全 文 ：相比, 差异不显著 (P > 0105)。另外在各时间段, 胸
腺的细胞凋亡率均高于脾脏和骨髓的细胞凋亡率至
少 1 倍; 且随时间延长胸腺细胞凋亡率逐渐升高, 表
明胸腺细胞对射线较为敏感, 且修复需要较长的
时间。
4　讨论
　　放射线可通过直接和间接作用, 损伤细胞
DNA、生物膜以及其他生物分子, 引起细胞周期紊
乱, 从而造成细胞坏死和凋亡[5～ 7 ] , 而免疫器官 (胸
腺和脾脏)和造血器官 (骨髓)对放射线又极为敏感,
故射线很容易加重机体免疫功能低下或紊乱, 使淋
巴细胞失去调节机体免疫的作用, 使造血干细胞失
去造血活性, 进而加速这些细胞的凋亡。
胸腺和脾脏作为参与免疫功能调节的重要免疫
器官, 是高辐射敏感的细胞群。一般情况下, 机体受
辐射后会引起胸腺、脾脏指数下降, 细胞凋亡增加,
机体免疫功能降低。本实验中辐照小鼠胸腺、脾脏指
数的急剧下降证明了这一点。卷柏组小鼠的胸腺和
脾脏指数高于模型组, 胸腺和脾脏细胞凋亡率明显
低于模型组, 表明卷柏有效部位能够显著抑制辐射
造成的小鼠胸腺、脾脏细胞的凋亡, 从而减轻照射损
伤小鼠胸腺、脾脏的萎缩, 即其对免疫器官有辐射防
护作用。卷柏有效部位可降低辐射小鼠骨髓细胞凋
亡率, 即卷柏有效部位对造血组织也具有辐射防护
作用。
综上所述, 卷柏有效部位即水部位具有抗辐射
作用, 其抗辐射作用的机制可能与其能抑制机体因
受辐照造成的正常免疫细胞凋亡, 提高机体免疫功
能和保护造血组织, 从而提高了小鼠因放疗的适应
性和对有害刺激的抵御能力有关[8 ] , 至于其具体的
机制有待进一步研究。
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知母总黄酮对溴酸钾诱发小鼠肝损伤的保护作用①
李满妹1, 江　涛1, 黄杰昌2, 姚新生1Ξ , 栗原博1Ξ
(11 暨南大学中药及天然药物研究所, 广东 广州　510632; 21 广州莱泰制药有限公司, 广东 广州　510635)
摘　要: 目的　研究知母总黄酮对溴酸钾 (KB rO 3) 诱发小鼠肝损伤的保护作用。方法　200 m gökg KB rO 3 ip 诱发
小鼠肝损伤模型, 分别测定小鼠血浆丙氨酸氨基转移酶 (AL T )、NO、肝组织丙二醛 (M DA ) 水平、抗氧化能力指数
(ORA C)、谷胱甘肽 (GSH ) 及谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH 2Px) 活性。结果　与模型组相比, 知母总黄酮可以明显
降低因 KB rO 3引起的小鼠血浆AL T 水平, 保护因 KB rO 3诱发的肝损伤。此外, 知母总黄酮有效地提高应激小鼠肝
组织匀浆的 ORA C、GSH 及 GSH 2Px 活性, 降低血浆中NO 及M DA 水平。结论　知母总黄酮对 KB rO 3诱发的小
鼠肝损伤具有一定的保护作用, 其作用机制可能部分来自于清除自由基和抑制脂质过氧化过程。
关键词: 知母; 总黄酮; 肝损伤; 氧化应激; KB rO 3
中图分类号: R 28515　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253- 2670 (2008) 02- 0252- 04
　　知母为百合科植物知母A nem a rrhena asp hod e2
loid es Bunge 的干燥根茎, 知母中富含皂苷和黄酮
类化合物, 临床上用于清热泻火、生津润燥[1 ]。近年
来国内外对知母皂苷的药理活性已有一些研究报
道, 但有关知母总黄酮研究工作甚少。基于黄酮类化
合物的抗氧化活性, 本研究以溴酸钾 (KB rO 3) 诱发
·252· 中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 2 期 2008 年 2 月
① 收稿日期: 20072062053 通讯作者　姚新生　栗原博　T el: (020) 85221352　Fax: (020) 85225849　E2m ail: H iro sh i- Kurihara@ 163. com
小鼠肝损伤的氧化应激模型[2～ 5 ] , 探讨知母总黄酮
对氧化应激小鼠血浆丙氨酸氨基转移酶 (AL T ) 水
平、肝组织NO 释放能力、抗氧化能力指数 (oxygen
radica l ab so rbance capacity, ORA C )、丙 二 醛
(M DA )、谷胱甘肽 (GSH ) 和谷胱甘肽过氧化物酶
(GSH 2Px) 水平的影响, 评价知母总黄酮对 KB rO 3
诱发的小鼠肝脏氧化应激性肝损伤的保护作用。
1　材料与方法
111　药品、试剂与仪器: 知母总黄酮由广州莱泰制
药有限公司提供, 批号 050801。62H ydroxy22, 5, 7,
82tet ram ethylch rom an222carboxylic acid ( T ro lox,
为维生素 E 的水溶性衍生物)、2, 2′2azob is ( 22
am idinop ropane) d ihydroch lo ride (AA PH )、荧光素
钠均为日本和光纯药株式会社产品。GSH (Koh jin
Co. , L td, 日本) , 辛烷磺酸钠 (SO S, Tokyo Kasei
Kogyo Co. , L td, 日本) ; AL T、M DA 及 GSH 2Px
测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。其余试
剂均为国产分析纯。甲醇为 F ischer 色谱纯。M K3
型酶标仪 (L ab system , H elsink , 芬兰) ; GEN H io s
系列荧光酶标仪 (T ecan Inc, M aennedo rf, 瑞典) ;
日本 H itach i 高效液相色谱仪和 E icom 公司
ECD—100 型电化学检测器; UL TRA 2TU RRA X
T 8 型组织匀浆机 ( IKA L abo rtechn ik, Stanfen, 德
国 ) ; 3—18K 型台式高速冷冻离心机 (Sarto riu s,
Go　¨ t t ingen, 德国 ) ; BS210S 电子分析天平, (Sarto2
riu s, Go　¨ t t ingen, 德国 ) ; pH S—25 型酸度计 (上海
伟业仪器厂)。
112　动物分组及模型制备: 7 周龄 18～ 22 g 雄性
清洁级昆明种小鼠购自广东省医学实验动物中心
[ 合格证号 SCXK (粤) 2003—2002 ]。饲养温度
(23±2) ℃, 照明时间每天 12 h。饲养 1 周后进行实
验。动物随机分为正常组、模型组、知母总黄酮低、
中、高剂量 (125、250、500 m gökg) 组, 共 5 组, 每组
10 只。各组连续 5 d、每天 1 次 011 mL ö10 g ig 给予
知母总黄酮化合物水溶液, 正常组给予等容量水。第
5 天给药 015 h 后, 一次性 ip 200 m gökg KB rO 3生
理盐水溶液[2 ] , 正常组小鼠 ip 等容量生理盐水。6 h
后将小鼠乙醚麻醉, 心脏采血, 并置于肝素处理过的
离心管中以 5 000 röm in 离心 5 m in 分离血浆, 用
于测定AL T 和NO。同时取肝组织, 以 3% 高氯酸
制成 5% 肝组织匀浆, 12 000 röm in 离心 15 m in 后
取上清液, 经 0145 Λm 微孔滤膜过滤后, 测定 GSH
水平; 以生理盐水制成 10% 肝组织匀浆, 3 000 rö
m in 离心 15 m in 后, 取上清液测定蛋白量、GSH 2Px
活性、ORA C。
113　血浆中 AL T 活性测定: 血浆样品直接以赖氏
法 (R eitm an2F rankel) 测定 AL T 活力, 按试剂盒
说明操作。
114　肝组织的M DA 测定: 5% 生理盐水肝组织匀
浆液在 4 ℃ 条件下以 3 000 röm in 离心 10 m in, 取
上清液稀释成 2% 后以考马斯亮蓝蛋白试剂盒测
定蛋白量。肝组织中M DA 水平使用M DA 检测试
剂盒测定。
115　肝组织的 GSH 2Px 测定: 肝组织中 GSH 2Px
活性采用试剂盒方法检测。
116　肝组织的 GSH 测定: 使用N acala i T esque 公
司 Co smo sil 系列 150 mm ×416 mm 5C 18柱, 流动相
为 99 mmo löL 磷酸盐缓冲液 (pH 2. 5) , 1% 甲醇,
200 m göL SO S, 5 m göL ED TA , 磷酸盐缓冲液由磷
酸二氢钠配制, 用磷酸调 pH 值至 215 使用[6 ]。柱温
25 ℃, 体积流量为 1 mL öm in, 电压为 600 mV 及进
样体积为 15 ΛL。标准对照 GSH 以 011 mo löL HC l
溶解并稀释后 - 20 ℃ 保存。对照品储备液的制备
过程需要在低温条件下进行操作。
117　肝组织的 ORA C 测定: 参照 Ku rihara 等方
法[7 ]并加以改进。96 孔板每个微孔中加入不同浓度
的待测样品溶液 20 ΛL , 再加入磷酸钾缓冲液 20 ΛL
和 AA PH 140 ΛL (终浓度 1218 mmo löL ) , 最后添
加荧光素钠 20 ΛL 至终浓度为 63 nmo löL , 并启动
反应, 迅速将酶标板置于预置温度 37 ℃ 荧光酶标
仪中开始测定。采用动力学方式, 每 2 m in 测定一个
点, 至荧光强度衰减为零为止。
118　血浆和肝组织 NO 测定: 参照 Park 等[8 ]方法
并加以改进, 取 40 ΛL 血浆加入 160 ΛL Griess 试
剂 [ 011% 柰乙二胺溶液与 1% 磺胺 (5% ) 磷酸溶
液, 使用前 12 h 内等体积混合后静置 20 m in ], 550
nm 波长测定溶液吸光度 (A ) 值。根据NO 标准曲
线计算NO 水平。
119　统计学处理: 实验数据以 x ±s 表示, 用 Stu2
den t′s t 检验进行统计学处理。
2　结果
211　对 KB rO 3诱发氧化应激小鼠血浆 AL T 水平
的影响: 与正常组相比, 模型组小鼠血浆AL T 水平
明显升高 (P < 0101)。知母总黄酮各剂量组均能降
低 KB rO 3负荷小鼠血浆AL T 水平, 其中高、中剂量
组血浆AL T 水平明显低于模型组 (P < 0105) , 低
剂量组也显示一定的降低作用, 各剂量组间显示一
定的量效关系 (表 1)。
·352·中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 2 期 2008 年 2 月
表 1　知母总黄酮对 KBrO 3诱发氧化应激小鼠血浆 AL T、NO 及肝组织ORAC、MDA、GSH、GSH-Px 水平的影响 (x±s, n= 10)
Table 1　Effect of tota l f lavone of A. asp hodeloides on levels of AL T and NO in plasma , ORAC, MDA ,
GSH, and GSH-Px in l iver tissue of stress m ice induced with KBrO 3 (x±s, n= 10)
组别
剂量ö
(m g·kg- 1)
AL T ö
(U ·L - 1)
ORA C
M DA ö
(mmo l·m g- 1)
NO ö(Λmo l·mL - 1)
血浆 肝
GSH ö
(Λg·g- 1) GSH 2Pxö(U ·mL - 1)
正常 - 8215±1119 217±014 2910±913 1014±112 911±116 9612± 418 3716±315
模型 - 42612± 3163 3 018±0143 3 5813±4113 1315±1193 1518±2143 3 6919± 2143 1811±3113 3
知母总黄酮 125 32016±1316 118±013 3513±819 917±119 814±210△△ 7315± 811 2116±118
250 29013±1115△ 210±012△ 2711±514△ 919±115 812±114△△ 6912± 912 2613±414
500 28016±1014△ 214±013△△ 3218±612△ 911±019△ 719±114△△ 8419±1017 2912±319△
　　　与正常组比较: 3 P < 0105　3 3 P < 0101; 　与模型组比较: △P < 0105　△△P < 0101
　　　3 P < 0105　3 3 P < 0101 vs no rm al group; 　△P < 0105　△△P < 0101 vs model group
212　对 KB rO 3诱发氧化应激小鼠肝组织M DA 水
平的影响: 与正常组相比, 模型组小鼠肝组织M DA
水平明显升高 (P < 0105)。知母总黄酮各剂量组均
能降低氧化应激小鼠肝组织M DA 水平, 其中高、中
剂量组明显低于模型组 (P < 0105) (表 1)。
213　对 KB rO 3诱发氧化应激小鼠肝组织 ORA C
的影响: 与正常组相比, 模型组小鼠肝组织的
ORA C 值明显降低 (P < 0101)。知母总黄酮对
KB rO 3负荷小鼠肝组织 ORA C 的下降有明显减缓
作用。与模型组相比, 知母总黄酮高、中剂量组有显
著性差异 (P < 0105) , 低剂量组也显示一定的抗氧
化作用, 各剂量组间显示一定的量效关系 (表 1)。
214　对 KB rO 3诱发氧化应激小鼠血浆及肝组织中
NO 水平的影响: 与正常组相比, 模型组小鼠肝组织
中 NO 水平均明显升高 (P < 0105、0101)。知母总
黄酮高剂量组能显著降低 KB rO 3负荷小鼠血浆NO
水平 (P < 0105) , 中、低剂量组对血浆 NO 水平的
升高也显示一定的改善作用, 但无显著性差异 (P >
0105)。此外, 知母总黄酮各剂量组均能显著降低
KB rO 3负荷小鼠肝组织 NO 水平 (P < 0101) , 见
表 1。
215　对 KB rO 3诱发氧化应激小鼠肝组织 GSH 的
影响: 与正常组相比, 模型组小鼠肝组织 GSH 水平
明显降低 (P < 0105)。知母总黄酮各剂量组对
KB rO 3负荷小鼠肝组织 GSH 水平的降低均有一定
的改善作用, 但无显著性差异 ( P > 0105) , (表
1)。　　　　　　
216　对 KB rO 3诱发氧化应激小鼠肝组织 GSH 2Px
活力的影响: 与正常组相比, 模型组小鼠肝组织
GSH 2Px 活性明显降低 (P < 0101)。知母总黄酮高
剂量组能显著升高 KB rO 3负荷小鼠肝组织 GSH 2Px
活性 (P < 0101) , 中、低剂量组对 KB rO 3负荷小鼠
肝组织 GSH 2Px 活性的降低也有一定的改善作用,
但无显著性差异 (P > 0105) , (表 1)。
3　讨论
　　KB rO 3 ip 6 h 后小鼠血浆 AL T 水平与正常组
相比显著升高, 诱发肝损伤。近年的研究证明
KB rO 3诱发组织损伤的发病过程与活性氧自由基有
关[9 ]。本实验发现 KB rO 3引起小鼠血浆AL T 水平
增高的同时, 肝组织中脂质过氧化产物M DA 显著
提高, 而 ORA C、GSH 及 GSH 2Px 水平均不同程度
下降, 表明小鼠机体处于氧化应激状态。肝脏是机体
中主要的代谢器官, 容易受各种应激刺激的影响诱
发肝损伤。R auen 等[10 ]研究确认氧化应激诱发肝损
伤是来自肝组织脂质过氧化的链式反应, 损伤肝组
织细胞的结果。本实验结果发现, 知母总黄酮显著降
低氧化应激所致小鼠血浆 AL T 水平的同时, 抑制
肝组织M DA 的升高。ORA C 测定结果表明, 知母
总黄酮能够提高氧化应激小鼠肝组织的抗氧化能
力, 同时也对肝组织中 GSH、GSH 2Px 等一些内源
性抗氧化活性物质水平的下降起到保护作用。这些
结果表明知母总黄酮可通过提高机体的内源性抗氧
化能力及清除过多的氧自由基来减缓应激性肝损伤
的发生。
NO 在体内具有多重生物活性,W atanabe 等[2 ]
研究证明 KB rO 3能使体内 NO 释放过多, NO 可与
超氧阴离子自由基 (O 2÷) 反应生成过氧亚硝基阴
离子 (ONOO - ) , 后者可以分解成羟自由基 (OH·)
和二氧化氮而加重对体内组织的损伤。对NO 的测
定结果也发现, ip KB rO 3 6 h 后小鼠血浆及肝组织
中 NO 水平均明显升高, 这一结果可能是导致肝组
织损伤的原因之一。此外, 体内 NO 释放过多在一
定程度上也将引起 GSH 2Px 活性降低和 GSH 减
少[11 ]。对 KB rO 3诱发肝损伤时的 GSH 2Px 活性和
GSH 的测定中也确认这种相关性。知母总黄酮对
KB rO 3负荷小鼠血浆及肝组织中NO 水平的升高均
有不同程度的改善作用, 说明其作用部分来自通过
·452· 中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 2 期 2008 年 2 月
抑制体内 NO 的释放来减轻氧化应激性肝组织
损伤。
知母中富含的黄酮类化合物是一类含有一个或
多个酚性基团具有清除自由基能力的抗氧化作用物
质[12 ] , 知母总黄酮通过自身清除自由基, 有效地防
止应激状态下活性氧引起的过氧化损伤, 从而改善
应激性肝损伤的发生。本研究证明知母总黄酮在预
防和改善氧化应激性疾病方面可能具有一定的应用
价值。
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复方瑞康欣对吗啡依赖大鼠戒断症状及下丘脑
和丘脑单胺类神经递质的影响①
李晓东1, 邓菊平1, 文　兴1, 黄秋艳1, 麦创富1, 罗素元2
(11 珠海瑞桦戒毒康复中心, 广东 珠海　519070; 21 遵义医学院 生物学教研室, 贵州 遵义　563003)
摘　要: 目的　观察复方瑞康欣对吗啡依赖大鼠戒断症状、下丘脑和丘脑单胺类神经递质水平的影响, 研究复方瑞
康欣的戒毒作用机制。方法　SD 大鼠按剂量递增法 sc 吗啡建立大鼠吗啡依赖模型。复方瑞康欣 ig 给药 5 d 后,
经纳洛酮催瘾, 观察戒断症状, 并用荧光分光光度法检测下丘脑和丘脑去甲肾上腺素 (NA )、多巴胺 (DA )、52羟色
胺 (52H T ) 和 52羟吲哚乙酸 (52H IAA ) 的量。结果　复方瑞康欣低、高剂量组戒断症状的评分值均低于吗啡戒断
组 (P < 0101) ; 复方瑞康欣能缓解吗啡依赖大鼠戒断后的体重丢失; 复方瑞康欣高剂量组下丘脑 NA、DA、52H T 递
质水平比吗啡戒断组显著降低 (P < 0105) ; 在丘脑中NA、DA、52H T 和 52H IAA 的变化无显著差异 (P > 0105)。结
论　复方瑞康欣能明显抑制吗啡依赖大鼠的戒断症状及降低下丘脑单胺类神经递质的量, 下丘脑单胺类神经递质
水平的下调可能是复方瑞康欣的戒毒作用机制之一。
关键词: 复方瑞康欣; 吗啡依赖; 单胺类神经递质
中图分类号: R 28515　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253- 2670 (2008) 02- 0255- 04
　　复方瑞康欣是由元胡、牛膝、川芎、钩藤、当归等 组成的中药复方, 在临床上用于治疗阿片类药物成
·552·中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 2 期 2008 年 2 月
① 收稿日期: 2007205222
基金项目: 珠海市科技计划项目 (PC1200511092) ; 贵州省卫生厅科学技术基金资助项目 (D 2211)
作者简介: 李晓东 (1960—) , 男, 医学硕士, 副主任医师, 广东省珠海瑞桦戒毒康复中心院长, 主要从事药物依赖研究工作, 在专业杂志上发
表论文 20 余篇。T el: (0756) 8508096　E2m ail: w ebm aster@ 21ru ihua. com