全 文 ：HPLC法测定红毛五加中刺五加苷 E
钟世红1 , 2 ,卫莹芳2 ,古　锐2 ＊
(1.成都医学院药学院 ,四川 成都　610083;2.成都中医药大学 , 四川 成都　611131)
摘　要:目的　建立红毛五加药材中刺五加苷 E 的测定方法。方法　采用 H ypersil ODS2 色谱柱;流动相:乙腈-
0.3%磷酸二氢钠水溶液梯度洗脱系统(磷酸调节 pH 值为 3.5);体积流量:1.0 m L/ min;柱温:35 ℃;检测波长为
207 nm。结果　刺五加苷 E 的线性范围为 0.142～ 1.133 μg ,平均回收率为 101.73%, RSD小于 2%。结论　该方
法简便 、准确 、重现性好 ,可为红毛五加的质量控制提供参考。
关键词:红毛五加;刺五加苷 E;高效液相色谱
中图分类号:R282.6　　　文献标识码:A　　　文章编号:0253-2670(2009)06-0979-03
　　红毛五加是五加科五加属植物红毛五加 Acan-
thopanax giraldii Harms的干燥茎皮 ,收载于《四
川省中药材标准》1987年版 ,具有祛风湿 、强筋骨 、
利关节之功效[ 1] 。本品主产于川西高原地区 ,为四
川地区五加皮的习用品种和羌民族特色药材 ,大量
出口日韩 ,极具开发价值。关于红毛五加的药理药
效作用及化学成分已有较多报道 ,但与其药效相关
成分的质量控制方法研究较少 。苷类为红毛五加的
主要活性成分[ 2 , 3] ,本实验以刺五加苷 E 为指标成
分 ,建立红毛五加的定量测定方法 ,以期为该药材的
质量控制提供科学依据。
1　仪器与试剂
高效液相色谱仪(Waters 2695 ,美国),高效液相
色谱仪(Dionex P680美国戴安),超纯水器(美国 Mil-
lipore)。AS5150A型超声清洗器(天津 ,功率:180 W ,
频率:40 kHz),雷磁 PHS —3C型 pH计(上海)。
刺五加苷 E(成都曼思特生物科技有限公司 ,供
测定用 ,质量分数≥98%),乙腈(色谱纯 , Fisher),
水为超纯水 ,其余试剂均为分析纯 。
样品自采及市售 ,经成都中医药大学卫莹芳教
授鉴定为红毛五加 A.giraldi i Harms的干燥茎皮
和部分药材的木心。
2　方法与结果
2.1 　色谱条件:Hypersil ODS2 C18柱(250 mm ×
4.6 mm , 5 μm)(大连伊利特)。流动相组成:A 乙
腈-B 0.3%磷酸二氢钠水溶液(用磷酸调节 pH 值
为 3.5);梯度条件:0 ～ 7 ～ 15 ～ 26 min;VA-VB 为
2∶98 ～ 18∶82 ～ 12 ∶88 ～ 17∶83 ,二元梯度洗脱。
检测波长:207 nm ,柱温:35 ℃,体积流量:1.0 mL/
min ,进样量:10 μL。色谱柱理论塔板数以刺五加苷
E 峰计 ,不得低于3 000。
2.2　对照品溶液的制备:精密称取干燥至恒重的刺
五加苷 E 对照品 1.78 mg ,置于 25 mL 量瓶中 ,加
甲醇溶解并定容 ,配制成质量浓度为 0.071 mg/mL
的对照品溶液。
2.3　供试品溶液的制备:取样品粉末(过四号筛)约
1.0 g ,精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加入50 %甲
醇 25 mL ,称定质量 ,超声提取 30 min ,放冷 ,再称定
质量 ,用 50%甲醇补足减失的质量 ,摇匀 ,滤过 ,取
续滤液 ,即得 。
2.4　标准曲线的绘制:精密吸取 0.071 mg/mL 刺
五加苷 E 对照品溶液 2 、4 、8 、10 、16 μL 进样 ,测定
刺五加苷 E的峰面积。以进样量为横坐标 ,峰面积
积分值为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,得刺五加苷 E 的
回归方程 Y =99.525 X -1.745 ,(r =0.999 9),其
进样量在 0.142 ～ 1.133 μg 与峰面积呈良好的线性
关系。
2.6　精密度试验:精密吸取 6号样品粉末(过四号
筛)制得的供试品溶液 ,重复进样 5 次 ,计算得刺五
加苷 E峰面积的 RSD为 0.25%。
2.7　重现性试验:取 6号样品粉末(过四号筛)约
1.0 g ,共 6份 ,精密称取 ,制备各供试品溶液 ,进样
分析 ,测得刺五加苷 E 的峰面积 ,计算得到其质量
分数的平均值为 0.873 mg/g , RSD为 0.09 %。
2.8　稳定性试验:取 6号样品粉末(过四号筛)制得
的供试品溶液 ,室温放置 ,于 0 、2 、4 、8 、12 、24 h 分别
·979·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
＊ 收稿日期:2008-08-26　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　基金项目:国家自然科学基金青年基金项目(30701087)作者简介:钟世红(1980—),女 ,四川省隆昌人 ,讲师 ,硕士 ,主要研究方向为中药品种 、质量及资源研究。　Tel:(028)68289198　E-mail:zh ong shihong@cmc.edu.cn＊通讯作者　古　锐　T el:(028)61800160　E-mai l:Raingu 80413@sin a.com
进样分析 ,计算得刺五加苷 E 的峰面积 RSD 为
0.85 %,表明供试品溶液在 24 h内稳定。
2.9　回收率试验:取 6 号样品粉末(过四号筛)约
0.5 g ,共 6份 ,精密称取。另重新称取刺五加苷 E
对照品适量 ,配制成 0.212 mg/mL 溶液 ,分别精密
移取该对照溶液 2.1 mL ,加入样品中 ,制备供试品
溶液 ,依法测定 ,计算得刺五加苷 E 的平均回收率
为 101.73%,RSD为 1.69%。
2.10 　样品测定:按上述方法对不同来源样品进行
测定 ,外标法计算刺五加苷 E ,色谱图见图 1 ,结果
见表 1(样品情况中的“去年枝条”示 2007年萌发枝
条 , “当年枝条”示 2008年新萌发枝条)。
图 1　刺五加苷 E(A)和红毛五加茎皮(B)的 HPLC色谱图
Fig.1　HPLCChromatogram of eleutheroside E(A)
and stem bark of A.giraldii (B)
3　讨论
3.1　测定指标的选择:刺五加苷 E 具有显著的缓
解压力作用 ,刺五加苷 B(紫丁香酚苷)能增强机体
非特异性抵抗力[ 4 , 5] ,原计划建立同时测定这两种
成分的方法。但预实验结果表明 ,红毛五加中刺五
加苷 E的量较高 ,刺五加苷 B 的量普遍较低 ,且分
离效果不佳 ,因此选择刺五加苷 E为指标成分 。另
采用外标法对刺五加苷 B量进行了估算(测定波长
220 nm ,由刺五加苷 B对照品溶液 200 ～ 400 nm 扫
描得到的最大吸收波长)。18批商品样品中刺五加
苷 B的量均低于 0.10 mg/g ,最高量 0.36 mg/g 。
3.2　色谱条件的选择:吸取刺五加苷 E 对照品溶
液注入Waters高效液相色谱仪 ,200 ～ 400 nm 波长
扫描 。根据扫描结果 ,确定刺五加苷 E 的最大吸收
波长 为 207 nm 。曾 考 察 了 Phenomenex 和
Welchrom C18反相色谱柱 ,在该色谱条件下刺五加
苷 E均分离良好 ,使用大连伊利特 Hypersil ODS2
C18柱峰形较好 。
3.3　本实验对 30余批不同来源红毛五加药材进行
了刺五加苷 E 的定量测定 ,其中 18批商品药材的
刺五加苷 E 量为 0.417 ～ 1.833 mg/g , 平均为
0.940 mg/g ,为保证红毛五加药材质量 ,建议红毛
五加茎皮中刺五加苷 E不得低于 0.75 mg/g 。
表 1　红毛刺五加中刺五加苷 E的测定结果(n=2)
Table 1　Determination of eleutheroside E
in A.giraldii(n=2)
编号 样品来源 样品情况 购买或采集时间
刺五加苷 E/
(mg· g -1)
1 统货 2007-04 1.052
2 统货 2007-05 0.864
3 统货 2008-02 1.833
4 统货 2008-03 0.761
5 统货 2008-03 0.873
6 西南药都购买 统货 2008-03 0.708
7 统货 2008-05 1.211
8 统货 2008-05 1.004
9 统货 2008-06 0.597
10 统货 2008-06 1.013
11 统货 2008-07 1.628
12 茂县民族医院 统货 2006-08 0.518
13 产 茂县 统货 2007-05 0.932
14 地 茂县三龙乡勒依村 统货 2007-07 0.512
15 购 小金县达维乡石鼓村 统货 2007-05 0.793
16 买 小金县达维乡石鼓村 统货 2008-06 0.758
17 小金县达维乡滴水村 统货 2007-06 1.442
18 小金县达维乡继英村 统货 2008-06 0.417
19 对 茂县石大关乡阳雀寨 去年枝条 2008-07 0.488
20 口 茂县石大关乡阳雀寨 木心 2008-07 0.231
21 药 小金县达维乡红军坪 当年新枝 2008-08 0.293
22 材 小金县达维乡红军坪 木心 2008-08 0.506
23 小金县达维乡木尔寨沟 当年新枝 2008-08 0.116
24 小金县达维乡木尔寨沟 木心 2008-08 0.402
25 小金县科牛村小太子坡 去年枝条 2008-08 0.197
26 小金县科牛村小太子坡 当年新枝 2008-08 0.055
27 马尔康县梭磨乡坎竹村 去年枝条(林窗) 2008-08 1.254
28 马尔康县梭磨乡坎竹村 当年枝条(林窗) 2008-08 0.301
29 马尔康县梭磨乡坎竹村 去年枝条(林下) 2008-08 1.063
30 马尔康县梭磨乡坎竹村 当年枝条(林下) 2008-08 0.286
31 红原县刷经寺镇 2队 去年枝条(林窗) 2008-08 1.043
32 红原县刷经寺镇 2队 当年枝条(林窗) 2008-08 0.145
33 红原县刷经寺镇 2队 去年枝条(林下) 2008-08 0.271
34 红原县刷经寺镇 2队 当年枝条(林下) 2008-08 0.034
3.4　红毛五加 5月新枝萌发 ,传统采收方法为每年
5月采收去年萌发的红色枝条(即生长 1 年的枝
条),剥取茎皮 ,8月后当年新萌发枝茎皮基本变红。
因受地震影响未能在传统最佳采收期(5月)收集样
品 ,收集了 8月份的去年枝条和当年新枝 。结果显
示当年新枝茎皮的刺五加苷 E量远低于老枝 ,说明
刺五加苷 E在茎皮中的积累随时间而增长 ,其积累
规律有待进一步研究。
红毛五加种群主要生长在南偏东 100°左右的
半阴半阳坡地上 ,对 4 组林窗和林下样品的茎皮测
定结果表明 ,相同采收期林窗中茎皮的刺五加苷 E
量均高于林下样品 ,说明日照有利于刺五加苷 E 的
积累。
·980· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
3.5　对 3组茎皮和木心的测定结果显示 ,木心中刺
五加苷 E的量在当年新枝中可达茎皮的两倍以上 ,
而在老枝中约为茎皮的一半。推测刺五加苷 E 在
嫩枝中木质部的积累速度高于皮部 ,随着枝条的生
长 ,刺五加苷持续积累 ,但木质部的细胞增长速率高
于韧皮部 ,因此老枝中茎皮的刺五加苷 E的量高于
木心 。木心一直被认为是非药用部位而弃去 ,本实
验结果显示木心中的刺五加苷 E 量较高 ,应加以利
用 ,对于扩大药源 、保护资源有积极意义 。
3.6　本实验另对 15批不同来源的红毛五加叶进行
了定量测定 ,其中仅有 7批样品中含有刺五加苷 E ,
其量在 0.025 ～ 0.503 mg/g 。
参考文献:
[ 1] 　四川省中药材标准 [ S]. , 1987.
[ 2] 　党月兰 , 龚经纬.红毛五加总苷的镇痛作用 [ J].中国药物
依赖性杂志 , 1998 , 7(2):88-92.
[ 3] 　党月兰 , 骆　勤 , 李淑玉.红毛五加总苷的抗炎作用 [ J].中
药药理与临床 , 2000 , 16(1):14-18.
[ 4] 　江苏新医学院.中药大辞典 [ M].上册.上海:上海科学技
术出版社 , 1995.
[ 5] 　楼之岑 , 秦　波.常用中药材品种整理和质量研究 [ M].北
方编.第 2册.北京:北京大学医学出版社 , 1995.
HPLC法测定赶黄草中槲皮苷 、槲皮素和乔松素-7-O-葡萄糖苷
贺晓华1 , 2 ,王小淞1 ,曾建国1 , 2 ＊ ,罗丽娟1 ,铃木万荣3
(1.湖南省中药提取工程研究中心 , 湖南 长沙　410331;2.湖南中医药大学 ,湖南 长沙　410007;
3.日本丸荣贸易株式会社 , 日本 东京　1010032)
摘　要:目的　建立测定赶黄草中槲皮苷 、槲皮素 、乔松素-7-O-葡萄糖苷等黄酮类成分的分析方法。 方法　用
HPLC 法;色谱柱为 Luna-C18柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸水 , 梯度洗脱;检测波长 267 nm;体积流量 0.8 mL/min。
结果　槲皮苷 、槲皮素 、乔松素-7-O-葡萄糖苷获得良好分离 ,在 10.8～ 216.0 、10.4 ～ 208.0、10.4 ～ 207.0 μg/ mL 与
峰面积积分值线性关系良好;重现性试验 RSD 分别为 0.19%、0.19%、0.12%;加样回收率分别为 100.17%、
100.06%、99.87%。结论　本方法简便快速 , 精密度 、分离度良好 , 为赶黄草及其制剂质量标准的制定提供了可供
借鉴的方法。
关键词:赶黄草;槲皮苷;槲皮素;乔松素-7-O-葡萄糖苷;高效液相色谱
中图分类号:R282.6　　　文献标识码:A　　　文章编号:0253-2670(2009)06-0981-03
　　赶黄草是虎耳草科扯根菜属植物扯根菜 Pentho-
rum chinense Pursh的干燥地上部分[ 1] ,为苗族民间的
草药 ,具有清热解毒 、退黄利湿 、活血散瘀 、利水消肿
之功效[ 2] ,广泛用于治疗各型肝炎 、胆囊炎 、脂肪肝
等[ 3] 。赶黄草中含有黄酮类 、有机酸类等成分 ,其中
已知并且稳定存在的为没食子酸 、槲皮素[ 4] ,另外还
有槲皮苷(槲皮素-3-O-鼠李糖苷)、乔松素-7-O-葡萄
糖苷等其他黄酮成分[ 5] 。已有文献报道采用 HPLC
法测定赶黄草中槲皮素 。本研究采用 RP-HPLC 法
对赶黄草中槲皮苷 、槲皮素和乔松素-7-O-葡萄糖苷 3
种黄酮成分进行了测定。实验结果表明 ,该方法分离
度好 ,具有良好的精密度和重现性 ,可为赶黄草质量
标准建立提供定量测定指标。
1　仪器与试药
1.1　仪器:高效液相色谱仪(岛津 20A);色谱工作
站(岛津 LC-Solution系统);超声清洗仪(昆明市超
声仪器有限公司);电子天平(梅特勒-托利多仪器有
限公司)。
1.2　试药:槲皮素(中国药品生物制品检定所 ,质量
分数为 98 %,批号 100081-200406);槲皮苷(中国药
品生物制品检定所 ,质量分数为 98 %,批号 111538-
200403);乔松素-7-O-葡萄糖苷(自制 ,经核磁共振 、
质谱等技术分析鉴定 ,峰面积归一化法计算质量分
数大于 98 %)。实验用甲醇 、乙腈 、磷酸均为色谱
纯 ,试验用水为自制二次重蒸水 。
1.3　药材:赶黄草药材采于四川古蔺(药材原产地)
和湖南浏阳(由四川古蔺引种 ,浏阳自种),经湖南中
医药大学周日宝教授鉴定为扯根菜 P. chinense
·981·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
＊ 收稿日期:2008-10-19　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　基金项目:湖南省科技厅重点项目(2007w k2003)作者简介:贺晓华(1983—),女 ,湖南省长沙市人,硕士生 ,研究方向为中药及其复方化学成分研究。
Tel:013574875497　E-mail:hexiaohualuck@163.com＊通讯作者　曾建国　T el:(0731)4686478　E-mai l:ginkgo@w orld-way.net