全 文 ：虎掌南星中氨基酸含量测定
居 羚１，池玉梅２，王天鹤２
（１．常州市中医医院，江苏 常州２１３００２；２．南京中医药大学，江苏 南京２１００４６）
摘 要：目的：建立虎掌南星中各氨基酸含量测定的方法。方法：采用柱前衍生化后进行高效液相色谱
法定量分析。色谱柱为Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ Ｃ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ），柱温３５℃；以异硫氰酸苯酯（ＰＩＴＣ）为衍
生化试剂；乙腈－醋酸铵缓冲液（ｐＨ＝６．５）为流动相体系，梯度洗脱，流速１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测波长
２５４ｎｍ。结果：谷氨酸和色氨酸在２μｇ·ｍＬ
－１～１００μｇ·ｍＬ
－１浓度范围内，精氨酸在６～３００μｇ·ｍＬ
－１浓
度范围内，其他氨基酸在０．８～４０μｇ·ｍＬ
－１浓度范围内均与峰面积呈良好线性关系，相关系数均不低于
０．９９９ ５，平均回收率均在９３．４３％～１１１．０１％之间，ＲＳＤ均小于３％。结论：该方法灵敏、准确，重现性
好，可用于虎掌南星中各氨基酸含量的测定。
关键词：虎掌南星；衍生化；氨基酸；异硫氰酸苯酯；高效液相色谱
中图分类号：Ｒ２８４．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３－２１９７（２０１６）０９－００３０－０３
ＤＯＩ：１０．１１９５４／ｙｔｃｔｙｙ．２０１６０９０１３
收稿日期：２０１５－１１－２６
作者简介：居羚（１９８５－），女，硕士，江苏省常州市中医医院主管中药师，研究方向为中药配伍及鉴定。
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ ｉｎ Ｐｅｄａｔｅ Ｐｉｎｅｌｉａ Ｒｈｉｚｏｍｅ ｂｙ Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ
Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
Ｊｕ Ｌｉｎｇ１，Ｃｈｉ Ｙｕｍｅｉ ２，Ｗａｎｇ Ｔｉａｎｈｅ２
（１．Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｉｎ Ｃｈａｎｇｚｈｏｕ，Ｃｈａｎｇｚｈｏｕ ２１３００２，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｎａｎｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００４６，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｉｎ Ｐｅｄａｔｅ Ｐｉｎｅｌｉａ Ｒｈｉｚｏｍｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ｑｕａｎｔｉｔａ－
ｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｂｙ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗａｓ ｐｒｏｃｅｅｄｅｄ ａｆｔｅｒ ｐｒｅ－ｃｏｌｕｍ ｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｐｈｅｎｙｌ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ
（ＰＩＴＣ）ａｓ ｔｈｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎ ｒｅａｇｅｎｔ．Ｉｔ ｕｓｅｄ ｔｈｅ Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ Ｃ１８ｃｏｌｕｍｎ（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｅ ｗａｓ
３５℃．Ａｎｄ ｉｔ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ａｔ ２５４ｎｍ，ａｎｄ ｇｒａｄｉｅｎｔｌｙ ｅｌｕｔｅｄ ｂｙ ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ ａｎｄ ａｍｍｏｎｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ（ＰＨ＝６．５）．Ｔｈｅ ｖｅｌｏｃｉｔｙ ｏｆ ｆｌｏｗ
ｗａｓ １．０ｍＬ·ｍｉｎ－１．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ａｌ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｃｕｒｖｅｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒｉｔｙ：ｇｌｕｔａｍａｔｅ ａｎｄ ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ２～１００μｇ·
ｍＬ－１，ａｒｇｉｎｉｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ６～３００μｇ·ｍＬ
－１，ｏｔｈｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ０．８～４０μｇ·ｍＬ
－１，ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ≥０．９９９
５．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ａｍｏｎｇ ９３．４３％～１１１．０１％ａｎｄ ｔｈｅ ＲＳＤ ｗａｓ ｌｅｓｓ ｔｈａｎ ３％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ
ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｔｅ ｗｉｔｈ ｇｏｏｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｔｈｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｉｎ Ｐｅｄａｔｅ Ｐｉｎｅｌｉａ Ｒｈｉｚｏｍｅ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｅｄａｔｅ Ｐｉｎｅｌｉａ Ｒｈｉｚｏｍｅ；Ｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎ；Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ；Ｐｈｅｎｙ Ｌｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ；Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａ－
ｐｈｙ（ＨＰＬＣ）
虎掌南星Ｐｅｄａｔｅ Ｐｉｎｅｌｉａ Ｒｈｉｚｏｍｅ，为天南星科半夏属
植物掌叶半夏Ｐｉｎｅｌｌｉａ Ｐｅｄａｔｉｓｅｃｔａ Ｓｃｈｏｔｔ．的干燥块茎，其
性温，味苦、辛；归肺、肝、脾经［１］，具有祛风止痉、化痰散结、
抗惊厥等功效［２］，其含有生物碱类、二肽类、苷类、氨基酸、
凝集素、脂肪酸、糖、微量元素、核苷等成分［３］，在安徽、四
川、河北等地均有大面积种植。然而迄今虎掌南星尚未收
载于《中国药典》，有关虎掌南星质量研究的报道［４］也尚少，
目前个小者常被当作天南星科半夏属植物半夏（Ｐｉｎｅｌｌｉａ
ｔｅｒｎａｔｅ（Ｔｈｕｍｂ）Ｂｒｅｉｔ），大多数被作为天南星科天南星属
植物天南星（Ｒｈｉｚｏｍａ Ａｒｉｓａｅｍａｔｉｓ）的主流商品使用［５－６］。
有研究报道虎掌南星中含有多种氨基酸成分［７］，但尚未见
有其定量分析的报道。众所周知，氨基酸不仅对人体生命
活动有重要作用，也是植物生长活动必需的一类物质［８］。
鉴于中药的功效往往是多成分的协同作用，且目前虎掌南
星的功效成分尚不清楚，因此本文以异硫氰酸苯酯（ＰＩＴＣ，
Ｃ７Ｈ５ＮＳ）为衍生化试剂，通过柱前衍生化，采用高效液相色
谱法对虎掌南星中游离氨基类成分进行定量分析，以期为
虎掌南星的研究及质量控制提供参考。
—０３—
１ 仪器与试药
仪器：Ｗａｔｅｒｓ Ａｌｉａｎｃｅ ２６９５ ＨＰＬＣ（美国 Ｗａｔｅｒｓ公
司），配 Ｗａｔｅｒｓ２４８９紫外检测器，Ｗａｔｅｒｓ Ｅｍｐｏｗｅｒ Ｐｒｏ色谱
工作站；ＸＷ－８０Ａ 涡旋混合器；ＴＧＬ－１６Ｇ 离心机；ＫＨ－
７００ＤＥ型数控超声波仪。
试药：异硫氰酸苯酯（ＰＩＴＣ，ａｌａｄｄｉｎ公司），纯度标示量
为９８％；乙腈为色谱纯；醋酸、醋酸铵、三乙胺皆为分析纯；
水为自制超纯水；药材：１２批虎掌南星，经南京中医药大学
药植鉴定专家谈献和教授鉴定为相应品种。
对照品：天冬氨酸（Ａｓｐ）、谷氨酸（Ｇｌｕ）、丝氨酸（Ｓｅｒ）、
甘氨酸（Ｇｌｙ）、组氨酸（Ｈｉｓ）、精氨酸（Ａｒｇ）、苏氨酸（Ｔｈｒ）、丙
氨酸（Ａｌａ）、脯氨酸（Ｐｒｏ）、酪氨酸（Ｔｙｒ）、缬氨酸（Ｖａｌ）、异亮
氨酸（Ｉｌｅ）、亮氨酸（Ｌｅｕ）、色氨酸（Ｔｒｙ）及赖氨酸（Ｌｙｓ）均购
自ＢＩＯ ＢＡＳＩＣ ＩＮＣ，供含量测定用，质量分数均＞９８％。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件
色谱柱：Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ Ｃ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）；流动
相：Ａ：乙腈，Ｂ：０．０５ｍｏＬ·Ｌ－１醋酸－醋酸铵缓冲液（ｐＨ＝
６．５），梯度洗脱（０～１５ｍｉｎ，３％～１３％Ａ；１５～２２ｍｉｎ，１３％～
１７％Ａ；２２～２５ｍｉｎ，１７％～２３％Ａ；２５～３５ｍｉｎ，２３％～２５％
Ａ；３５～４５ｍｉｎ，２５％～３０％Ａ；４５～５０ｍｉｎ，３０％～１００％Ａ），
流速：１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１；柱温：３５℃；进样量：３μＬ；检测波长：
２５４ｎｍ。
２．２ 对照品溶液的制备
分别取氨基酸对照品适量，精密称定，加入０．１ｍｏＬ·
Ｌ－１盐酸溶液，配成１ｍｇ·ｍＬ－１的对照品储备液，备用。
２．３ 供试品溶液的制备
取虎掌南星药材粉末约０．４ｇ，精密称定，置具塞锥形瓶
中，精密加入０．１ｍｏｌ·Ｌ－１盐酸溶液５０ｍＬ，称重，超声提取
４０ｍｉｎ，取出，放冷，用０．１ｍｏＬ·Ｌ－１盐酸溶液补足重量，摇
匀，滤过，滤液即得。
２．４ 衍生化方法
精密量取供试品溶液２００μＬ，置于１．５ｍＬ塑料管中，加
入０．１ｍｏＬ·Ｌ－１ＰＩＴＣ－乙腈溶液和１ｍｏｌ·Ｌ－１三乙胺－乙腈溶
液各５０μＬ，涡旋混匀１ｍｉｎ，再置２５℃水浴１ｈ后，精密加入
正己烷１ｍＬ，涡旋混匀１ｍｉｎ，静置１０ｍｉｎ，取下层溶液，于
１３ ０００ｒ·ｍＬ－１高速离心１０ｍｉｎ，取上清液即得。
２．５ 线性考察
精密移取各对照品储备液适量，置于２５ｍＬ容量瓶中，
０．１ｍｏｌ·Ｌ－１盐酸定容至刻度，即得含有谷氨酸和色氨酸浓
度为０．１ｍｇ·ｍＬ－１、精氨酸浓度为０．３ｍｇ·ｍＬ－１及其他氨
基酸浓度为０．０４ｍｇ·ｍＬ－１的混合对照品溶液。分别将其
稀释２倍、５倍、１０倍、２５倍、５０倍，即得系列对照品溶液，按
“２．４”项下方法进行衍生化，按“２．１”项下色谱条件进样，测
定峰面积。以对照品的浓度Ｘ（μｇ·ｍＬ
－１）对峰面积Ｙ 进行
线性回归，得各氨基酸的回归方程，见表１。谷氨酸和色氨
酸在２～１００μｇ·ｍＬ
－１浓度范围内，精氨酸在６～３００μｇ·
ｍＬ－１浓度范围内，其他氨基酸在０．８～４０μｇ·ｍＬ
－１浓度范围
内均与峰面积之间有良好的线性关系，相关系数均不低于
０．９９９ ５。
２．６ 精密度考察
取已衍生化的浓度适中的混合对照品溶液，按“２．１”项
下色谱条件连续进样６次，以对应的色谱峰峰面积计算，
ＲＳＤ均小于３．０％，表明仪器精密度良好。
２．７ 重复性和稳定性考察
取同一药材（ＨＺ－１）粉末６份，以建立的方法进行测定
含量，所得ＲＳＤ均小于３．０％，表明该方法重复性好。以同
一供试品溶液在２４ｈ内每隔６ｈ依此进行测定，结果显示供
试品溶液在制备后２４ｈ内色谱峰面积无显著性变化，ＲＳＤ
均小于３．０％，表明供试品溶液稳定性良好。
表１ １５种氨基酸的线性回归方程
对照品 回归方程 ｒ 线性范围（μｇ／ｍＬ）
天冬氨酸 Ｙ＝８ ８９９．９ Ｘ－１ ７９７．３ ０．９９９ ８ ０．８～４０
谷氨酸 Ｙ＝８ ４２８．９ Ｘ－５３５．０５ ０．９９９ ５ ２～１００
丝氨酸 Ｙ＝１５ ０８３ Ｘ－１ ５７５．３ ０．９９９ ６ ０．８～４０
甘氨酸 Ｙ＝２５ ３０７ Ｘ－１３ ０５３ ０．９９９ ７ ０．８～４０
组氨酸 Ｙ＝８ ２２６．９ Ｘ－１ ９２１．３ ０．９９９ ８ ０．８～４０
精氨酸 Ｙ＝８ １６０．６ Ｘ－１６ ０５５ ０．９９９ ８ ６～３００
苏氨酸 Ｙ＝１２ ７７７ Ｘ－２ ８４４．５ ０．９９９ ８ ０．８～４０
丙氨酸 Ｙ＝１８ ６１６ Ｘ－５ １９８．４ ０．９９９ ８ ０．８～４０
脯氨酸 Ｙ＝１６ ３８４ Ｘ－４ ２４１．７ ０．９９９ ８ ０．８～４０
酪氨酸 Ｙ＝１１ ２５２ Ｘ－４ ００２．０ ０．９９９ ９ ０．８～４０
缬氨酸 Ｙ＝１４ ６１１ Ｘ－５ ７０１．１ ０．９９９ ８ ０．８～４０
异亮氨酸 Ｙ＝１４ ３６０ Ｘ－７ ２５４．２ ０．９９９ ９ ０．８～４０
亮氨酸 Ｙ＝１４ ３８０ Ｘ－７ ２６３．４ ０．９９９ ９ ０．８～４０
色氨酸 Ｙ＝１１ ２８８ Ｘ－１４ ４５４ ０．９９９ ９ ２～１００
赖氨酸 Ｙ＝２０ ９３１ Ｘ－１３ １６５ ０．９９９ ８ ０．８～４０
２．８ 回收率试验
精密称取已知含量的样品（ＨＺ－１）粉末６份，各０．２ｇ，置
具塞锥形瓶中，分别加入每１ｍＬ含０．００３ ０ｍｇ天冬氨酸、
０．０４０ ０ｍｇ谷氨酸、０．００４ ０ｍｇ丝氨酸、０．００１ ８ｍｇ甘氨酸、
０．０００ ４ｍｇ组氨酸、０．０３０ ０ｍｇ精氨酸、０．００２ ０ｍｇ苏氨酸、
０．０１４ ０ｍｇ丙氨酸、０．００６ ０ｍｇ脯氨酸、０．００１ ４ｍｇ酪氨酸、
０．００３ ２ｍｇ缬氨酸、０．００１ ３ｍｇ异亮氨酸、０．００２ ０ｍｇ亮氨
酸、０．０１６ ０ｍｇ色氨酸、０．００２ ０ｍｇ赖氨酸的混合对照品溶
液２５ｍＬ，遂加入０．１ｍｏｌ·Ｌ－１盐酸２５ｍＬ，按“２．３”项下自
“称重，超声提取４０ｍｉｎ，取出，放冷”起操作，制备所需溶液，
按“２．４”项下方法进行衍生化，按“２．１”项下色谱条件进样，
根据峰面积测定，计算回收率，
结果显示（见表２），１５种氨基酸的平均回收率为：
９３．４３％～１１１．０１％，ＲＳＤ均小于３．０％，符合定量测定要
求。
表２ 回收率试验结果
成分 加入量（ｍｇ） 平均回收率（％） ＲＳＤ（％）
天冬氨酸 ０．０７５ １０２．２２ １．４２
谷氨酸 １．０００ １０３．１３ ２．８６
丝氨酸 ０．１００ １００．１ ２．１４
甘氨酸 ０．０４５ ９９．２１ １．４１
组氨酸 ０．０１０ ９７．１４ １．７４
精氨酸 ０．７５０ ９７．５７ ２．１５
苏氨酸 ０．０５０ １１１．０１ １．９７
丙氨酸 ０．３５０ ９８．８１ ２．９１
脯氨酸 ０．１５０ ９４．６７ ０．６６
酪氨酸 ０．０３５ １０２．６１ ２．４１
缬氨酸 ０．０８０ １０５．９４ １．６８
异亮氨酸 ０．０３２ １０５．４２ ２．８２
亮氨酸 ０．０５０ １０４．１１ １．１６
色氨酸 ０．４００ １０７．７２ ２．７１
赖氨酸 ０．０５０ ９３．４３ １．２３
２．９ 样品测定
按已建立的方法，测定了１２批虎掌南星样品，测定结
果见表３。该方法适用性强，被测组分与相邻的色谱峰都能
达到基线分离（见图１）。
—１３—
表３ １２批虎掌南星药材中１５种游离氨基酸含量 （ｍｇ·ｇ－１，ｎ＝２）
编号 产地 Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｈｉｓ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｔｒｙ Ｌｙｓ
ＨＺ－１ 河北 ０．２９ ２．６７ ０．２６ ０．１３ ０．０７ ２．７１ ０．１６ ０．８８ ０．２４ ０．１９ ０．３４ ０．１７ ０．２４ ０．５９ ０．２８
ＨＺ－２ 河北 ０．３８ ５．０９ ０．４６ ０．２３ ０．０６ ３．８０ ０．２６ １．６９ ０．７１ ０．１７ ０．４１ ０．１６ ０．２４ ２．０８ ０．２４
ＨＺ－３ 河北 ０．４５ ６．５６ ０．５１ ０．２３ ０．０７ ６．２６ ０．１４ ２．３６ ０．７３ ０．１５ ０．３８ ０．１７ ０．２３ ２．０１ ０．２５
ＨＺ－４ 河南 ０．３６ ４．８９ ０．４３ ０．２８ ０．１０ ７．９３ ０．１７ １．５０ ０．５６ ０．２５ ０．５０ ０．２７ ０．４２ １．７３ ０．５５
ＨＺ－５ 河南 ０．５０ １．４２ ０．２８ ０．１５ ０．０６ ４．８７ ０．１５ ０．９３ ０．２３ ０．１６ ０．３１ ０．１８ ０．２８ ０．４３ ０．２３
ＨＺ－６ 山东 ０．３８ ５．７３ ０．４５ ０．２２ ０．０６ ６．１４ ０．１６ ２．１１ ０．６７ ０．１７ ０．３８ ０．１６ ０．２４ １．８６ ０．２２
ＨＺ－７ 陕西 ０．３８ ２．１８ ０．３１ ０．１３ ０．１４ ４．９８ ０．１９ ０．６１ ０．３０ ０．２４ ０．２０ ０．１５ ０．２０ ０．２７ ０．４５
ＨＺ－８ 安徽 ０．５５ ０．７１ ０．１８ ０．１１ ０．０７ ６．７２ ０．１２ ０．９４ ０．１６ ０．１３ ０．１８ ０．１３ ０．２５ ０．２１ ０．２１
ＨＺ－９ 东北 ０．７０ １．３１ ０．２９ ０．１４ ０．１３ ５．９４ ０．１９ １．３５ ０．２８ ０．２５ ０．２９ ０．１９ ０．５４ ０．２２ ０．３２
ＨＺ－１０ 广西 ０．６０ １．５０ ０．３１ ０．２３ ０．０９ ７．７２ ０．１９ １．１６ ０．３７ ０．２８ ０．４４ ０．２８ ０．５１ １．２９ ０．４２
ＨＺ－１１ 四川 ０．６７ ２．９５ ０．３４ ０．２０ ０．１１ ９．９８ ０．１７ １．０８ ０．３１ ０．１９ ０．２８ ０．１８ ０．３２ ０．３０ ０．４０
ＨＺ－１２ 河北 ０．３７ ０．５７ ０．１１ ０．１２ ０．０８ ２．９３ ０．１２ ０．１８ ０．１０ ０．１５ ０．１６ ０．１３ ０．２１ ０．７１ ０．２９
ＲＳＤ（％） ２８ ７０ ３６ ３１ ３２ ３７ ２２ ５０ ５７ ２５ ３３ ２６ ３８ ７８ ３４
图１ 对照品（Ａ）、虎掌南星样品（ＨＺ－１，Ｂ）和溶剂（Ｃ）ＨＰＬＣ色谱
１．天冬氨酸ａｓｐａｒｔｉｃ ａｃｉｄ；２．谷氨酸ｇｌｕｔａｍａｔｅ；３．丝氨酸ｓｅｒｉｎｅ ４．；甘氨酸ｇｌｙｃｉｎｅ；５．组氨酸ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ；６．精氨酸ａｒｇｉｎｉｎｅ；７．苏氨酸ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ；
８．丙氨酸ａｌａｎｉｎｅ；９．脯氨酸ｐｒｏｌｉｎｅ；１０．酪氨酸ｔｙｒｏｓｉｎｅ；１１．缬氨酸ｖａｌｉｎｅ；１２．异亮氨酸ｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ；１３．亮氨酸ｌｅｕｃｉｎｅ；１４．色氨酸ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ；
１５．赖氨酸ｌｙｓｉｎｅ
３ 讨论
本试验采用异硫氰酸苯酯与氨基酸衍生化，其产物苯
基硫酸盐－氨基酸，稳定性高，有研究［９］显示该产物在干粉
冰冻条件下保持１～２周稳定。其最大吸收波长在２５０ｎｍ
左右，在其附近微调波长，以基线稳定、峰面积大小合适为
指标，最终确定检测波长为２５４ｎｍ。
实验中分别采用醋酸钠－醋酸（ｐＨ＝６．５）∶甲醇，醋酸
钠－醋酸（ｐＨ＝６．５）∶乙腈，醋酸铵－醋酸（ｐＨ＝６．５）∶乙
腈，等不同溶剂进行检测，结果表明甲醇或者乙腈作为有机
相，二者分离能力相差不大，但是乙腈体系柱压低，醋酸铵－
醋酸：乙腈体系，较醋酸钠－醋酸：乙腈体系不存在盐析、柱压
高等问题，能够降低高效液相色谱仪的损耗，延长色谱柱的
使用寿命，所以选择醋酸铵－醋酸（ｐＨ＝６．５）∶乙腈体系。
通过测定１２批不同产地虎掌南星中的１５种氨基酸成
分含量，结果显示，药材中氨基酸类成分含量差异较大，这
是否与产地、采收时间等因素有关，还需进一步研究。
本方法灵敏、准确，重现性好，可用于虎掌南星中各氨
基酸含量的测定，为虎掌南星的质量控制奠定了基础。
参考文献：
［１］ 宋立人．中华本草［Ｍ］．第２３卷．上海：上海科学技术出版
社，１９９９：５０４．
［２］ 毛淑杰，程立平，吴连英，等．天南星（虎掌南星）抗惊厥作用
探讨［Ｊ］．中药材，２００１，２４（１１）：８１３．
［３］ 汪荣斌，王存琴，刘晓龙．天南星（虎掌南星）的化学成分和药
理作用研究［Ｊ］．长春中医药大学学报，２０１０，２６（４）：５９０－５９２．
［４］ 陆丹，池玉梅，赵懿清，等．虎掌南星药材的质量标准研究
［Ｊ］．中成药，２０１３，３５（６）：１２７４－１２７８．
［５］ 李彦文，李志勇，郭庆梅，等．虎掌南星的本草考证［Ｊ］．现代
中药研究与实践，２０１２，２６（４）：１８－２０．
［６］ 孙稚颖，周凤琴．虎掌南星药材产地加工方法的初步研究
［Ｊ］．中国现代中药，２００９，１１（３）：２８－３０．
［７］ 季申，丁声颂，李颖．１０种药用天南星的化学成分分析［Ｊ］．
上海医科大学学报，１９８９，１６（３）：１９３－１９５．
［８］ 杨云，张晶，陈文婷，等．天然药物化学成分提取分离手册
［Ｍ］．第２版．北京：中国中医药出版社，２００３：５０６－５０８．
［９］ 董泗建，梁发权，蔡宁生．柱前衍生氨基酸的高效液相色谱分
析［Ｊ］．氨基酸和生物资源，１９９６，１８（３）：４６－５１．
（责任编辑：宋勇刚）
—２３—