全 文 ：·1140· 中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月
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银耳孢子多糖TFA结构的研究
徐文清1’2，高文远¨，王雪姣2
(1．天津大学药学院，天津300070；2．中国医学科学院放射医学研究所，天津300192)
摘要：目的研究从银耳孢子粉Tremellafuciformis中提取分离所得中性多糖银耳孢子多糖A(TFA)的结构特
征。方法利用糖组成分析、甲基化、还原水解乙酰化及GC—MS、NMR分析，确证其结构。结果TFA的相对分子
质量为73000，糖组成分析显示由半乳糖、甘露糖、葡萄糖和2个七碳糖组成。多糖TFA的甲基化产物，经水解、还
原、乙酰化，通过GC—MS分析表明，主要含有1，6连接的半乳糖，不同位置连接的甘露糖，另外还有2个七碳糖，末
端为端基连接的甘露糖和葡萄糖。结论TFA为一多分支的结构复杂的新结构杂多糖，为首次发现。
关键词：银耳；多糖，七碳糖；甲基化分析
中围分类号：0636．1；Q539文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)08—1140一03
银耳TremellafuciformisBerk．是一种高等真
菌，属于有隔担子菌亚纲银耳科。银耳是世界公认的
珍贵食用菌和重要药材，具有润肺滋阴的作用。银耳
的现代研究起步较晚，从20世纪60年代晚期才有报
道。从20世纪70年代开始，国内外对银耳化学成分
的研究主要集中在多糖上。目前从银耳子实体中得
到银耳多糖有酸性杂多糖、中性杂多糖[1~4】。大量生
物实验表明，银耳多糖具有提高免疫功能，抑制肿
瘤、抗放射等生物活性[5~8]。从银耳孢子粉中，我国
学者吴梧桐提取得到3种多糖，仅对其单糖组成进
行了研究，对其详细结构未见报道[9’101。本实验从银
耳孢子粉中水提得到一种均一体中性多糖，与以往
的报道相比，其单糖组成不同，笔者对其结构进行了
详细研究，发现该多糖为一多分支的结构复杂的新
结构杂多糖，为首次发现。药理实验表明该多糖具有
预防放射损伤的作用。
I实验部分
1．1材料和仪器：单糖对照品葡萄糖、阿拉伯糖、半
乳糖、甘露糖、岩藻糖、木糖、鼠李糖均为Phamacia
公司出品。多糖相对分子质量分布测定所用的标准
品为Dextran系列，SephadexG一200和DEAE—
DextrangelA一25均为Pharmacia公司出品。硼氢化
钠、三氟乙酸、碘甲烷、二甲基亚砜均为国产试剂
(AR)级。二甲基亚砜，加4A的分子筛干燥后重蒸，
碘甲烷用前重蒸。
气相色谱仪为Shimadzu一9A型。气质联用仪
为ShimadzuGC—MS—OP2010。核磁共振仪为
Unity—Plus400，红外光谱仪为MAGNA一560FT—
IR，旋光仪为MC241，高效液相色谱仪为Shimadzu
LC一10A，柱TSKG4000PWXL(300mm×6mm)，
监测器Shodex。银耳孢子粉由中国医学科学院生物
技术研究所药厂提供，由天津中医药大学张丽娟教
授鉴定。
1．2提取与分离：取150g银耳孢子发酵粉，用3L
水煮提5h，冷却至室温后，将提取液离心。提取后的
残渣再用水煮提，冷却后离心，合并2次上清液，浓
缩至微黏稠，加3倍量乙醇，静置后抽滤取沉淀。沉
淀用少许乙醚洗，置真空干燥器中干燥，得粗多糖80
g。取10g粗多糖，加500mL蒸馏水，加热溶解，
Sevage法除蛋白质，茚三酮法检测至无蛋白质为
止。取除尽蛋白质的溶液浓缩，加3倍量乙醇，静置
后抽滤取沉淀，得精制银耳多糖5．25g。取3g精制
银耳多糖，经DEAE—DextrangelA一25分离，得到2
个银耳多糖，分别经SephadexG一150分离后，透析，
收稿日期：2007—11—26
基金项目：天津市科技发展计划应用基础重点项目(033801711)
作者简介：徐文清，女，研究员。Tel：(022)85683049E—mail：xuwenqin967@yahoo．corn．cn
*通讯作者 高文远Tel：13312076345E—mail．．pharmgao@tiu．edu．cn
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月·1141·
得到2个多糖，分别为TFA和TFB。多糖TFA
0．56g；多糖TFB1．62g。多糖TFA经HPLC检测
为单一对称峰。
1．3 纯度及相对分子质量测定[11。：样品TFA及标
准品多糖分别经HPLC分离，根据峰型判断样品纯
度，由标准品多糖的相对分子质量对数与洗脱体积
求得标准曲线，再由标准曲线求得样品的重均相对
分子质量。
1．4糖组成分析[12’131
1．4．1水解及纸色谱：TFA5mg用2mol／L三氟
乙酸封管于120℃水解2h，除去三氟乙酸后溶于
水。用纸色谱检测样品所含的糖组分。纸色谱：
(WhattmanN01)色谱滤纸，展开剂：正丁醇一冰醋
酸一水(4：1：5)，显色剂：苯胺一邻苯二甲酸。
1．4．2还原、乙酰化、气相色谱分析：将水解后的样
品溶于3mL蒸馏水中，加入20mg硼氢化钠于室温
还原2h，用冰醋酸破坏过量的硼氢化钠，减压蒸干。
加Ac20和无水毗啶各1mL，100℃反应1h进行乙
酰化。反应完成后减压蒸除过剩的醋酐和吡啶。衍
生物溶于CHCl。后进行气相色谱分析。
1．5甲基化分析[1“：10mgTFA充分干燥后，溶于
3mLDMSO中，搅拌溶解后加入50mg干燥的粉末
状NaOH，搅拌至大部分溶解后，水浴下缓慢加入2
mLCH。I，室温搅拌1h。减压蒸去过量的CH。I，用蒸
馏水透析3d。取透析带内的溶液冷冻干燥。如此重
复4次，至红外光谱检测无羟基吸收峰为止。对上述
甲基化完全的多糖，先用90％的甲酸解聚6h，再用2
mol／L三氟乙酸封管于120℃水解2h，按1．4．2还
原、乙酰化方法制备其甲基化的糖醇乙酰化衍生物。
衍生物溶于CHCl。后进行气相一质谱联用分析。
1．6部分酸水解[1引：100mgTFA用0．1mol／L三
氟乙酸，于100℃水解1h，减压蒸干。将水解产物溶
于水中，透析3d。透析带内的溶液浓缩，冷冻干燥。
用糖组成分析法检测其单糖组成。
1．7 NMR分析：TFA溶于D。O中，在D。O中加两
滴丙酮为内标，于核磁共振仪上测定。
1．8红外光谱和旋光度测定：TFA用KBr压片，甲
基化的多糖用石蜡油压片在红外光谱仪上测定红外
吸收。旋光度的测定是将TFA配成一定浓度的水溶
液，于数字旋光仪上测定旋光度。
2结果与讨论
2．1银耳孢子多糖的色谱分离：银耳孢子多糖经
DEAE—DextrangelA一25分离，用NaCI为洗脱液，
苯酚一硫酸法检测糖的质量分数。如图1，得到两部
分，先流出的组分为TFA，经SephadexG一150反复
分离后，得到分布均一的多糖。
f
皇
函
旦
＼
趣
嫡
60 120 200 250 400
V／mL
图1 DEAE—DextrangelA·25分离粗多糖的色谱
Fig．1ChromatogramofcrudepOIysaccharide
byDEAE—DextrangelA-25
2．2银耳孢子多糖TFA的分布和相对分子质量测
定：在HPLC中呈现为单一对称的尖峰，表明其为均
一多糖组分。根据标准曲线lgM一9．399653—
0．2915961T，确定TFA重均相对分子质量为
73000。
2．3 银耳孢子多糖TFA的理化性质：比旋度
■弦+154．4(o．01，H。O)，该多糖能溶于水和二甲
基亚砜，不溶于乙醇等有机溶剂。元素分析结果，C
39．77％，H为6．68％，符合多糖的组成比例，不含
N、P等。紫外扫描未见蛋白质的特征吸收峰。红外
光谱在3406am-1的强宽峰为分子问及分子内羟基
吸收峰，2928cm-1为C—H键伸缩振动，1421～
1 155为C—H键的变角振动。1000～1155为糖环上
C—O—C醚键的不对称伸缩振动。
2．4 TFA完全水解分析：TFA经2mol／L三氟乙
酸完全水解，所得产物经纸色谱和气相色谱表明含
有半乳糖、甘露糖、葡萄糖、2个七碳糖，未见葡萄糖
醛酸。经硫酸一咔唑反应[1引，证明不含糖醛酸。核磁
共振碳谱未见低场羰基的化学位移，由此可以证明
是中性糖。几种单糖的摩尔比经气相分析确定接近
为7：3：1：1：1。
2．5 TFA部分酸水解分析：TFA部分酸水解后，
透析带内的次级糖经纸色谱和气相色谱分析，由半
乳糖和甘露糖组成。
2．6 TFA甲基化分析：TFA甲基化后GC—MS数
据见表1。经过NIST数据库检索和分析，结果表明，
TFA主要连接方式为1，6连接的半乳糖。同时含有
端基连接的甘露糖；1，3，6连接的甘露糖和少量1，
2，4连接的甘露糖。葡萄糖仅以端基连接一种方式。
同时还有 2，3，1，7连接的glycer—D—
glucoheptopyranoside和1，3，5，7连接的glycer—D—
mannoheptopyranoside2个七碳糖。此结果表明
TFA主链由1，6连接的半乳糖和1，3，6连接的甘露
万方数据
·1142· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8,el
裹1 甲基化的TFA糖醇乙酰化衍生物的气相一质谱分析结果
Table1 GC-MSAnalysisofalditolalditolsderivedfrommethylTFA
糖组成。分枝点在甘露糖上。侧链分枝由1，2，4连接
的甘露糖、2个七碳糖组成。末端为端基连接的甘露
糖和端基葡萄糖组成。根据上述结果推测TFA主链
的结构如下：
r一1Gal61Gal6_1GaPJGal61GalS_ ,sMan6-]n-1Gal6—
2．7 TFA核磁共振分析：TFA核磁共振，
1H—NMR仅能提供是糖类物质的化学位移。但在
13C—NMR谱中，异头碳区在艿104处有一较强的信
号，归属为含量较高半乳糖的C一1的信号，艿71．904
为1，6连接的半乳糖C一6向低场移动的信号。占
77．691归属为C一2的信号；占79．686为C一4的信号；
艿76．483为C一3的信号；艿75．865为C一5的信号，表
明半乳糖为Q—D一半乳呋喃糖。同时还出现了甘露糖
C一6在艿63．7的信号。
2．8活性分析：对于7．5Gy137Cs了射线照射的放
射损伤小鼠，提前3天预防给予TFA，可明显减轻射
线对小鼠造血系统的损伤，脾结节、脾指数以及股骨
DNA量与对照组比较，差异显著。表明TFA可预防
射线对小鼠的损伤。
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银耳孢子多糖TFA结构的研究
作者： 徐文清， 高文远， 王雪姣
作者单位： 徐文清(天津大学药学院,天津,300070;中国医学科学院放射医学研究所,天津,300192)， 高
文远(天津大学药学院,天津,300070)， 王雪姣(中国医学科学院放射医学研究所,天津
,300192)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(8)
被引用次数： 1次

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