全 文 ：中草芮ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月·1027·
2．11回收率试验：取批号为20040201折样品适
量，共6份，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加精密
入1mL683．8弘g／mL五味子醇甲对照品溶液，制
备供试品溶液，进行测定，计算得平均回收率为
99．5％，RSD为2．28％。
2．12样品测定：取10批样品，制备供试品溶液。分
别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10肛L，注
入液相色谱仪，采用外标法计算五味子醇甲的质量
分数，结果见表1。
3讨论
本品制得的供试品溶液曾采用《中国药典))2005
年版一部收载的五味子测定项下的流动相甲醇一水
表1五子衍宗片中五味子醇甲的测定结果
Table1 Determinationofschisandrin
inWuziYanzongTablets
批号
五味子醇甲
批号
五味子醇甲
(pg·片_1) (腿·片-1)
20040302 40．2 20040405 48．9
20040201 50．1 20040408 45．3
20040307 59．3 20040308 57．6
20040202 54．1 20040310 60．6
20040403 42．6 20040311 62．3
(13：7)，五味子醇甲峰与其他峰分离度不好，相互
干扰，经试验采用乙腈一0．5％磷酸溶液(45：55，pH
值为2．i～2．3)为流动相供试品溶液主峰与其他峰
分离较好。
柱前衍生一异硫氰酸苯酯法测定宁心宝胶囊中水解氨基酸
王棘1’2，毕开顺1
(1．沈阳药科大学药学院，辽宁沈阳 110016}2．辽宁省食品药品检验所，辽宁沈阳110023)
宁心宝胶囊为新鲜冬虫夏草中分离得到的麦角
菌科真菌虫草头孢CephalosporiumsinensisChen
sp．Nov经液体深层发酵所得菌丝体的干燥粉末制
成的胶囊，具有提高窦性心率，改善窦房结、房室传
导功能，改善心脏功能的作用，用于多种心律失常，
房室传导阻滞，难治性缓慢型心律失常传导阻滞[1]。
现行标准规定了甾体化合物和氨基酸两项定性鉴
别，并以每粒含氮量作为定量指标。随着大量虫草菌
丝体发酵产品被开发，人工虫草产品中化学成分的
整体水平接近于虫草子实体，水解后氨基酸的种类
和数量也能从一个方面反映其质量优劣，这对确保
其疗效是非常重要的[2]。为了准确反映产品的内在
质量，有必要对宁心宝胶囊水解得到的氨基酸进行
研究。本实验建立了柱前衍生RP—HPLC法测定宁
心宝胶囊中16种水解氨基酸，实验结果表明，本方
法简便、快速、准确。
l仪器与试药
日本岛津LC一10AD高效液相系统，包括
SCL一10AvP控制器LC一10ADvP泵，SPD一10A，。紫
外检测器，SIL一10ADv，自动进样器，CTO～10Avr
柱温箱，LCSolution色谱工作站。
16种氨基酸门冬氨酸(asparticcid，Asp)，谷
氨酸(glutamicc d，Glu)、丝氨酸(serine，Ser)、甘
氨酸(glycine，Gly)、组氨酸(histidine，His)、精氨
酸(arginine，Arg)、苏氨酸(threonine，Thr)、丙氨
酸(alanine，Ala)、脯氨酸(praline，Pro)、酪氨酸
(tyrosine，Tyr)、缬氨酸(valine，Val)、蛋氨酸(me—
thionine，Met)、异亮氨酸(isoleucine，lie)、亮氨酸
(1eucine，Leu)、苯丙氨酸(phenylalanine，Phe)、赖
氨酸(1ysine，Lys)对照品(批号624—200104，质量分
数>98％，中国药品生物制品检定所)。异硫氰酸苯
酯(批号20020801，亭新化工试剂厂)，乙腈为色谱
纯，三乙胺、正己烷、乙酸钠均为分析纯，水为重蒸水。
2方法与结果
2．1色谱条件：KromasilC18色谱柱(250mm×4．6
mm，5肚m)；流动相：A(O．1mol／L乙酸钠水溶液)、
B乙腈一水(4：1)，梯度洗脱：o～15rain，o～7％B；
15～25min，7％～23％B；25～35rain，23％～33％
B；35～40rain，33％～100％B；检测波长：254nm；
体积流量：1．0mL／min；柱温：36℃；自动进样，进
样量3肛L。
2．2样品处理：精密称取宁心宝胶囊内容物250
mg，置25mL水解罐中，加6mol／L盐酸溶液15
mL，充N：，于110℃水解12h，取出放冷，水解液倒
收稿日期：2007—12-06
作者简介：王棘(1977一)，女，辽宁沈阳人，主管药师，硕士研究生，1999年毕业于沈阳药科大学药物制剂专业，从事生化药物分析。
Tel：13674279842E—mail：nebula．sea@hotmail．com
万方数据
·1028· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月
入蒸发皿中，用50mL水分次洗涤水解罐，洗液并
入蒸发皿中，蒸干，残渣用水洗涤3次，每次lOmL，
合并洗液，滤过至100mL量瓶中，加水稀释至刻
度，摇匀。
2．3衍生化方法：取对照品和供试品溶液各0．5
mL，分别加1mol／L三乙胺乙腈液0．25mL和0．1
mol／LPITC衍生试剂0．25mL，室温放置1h，加
正己烷0．5mL，充分混匀，放置10min，取下层，滤
量，精密称定，置50mL量瓶中，用水溶解并定容至
刻度，制成质量浓度分别为236．2、215．8、207．4、
205．8、203．4、208．4、219．8、260．4、216．0、189．0、
190．0、241．8、216．8、207．8、215．8、177．0pg／mL
的溶液，摇匀，备用。依次分别精密量取16种氨基酸
对照品溶液1．0、2．0、5．0、10．0、25mL置25mL量
瓶中，用水定容至刻度，摇匀，即得系列对照品溶液。
分别吸取0．5mI。进行衍生。进样测定，以各氨基酸
过，取3肛L进样分析。 质量浓度对峰面积值作图，绘制标准曲线。结果表明，
2．4线性关系考察：分别取16种氨基酸对照品适16种氨基酸呈良好的线性关系，其回归方程见表1。
表1 16种氨基酸的线性回归方程
Table1 Linearregressionequationof16aminoacids
2．5 回收率试验：精密称取6份宁心宝胶囊(批号
20040702)内容物10mg，精密加入含16种氨基酸
质量浓度均约为0．04mg／mL对照品溶液5mL，制
备供试品溶液，进样测定，计算回收率。结果门冬氨
酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨
酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨
酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸平均回收率和RSD分
别为103．9％(2．8％)、103．3％(2．5％)、97．4％
(1．7％)、85．2％(2．2％)、100．0％(1．3％)、100．0％
(1．3％)、94．7％(1．9％)、100．0％(1．5％)、93．2％
(1．6％)、100．0％(1．3％)、97．6％(1．6％)、97．2％
(1．1％)、98．4％(1．3％)、99．2％(1．9％)、92．5％
(2．5％)、104．7％(2．5％)。
2．6精密度试验：取氨基酸对照品溶液的衍生液，
连续进样5次，分别测定峰面积，计算得门冬氨酸、
谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙
氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮
氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸16种氨基酸的峰面积RSD
分别为2．2％、2．2％、1．5％、0．8oA、1．6％、1．1％、
1．2％、0．7％、0．6％、0．8％、0．5％、0．8％、0．6％、
0．6％、0．6％、0．7％。
2．7重现性试验：取同一批(批号05031501)宁心
宝胶囊内容物6份，制备供试品溶液，进样测定，计
算门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨
酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨
酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸的质量分
数，结果其RSD分别为1．7％、1．4％、1．1％、
1．8％、2 6 、1．4％、0．6％、0．9％、1．1％、1．O％、
2．6％、2 6 、1．3％、1．4％、1．6％、1．1％。
2．8稳定性试验：取同一供试品溶液，分别在0、2、
4、6、8h进样，测定峰面积，计算得门冬氨酸、谷氨
酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨
酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨
酸、苯丙氨酸、赖氨酸的RSD分别为3．4％、3．4％、
2．4％、I．5％、1．4％、2．1％、2．0％、1．4％、1．6％、
1．3％、1．1％、1．7％、1．3％、1．4％、1．3％、1．8％。结
果表明供试品溶液在8h内基本稳定。
2．9 样品测定：精密称取供试品(规格0．25g／粒)，
万方数据
中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月·1029·
制备供试品溶液，进样测定，每份供试品重复进样2 解氨基酸测定结果见表2。16种氨基酸对照品溶液和
次，用峰面积按外标法定量。4个厂家宁心宝胶囊的水 宁心宝胶囊中水解氨基酸的HPLC分离结果见图1。
表2宁心宝胶囊的测定结果
Table2 Determinationof minoacidinNingxinbaoCapsula
批号 垦量坌鏊!!竺!：壁二!
AspGluSer GlyHisArgThrAlaProTyrValMetlie LeuPheLys
辽宁天龙药业有限公司(20020301)
昆明赛诺制药有限公司(0503150 )
东北制药集团公司沈阳第一制药厂(050601)
锦州九洋药业有限责任公司(20040702)
6．1635．2732．7844．5631．1873．7153．0684．4523．4881．4343．3030．7732．6924．1692．8373．671
6．7195．9284．2063．3951．4643．643．1764．7492．6151．7613．6310．4753．1114．7053．0833．607
7．9487．8954．2203．8111．7034．4423．8175．4803．0652．4824．5260．8074．0286．2383．8334．709
6．4096．0163．5343．1531．3854．0323．1594．5622．6441．9193．7470．6773．3005．1443．1673．997
O lO 20
O lO 20 30 40
t／min
1-Asp2-Glu3-Ser4-Gly5-His6-Arg7-Thr8-Ala
9-Pro10一Tyr11-Val12-Met13一Ile14一Leu15-Phe
16-Lys
图1氨基酸对照品(A)和宁心宝胶囊(B)的HPLC图
Fig．1HPLCChromatogramsofaminoacidsreference
substances(A)andNingxi baoCapsula(B)
3讨论
由于宁心宝胶囊对心脏病的作用机制尚未十分
明确，还有待更进一步的探讨和研究[引。为了更有效
地控制好该品种的质量，确保其临床疗效，笔者用异
硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生化RP—HPLC法测定
其氨基酸。通过酸水解使其转化成游离氨基酸，比原
有标准测其总氮量的方法更确切、全面，对控制其工
艺稳定性提供了可靠依据。此法具有分析时间短、成
本低、重现性好、稳定性好等优点，对控制该药品质
量起到一定的作用。
参考文献：
Ell卫生部药品标准[s]．中药成方制剂第1i册．1996．
[2]王尊生，顾宇翔．冬虫夏草(Cordycepssinensis)菌丝体固体发
酵粉化学成分的分析口]．天然产物研究与开发，2005，17
(3)：331—336．
[3]周建树，池景良，李鑫．冬虫夏草的化学成分及药理功能研
究进展rJ]．人参研究，2005(1)：18．
HPLC法测定黄体超泻痢丹中甘草酸
王 杰1，黄可婧1，吕曙华1，樊岩2
(1．天津市药品检验所，天津300070l2．天津工业大学，天津300160)
黄体超泻痢丹为香港黄体超制药厂产品，其处
方以甘草、赤石脂、茯苓等中药材组成，具有治疗急
泻、湿滞泻、食滞泻、呕吐肚痛等功效。处方中甘草具
有补脾益气，清热解毒，缓急止痛，调和诸药作用，与
成品的功效相吻合。因此，本实验采用高效液相色谱
法，以甘草酸为定量指标进行了测定，为该制剂的质
量控制提供了保证。
1仪器与试药
日本岛津2010A高效液相色谱仪。
甘草酸铵对照品购自中国药品生物制品检定所
(批号110731—200511)，黄体超泻痢丹由香港标准
收稿日期：2007—12—19
及检定中心提供，甲醇、冰醋酸、醋酸铵为分析纯，水
为纯化水。
2方法与结果
2．1 色谱条件：色谱柱为DiamonsilC18(250mm×
4．6mm，5弘m)；流动相：甲醇一0．2mol／L醋酸铵溶
液一冰醋酸(67：33：1)；柱温：30℃；体积流量：1
mL／min；检测波长：250nm。理论板数按甘草酸峰
计算应不低于3000。色谱图见图1。
2．2溶液的制备
2．2．1对照品溶液的制备：取甘草酸对照品适量，
精密称定，加流动相制成0．1mg／mL的溶液，摇匀，
万方数据
柱前衍生-异硫氰酸苯酯法测定宁心宝胶囊中水解氨基酸
作者： 王棘， 毕开顺
作者单位： 王棘(沈阳药科大学药学院,辽宁,沈阳,110016;辽宁省食品药品检验所,辽宁,沈阳,110023)
， 毕开顺(沈阳药科大学药学院,辽宁,沈阳,110016)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(7)
被引用次数： 2次
参考文献(3条)
1.中药成方制剂 1996
2.王尊生;顾宇翔 冬虫夏草(Cordyceps sinensis)菌丝体固体发酵粉化学成分的分析[期刊论文]-天然产物研究与
开发 2005(03)
3.周建树;池景良;李鑫 冬虫夏草的化学成分及药理功能研究进展[期刊论文]-人参研究 2005(01)
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4. 李惠芬.骆达.张庆伟.朱丽丽.李鋆.LI Hui-fen.LUO Da.ZHANG Qing-wei.ZHU Li-li.LI Jun 柱前衍生化RP-
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5. 陆芳芳.孙伟 冬虫夏草制剂在肾脏病中的应用[期刊论文]-吉林中医药2009,29(11)
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引证文献(2条)
1.黄浩.侯媛媛.肖雪.傅俊曾.宋生有.白钢.罗国安 邻苯二甲醛-9-氯甲酸芴甲酯柱前衍生HPLC法测定血必净注射液
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2.徐飞.谭乐和.陈鹏.朱红英.胡荣锁.张翠玲 OPA-FMOC柱前衍生反相高效液相测定糯米香茶叶片中的氨基酸[期刊
论文]-热带作物学报 2012(8)
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