全 文 ：收稿日期:2008-10-11;　修订日期:2008-12-30
基金项目:国家科技支撑计划重大项目(No.2007BAI25B05);
四川省中医药管理局科技专项课题(No.2008-32);
四川省青年基金项目(No.07ZQ026-011)
作者简介:李　莹(1982-),女(汉族),吉林伊通满族自治县人 , 现为西南
民族大学民族药物专业硕士研究生 ,学士学位 , 主要从事民族药研究
工作.
＊通讯作者简介:刘　圆(1968-), 女(汉族),重庆人 ,现任西南民族大学
化学与环境保护工程学院教授 ,博士学位 ,主要从事少数民族药物的研究
和教学工作.
反相高效液相色谱法
测定藏药材红毛五加中金丝桃苷的含量
李　莹 ,袁　玮 ,刘　超 ,刘　圆＊
(西南民族大学少数民族药物研究所 ,四川 成都　610041)
摘要:目的 建立藏药材红毛五加药材中金丝桃苷的含量测定方法并比较其不同药用部位及不同产地 、不同采收期的红
毛五加皮中金丝桃苷的含量。方法 KromasilC18柱(4.6mm×250mm, 5 μm),柱温 30℃, 流动相甲醇(A)-0.5 %磷酸
水溶液(B),梯度洗脱 , 程序为:基线(A∶B=30∶70), 0 ～ 5 min(A∶B=35∶65), 5 ～ 15 min(A∶B=40∶60), 15 ～ 30
min(A∶B=50∶50);检测波长 358 nm,流速 1 ml· min-1。结果 金丝桃苷在 2.90×10-3 ～ 0.58 μg范围内峰面积与进
样量具有良好的线性关系 ,回归方程 Y=4×106X-14 065, r=0.999 9(n=9),平均回收率为 100.6 %, RSD为 0.96 %
(n=6)。结论 该法简便 、准确 、重复性好 , 有助于红毛五加质量控制方法的研究。
关键词:红毛五加;　金丝桃苷;　反相高效液相色谱
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)07-1617-02
DeterminationofHyperosideinAcanthopanacisgiraldibyRP-HPLC
LIYing,YUANWei, LIUChao,LIUYuan＊
(EthnicPharmaceuticalInstituteofSouthwestUniversityforNationalities, Chengdu, 610041, China)
Abstract:ObjectiveTodevelopanRP-HPLCmethodfordeterminationofHyperosideinAcanthopanaxgiraldiHarms, andto
determinethecontentsofHyperosideindiferentparts, differentareasanddiferentcollectiontimeofAcanthopanaxgiraldi
Harms.MethodsTheanalysiswascarriedoutat30℃ onaKromasilC18 columnelutedwithamobilephaseconsistedofmetha-
nol(A)-0.5 %phosphoricacid(B).Thegradientelutionwasasfolowing:ⅰ TheratioofAandBwas35/65from0 to5min.
iiTheratioofAandBwas40/60 from5 to15min.ⅲ TheratioofAandBwas50/50 from 15 to30min.Thedetectivewave-
lengthwasat358nmwiththeflowrateof1.0ml/min.ResultsThecalibrationcurvewaslinearwithintheconcentrationrangeof
2.90×10-3 ～ 0.58 μgwithrof0.999 9(n=9).Theaveragerecoverywas100.6% andRSDwas0.96% (n=6).Conclusion
Thismethodissimple, accurateandreproducible.ItisusefulforqualitycontrolofAcanthopanaxgiraldiHarms.
Keywords:AcanthopanaxgiraldiiHarms;　Hyperoside;　RP-HPLC
　　藏药材红毛五加为五加科五加属植物 Acanthopanaxgiraldii
Harms的干燥茎皮。 《中国药典》尚未收载红毛五加药材。在文
献报道中发现刺五加中含有金丝桃苷成分 [ 1] , 金丝桃苷对钙内
流有较强的选择性阻滞作用 , 并对心肌有保护作用 , 对脑缺血损
伤也有保护作用 , 调节免疫作用 , 临床上主要用于治疗心脑血管
疾病 、抗菌 、抗炎 、止咳 、平喘 、祛痰等 ,且疗效突出 , 应用前景十分
广阔 [ 2] , 这与红毛五加皮的对心血管系统 、免疫系统 、抗炎 、抗病
毒 、抗肿瘤等药理作用 [ 3]相一致。 红毛五加与刺五加为同科同
属植物 , 目前作者尚未查阅到红毛五加中有关金丝桃苷的研究。
四川为红毛五加药材的主要产区 ,其传统的入药部位为茎皮 ,本
课题组的前期研究表明其茎皮中其它有效成分的含量较高 [ 4～ 8] 。
本实验拟采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法考察比较红毛
五加不同药用部位 、不同产地和不同采收期的红毛五加皮中金丝
桃苷的含量 , 以期为红毛五加药材的质量控制 、最佳采收期的确
定 、资源的合理利用提供参考。
1　仪器与材料
Waters2695高效液相色谱仪 , Waters2996检测器 , Empower
色谱工作站。金丝桃苷(批号 111521 -200303, 中国药品生物制
品检定所 ,含量测定用);甲醇为色谱纯;水为二次重蒸水;其余
试剂均为分析纯。 9个不同产地的红毛五加药材样品采自四川
省境内 ,经刘圆教授鉴定为五加科五加属植物 Acanthopanaxgi-
raldiiHarms的干燥茎皮。
2　方法与结果
2.1 　色谱条件 KrosmasilC18柱(250 mm×4.6 mm, 5μm), 柱温
30℃。流动相为甲醇(A)-0.5 %磷酸水溶液(B),梯度洗脱 , 程
序为:基线(A∶B=30∶70), 0 ～ 5 min(A∶B=35∶65), 5 ～ 15
min(A∶B=40∶60), 15 ～ 30 min(A∶B=50∶ 50);检测波长
358nm, 流速 1ml· min-1。金丝桃苷峰可以达到基线分离 ,峰形
对称 , 分离度好 ,按照金丝桃苷峰计 ,理论塔板数不应低于 5 000,
对照品溶液及红毛五加样品溶液的高效液相色谱图见图 1。
2.2 　溶液的制备
2.2.1　对照品溶液的制备 精密称取金丝桃苷对照品适量 , 加
甲醇配置成 29.00 μg· ml-1的溶液。
2.2.2　样品溶液的制备 称取红毛五加药材粉末(过 40目筛)
约 2 g, 精密称定 ,置圆底烧瓶中加入石油醚溶液 25 ml, 称定重
量 , 加热回流 1 h, 取出 , 过滤 , 弃去滤液 , 挥去溶剂 , 滤渣中加入
25 ml甲醇 , 称定重量 ,回流 2h,取出 , 冷却至室温 , 用甲醇补足减
失重量 ,摇匀 ,过滤 ,取续滤液 , 过 0.45μm的微孔滤膜 , 作为样品
溶液。
2.3 　线性关系的考察 分别精密量取上述对照品溶液 0.1,
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.7 时珍国医国药 2009年第 20卷第 7期
0.5, 1, 2, 4, 6, 10, 20 μl,在上述色谱条件下测定峰面积。以进样
量(μg)为横坐标 , 峰面积为纵坐标绘制标准曲线 , 回归方程为
Y=4×106X-14 065, r=0.999 9(n=9)。结果表明金丝桃苷在
2.90×10-3 ～ 0.58 μg范围内峰面积与进样量具有良好的线性
关系。
2.4 　精密度实验 精密吸取对照品溶液 10 μl, 重复进样 5次 ,
测得峰面积的 RSD为 0.96 %(n=6)。结果表明仪器精密度
良好。
a-对照品　b-样品　c-根　d-根皮　e-去皮茎　f-皮　g-叶
图 1　对照品及红毛五加样品溶液的高效液相色谱图
2.5 　稳定性实验 精密量取样品溶液 10μl, 分别于 0, 2, 4, 6, 8
h测定。按照金丝桃苷对照品峰面积计算 RSD为 0.57%(n=
6)。结果表明样品溶液在配制后 8 h内稳定。
2.6 　重复性实验 取红毛五加皮样品约 2 g, 精密称取 6份 ,按
“ 2.2.2”项下方法制备样品溶液 , 按照 “ 2.1”项下色谱条件测定
金丝桃苷的含量。结果样品中金丝桃苷的量均值为 99.68 μg/g,
RSD为 1.12%(n=6),表明重复性良好。
2.7　加样回收率实验 精密称取 9份已知含金丝桃苷量的药材
粉末 2.0 g, 依次加入低 、中 、高 3种质量浓度金丝桃苷对照品溶
液 , 按 “ 2.2.2”项下方法制备样品溶液 ,按照 “ 2.1”项下色谱条件
测定。结果平均回收率为 100.6%, RSD为 0.96%(n=9)。
2.8　 样品测定 精密称取红毛五加的不同药用部位及不同产
地 、不同采收期的红毛五加皮(过 40目筛)2 g。按 “ 2.2.2”项下
方法制备样品溶液 , 按照 “ 2.1”项下色谱条件测定。结果见
表 1 ～ 3, 色谱图见图 1。
表 1　红毛五加不同部位金丝桃苷的含量 μg· g-1
不同部位 金丝桃苷含量
根 -
根皮 -
去皮茎 -
皮 99.68
叶 645.31
　　n=3
表 2　不同产地红毛五加皮中金丝桃苷的含量
　　μg· g-1
药材来源 金丝桃苷含量
四川阿坝洪源县马嘉沟 99.68
成都五块石药材市场 41.64
四川雅安 55.67
四川阿坝茂县 179.42
四川阿坝金川 9.71
四川阿坝小金县美兴镇石庆村 52.94
四川阿坝小金县美兴镇莪阳村 40.83
四川阿坝小金县沙龙 5.90
四川阿坝马尔康县康山乡雅尔珠村 18.06
四川阿坝小金 41.87
四川阿坝小金火地村 66.45
四川阿坝小金两河乡 66.13
四川阿坝小金汗牛乡 6.22
　　n=3
表 3　不同采收期红毛五加皮中金丝桃苷的含量
采收时间 /月份 金丝桃苷含量 C/μg· g-1
2 3.37
3 12.04
4 24.78
6 112.03
7 41.64
8 30.58
9 13.73
10 5.90
　　n=3
从实验结果来看 ,红毛五加各部位中叶中金丝桃苷的含量最
高:645.31μg/g;四川阿坝茂县的红毛五加皮中金丝桃苷含量明
显高于其他产地 ,为 179.42 μg/g;6月份的红毛五加皮中金丝桃
苷含量最高 ,为 112.03 μg/g。
3　讨论
3.1　检测波长的选择 以流动相作溶剂 , 在 200 ～ 400 nm波
长范围内测定了金丝桃苷对照品的紫外光谱图 , 结果在 256
nm和 358 nm波长处有最大吸收 , 确定 358 nm为检测波长 。
3.2　提取方法的选择 实验中曾分别考察了用甲醇作为提取溶
剂超声 0.5 h[ 9] , 超声 1 h[ 10] , 醋酸乙酯索氏提取 [ 11]以及石油醚
先脱脂 ,再加甲醇回流的提取方法 [ 12]等 4种方法测定同批试样
的含量 , 经比较最后一种方法提取的最为完全 , 故采用石油醚先
脱脂 , 再加甲醇回流的提取方法。
3.3　流动相的选择 实验曾考察了乙腈 -0.05 %磷酸水溶液
(16∶84)[ 13] 、甲醇 -0.1%磷酸溶液(40∶60)[ 10] 、甲醇∶0.2 %
磷酸溶液(45∶55)[ 14]为流动相 ,金丝桃苷的保留时间相对短些 ,
但不能与其它化合物很好地分离。采用本文选择的梯度洗脱 , 可
以达到基线分离 ,峰形对称 , 分离度好。
3.4　不同入药部位药效成分含量 从入药部位来看 , 藏药材红毛
五加的叶中金丝桃苷的含量最高 ,明显高于红毛五加皮中金丝桃
苷的含量 ,与结合本课题组的前期研究成果相一致 [ 15] , 但是红毛
五加叶能否同等入药 ,还需要进行更多化学成分分析和药理实验
研究。
3.5　不同产地或采收期药效成分含量 从不同产地来看 ,采自四
川阿坝藏族羌族自治州茂县的红毛五加皮中金丝桃苷含量明显
高于其它产地。从不同采收期来看 , 6月份的红毛五加皮中金丝
桃苷含量最高。从实验结果来看 ,红毛五加药材中金丝桃苷的含
量除叶以外 ,其它含量值均低于 0.05%, 但仍为其质量评价提供
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 7期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.7　
了一定的科学依据。
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收稿日期:2008-08-29;　修订日期:2008-12-29
基金项目:辽宁省教育厅科技攻关基金项目(No.05L381)
作者简介:吴　杰(1984-),女(汉族),黑龙江黑河人, 现为沈阳农业大学
园艺学院在读硕士研究生 ,主要从事药用植物资源评价与创新研究工作.
＊通讯作者简介:宁　伟(1959-), 男(汉族),辽宁沈阳人 , 现任沈阳农业
大学教授 ,博士学位 ,主要从事药用植物资源评价与创新研究工作.
关玉竹染色体形态学研究
吴　杰 , 赵　鑫 , 李艳辉 , 刘　宇 , 李鑫龙 , 宁　伟＊
(沈阳农业大学园艺学院 ,辽宁省设施园艺重点实验室 ,辽宁 沈阳　110161)
摘要:目的 对长白山地区分布的关玉竹体细胞染色体计数 ,对其进行核形态学研究。方法 采用常规压片法。结果 关
玉竹的染色体数目为 2n=20,核型公式为 K(2n)=2X= 2sm(2SAT)+ 8sm+10m,属 “ 2B”类型 , 核型不对称系数为
61.71%。结论 基于观察结果分析了关玉竹染色体对称程度 、类型及染色体组成。关玉竹染色体的随体结构为首次
报道。
关键词:关玉竹;　染色体;　核型分析
中图分类号:R282.6　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)07-1619-02
MorphologicalAnalysisonChromosomeofPolygonatumodoratum(Mil.)Druce
WUJie, ZHAOXin, LIYan-hui, LIUYu, LIXin-long, NINGWei＊
(ColegeofHorticulture, ShenyangAgricalturalUniversity, Shenyang110161, China)
Abstract:ObjectiveTostudythekaryomorphologyofPolygonatumodoratum(Mill.)Druce.fromChangbaimountain.Meth-
odsConventionalpressedslicemethodwasemployed.ResultsThechromosomalnumberofS.chinensiswas2n=20, thekary-
otypebelongedto“ 2B” andwasformulatedasK(2n)=2X=2st+8sm +10m, theasymmetryindexwasK%=61.71%.
ConclusionDetailedanalysiswasconsequentlydisplayedonsymmetricaldegree, chromosomaltypeandcompositionsofP.odor-
atum.ThechromosomalmorphostructureofP.odoratumwasreportedforthefirsttime.
Keywords:Polygonatumodoratum(Mil.)Druce;　Chromosome;　Karyotypeanalysis
　　玉竹 Polygonatumodoratum(Mil.)Druce为百合科黄精属
多年生草本植物 , 其根茎的应用历史久远。关玉竹是辽东山区农
业发展产业的重要植物。关玉竹富含各种营养物质 ,而且对人体
有益的营养物质和活性物质含量都较高 ,常作为原材料销往国内
和国外市场。关玉竹既可作为一种野菜新品种进行开发利用 ,又
可作为药用植物资源进行研究发展。因此 ,关玉竹资源的发展前
景广阔。植物染色体是植物细胞学特征的最稳定因素之一 ,关于
玉竹染色体的核型研究在近年有些许报道 ,但未见其染色体随体
形态结构报道。本实验对关玉竹染色体的核型进行了详细分析 ,
为进一步对关玉竹的遗传育种研究提供细胞学理论依据 ,也为辽
东山区关玉竹分类研究奠定基础。
1　材料
本试验种子来源于辽宁省丹东市宽甸县玉竹生产基地 ,经沈
阳农业大学宁伟教授鉴定。
2　方法
试验采用常规后熟处理方法完成关玉竹种子后熟 ,即将采收
种子 1∶3沙沉处理于 25℃恒温箱中 30d有待萌发。待根部生长
至 1 ～ 2cm时 ,进行取材。用 0.004 mol· L-1 8-羟基喹啉处理
4 h, 然后再用卡诺氏固定液(无水乙醇∶冰醋酸 =3∶1)在 4℃
条件下固定 24 h。经乙醇溶液梯度洗涤 , 存放于 70 %乙醇溶液
中 , 于 4℃条件下可长期保存。取固定过的根尖在 60℃条件下 ,
1mol· L-1盐酸中解离 10 min, 然后经卡宝品红染色 , 常规压片 ,
显微镜观察 ,拍照 , 制作永久封片。选取染色体数目清晰的细胞
进行统计 ,以 80 %以上细胞的染色体数目为标准 , 确定关玉竹染
色体的数目。挑选分裂好的体细胞中期染色体 ,根据李懋学和陈
瑞阳的标准进行染色体核型分析 , 按 Stebbins的方法做核型
分类 [ 1] 。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.7 时珍国医国药 2009年第 20卷第 7期