全 文 ：·844· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月
利用脂肪乳载体提高羟基喜树碱的胰腺靶向性
刘健华1，江荣高2，王春龙2’3。
(1．河南大学，河南开封475004，2．天津药物研究院，天津300193，3．天津大学，天津300072)
摘要：目的考察脂肪乳载体对羟基喜树碱胰腺靶向性的影响。方法 以大豆磷脂和大豆油为主要辅料，采用两
步乳化法制备羟基喜树碱脂肪乳。家兔分别静脉注射单剂量(3．5mg／kg)的羟基喜树碱脂肪乳和羟基喜树碱注射
液，内标采用HPLC法测定药物在胰腺组织中的浓度。结果所建立的HPLC法专属性好、灵敏度高；与羟基喜树
碱注射液相比，羟基喜树碱脂肪乳显著提高了胰腺中药物的浓度。结论脂肪乳作为载体可以明显提高羟基喜树
碱对胰腺的靶向性。
关键词：喜树碱；羟基喜树碱；脂肪乳；胰腺；高效液相色谱
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)06—0844—04
Improvingpa creastargetingcapabilityofhydroxycamptothecin
usinglipidemulsionasdrugcarrier
LIUJian—hual，儿ANGRong—ga02，WANGChun—lon92’3
(1．HenanUniversity，Kaifeng475004，China；2．TianjinInstituteofPharmaceuticalReseach，Tianjin300193，ChinaI
3．TianjinUniversity，Tianjin300072，China)
Abstract：ObjectiveToinvestigatetheffectoflipidemulsionasdrugcarrieronpancreastargeting
capabilityofhydroxycamptothecin．MethodsHydroxycamptothecin—loadedlipidemulsionw sprepared
byatwo—stepemulsifyingprocesswithsoybeanphospholipidandsoybeanoilasmainexcipients．Hydroxy—
camptothecin—loadedlipidemulsionandhydroxycamtothecininjectionwereivadministratedOrabbitsa a
singledoseof3．5mg／kg．Thehydroxycamptothecinconcentrationinthepancreasw determinedby
HPLCwithcamptothecinasthenternalstandard．ResultsTheHPLCmethodf rthedeterminationof
hydroxycamptothecinandcamptothecinwasensitiveandaccurate．Thehydroxycamptothecinconcentra—
tioninthepancreasw greatlyimprovedinhydroxycamptothecin—loadedlipidemusionc mparedwithhy—
droxycamtothecininject on．ConclusionThepancreaticglandtargetingcapabilityisgreatlyimproved，
whenlipidemulsionisusedasdrugcarrier．
Keywords：camptothecin；hydroxycamptothecin；emulsion；pancreaticgland；HPLC
胰腺癌作为一种预后极差的恶性肿瘤，发病率
在世界范围内有逐渐上升的趋势[1]。体外研究发现
羟基喜树碱对人胰腺癌细胞株SW一1990有抑制其
生长、增殖及促进凋亡的作用[2]。胰腺癌细胞对羟基
喜树碱敏感且其敏感性随药物质量浓度的增加而增
高，说明胰腺癌细胞对羟基喜树碱具有药物浓度依
赖性[3]，将药物富集于胰腺有助于提高羟基喜树碱
对胰腺癌细胞的杀伤作用。脂肪乳作为一种新型药
物传输系统，在提高药物溶解度、增加药物稳定性、
降低药物不良反应的同时提高了靶组织中的浓度，
因而有着广泛的应用[4]。本研究对脂肪乳作为载体
将羟基喜树碱以高活性的闭环结构[51转运至家兔体
内，以提高其抗癌活性；并以羟基喜树碱注射液作比
较，进一步研究脂肪乳对家兔胰腺组织的靶向性，为
进一步开发羟基喜树碱脂肪乳注射液用于临床胰腺
癌治疗提供实验参考依据。
I仪器与材料
RE52CS型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器
厂)；FJ200—S型高速剪切仪(上海标本模型厂)；
M一110L型高压微射流纳米均质机(美国MFIC公
司)；Series1500型高效液相色谱仪(美国LabAl—
liance公司)；QL一901型旋涡混合器(江苏海门市
麒麟医用仪器厂)；TGL型高速离心机(上海安亭科
学仪器厂)；BI一9000AT型光子相关光谱测定仪
(美国Brookhaven)。
羟基喜树碱对照品(湖北李时珍药业有限公司，
收稿日期：2007—09—11
作者简介：刘健华(1983一)，女，河南永城人．在读硕士研究生，主要从事新型给药系统的的研究。E—mail：jianhualiu986@163．corn．
*通讯作者王春龙Tel：(022)23003212
万方数据
中草蔼ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月·845·
批号20050502)；羟基喜树碱原料药(湖北浩信药业
有限公司，批号20051001，质量分数为98．82％)；喜
树碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号
100532—200401)；羟基喜树碱注射液(贵州汉方制药
有限公司，批号20060903)；无水乙醇(天津市天河化
学试剂厂，批号20060902)；大豆磷脂(上海太伟药业
有限公司，批号060417)；维生素E(巴斯夫维生素有
限公司，批号200602003)；聚山梨酯一80(南京威尔化
工有限公司，批号20060903)；泊洛沙姆188(沈阳药
大集琦药业有限责任公司，批号060407)；甲醇、乙腈
为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
日本大耳兔(天津市动物中心，合格证号：wJ
津实动质R—A准字第001号)。
2方法与结果
2．1 羟基喜树碱脂肪乳的制备：取羟基喜树碱100mg
置150mL无水乙醇中溶解，加入大豆磷脂1．2g、
维生素E、泊洛沙姆188、聚山梨酯一80各适量，超声
使其溶解，60℃水浴旋转蒸发除去无水乙醇，将蒸
干混合物均匀分散至20g、70℃的大豆油中，得油
相；另取80mL注射用水并加入甘油2．4g、大豆磷
脂适量，70℃水浴中使其均匀分散得水相。水相
70℃水浴中12000r／rain高速剪切，同时将油相缓
缓加入水相中，加完油相后继续剪切20min得初
乳。将初乳通过高压微射流仪(压力>5．5×105Pa)
3遍，得载药脂肪乳。
2．2羟基喜树碱脂肪乳中羟基喜树碱的测定
2．2．1色谱条件：色谱柱：迪马钻石C。。柱(250mm×
4．6mm，5肛m)，流动相：10mmol／L磷酸盐缓冲溶液
(pH4．O)一甲醇(50：50)，体积流量：1．0mL／min，柱
温：35℃，波长：384nm，进样量：20弘L。
2．2．2羟基喜树碱储备液的配制：精密称取羟基喜
树碱对照品20mg，置100mL量瓶中，加适量甲醇
溶解后定容，配制成0．2mg／mL的储备液，置于4
℃冰箱中备用。
2．2．3供试品溶液的配制：取羟基喜树碱脂肪乳
100弘L于1mL量瓶中，加适量甲醇涡旋10min，使
脂肪乳中各成分均匀分散在甲醇中，加甲醇至刻度，
摇匀即得。
2．2．4标准曲线的制备：精密量取羟基喜树碱储备
液适量，配制成含羟基喜树碱分别为1．0、4．0、8．0、
12．0、16．0、32．0、50．0／-g／mL溶液，进样分析。以
峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标，进行线性回
归，回归方程为Y=114．5455X一358．938，r=
0．999，表明羟基喜树碱在1．O～50．0弘g／mL与峰
面积线性关系良好。
2．2．5精密度试验：取羟基喜树碱对照品溶液20
pL注入高效液相色谱仪，重复进样5次，测定其峰
面积积分值，RSD为0．83％(咒一5)。
2．2．6稳定性试验：将同一供试品溶液1d内重复
进样5次，并连续测定5d，得出羟基喜树碱的峰面
积和相应的质量浓度，其日内与日间RSD分别是
1．68％、4．05％，说明供试品溶液在所测时间内基
本稳定。
2．2．7重复性试验：取同一批样品5份，制备供试
品溶液，进样测定，计算样品中羟基喜树碱的质量分
数，其结果为(98．4土1．6)％，RSD为1．65％，表明
方法的重复性好。
2．2．8回收率试验：分别精密量取空白乳0．1mL，
加入羟基喜树碱储备液适量，配制羟基喜树碱质量
浓度分别为1．0、12．0、50．0tlg／mL的溶液，进样测
定，各测定3次，结果平均回收率分别为99．6％、
98．7％、98．9％，RSD分别为0．76％、0．77％、
0．78％。
2．2．9测定结果：精密量取羟基喜树碱脂肪乳100
pL，于10mL离心管中，加适量甲醇涡旋10min，
使脂肪乳中各成分均匀分散在甲醇中，加甲醇至刻
度，得澄明溶液。取20肛L，直接注入液相色谱仪测
定。同法测定3批样品，每批测定3份，结果见表1。
表1羟基喜树碱脂肪乳中羟基喜树碱的测定结果(一一3)
Table1 Determinationofhydroxycamptothecin
inhydroxycamptothecin—loadedlipid
emulsion(以一3)
2．3粒径的考察：取羟基喜树碱脂肪乳适量，用双
蒸水稀释至澄清透明，用动态光散射法测定粒径，结
果见图1。可见粒径分布在160～200nm，平均粒径
187．1nm。
100
髻50
0
一。
I IL
50 500
粒径／nm
图1 羟基喜树碱脂肪乳的粒径及粒径分布圈
Fig．1Particlediameteranditsdistributionofhydroxy
camptothecin-loadedlipidemulsion
2．4胰腺组织中羟基喜树碱的测定
万方数据
·846· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月
2．4．1组织样品预处理：取家兔胰腺，精密称取1g
剪碎，加入3mL生理盐水，12000r／min剪切5
min，精密称取3g匀浆并加入浓磷酸30弘L和100
／Jg／mL内标液10弘L，涡旋混合后冷藏过夜，加入5
mL乙腈，涡旋10min，离心后取上清液4mL置10
mL离心管中，以乙腈定容至10mL并振摇1min，
再次离心后取上清液8mL氮气吹干，加入100肛L
流动相，涡旋使充分溶解，离心后取上清液，即得。
2．4．2色谱条件：同2．2．1。
2．4．3专属性试验：取家兔空白胰腺和给药后的胰
腺，进行预处理，进行测定，结果见图1。空白组织样
品出峰时间均在6min之前，羟基喜树碱的保留时
间约为13．7min，内标喜树碱的保留时间为18．8
min。胰腺内源性物质对内标及羟基喜树碱均无干
扰，且羟基喜树碱和内标分离良好。
t／rain
1一羟基喜树碱2一喜树碱
1一hydroxycamptothecin2-camptothecin
圈2空白胰腺(A)和胰腺样品(B)的HPLC色谱图
Fig．2HPLCChromatogramsofbl nkpancreas(A)
andpancreassample(B)
2．4．4 内标液的配制：精密称取喜树碱对照品5
mg，加适量甲醇溶解并定容至50mL，得100／比g／mL
的内标溶液，置于4℃冰箱中备用。
2．4．5线性范围和检测限：取空白胰腺组织匀浆3
g，配制成含羟基喜树碱分别为1．0、2．4、4．8、8．0、
16．0、32．0、64．0、100．0、120．0、160．O／19／mL溶液，
进样分析。以羟基喜树碱兔胰腺组织样品质量浓度
为横坐标，羟基喜树碱与内标物喜树碱峰面积之比
为纵坐标制备标准曲线，采用加权最dx_-乘法计算
得回归方程为y一0．718X一6．336，r=0．999。羟基
喜树碱在1．o～160．0}tg／mL相关性良好。
配制羟基喜树碱对照品溶液0．1pg／mL，多次
稀释，观察其峰高与噪音，以信噪比约等于3求得最
低检测质量浓度为20ng／mL。
2．4．6精密度试验：取空白胰腺组织匀浆3g，配制
成含羟基喜树碱分别为2．4、32．0、120．0／ag／mL家
兔胰腺组织匀浆样品，1d内连续测定5次，计算日
内精密度；每天测定1次，连续测定5d，计算日间精
密度。结果见表2。
2．4．7回收率试验：取空白胰腺匀浆3g，加人浓磷
酸30pL、喜树碱内标液(100／lg／mL)10pL和适量
羟基喜树碱对照品溶液，涡旋混合后冷藏过夜，加入
5mL乙腈，涡旋10min，离心后取上清液4mL置
10mL离心管中，以乙腈定容至10mL并振摇1
min，再次离心后取上清液8mL氮气吹干，加入100
弘L流动相，涡旋使充分溶解，制得质量浓度为2．4、
32．0、120．0肛g／mL羟基喜树碱溶液，离心后取上
清液进样。各质量浓度依次测定3次，结果见表2。
裹2家兔胰腺组织中羟基喜树碱回收率、精密度试验结果
Table2 Recoveryrateandprecisionofhydroxy—
camptothecininrabbitpancreas
2．4．8羟基喜树碱脂肪乳和羟基喜树碱注射液在
家兔胰腺中的分布研究：取家兔40只，随机分成两
组，按3．5mg／kg的剂量经耳缘静脉分别推注羟基
喜树碱脂肪乳或羟基喜树碱注射液，并于给药后
0．5、1、3、4h将家兔处死，取其胰腺，滤纸吸干表面
水分，进行处理，测定胰腺中的药物。两种制剂在家
兔胰腺中的分布见图3。结果表明，羟基喜树碱脂肪
乳给药后胰腺中的羟基喜树碱质量浓度远高于羟基
喜树碱注射液。
，
-叫
●
曲
j
<
譬
客
_|血
：日}；
鼎
0 l 2 3 4
t／h
田3羟基喜树碱脂肪乳和羟基毫树碱注射液在家兔
胰腺中的浓度(一=5)
Fig．3Hydroxycamptothecinlevelfhydroxy-
camptothecin—loadedlipidemulsion
andhydroxycamptothecininjection
inrabbitpancreas(甩一5)
3讨论
采用两步乳化法制备的羟基喜树碱脂肪乳载药
量高，粒径均一。将乳剂用甲醇破乳后直接进样，样
品处理简单，脂肪乳中的油脂、磷脂等主要脂类杂质
被C。。柱较强吸附，而与羟基喜树碱分离开来且回收
∞
笛
加
”
m
；
O
万方数据
中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月·847·
率高达99．07％，可作为羟基喜树碱脂肪乳质量控
制的方法。实验证明，同一样品连续进样10次(每次
色谱分析18min，不用100％甲醇洗脱脂类杂质)，
柱上吸附的脂类杂质对羟基喜树碱分离及测定均无
影响。最后再用100％甲醇一次性把脂类杂质洗脱
下来，从而降低对仪器的要求。另外，两种羟基喜树
碱制剂在胰腺组织中药物浓度的检测采用HPLC
法，本实验方法专属性高，灵敏，可靠，可作为羟基喜
树碱体内组织分布研究的可靠检测方法。
临床研究将羟基喜树碱、顺铂、5一氟脲嘧啶和醛
氢叶酸联合化疗治疗晚期胰腺癌，发现对于晚期首诊
胰腺癌的治疗有较好的疗效和可耐受的毒性[6]。羟基
喜树碱对胰腺癌细胞的抑制率随药物浓度增加和作
用时间的延长而增高，单药最大抑制率为54．6％；羟
基喜树碱与顺铂联用产生协同作用，抑制率最高可达
74．8％，与临床常用的FEM化疗方案(5一氟尿嘧啶、
表阿霉素、丝裂霉素)相比无显著性差异[7]。因而开发
新的羟基喜树碱载体十分必要。
羟基喜树碱难溶于水，临床上常用的剂型是将其
内酯环打开形成钠盐制备成注射液。内酯开环后形成
的钠盐在生理条件下(pH7．4)可部分闭环转化成为
内酯型而发生药效，但其只占总药量的10％～
20％[83。然而喜树碱类药物的内酯结构是它们作用
于靶酶的必要结构，开环结构的钠盐导致活性显著
降低曲]。本研究将羟基喜树碱包裹于粒径近200am
的脂肪乳中，保护了具有活性的羟基喜树碱内酯
结构。
本实验结果也表明，将羟基喜树碱制成脂肪乳
以后，大大提高了药物在胰腺组织中的浓度。胰腺癌
是临床常见的恶性肿瘤，目前对其治疗仍缺乏有效
的手段。胰腺癌细胞对羟基喜树碱敏感且其敏感性
随药物浓度的增加而增高[3]，说明胰腺癌细胞对羟
基喜树碱具有药物浓度依赖性，因此羟基喜树碱富
集于胰腺有助于胰腺癌的治疗。羟基喜树碱脂肪乳
在胰腺中的浓度比羟基喜树碱注射液提高3～32
倍，并且本研究是采用胰腺正常的家兔进行的，而肿
瘤部位毛细血管通透性比正常部位高，因此该脂肪
乳不仅有望进一步提高对癌变胰腺的靶向性，而且
还可能同时降低羟基喜树碱对其他器官及胰腺未癌
变部位的不良反应。
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麝香缓释双层片和普通片单剂量口服的体内释药特征
与生物利用度研究
程怡1，陈文俊2，郭波红3，陈秀娟1，郭委1
(1．广州中医药大学药剂教研室，广东广州510405f2．广州汉方现代中药研究开发有限公司，广东广州510400，
3．广东药学院，广东广州 510400)
摘要：目的研究麝香缓释双层片MSDT和普通片(MT)单剂量口服的人体释药药力学过程。进行缓释效果和
生物利用度评价。方法 对8名健康自愿男性受试者随机交叉单剂量口服麝香缓释双层片和普通片，用气相一质谱
收稿日期：2007—09—15
基金项目：广东省自然科学基金资助项目(980638)l广州市重大科技攻关资助项目(0223一E5021)
作者简介：程 怡(1955一)，女，河北人，教授，博士生导师．广州广药集团博i=后流动站博士后导师，世界中医药联合会新型给药技术专
业委员会常务理事、世界中医药联合会中药药剂专业委员会理事，国家自然科学基金评审专家库专家，进行10余项省部级科
技计划项目，获得国家中医药管理局中医药科技进步三等奖1项、国家成果证书l项、获得专利授权3项。发表研究论文40
余篇，一直从事药剂学领域的研究和教学。E—mail：ncehenyi@21en．com
万方数据
利用脂肪乳载体提高羟基喜树碱的胰腺靶向性
作者： 刘健华， 江荣高， 王春龙， LIU Jian-hua， JIANG Rong-gao， WANG Chun-long
作者单位： 刘健华,LIU Jian-hua(河南大学,河南,开封,475004)， 江荣高,JIANG Rong-gao(天津药物
研究院,天津,300193)， 王春龙,WANG Chun-long(天津药物研究院,天津,300193;天津大学
,天津,300072)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(6)
被引用次数： 1次

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