全 文 ：柱前衍生 －高效液相色谱法同时测定可食药用葱属
植物中 18 种游离氨基酸含量*
赵东升1，2，马晓丽1，李新霞1＊＊，张海波1，勉强辉1，孟磊1，陈坚1
(1．新疆医科大学药学院，乌鲁木齐 830054;2．新疆师范大学化学化工学院，乌鲁木齐 830049)
摘要 目的:建立一种利用高效液相色谱法同时测定可食药用葱属植物中 18 种游离氨基酸含量的方法。方法:以异硫氰酸苯
酯为柱前衍生化试剂，采用梯度洗脱，于 254 nm波长处检测 18 种氨基酸。结果:在一定的浓度范围内，各种氨基酸峰面积和
浓度呈良好线性关系，r值均大于 0. 998;加样回收率为 91. 5% ～ 110. 5%(n = 9)。结论:应用该法对大蒜、洋葱、韭菜等几种常
见可食药用葱属植物中 18 种游离氨基酸的含量进行了测定，准确、方便、快速，可用于不同葱属植物的质量控制研究。
关键词:葱属植物;柱前衍生化;游离氨基酸;异硫氰酸苯酯;高效液相色谱法
中图分类号:Ｒ917 文献标识码:A 文章编号:0254 － 1793(2013)06 － 0963 － 06
* 国家自然科学基金项目(81260486) ;新疆维吾尔自治区科技支疆项目(200891124)
＊＊ 通讯作者 Tel:(0991)4365034;E － mail:lxx6668@ 163. com
Determination of 18 kinds of free amino acids in edible and
medicinal Allium using pre － column derivatization HPLC*
ZHAO Dong － sheng1，2，MA Xiao － li1，LI Xin － xia1＊＊，ZHANG Hai － bo1，
MIAN Qiang － hui1，MENG Lei1，CHEN Jian1
(1． College of Pharmacy，Xinjiang Medical University，Urumqi 830054，China;
2． College of Chemistry and Chemical Engineering，Xinjiang Normal University，Urumqi 830049，China)
Abstract Objective:To establish an HPLC method for simultaneous determination of 18 kinds of free amino acids
in edible and medicinal allium plants．Methods:The phenyl isothiocyanate was used as pre － column derivatization
reagent． A total of 18 kinds of amino acids were detected using gradient elution at 254 nm wavelength． Ｒesults:In a
certain concentration range，the peak area and concentration of each amino acid showed a good linear relationship．
Correlation coefficient r values were more than 0. 998． The recoveries ranged in 91. 5% － 110. 5% (n = 9)．
Conclusion:Totally 18 kinds of free amino acids were determined in garlic，onions，leeks and other several common
edible and medicinal Allium plants． The method established is accurate，simple and rapid，which is suitable for the
quality control of different Allium plants．
Key words:Allium plants;pre － column derivatization;free amino acids;phenylisothiocyanate;high performance
liquid chromatography
大蒜、洋葱等是几种常见历史悠久、药食两用广
义百合科(Alliaceae)或葱科葱属(Allium)植物。葱
属植物中独特的辛辣气味物质是国际公认的有效成
分，主要来源于一类性质稳定、无味的前体含硫氨基
酸类物质(S －烃基半胱氨酸亚砜，cysteine sulphox-
ide，CSOs) ，如蒜氨酸(alliin)［1］。在葱属植物组织
细胞受到损伤后，CSOs 与蒜氨酸酶(alliinase)等酶
反应，生成丙酮酸盐、氨和易挥发、具有刺激性气味
的含硫化合物(如大蒜辣素，allicin等) ，而含硫化合
物又不稳定，进一步分解成系列含硫化合物。因此，
多采用蒜氨酸等氨基酸类成分作为葱属植物中指标
成分进行质量控制。
—369—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2013，33(6)
DOI:10.16155/j.0254-1793.2013.06.006
目前，氨基酸测定主要以柱前衍生 －高效液相
色谱法较多［2］。文献报道的柱前衍生试剂主要有异
硫氰酸苯酯(phenyl － thiocarbamyl，PITC)［3 － 6］、丹磺
酰氯［7］、邻苯二甲醛(o － phthaldialdehyde，OPA)［8 － 9］
及Waters公司开发的一种专利柱前衍生试剂 6 －氨
基喹啉 －N －羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯(6 － ami-
noquinolyl － N － hydroxysuccinimidyl carbamate，AQC)。
已有文献对大蒜中氨基酸进行了报道［10 －14］，主要是对
其蒜氨酸含量的报道，而未见对不同葱属植物中 18
种游离氨基酸含量的报道。本研究采用异硫氰酸苯
酯柱前衍生化 －高效液相色谱法测定了几种常见药
食两用葱属植物中蒜氨酸等 18 种游离氨基酸的含
量，为葱属植物进行有效质量控制提供一种科学有
效的分析方法。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪(Waters e2695 － 2998，PAD 检
测器，Empower 3 色谱工作站) ;分析天平(Sartorius，
BS 110S，d = 0. 1 mg) ;快速混匀器(金坛市医药仪
器厂，SK －1) ;离心机(TGL － 16G，上海菲恰尔分析
仪器有限公司) ;pH 计(Sartorius PB － 10) ;低温离
心机(MULTIFUGEX － 3Ｒ，Thermo) ;超声波清洗仪
(200 W，40 kHz，昆山市超声仪器有限公司) ;匀浆机
(美的，BM254) ;微电脑微波化学反应器(WBFY －
205，巩义市予华仪器有限责任公司)。
醋酸钠(天津市光复精细化研究所，优级纯) ;
正己烷(天津市致远化学试剂有限公司，分析纯)、
三乙胺天津市富宇化工有限公司，分析纯) ;异硫氰
酸苯酯(上海市金山亭新化工试剂厂，分析纯) ，乙
腈(CHＲOMADEX，色谱纯) ;去离子水(Milli － Q 超
低有机物超纯水机，美国 Millipore 公司生产) ;盐酸
(西安化学试剂厂，优级纯) ;冰醋酸(天津市光复精
细化研究所，色谱纯) ;无水甲酸(天津市富宇精细
化工有限公司，分析纯) ;甲醇 (CHＲOMADEX，色谱
纯) ;天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、天冬酰胺 (As-
pa)丝氨酸(Ser)、组氨酸(His)、甘氨酸(Gly)、苏氨
酸(Thr)、精氨酸(Arg)、丙氨酸(Ala)、脯氨酸
(pro)、酪氨酸(Tyr)、缬氨酸(Val)、蛋氨酸(Met)、
胱氨酸(Cys － Cys)、亮氨酸(Leu)、苯丙氨酸(Phe)
色氨酸(Trp)、赖氨酸(Lys) (上海国药集团，分析
纯，纯度均大于 98%) ;蒜氨酸对照品 (批号
AL080430，新疆埃乐欣药业有限公司提供，纯
度 98%)。
不同产地大蒜药材购自当地市场，具体见
表 1。
表 1 不同葱属植物采集情况
Tab 1 The collection of different Allium plants
编号
(No．)
样品
(sample)
批号
(Lot No．)
编号
(No．)
样品
(sample)
批号
(Lot No．)
1 安徽合肥蒜
(Anhui Hefei garlic)
20111220 11 云南大理蒜
(Yunnan Dali garlic)
20110501
2 江苏南通蒜
(Jiangsu Nantong garlic)
20110902 12 山东金乡蒜
(Shandong Jinxiang garlic)
20110902
3 新疆吉木萨尔蒜
(Xinjiang Jimusaer garlic)
20111005 13 新疆昭苏蒜
(Xinjiang Zhaosu garlic)
20111024
4 甘肃民乐蒜
(Gansu Minle garlic)
20111202 14 江西九江蒜
(Jiangxi Jiujiang garlic)
20110830
5 新疆阿合奇蒜
(Xinjiang Aheqi garlic)
20111103 15 新疆黄皮洋葱
(Xinjiang yellow onion)
20110823
6 湖北十堰蒜
(Hubei Shiyan garlic)
20110901 16 新疆白皮洋葱
(Xinjiang white onion)
20110930
7 吉林长春蒜
(Jilin Changchun garlic)
20110928 17 新疆大葱
(Xinjiang welsh onion)
20111106
8 四川成都蒜
(Sichuan Chengdu garlic)
20110831 18 云南红皮洋葱
(Yunnan red onion)
20110501
9 宁夏石嘴山蒜
(Ningxia Shizuishan garlic)
20110828 19 云南大理独子蒜
(Yunnan Dali only bulblet of garlic)
20110501
10 河南中牟蒜
(Henan Zhongmu garlic)
20110515 20 新疆韭菜
(Xinjiang leeks)
20111106
—469— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2013，33(6)
2 溶液的配制
2． 1 混合对照品储备溶液 分别精密称取氨基酸
对照品适量，置于 25 mL量瓶中，加水溶解并定容至
刻度，作为混合对照品储备溶液。各氨基酸浓度在
400 ～ 2000 μg·mL －1范围内。
2． 2 供试品溶液 取去皮大蒜约 10 g、洋葱(红皮、
黄皮、白皮)约 40 g、韭菜(切断)约 20 g、大葱(切
断)约 30 g，分别精密称定;置 50 mL小烧杯中，加水
15 mL，微波(功率 200 W，频率 50 Hz)1. 5 min 灭
酶，转入匀浆杯中，匀浆 1 min，浆液转移至 100 mL
锥形瓶中，适量水(60 mL)润洗匀浆杯，润洗液与浆
液合并，超声(功率 200 W，频率 40 kHz)处理 20
min，放冷至室温，转移至 100 mL 量瓶中，以水定容
至刻度，摇匀，离心(12000 × g，25 ℃)20 min，取上
清液作为供试品溶液。
2． 3 三乙胺乙腈溶液(1 mol·L －1) 移取三乙胺
13. 5 mL，置 100 mL量瓶中，加乙腈稀释并定容至刻
度，摇匀即得。
2． 4 异硫氰酸苯酯乙腈溶液(0. 1 mol·L －1)移取
异硫氰酸苯酯 1. 2 mL，置 100 mL量瓶中，加乙腈稀
释并定容刻度，摇匀即得。
3 衍生化反应
分别准确移取对照品溶液、供试品溶液和水各
200 μL，0. 1 mol·L －1异硫氰酸苯酯乙腈溶液 100
μL，1 mol·L －1三乙胺乙腈溶液 100 μL，混匀，室温
放置 30 min，加入正己烷 400 μL，充分振摇混匀后，
离心(10000 × g，室温)5 min，弃去上层溶液，再加入
正己烷 400 μL 萃取，离心(10000 × g，室温)5 min，
吸取下层溶液，用 0. 45 μm 滤膜滤过，即得对照品、
供试品和空白的衍生化溶液。
4 色谱条件
色谱柱:日本岛津 VP － ODS C18色谱柱(4. 6
μm × 25 cm，5 μm) ;保护柱:Phenomenex security
guard C18(4. 0 mm × 2. 0 mm，5 μm) ;流动相 A:
1850 mL 0. 1 mol·L －1醋酸钠，以冰醋酸调 pH 至
6. 5，加乙腈 140 mL，混匀;流动相 B:甲醇 －乙腈 －
水(20∶ 60∶ 20) ;流速:1. 0 mL·min －1;检测波长:254
nm;柱温:35 ℃;进样量:10 μL;梯度洗脱见表 2。
表 2 梯度洗脱程序
Tab 2 Gradient elution program
时间(time)/min A /% B /%
0 100 0
5 98 2
6 95 5
14 91 9
18 79 21
32 55 45
34 45 55
38 0 100
42 0 100
45 100 0
50 100 0
5 方法与结果
5． 1 方法专属性及系统适用性 在上述色谱条件
下进样分析，记录空白衍生化溶液、对照品衍生化溶
液、供试品衍生化溶液典型色谱(图 1)。结果，18种
图 1 空白衍生化溶液(a)、18 种氨基酸对照品衍生化溶液(b)和大蒜供试品衍生化溶液(c)HPLC色谱图
Fig 1 HPLC chromatograms from blank derivative solution(a) ，the reference derivative solution of 18 kinds of amino acids(b)and the test derivative so-
lution of garlic(c)
1．天冬氨酸(Asp) 2．谷氨酸(Glu) 3．丝氨酸(Ser) 4．甘氨酸(Gly) 5．组氨酸(His) 6．精氨酸(Arg) 7．苏氨酸(Thr) 8．丙氨酸(Ala)
9．脯氨酸(Pro) 10．蒜氨酸(Alliin) 11． 酪氨酸(Tyr) 12． 缬氨酸(Val) 13．蛋氨酸(Met) 14．胱氨酸(Cys － Cys) 15．亮氨酸(Leu)
16．苯丙氨酸(Phe) 17．色氨酸(Trp) 18．赖氨酸(Lys)
—569—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2013，33(6)
氨基酸在 35 min内得到完全分离，衍生化试剂不干
扰氨基酸的测定，相邻氨基酸之间均达到基线分离，
分离度均大于 1. 5，理论塔板数均不低于 5000，拖尾
因子均在 0. 95 ～ 1. 05 范围内。
5． 2 线性关系考察 精密量取氨基酸混合对照品
储备溶液 0. 20、0. 5、1、2、3、4、5 mL，分别置 10 mL
量瓶中，以水定容至刻度，得到 18 种氨基酸对照品
混合溶液。按照“3”项下方法衍生后测定，记录色
谱图。以浓度 C 为横坐标，峰面积 A 为纵坐标，绘
制标准曲线，得到回归方程、相关系数和线性范围
(表 3)。结果显示 18 个氨基酸分别在其线性浓度
范围内的线性关系良好。
表 3 18 个氨基酸的线性与范围
Tab 3 The linearity and range of 18 kinds of amino acids
编号
(No．)
氨基酸
(amino acids)
标准曲线
(calibration curve)
r
线性范围
(range of linear)/μg·mL －1
1 天冬氨酸(Asp) A =1. 21 × 104 C +2. 66 × 104 0. 9992 16 ～ 240
2 谷氨酸(Glu) A =1. 22 × 104 C －6. 38 × 104 0. 9981 16 ～ 240
3 丝氨酸(Ser) A =2. 94 × 104 C +5. 19 × 104 0. 9992 8 ～ 120
4 甘氨酸(Gly) A =5. 60 × 104 C +4. 25 × 104 0. 9998 8 ～ 120
5 组氨酸(His) A =2. 76 × 104 C +1. 57 × 104 0. 9992 8 ～ 120
6 精氨酸(Arg) A =2. 17 × 104 C －1. 84 × 105 0. 9998 200 ～ 1600
7 苏氨酸(Thr) A =8. 88 × 104 C +8. 29 × 104 0. 9994 16 ～ 360
8 丙氨酸(Ala) A =4. 01 × 104 C +1. 98 × 105 0. 9991 16 ～ 360
9 脯氨酸(Pro) A =2. 50 × 104 C －3. 36 × 104 0. 9998 16 ～ 360
10 蒜氨酸(Alliin) A =1. 36 × 104 C +2. 05 × 104 0. 9996 200 ～ 2000
11 酪氨酸(Tyr) A =3. 49 × 104 C +8. 41 × 104 0. 9992 8 ～ 120
12 缬氨酸(Val) A =2. 89 × 104 C +6. 32 × 104 0. 9981 16 ～ 240
13 蛋氨酸(Met) A =1. 37 × 104 C －5. 46 × 105 0. 9995 16 ～ 240
14 胱氨酸(Cys － Cys) A =2. 49 × 104 C +1. 75 × 105 0. 9997 8 ～ 120
15 亮氨酸(Leu) A =3. 69 × 104 C +1. 44 × 105 0. 9987 8 ～ 120
16 苯丙氨酸(Phe) A =2. 73 × 104 C +7. 87 × 105 0. 9992 16 ～ 240
17 色氨酸(Trp) A =2. 61 × 104 C +1. 42 × 104 0. 9995 8 ～ 120
18 赖氨酸(Lys) A =3. 19 × 104 C －7. 21 × 105 0. 9990 16 ～ 240
5． 3 方法学验证
5． 3． 1 精密度 取 1 份含 18 种氨基酸的对照品混
合溶液 200 μL按照“3”项下方法衍生化，连续进样
6 次，以色谱峰保留时间和峰面积为指标计算 ＲSD，
考察其精密度。结果，18 种氨基酸除苯丙氨酸外，
其他衍生氨基酸的精密度良好，各氨基酸保留时间
的 ＲSD在 0. 08% ～0. 75%范围内，各氨基酸的峰面
积的 ＲSD在 0. 32% ～4. 5%范围内。
5． 3． 2 重复性 取同一批大蒜药材 5 份，按上述
“2． 2”项下方法制备供试品溶液，按“3”项下方法衍
生化，进样测定，以色谱峰面积超过 1%的氨基酸为
指标分别计算 ＲSD，考察方法的重复性。结果，各
氨基酸峰保留时间 ＲSD 在 0. 02% ～ 1. 0%(n = 5) ，
各氨基酸的峰面积的 ＲSD在 0. 12% ～0. 57%，各氨
基酸含量的 ＲSD在 0. 13% ～0. 58%。
5． 3． 3 稳定性 取 1 份大蒜药材(阿合奇)供试品
溶液 200 μL按照“3”项下方法衍生化，分别在 0、2、
4、8、12、24 h进样，以色谱峰峰面积超过 1. 0%的氨
基酸的保留时间、峰面积、含量为指标计算 ＲSD，考
察大蒜药材衍生化溶液的稳定性。结果，各氨基酸
衍生化产物保留时间的 ＲSD 在 0. 19% ～ 1. 0%
(n = 6) ，峰面积的 ＲSD 在 0. 26% ～ 2. 3% (n = 6) ，
各氨基酸含量的 ＲSD 在 0. 19% ～ 1. 0% (n = 6)。
表明，氨基酸衍生化溶液在室温下可以稳定 24 h。
5． 3． 4 衍生化重复性 取同一浓度对照品混合溶
液重复衍生化 6 份，分别进样测定，以各氨基酸色谱
峰的保留时间和峰面积的 ＲSD为计算指标，考察衍
生化重复性。结果，18 个氨基酸除胱氨酸外，其它
氨基酸衍生化的重复性良好，各氨基酸保留时间的
ＲSD在 0. 76%，各氨基酸的峰面积的 ＲSD 均小于
4. 2%。
5． 3． 5 回收率试验 精密称取同一产地已知含量
的大蒜样品(吉木萨尔)约 5. 0 g，精密称定，6 份，分
别准确加入适量的氨基酸混和对照品溶液(400 ～
—669— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2013，33(6)
2000 μg·mL －1) ，按照“2． 2”项下方法制备供试溶
液，按“3”项下方法衍生化后进样测定，计算回收率。
结果，18种氨基酸的平均回收率(n =6)在 95. 04% ～
105. 03%范围，ＲSD在 0. 96% ～2. 97%范围。
5． 4 含量测定 分别取不同葱属植物，按“2． 2”项
下方法制备供试品溶液，进行衍生化，进样测定，并
参照文献报道方法［11］测定水分，以干重计算不同葱
属植物中氨基酸含量(mg·g －1) ，结果见表 4。
表 4 不同葱属植物中氨基酸含量(以干重计，mg·g －1)
Tab 4 The amino acids content of different Allium plants (calculate as dry weight，mg·g －1)
样品编号
(sample No．)
Asp Glu Ser Gly His Arg Thr Ala Pro Alliin Tyr Val Met
Cys －
Cys
Leu Phe Trp Lys
总含量
(total content)
1 1. 39 3. 03 0. 50 0. 11 1. 93 50. 93 1. 45 1. 13 5. 78 58. 58 2. 96 2. 76 0. 13 0. 76 1. 11 1. 56 3. 71 6. 94 144. 76
2 1. 92 2. 88 4. 83 0. 18 1. 55 58. 69 1. 07 0. 68 2. 64 55. 12 1. 17 1. 34 0. 12 0. 11 0. 40 0. 56 4. 24 12. 99 150. 49
3 1. 30 1. 72 1. 34 0. 07 1. 24 46. 19 0. 75 0. 42 2. 14 51. 45 1. 21 0. 86 0. 10 0. 03 0. 36 0. 80 2. 37 5. 70 118. 05
4 0. 29 0. 53 0. 47 0. 04 0. 59 15. 37 0. 11 0. 32 2. 36 47. 65 0. 74 0. 24 0. 16 1. 18 0. 12 0. 53 0. 71 3. 00 74. 41
5 0. 80 0. 76 2. 65 0. 09 0. 26 30. 37 0. 46 0. 51 0. 62 46. 34 0. 23 0. 46 0. 03 0. 05 0. 09 0. 43 0. 95 3. 52 88. 62
6 1. 77 2. 73 6. 42 0. 31 2. 53 62. 93 1. 46 1. 57 4. 55 43. 12 2. 06 2. 12 0. 13 0. 03 0. 77 0. 59 4. 10 12. 52 149. 71
7 1. 41 2. 43 4. 63 0. 21 0. 60 10. 66 0. 76 0. 63 3. 61 40. 05 1. 77 1. 19 0. 07 0. 05 0. 36 0. 52 1. 25 2. 02 72. 22
8 1. 38 3. 07 5. 70 0. 31 1. 03 24. 07 1. 01 1. 04 4. 20 38. 19 2. 64 1. 89 0. 11 0. 04 0. 58 0. 54 1. 98 5. 49 93. 27
9 1. 18 1. 34 3. 52 0. 22 0. 78 38. 29 1. 04 0. 75 2. 42 34. 32 0. 93 1. 13 0. 08 0. 13 0. 27 0. 44 2. 01 6. 17 95. 02
10 1. 32 1. 70 4. 63 0. 25 0. 66 16. 81 0. 75 0. 73 3. 57 34. 31 1. 58 1. 37 0. 08 0. 03 0. 35 0. 48 1. 17 4. 51 74. 30
11 1. 16 1. 64 3. 00 0. 16 0. 30 9. 76 0. 48 0. 47 2. 37 29. 97 0. 80 0. 76 0. 07 0. 03 0. 21 0. 49 0. 60 2. 54 54. 81
12 0. 92 1. 32 2. 85 0. 14 0. 42 6. 72 0. 49 0. 36 2. 30 27. 57 1. 09 0. 91 0. 06 0. 04 0. 33 0. 42 0. 84 1. 52 48. 30
13 0. 99 0. 99 1. 50 0. 05 0. 49 34. 73 0. 31 0. 30 1. 30 26. 22 0. 42 0. 42 0. 05 0. 01 0. 10 0. 38 1. 25 4. 07 73. 58
14 0. 76 0. 88 1. 65 0. 05 0. 17 20. 01 0. 19 0. 28 1. 06 25. 74 0. 57 0. 42 0. 03 0. 14 0. 15 0. 38 0. 81 2. 61 55. 90
15 2. 88 4. 21 5. 50 1. 83 2. 93 23. 78 0. 61 0. 13 0. 16 18. 78 1. 22 0. 42 0. 06 3. 28 0. 21 0. 43 0. 87 3. 22 51. 74
16 1. 66 2. 99 7. 63 0. 29 0. 54 10. 22 0. 94 0. 27 0. 24 17. 49 1. 72 0. 95 0. 25 0. 04 0. 51 0. 50 0. 97 3. 39 33. 11
17 1. 20 1. 71 7. 15 0. 43 0. 48 3. 03 1. 10 3. 56 0. 19 14. 51 1. 29 1. 36 0. 09 0. 15 0. 80 0. 43 0. 60 2. 54 26. 11
18 0. 32 0. 56 1. 24 0. 07 0. 23 12. 15 0. 21 0. 22 1. 07 10. 22 0. 55 0. 36 0. 03 0. 01 0. 15 0. 30 0. 53 1. 40 29. 62
19 0. 88 4. 24 8. 44 0. 39 0. 23 14. 00 0. 41 0. 06 0. 17 9. 56 1. 01 0. 38 0. 07 0. 32 0. 20 0. 42 0. 82 2. 40 34. 44
20 1. 84 2. 54 4. 88 0. 42 0. 26 13. 35 0. 95 2. 46 0. 65 7. 24 0. 51 0. 79 0. 04 0. 04 0. 44 0. 53 1. 17 4. 51 42. 62
6 讨论
6． 1 衍生化试剂的选择 本实验分别采用了
PITC、AQC和 OPA为衍生化试剂。结果，因 OPA极
不稳定，衍生化反应后严格控制在 1. 5 min 内进样，
分离效果和衍生重复性较差;AQC 价格较昂贵，衍
生化操作需要水浴条件;PITC 室温下反应，生成苯
氨基硫甲酰衍生化物(PTC － AA)稳定，操作简便;
确定采用 PITC为衍生化试剂。
6． 2 衍生化时间和萃取次数的考察 分别考察了
不同衍生化时间(10 min、30 min、1 h、1. 5 h)、不同
萃取次数(1 次、2 次、3 次)对衍生化产物的影响。
结果，室温下衍生 30 min以上对衍生化产物测定结
果无影响;萃取次数对氨基酸的测定结果影响不大，
而衍生化试剂对色谱柱有一定的损害，用正己烷萃
取后，可以有效减少衍生化试剂的残留，同时可以减
少其对色谱柱的损害，延长色谱柱的使用寿命。最
终，本实验选用样品与衍生化试剂室温下反应 30
min，正己烷萃取 2 次进行测定。
6． 3 流动相的选择 本实验考察了不同梯度的甲
醇、乙腈和甲醇 +乙腈 －缓冲盐系统。结果甲醇和
乙腈的选择具有互补性，在乙腈中加入一定量的甲
醇，调整梯度比例后，可以有效地分离 18 种氨基酸。
6． 4 小结 本实验对常见几种不同葱属植物中 18
种游离氨基酸含量进行了测定。结果，不同葱属植
物中氨基酸总含量差异较大:除山东金乡大蒜外，大
蒜 ＞黄皮洋葱 ＞ 韭菜 ＞红皮洋葱 ＞白皮洋葱 ＞大
葱;且含量较高的为蒜氨酸和精氨酸，两者所占总氨
基酸的比例在 48. 31% ～ 86. 56% 范围内，除韭菜
外，其他均在 66. 75%以上;赖氨酸、色氨酸、苯丙氨
酸、蛋氨酸、苏氨酸、亮氨酸、结氨酸 7 种为人体必需
氨基酸，蒜氨酸为葱属植物中特有含硫氨基酸，精氨
酸为幼儿必需氨基酸。
—769—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2013，33(6)
参考文献
1 TANG Hui(唐辉) ，CHEN Jian(陈坚)． Alliin and related active
components:research advance(蒜氨酸及其相关活性组分的研究
进展)． J Int Pharm Ｒes(国际药学研究杂志) ，2008，35(6) :441
2 Ｒoch MC，Harmony MD． Determination of amino acids at subfemto-
mole levels by high － performance liquid chromatography with laser －
induced fluorescence detection． Anal Chem，1987，59(3) :411
3 YANG Jing(杨菁) ，SUN Xiao － guang(孙晓光) ，BAI Xiu － zhen
(白秀珍) ，et al． Simultaneous determination of 18 amino acids by
reversed － phase high performance liquid chromatography with prec-
olumn phenyl isothiocyanate derivatization (异硫氰酸苯酯柱前衍
生化反相高效液相色谱法同时测定 18 种氨基酸)． Chin J Chro-
matogr(色谱) ，2002，20(4) :369
4 HE Yi(何轶) ，CHEN Ya － fei(陈亚飞) ，ZHU Yan － ping(朱延
萍) ，et al． HPLC determination of the main free amino acids in root
of Isatis indigotica Fort． (高效液相色谱法测定板蓝根中主要游
离氨基酸的含量)． Chin J Pharm Anal(药物分析杂志) ，2005，25
(3) :274
5 Somack Ｒ． Complete phenylthiohydantoin amino acid analysis by
high － performance liquid chromatography on ULTＲASPHEＲE － oc-
tadecyltrimethyloxysilane． Anal Biochem，1980，104(2) :464
6 Sottrup － Jensen L，Petersen TE，Magnusson S． Analysis of amino
acid phenylthiohydantoins by high － performance liquid chromatogra-
phy using gradient elution with ethanol． Anal Biochem，1980，107
(2) :456
7 ZHU Xiao － wei(朱晓伟) ，GAO Xin － xing(高新星) ，AN Fang
(安芳) ，et al． Determination of 22 kinds of free amino acid in urine
of hypertensive patient by pre － column derivatization HPLC with
fluorescence detection(柱前衍生化 HPLC －荧光检测法测定高血
压患者尿液中 22 种游离氨基酸的浓度)． China Pharm(中国药
房) ，2010，21(30) :2823
8 YANG Wei(杨卫) ，XIAN Shu(鲜殊) ，LI Da － xiang(李大祥) ，et
al． ＲP － HPLC determination of seventeen free amino acids in tea
with o － phthalaldehyde precolumn derivation(邻苯二甲醛柱前衍
生反相高效液相色谱法测定茶叶中 17 种游离氨基酸)． J Tea
Sci(茶叶科学) ，2011，31(3) :211
9 Pozdeev VK，Pozdeev NV． Determination of total aminothiols and
neuroactive amino acids in plasma by high performance liquid chro-
matography with fluorescence detection． Biomed Khim，2010，56
(6) :726
10 ZHAO Dong － sheng(赵东升) ，LI Xin － xia(李新霞) ，GUAN Ming
(关明) ，et al． Study on the discussion about quality specification of
garlic(大蒜质量标准中商榷内容的研究)． Chin J Pharm Anal(药
物分析杂志) ，2012，32(3) :498
11 YANG Yi(杨毅) ，XIE Hui － ming(谢慧明) ，WU Ze － yu(吴泽
宇) ，et al． Determination of alliin in garlic using precolumn derivat-
ization with AQC followed by reversed － phase high － performance
liquid chromatography(AQC柱前衍生化 ＲP － HPLC 法测定大蒜
中蒜氨酸含量)． Food Sci(食品科学) ，2009，30(4) :214
12 HU Hong － hua(胡红华) ，WU Xi － ran(吴熙然) ，SUN Zhi － ping
(孙智平) ，et al． Determination of alliin content in garlic by ＲP －
HPLC with DNFB(DNFB 柱前衍生 ＲP － HPLC 法测定大蒜中蒜
氨酸含量)． Mod Food Sci Technol (现代食品科技) ，2009，25
(2) :198
13 YUAN Yao － zuo(袁耀佐) ，HANG Tai － jun(杭太俊) ，JI Yu(纪
宇) ，et al． Determination of alliin and its related substances in garlic
using pre － column derivatization and reversed － phase high perform-
ance liquid chromatography(柱前衍生化反相高效液相色谱法测
定大蒜中的蒜氨酸及其有关物质)． Chin J Chromatogr (色谱) ，
2008，26(2) :242
14 Auger J，Mellouki F，Vannereau A，et al． Analysis of allium sulfur a-
mino acids by HPLC after derivatization． Chromatographia，1993，36
(1) :347
(本文于 2012 年 8 月 14 日收到)
—869— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2013，33(6)