全 文 ：·1054· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月
川芎嗪、阿魏酸及其配伍对心肌缺血再灌注模型大鼠的
保护作用及对黏附分子的影响
杨家荣1，张密霞2，常亮堂2，庄朋伟2，李慧颖2，冯英2，张艳军2
(1．天津市第一中心医院药剂科，天津300192l2．天津中医药大学，天津300193)
摘要：目的观察JIl芎嗪、阿魏酸及其配伍对心肌缺血再灌注模型大鼠的保护作用。方法122只SD大鼠随机
分为对照组．模型组，假手术组，盐酸川芎嗪高、低剂量(18、9mg／kg)组，阿魏酸高、低剂量(3、1．5mg／kg)组及盐
酸川芎嗪(9mg／kg)配伍阿魏酸(1．5mg／kg)组，舌下iv给药3d。末次给药后5min，制备大鼠心肌缺血再灌注
模型。再灌后6h检测血清肌酸磷酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)水平，再灌后24h检测缺血半暗带黏附分子
表达。结果与假手术组比较，模型组血清CK、LDH显著升高(尸<0．05)；心脏微血管内皮细胞表达黏附分子水
平升高。各用药组不同程度降低血清CK、LDH水平，减少心肌组织E选择素、P选择素、ICAM—lmRNA表达，其
中盐酸川芎嗪配伍阿魏酸作用显著。结论 川芎嗪、阿魏酸及其配伍均可以通过抑制内皮细胞黏附分子E选择素、
P选择素、lCAM一1mRNA表达减轻心肌缺血再灌注损伤，其中盐酸川芎嗪配伍阿魏酸作用显著。
关键词：心肌缺血再灌注；川芎嗪；阿魏酸；黏附分子
中图分类号：R286．2 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)07—1054一03
随着人们生活水平的不断提高和人类寿命的延
长，心血管疾病的发病率呈不断升高趋势，心肌梗死
及其溶栓后的缺血再灌注损伤严重威胁着人类的健
康。近年来，白细胞在缺血再灌注损伤中的作用越来
越受到重视，白细胞内皮细胞黏附是白细胞经内皮
迁移游出，在组织间募集的关键步骤，是白细胞导致
缺血再灌注损伤，发挥病理学效应的先决条件。
在前期的实验中发现[1]，川芎嗪、阿魏酸可以不
同程度降低体外培养人心脏微血管内皮细胞细胞间
黏附分子一1(ICAM一1)、P选择素、E选择素mRNA
的表达，在本实验中选用川芎嗪、阿魏酸单独及配伍
给药，观察其对心肌缺血再灌注模型大鼠的保护作
用及对黏附分子的影响。
1材料与方法
1。1 动物：SD大鼠122只，雄性，体质量(220±
10)g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提
供，合格证号：SCX(京)2007—0001。
1．2实验药品：盐酸川芎嗪，质量分数98．5％，批
号07030一A；阿魏酸，质量分数98％，批号
20070108，均由天津市一方科技有限公司提供；黄芩
苷，天津中医药大学提取，质量分数91％。
1．3实验试剂：肌酸磷酸激酶(CK)试剂盒、乳酸
脱氢酶试剂盒(LDH)由中生北控生物科技股份有
限公司提供。TRNzol总RNA提取试剂盒：F5120，
天根生化科技(北京)有限公司产品；TaKaRa
Primescript⋯RTReagentKit(PerfectReal
Time)：BK60l；TaKaRaSYBRRPremixExTaqTM
(PerfectRealTime)：BK4403，均为宝生物工程
(大连)有限公司产品。
1．4实验仪器：300半自动生化分析仪，荷兰威图；
ML795PowerLab多通道生理记录仪，澳大利亚；
UVPC2401型分光光度计，日本岛津公司；AllegraTM
64RCentrifuge离心机，Beckman，美国；ABI7300
定量PCR仪，美国；DM530核酸蛋白分析仪
(DNA／RNAProteinAnalyzer)，Beckman，美国。
1．5 动物分组及给药：122只大鼠随机分为：对照
组，模型组，假手术组，盐酸川芎嗪高、低剂量(18、9
mg／kg)组，阿魏酸高、低剂量(3、1．5mg／kg)组，
盐酸JII芎嗪(9mg／kg)配伍阿魏酸(1．5mg／kg)
组，假手术组10只，其余各组每组16只。对照组、
模型组、假手术组给予生理盐水，各给药组于造模前
2d每天舌下iv给药0．25mL／1009，于第3天给药
后造模。
1．6大鼠心肌缺血再灌注模型的制备[z矗]：乙醚麻
醉后，将大鼠仰卧位固定于手术台上，术前舌下iv
药物，于左胸第3～5肋间打开胸腔暴露心脏，在左
心耳与动脉圆锥之间，左冠状动脉起始处稍往下约
4mm，用0／7带线缝合针穿过心肌浅层，打一活结
(第 个结为活结)结扎冠状动脉造成心肌缺血，关
闭胸腔，将丝线线头留于胸腔外，检测心电图，30
收稿日期：2007—11-16
基金项目：天津市教育委员会基金资助项目(01—21002)
作者简介：杨家荣(1968一)，女，天津人，学士，副主任药师，主要研究方向为中药的合理使用．
万方数据
中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月·1055·
min后松开结扎线，行心肌再灌注，再次检测心电
图。其中假手术组只穿线不结扎，对照组大鼠不进行
手术处理。造模过程中死亡大鼠剔除，动物存活率为
65．6％。实验动物模型成功标准：在心肌缺血再灌注
过程中伴有心电图ST段变化或QRS波增宽；
NBT染色法将心脏染色后可见明显的缺血／坏
死区。
1．7指标检测方法
1．7．1生化指标：再灌后6h眼内眦取血，3000r／
rain离心15rain，取血清，半自动生化分析仪检测
CK、LDH。
1．7．2RT—PCR检测：再灌后24h摘取心脏，立即
冻于液氮，根据试剂盒说明书用RTPCR法检测半
暗带ICAM一1、P选择素、E选择素mRNA的表达。
PCR引物由上海生物工程技术服务有限公司合成，
ICAM一1[4]，正 向 引 物： 5-CGTGGCGTC—
TTACACCT一37，反向引物：5’一TTAGGGCCTCC—
TGAGC一37，产物80bp；E选择素[引，正向引物：57一
GGCGATTCAGAACAAGGAAG一3’，反向引物：
57一TCTCTCGTCATTCCACATGC一3’，产物200
bp；P选择素[6]，正向引物：57一CAATAAGACTCT—
CACGGCGGAGGC一37，反向引物：5-CAGGTG—
TAGCTCCCAATGGTCTCG一37，产物231bpkp
actin[3]，正向引物：5-AGAGGGAAATCGT‘G—
CGTGAC一3’，反向引物：5-CGATAGTGATGA—
CCTGACCGT一37，产物138bp。
1．8统计学方法：用SPSS10．0软件包进行统计
学处理，数据用z±s表示，方差分析用F检验，组
间比较用q检验。
2结果
2．1 对心肌缺血再灌注大鼠血清CK、LDH水平
的影响：结扎冠状动脉左前降支30min，再灌注6h
后，模型组与假手术组、对照组比较，血清CK、LDH
均显著升高(P
型组比较，各用药组除盐酸川芎嗪高剂量外，均可降
低血清CK水平，盐酸川芎嗪配伍阿魏酸组、盐酸川
芎嗪低剂量组与模型组比较，差异显著(P
嗪高、低剂量组外，各给药组均可降低血清LDH水
平，其中，盐酸川芎嗪配伍阿魏酸、阿魏酸低剂量组
与模型组比较差异显著(P
2．2对心肌缺血再灌注大鼠心肌缺血半暗带黏附
分子表达的影响：RT—PCR仪上检测各样本黏附分
子表达，根据Ct值(每个反应管内的荧光信号到达
设定的域值时所经历的循环数)以假手术组为标准，
计算各组基因表达为假手术组的倍数，表达倍数一
2-[《再育育甄陌鬲再z订盯朔『目面i西卜(西1r手耳趸瓦磊iz—归刁唾旧面i西)]
与假手术组比较，模型组E选择素、P选择素、
ICAM一1mRNA表达均升高。各用药组与模型组比
较，盐酸川芎嗪配伍阿魏酸组可显著降低E选择素、
P选择素、ICAM一1mRNA表达，结果见表2。
表1川芎嗪、阿魏酸及其配伍对心肌缺血再灌注大鼠
血清CK、LDH水平的影响(j土$，万一10)
Table1 Effectofligustrazine，ferulicacid，andtheir
compatibilityonCKandLDHlevelsin erum
ofischemia-reperfusionrats(z士s，露=10)
删 。。0：。，。u‰
LDH／
(U·L一1)
与假手术组比较：4P<0．05；与模型组比较：。P<0．05
4P
心肌黏附分子表达的影响(工士s，露一4)
Table2 Effectsofligustrazine，ferulicacid，andtheir
compatibilityonexpressionofadhesion
moleculesinmyocardiumof schemla-
reperfusionrats(i士s，n一4)
与模型组比较：。尸
3讨论
心肌再灌注损伤发生的机制主要有：钙离子超
载、氧自由基损伤、白细胞激活、内皮细胞自稳态调
节失控、血管紧张素加重心肌损伤等。其中自细胞与
血管内皮细胞的相互黏附和作用，是调节白细胞浸
润，引起缺血再灌注损伤的重要环节。缺血区白细胞
与内皮细胞的活化及表面黏附分子的表达则是引起
白细胞在局部浸润、发挥细胞毒作用的先决条件。
万方数据
·1056· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月
在心肌缺血再灌注损伤中活化的内皮细胞释放
ICAM一1、P选择素、E选择素，三者介导白细胞与内
皮细胞的黏附。缺血再灌注后白细胞黏附和聚集于
缺血组织的血管中，大量白细胞机械性阻塞微血管
限制再灌流，活化的中性粒细胞(PMN)释放大量
的毒性物质如超氧阴离子、H。O。及酶类物质，还释
放大量炎性介质和细胞因子，吸引更多的白细胞进
入组织，形成恶性循环，从而加剧缺血再灌注损伤。
因此有效地控制白细胞内皮细胞的黏附，可能成为
预防及治疗缺血再灌注损伤的有效方法。
本研究结果表明，心肌缺血再灌注后可引起血
清中CK、LDH显著升高(尸
芎嗪配伍阿魏酸组均可降低血清CK水平，其中盐
酸川芎嗪配伍阿魏酸作用最好。阿魏酸高、低剂量组
及盐酸川芎嗪配伍阿魏酸组均可降低血清LDH水
平，其中，盐酸川芎嗪配伍阿魏酸及阿魏酸低剂量作
用显著。以上结果表明在所选单体中除川芎嗪高剂
量组外各用药组均可减轻心肌缺血再灌注损伤。
进一步通过RT—PCR法检测缺血半暗带
ICAM一1、P选择素、E选择素mRNA的表达，来探
讨各用药组减轻心肌缺血再灌注损伤的机制。与假
手术组比较，模型组E选择素、P选择素、ICAM一1
mRNA表达均升高。各用药组与模型组比较，盐酸
川芎嗪配伍阿魏酸组可以显著降低E选择素、P选
择素、1CAM一1mRNA表达。
通过本实验，优选出川芎嗪和阿魏酸的配伍，可
减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤，其作用机制之一可
能为抑制内皮细胞黏附分子ICAM一1、E选择素、P
选择素mRNA表达。
参考文献：
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积雪草苷大鼠在体肠吸收动力学研究
黄怀鹏，刘彩霞
(河北平安健康集团，河北石家庄050021)
摘要：目的研究积雪草苷的在体肠吸收机制。方法采用大鼠在体肠灌流试验，利用HPI。C法测定积雪草苷的
量，分别研究药物浓度和吸收部位对积雪草苷吸收的影响。结果 在25～100t-g／mL，小肠吸收速率常数(疋)和
表观吸收系数(尸a。。)无显著性差异。各肠段的K。和P。，，有显著性差异，十二指肠、空肠、回肠、结肠的K。分别为
(0．0298±0．0043)、(O．0365±0．0076)、(O．0335士0．0081)、(O．0070--4-0．0015)min，P。pp分别为(3．42±0．63)×
10一、(4．02±1．07)×10～、(3．79±0．77)×10一、(1．72±0．43)×10_3em·min一。结论一定范围的药物浓度对
积雪草苷的K。和P。，，无影响，其吸收机制为被动扩散。
关键词：积雪草苷；液相色谱法；肠吸收动力学
中圈分类号：R285．61 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)07—1056—03
积雪草为伞形科植物积雪草Centellaasiatica
(L．)Urban的干燥全草，积雪草始载于《神农本草
经》，具有清热利湿、解毒消肿之功效。积雪草含有积
雪草苷、羟基积雪草苷、积雪草酸、羟基积雪草酸等
多种三萜类化合物，积雪草苷为积雪草中的主要活
性成分‘“。本研究采用大鼠在体肠灌流的方法建立
收稿日期：20080115
基金项目：河北省中小企业创新基金(C7C1303192001)
作者简介：黄怀鹏(1971一)．男，河北省ff家庄市人，博士．副研究员，硕上生导师。主要研究方向为中药新药研究与开发，发表论文40余
篇，参编专著3部，获省部级奖励3项，申请专利lo项。Tel：(0311)86109893E—mail：huan971526@163．eom
万方数据
川芎嗪、阿魏酸及其配伍对心肌缺血再灌注模型大鼠的保护
作用及对黏附分子的影响
作者： 杨家荣， 张密霞， 常亮堂， 庄朋伟， 李慧颖， 冯英， 张艳军
作者单位： 杨家荣(天津市第一中心医院药剂科,天津,300192)， 张密霞,常亮堂,庄朋伟,李慧颖,冯英
,张艳军(天津中医药大学,天津,300193)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(7)
被引用次数： 3次
参考文献(6条)
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200807032.aspx