋白原的利用度以及对内
源性凝血系统中的凝血因子 Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、ⅩⅡ表现出明
显的激活作用 ,达到止血、促进凝血的作用。PT 能
反映外源性凝血系统的活性 ,其长短与外源性凝血系
统中凝血因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的活性有关。丹皮炭品、
丹皮炭鞣质部位均有缩短大鼠 PT 的作用 ,说明两者
可通过影响外源性凝血系统以及激活凝血因子Ⅰ、Ⅱ、
Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的活性发挥止血、促进凝血的作用。
实验中同时发现丹皮炭作为一个整体比其鞣质
部位、醋酸乙酯部位具有更强的止血能力 ,说明丹皮
炒炭后也许是多成分通过多途径产生了止血作用 ,即
不仅对内源性和外源性凝血系统产生影响 ,是否还对
凝血途径中的纤溶系统、血小板的功能产生一定影
响 ,还有待于对丹皮炭止血机制进一步深入研究。
参考文献 :
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药 , 2008 , 39 (4) : 63126341
越橘中原花青素抑制新生大鼠心肌成纤维细胞增殖及其作用机制
王艳春1 ,任 　旷1 3 ,顾饶胜1 ,杨世杰2
(11 吉林医药学院 药理教研室 ,吉林 吉林 　132013 ; 21 吉林大学基础医学院 药理教研室 ,吉林 长春 　130021)
摘 　要 :目的 　研究越橘中原花青素对血管紧张素 Ⅱ (angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ) 诱导新生大鼠心肌成纤维细胞
(cardiac fibroblast , CFb) 增殖的影响及其作用机制。方法 　用 Ang Ⅱ诱导新生大鼠 CFb 增殖 ,采用 M TT 法检测
细胞增殖 ,EL ISA 法测定 Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及转化生长因子β1 ( T GF2β1 ) 的量 ,硝酸还原酶法、分光光度法检测
·0821· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 8 期 2009 年 8 月
3 收稿日期 :2009203212　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :吉林省科技厅发展计划项目资助课题 (200705405)
作者简介 :王艳春 (1972 —) ,女 ,副教授 ,博士 ,研究方向为心血管分子药理学。
Tel : (0432) 4560023 　E2mail : wangyanchun1972 @163. com3 通讯作者　任　旷　Tel : (0432) 4560301 　E2mail : renkuang @sina. com