全 文 ：微量抗肿瘤成分[ 2 ] 。今后通过对滇重楼多种活性成
分之间的合理配伍及对单体皂苷的结构改造 ,可望
得到高效低毒的抗肿瘤新药。
参考文献 :
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柠檬醛对小鼠侵袭性肺曲霉病的作用
罗闳丹1 ,杨 　芬1 ,施 　旻1 ,刘金辉2 ,谢小梅1 3
(11 江西中医学院 现代中药制剂教育部重点实验室 ,江西 南昌 　330004 ;
21 南昌大学医学院 微生物学教研室 ,江西 南昌 　330006)
摘　要 :目的 　研究中药活性成分柠檬醛对实验小鼠侵袭性肺曲霉病 ( IPA) 的作用。方法 　小鼠随机分成正常
组 ,正常 + 接种烟曲霉菌组 , IPA 模型组 , IPA + 不同剂量 (高、中、低 3 个剂量) 柠檬醛给药组及阳性对照组。建立
IPA 模型后 ,ip 给药不同剂量柠檬醛 ,阳性对照组 ig 酮康唑 ,连续 7 d ,第 8 天处死各组小鼠 ,分别取肺、脾、肝、肾
组织行烟曲霉菌培养和观察病理损伤 ;同时另取各用药组和 IPA 模型组 15 只小鼠做生存实验。结果 　中、高剂量
柠檬醛治疗的 IPA 小鼠各脏器烟曲霉菌落数均低于 IPA 模型小鼠 ,且烟灰色色素明显减少 ;病理结果显示 IPA 模
型小鼠肺组织可见大量菌丝 ,炎症细胞浸润 ,病理损伤明显 ;中、高剂量柠檬醛组肺组织未见菌丝。生存试验表明
柠檬醛中、高剂量组小鼠的生存率和生存质量明显优于未用药组。结论 　柠檬醛可缓解 IPA 小鼠的肺组织病理损
伤 ,明显减缓 IPA 的发展。
关键词 :柠檬醛 ; 侵袭性肺曲霉病 ; 烟曲霉菌
中图分类号 :R28515 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 2670 (2009) 0320428203
　　侵袭性肺曲霉病 (invasive p ulmonary asper2
gillo sis , IPA) 是免疫力低下患者感染烟曲霉菌的
常见类型 ,预后差 ,死亡率高达 80 %～90 %[1～3 ] 。
目前临床应用的抗深部真菌感染药物主要有两大
类 :多烯类与唑类药物 ,均作用于真菌的细胞质膜 ,
且多数因不良反应大、抗菌谱窄、价格昂贵和易产生
耐药等原因 ,临床应用受到了限制。从 20 世纪 20
年代开始 ,人们便开始从中药中寻找抗真菌药物 ,至
今已发现 300 余种具有抗真菌活性的中药。柠檬醛
是中药山苍子的主要成分 ,属萜类化合物 ,本实验室
研究发现柠檬醛能够在体外有效抑制烟曲霉菌[4 ] ,但
未见柠檬醛对体内感染烟曲霉菌的作用报道。本研
究拟通过建立小鼠 IPA 模型 ,观察柠檬醛对 IPA 小
鼠的影响 ,从而探讨柠檬醛的体内抗烟曲霉菌作用。
1 　材料
111 　动物 :清洁级昆明种小鼠 ,雄性 ,20～22 g ,由 江西中医学院清洁级动物中心提供。112 　菌株 :烟曲霉菌 (为临床分离株 ,编号为 3910)购于中国医学真菌保藏中心 (南京) 。113 　药物与试剂 :柠檬醛 ,德国进口 ,批号 0024892S20085623 ,质量分数 > 98 % ;环磷酰胺 ( CTX) ,江苏恒瑞医药股份有限公司 ,批号 06060521 ;酮康唑( TCZ ,200 g/ 每片) ,西安杨森制药有限公司 ,批号060421199 ;培养基为蔡氏培养基[5 ] 。2 　方法211 　动物分组 :小鼠随机分成 7 组 : ①正常对照组( n = 5) :正常健康小鼠 ; ②正常 + 接种烟曲霉菌组( n = 5) :未免疫抑制但接种烟曲霉菌的小鼠 ; ③IPA小鼠组 ( n = 10) :免疫抑制并接种烟曲霉菌的小鼠 ;④～ ⑥柠檬醛低、中、高剂量 (615、13、26μg/ kg) 治疗组 ( n = 10) ,造 IPA 模型 ,给予柠檬醛 ; ⑦阳性对照组 ( n = 10) :造 IPA 模型 ,给予酮康唑。
·824· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 3 期 2009 年 3 月
3 收稿日期 :2008210221
基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (30560147) ;江西省自然科学基金资助项目 (0540111) ;江西省教育厅基金资助项目
作者简介 :罗闳丹 (1981 —) ,女 ,山东济南人 ,助教 ,硕士 ,研究方向为中药与微生物。
Tel : (0791) 7118707 　E2mail : meimeitu @sina. com3 通讯作者　谢小梅　Tel : (0791) 7118707 　E2mail : 1990xxm @sohu. com
刘金辉　Tel : (0791) 6360572 　E2mail : jinhuil2003 @yahoo. com. cn
212 　IPA 小鼠模型的建立 :制备烟曲霉孢子悬液[6 ] ,
浓度调整为 1 ×107 / mL。造模动物感染前 2 d ,连续
ip CTX 200 mg/ (kg ·d) 。乙醚麻醉小鼠 ,加样枪吸
取孢子悬液 50μL ,滴入鼻孔 ,使之被动吸入肺部。
213 　给药方法 :接种烟曲霉孢子后立即给药。柠檬
醛用药组 ip 给药 ,给药体积 012 mL/ 10 g ;阳性对
照组 ig 酮康唑 30 mg/ ( kg ·d) ,1 次/ d ,连续 7 d。
未给药组 ig 等体积蒸馏水。
214 　小鼠组织烟曲霉体外培养 :给药 7 d 后处死小
鼠 ,取右肺组织、部分肝组织、脾组织及肾组织培养 ,
其中各组织均定量匀浆 ,均匀涂布接种于蔡氏培养
基 ,2615 ℃培养 7 d ,计数烟曲霉菌菌落。
215 　小鼠组织病理学分析 :左肺组织、部分肝组织
及肾组织用 4 % 甲醛溶液固定 ,石蜡包埋切片 ,常
规 H E 染色 ,显微镜下观察病理组织切片。
216 　生存实验 :按上述方法 ,重新制备 ③、④、⑤、⑥
和⑦组各 15 只小鼠进行生存实验。从接种烟曲霉
菌开始连续观察 4 周 ,观察小鼠一般情况和生存情
况的变化。
217 　数据处理 :所有数据用 SPSS 统计分析软件处
理 ,计量资料结果以 x ±s 表示 ,方差检验法进行组
间差异显著性分析。
3 　结果
311 　小鼠组织烟曲霉菌体外培养 :经计数与统计分
析 ,正常 + 接种烟曲霉菌组与 IPA 模型组肺组织和
肝组织的烟曲霉菌落数存在显著性差异 ,结果见
表 1。表明本研究成功建立了 IPA 小鼠模型。
312 　柠檬醛体内抗烟曲霉效果 :与 IPA 模型组相
比 ,3 种不同剂量柠檬醛治疗组的小鼠肺组织、肝组
织的菌落数均减少 ,中、高剂量组肺组织和肝组织的
菌落数低于 IPA 模型组 ( P < 0105) ,且烟灰色色素
明显减少 ;与阳性对照组比较差异无显著性意义
( P > 0105) 。表明适当剂量的柠檬醛在小鼠体内具
有抑制烟曲霉繁殖的效果。其效果与常用抗真菌药
物酮康唑相当。结果见表 1 和图 1。
表 1 　各组小鼠肺、肝、脾、肾组织烟曲霉菌落数比较
( x ±s , n = 5)
Table 1 　Comparison of As pergillus f umigatus number
in tissues of lung , liver , spleen , and kidney
in mice in every group ( x ±s , n = 5)
组　别 剂量/(μg ·kg - 1)
菌落数/ (个·mL - 1)
肺 肝 脾 肾
正常 + 接种烟曲霉菌 　- 　9 ± 0 3 3 ±1 3 5 ±3 7 ±4
IPA 　- 102 ±14 56 ±9 13 ±2 9 ±1
柠檬醛 　615 78 ± 7 46 ±3 39 ±2 8 ±1
13 16 ± 1 3 24 ±2 3 5 ±1 15 ±1
26 19 ± 1 3 16 ±2 3 5 ±1 14 ±1
酮康唑 30 000 25 ± 2 3 17 ±1 3 9 ±1 9 ±1
　　与 IPA 组比较 : 3 P < 0105
　　3 P < 01 05 vs IPA group
图 1 　用药后各组小鼠肺组织烟曲霉菌培养
Fig. 1 　Culture of As pergillus f umigatus in lung tissue
of mice in every group after treatment
313 　组织病理改变情况 :正常 + 接种烟曲霉菌组的
肺组织基本正常。IPA 模型组 :肺内支气管上皮坏
死 ,并有大量菌丝生长 ;肝细胞脂肪变性 ,小叶中央
区细胞萎缩 ;肾脏充血 ,肾小囊腔消失。柠檬醛低剂
量治疗组 :肺组织灶状炎症细胞浸润 ,未见菌丝 ;肝
脏充血 ;肾脏未见异常。柠檬醛中、高剂量治疗组 :
镜下见肺组织未见菌丝 ,仅有灶状炎细胞浸润 ;肝脏
充血 ,巨噬细胞增生 ,有小灶淋巴细胞浸润 ;肾脏未
见明显病变。阳性对照组 :镜下见肺组织部分肺泡
塌陷 ,充血明显 ;肝脏见肝细胞水肿明显 ;肾脏切片
示有轻度水肿现象。结果表明 IPA 小鼠肺组织有
菌丝生长 ,肝、脾、肾组织均有病理损伤 ;柠檬醛给药
后 ,小鼠肺组织未见有菌丝生长 ,肝、脾、肾组织的病
理损伤均有不同程度的好转 ,尤其以柠檬醛中、高剂
量组明显 ;阳性对照药物酮康唑能抑制菌丝在肺组
织的生长 ,但导致肺、肝和肾等器官病理损伤明显 ,
说明其对这些器官的毒性较大。结果见图 2 和 3。
A2正常对照组　B2正常 + 接种烟曲霉菌组　C2IPA 模型组　D2IPA 小鼠 + 柠檬醛高剂量治疗组　E2阳性对照组
A2normal cont rol group 　B2normal mice infected wit h A s pergil l us f umi gatus group 　C2IPA model group
D2IPA mice t reated wit h cit ral of high dose group 　E2positive cont rol group
图 2 　肺组织病理改变观察 ( HE 染色)
Fig. 2 　Observation of pathologic changes of lung tissue ( HE stainning)
·924·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 3 期 2009 年 3 月
A2正常对照组　B2正常 + 接种烟曲霉菌组　C2IPA 模型组　D2IPA 小鼠 + 柠檬醛高剂量治疗组　E2阳性对照组
A2normal cont rol group 　B2normal mice infected wit h A s pergil l us f umi gatus group 　C2IPA model group
D2IPA mice t reated wit h cit ral of high dose group 　E2positive cont rol group
图 3 　肝组织病理改变观察 ( HE 染色)
Fig. 3 　Observation of pathologic changes of liver tissue ( HE stainning)
314 　生存实验 :生存实验观察发现 IPA 小鼠及低
剂量柠檬醛治疗的小鼠生存率最低 ,中剂量柠檬醛
治疗的小鼠生存率最高 ,高剂量柠檬醛剂量组与阳
性对照组的小鼠生存率相当。结果见表 2。
表 2 　各组小鼠生存率比较
Table 2 　Comparison of Survival rates of mice in every group
组 　别 剂量/ (μg ·kg - 1 ) 生存数/ 只 死亡数/ 只 合计/ 只 生存率/ %
IPA - 4 11 15 261 7
柠檬醛 　　61 5 4 11 15 261 7
13 9 6 15 601 0
26 7 8 15 461 7
酮康唑 30 000 7 8 15 461 7
4 　讨论
　　曲霉菌以腐物寄生的形式广泛存在于自然环境
中 ,为条件致病菌 ,其 80 %～90 % 的感染为烟曲霉
菌所致。烟曲霉菌以分生孢子繁殖并传播。经呼吸
道入侵宿主呼吸系统的分生孢子 ,主要影响免疫受
损人群引起致死性的侵袭性肺曲霉病 ( IPA) 。IPA
以菌丝侵入及组织破坏为主要特征 ,菌丝在肺内增
殖和侵入血管 ,导致坏死性血管炎 ,造成血栓或菌
栓 ,引起咯血和血行播散 ,在脑、肝、肾、心脏等脏器
产生曲霉感染。病理表现主要为急性坏死性出血性
肺炎、炎性浸润、化脓 ,进而形成肉芽肿。
山苍子为樟科植物的成熟果实 ,药理实验表明
山苍子的主要成分柠檬醛具有多种药效 ,如增加离
体兔心冠脉血流量、保护心肌缺血再灌注损伤、抗室
性心律失常、降低血小板表面活性、抑制血栓形成及
抗菌消炎的作用[ 7 ] 。谢小梅等[8 ]用微量液基稀释法
测定出柠檬醛体外抗烟曲霉菌的 MIC 为 0165μg/
mL ,并通过同位素标记法显示柠檬醛的抗菌机制部
分可能是通过影响烟曲霉的 DNA、RNA 和蛋白质
的合成而发挥抗菌效应。在此基础上 ,以柠檬醛体
外的最低抑菌浓度为中间剂量观察了柠檬醛的 3 个
不同剂量对小鼠 IPA 模型的影响。研究结果显示 ,
中、高剂量的柠檬醛能够有效阻止烟曲霉孢子在肺
组织的萌发和菌丝生长 ,改善 IPA 模型小鼠各器官
的病理损伤 ,使其趋于正常 ,并且提高小鼠的生存
率 ;柠檬醛不仅减少了小鼠脏器的烟曲霉菌数量 ,且
烟灰色色素明显减弱 ,已证明烟灰色色素和烟曲霉
毒力密切相关[9 ] 。本实验结果表明柠檬醛对 IPA
的发生、发展有较好的阻止和缓解作用 ,这为中药活
性成分柠檬醛用于临床治疗 IPA 提供了实验数据。
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·034· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 3 期 2009 年 3 月