全 文 ：中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月·673·
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粗吻海龙抗肿瘤活性部位研究
王梦月1，秦孙星1，张朝晖2，何云瑾1，李晓波¨
(1．上海交通大学药学院，上海200030；2．江苏大学药学院，江苏镇江212001)
海龙为补益类名贵海洋中药，具有温肾壮阳、散
结消肿之功效。《中国药典>>2005年版收载海龙为刁
海龙Solenognathush rdwickii(Gray)、拟海龙Syn—
gnathoidesbiaculeatus(Bloch)或尖海龙Syngnathus
aCU$Linnaeus的干燥体。我国海龙资源丰富，除《中
国药典》收载品种外，同科的粗吻海龙Trachy·rham-
phusserratus(TemmincketSchlegel)在我国分布
广、产量大，在辽宁、山东、广东、福建、海南等地，为海
龙的主流品种之一[1]。前期研究证明粗吻海龙具性激
素样作用，其作用与尖海龙等《中国药典》收载的品种
作用相当[z3；同时还首次发现粗吻海龙醇提物具有明
显的抗肿瘤作用[3]。为进一步研究粗吻海龙的抗肿瘤
活性成分，对粗吻海龙抗肿瘤的活性部位进行了筛
选，并对活性部位进行了GC—MS分析，为海龙科药
用动物的抗肿瘤新药开发提供依据。
1实验部分
1．1药品与试剂：粗吻海龙药材2003年11月购白
海南省海口市，经李晓波教授鉴定为粗吻海龙丁．
$erratus(TemmincketSehlegel)的干燥全体，凭证
标本保存于上海交通大学药学院中药基因组学实验
室。RPMI1640购自Gibco公司；四氮唑盐(MTT)、
磺酰罗单明B(SRB)、Tris、SDS购自Sigma公司；
95％乙醇、石油醚、醋酸乙酯、异丁醇、三氯醋酸、乙
酸均为国产分析纯。
1．2 主要仪器：Autosystem(XL)GC—MS(美国
PerkinElmer公司)；MultiskanMK3酶标仪(Ther—
moLabsystems)；C02培养箱(ThermoForma)、
RE一52AA型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；
DZF一6050型真空干燥箱(上海一恒科学仪器有限
公司)。
1．3细胞株：人白血病细胞株HL-60、人肝癌细胞
株BEL一7402、人肺癌细胞株A一549和小鼠白血病细
胞株P388均由中国科学院上海药物研究所提供。
1．4样品的制备：粗吻海龙粉末200g：，95％乙醇超
声提取2h，滤过，低温回收溶剂至干，得粗吻海龙提
取物(A)；同时另取200g粗吻海龙粉末，水超声提
取2h，滤过，所得滤液用醋酸乙酯反复萃取后，低温
收尽溶剂，得粗吻海龙的不含脂溶性成分的提取物
(B)；一20℃储存。筛选到的活性组分A悬浮于水
中，分别用石油醚、醋酸乙酯萃取，低温收尽溶剂得组
分A，、组分A。，萃余母液低温收干溶剂得组分A。。
1．5 活性测试：MTT法[41检测组分对HL一60、
P388肿瘤细胞的生长抑制作用；SRB法[41检测组分
对BEL一7402、A一549肿瘤细胞的生长抑制作用。
1．6 GC—MS分析：气相色谱条件：色谱柱为DB一
5ht(30mm×0．25mm，0．25肛m)，柱温为80℃(1
min)，以5℃／min的程序升至310℃，进样室温度
为310oC，不分流。载气为氦气(99．999％)，压力为
68．948×103Pa，流量为1．0mL／min。质谱条件：离
子源温度为200℃，接口温度为300℃，质谱离子源
为EI源，电子能量为70eV，扫描范围为20～550
m／z。所得质谱图经计算机数据处理和NIST一98标
准质谱图库检索分析各组分，按峰面积归一化法计
算化学成分的质量分数。
2实验结果
2．1 不同提取物的抗肿瘤活性：粗吻海龙的95％
收稿日期：2006—10—18
基金项目；上海一SK研究发展基金资助项目(2003012一t)}国家自然科学基金项目(30672620)
篓翥第稆窘戮袈7(319—63’乌：娑箍罂慕竺蹇鑫冀誊墅耋导师。T。。：(021)34204806E-mail：xbli@sjtu．edu．cn*通讯作者李晓波 一)，女，回族，博士、教授、博士生导师。 Tel： ： @ ． ．
万方数据
·674· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月
乙醇提取物(A)和水提取物(B)对HL一60等4种肿
瘤细胞株的作用结果显示，提取物A和B对肿瘤细
胞均有一定的杀伤作用，但A活性更高，作用范围
更广，且显示出一定的剂量依赖效应，因此初步确定
粗吻海龙抗肿瘤的有效部位为95％乙醇提取部分，
用于进一步分离。
2．2不同极性组分的抗肿瘤活性：对提取物A的
不同极性组分A。、A。、A。进行抗肿瘤活性研究结果
表明，组分A。、A：均有明显活性，A。无明显作用，其
中组分A。对BEL一7402和A一549的抑制率更高，而
B对HL一60的抑制更强，说明两部分均含有抗肿瘤
活性成分，对不同肿瘤细胞有选择性抑制；BEL-
7402和A一549都是实体瘤细胞，HL一60是悬浮细
胞，提示粗吻海龙抗肿瘤活性成分可能包含多个化
合物，并且具有不同的作用机制。
2．3活性部位的GC—MS分析：运用GC—MS对抗
肿瘤活性组分A。和A：进行化学成分分析，分别检
出89个和56个成分(表1、表2)。可知A。和A：主
要成分均为脂肪酸、甾体类成分，但组分A，所含不
饱和脂肪酸、甾类化合物的量明显高于A。；A。高级
脂肪酸及其酯的量较A。高。
3讨论
本实验首次对海龙水溶性组分和脂溶性组分
的抗肿瘤作用进行了比较研究，发现脂溶性组分
(A)对HL一60、BEL一7402、A549细胞毒性远高于水
溶性组分(B)，而对P388的抑制作用两者相当，从
而初步认为脂溶性小分子是粗吻海龙抗肿瘤主要的
活性部位s为进一步追踪活性部位，对95％醇提物
(A)进行了分离，先后用石油醚、醋酸乙酯萃取其中
的脂溶性成分，并对石油醚萃取物、醋酸乙酯萃取
物、母液(主要是水溶性成分)的抗肿瘤作用进行了
比较，结果发现石油醚萃取物、醋酸乙酯萃取物均有
明显的抗肿瘤作用，而母液无效。进一步证明脂溶性
小分子可能是粗吻海龙抗肿瘤作用的主要物质基
础，当然也不排除水溶性大分子对其他细胞株也有
一定的抗肿瘤活性，并有不同的作用机制，目前水溶
表1粗吻海龙抗肿瘤活性组分A。GC—MS分析结果
Table1 GC—MSAnalysisonanti—tumoractivefractionAl fT．serratus
峰号 懒名称 霖 峰号 懒瓤 嚣 峰号 懒名称 翟
1 辛烷0．0132 1一十四醇0．06063 芥酸酰胺0．026
2 l一甲基丙基一环己烷0．02633 十七烷0．0978 64 胆甾烷一4一甲基一8，24一二烯一3一醇0．0400
3 壬烷0．30234 棕榈酸甲醣0．0418 65 胆甾烷一5一烯一3一醇 11．51
4 3一甲基一辛烷0．08135 邻苯二酸0．0826 66 胆甾烷一5一烯一3一醇丙酯0．057
5 3-二甲基一辛烷0．19136 Ii(E)一十六酸甲酯 5．104 67 胆甾烷一3，5-二烯一7一酮0．294
6 2，3-二甲基～庚烷0．05537 十八酸 5．030 68 胆甾烷一4一烯一3一酮0．065
7 4-甲基一2一丙基一戊醇0．09438 9(Z)一十八酸 6．2456 69 24丙烯基一胆甾烷一5一烯一3一醇0．087
8 癸烷0．19239 十八烷0．11170 胆甾烷一3，5-二烯一3一酮 3．044
9 3-甲基一十一烷0．06240 十七酸0．96671 5，6-环氧一胆甾烷一3一醇0．081
10 戊酸0．08041 十七酸甲酯0．0458 72 坎利酮0．033
n l一乙基一3一异丙基一苯0．03142 6一庚基一四氢一毗晴一2一酮0．0465 73 未鉴定 ’0．047
12 十一烷0．06043 十八酸乙酯0．11174 胆甾烷一3，7-二醇0．106
13 Z一乙基一己醇0．04944 油酸 7．494 75 胆甾醇乙酸醣0．223
14 l一乙基丙基～4一甲基一苯0．03345 Ⅳ，Ⅳ一二甲基一十二酰胺0．1772 76 ii，14，17一二十碳三烯酸甲酯0．038
15 十二烷0．03946 十九烷 2．636 77 7-甲基一(z)一十四烯一1一醇乙酸酯0．077
16 十三烷0．03347-二十烷0．0343 78 6一甲基一十八烷0．162
17 十四烷0．03048 十一醛0．12879 3一十九碳烯一1一醇乙酸酯0．065
18 2一癸酮0．02949 花生四烯酸甲酯 2．371 80 未鉴定0．492
19 2一甲基一壬烷0．10350 2(E)一十八烯一1一醇 1．154 81 十八酸甲醋0．444
20 2一甲基一十一烷0．07551 9(z)一油酸酰胺0．35882 三十二烷0．035
2l 亚油酸 3．045 52 十六酰胺0．0676 83 胆甾醇丁酸酯0．109
22 十五烷0．06453 未鉴定0．0258 84 胆甾一5一烯一3一醇十四酸酯0．0403
23 十二酸0．17354 卜辛烯一3一醇0．06385 三十烷0．0384
24 2(E)一丁烯酸乙酯0．08855 l一柠檬烯一10一醇0．01986 2一甲基一十九烷0．462
25 二十七烷0．01956 1(Z)，4(z)，6(z)一十九碳三烯1．466 87 胆甾一5一烯一3一醇壬酸酯0．0346
26 十六烷0．08857 4，7，10，13，16，19一二十二碳六烯酸甲酯2．068 88 胆甾醇8．0366
27 2，7，10一三甲基一十二烷0．03958 角鲨烯 1．384 89· 胆甾一5一烯一3一醇乙酸酯0．180
28 十四酸 3．810 59 胆甾烷一4，6一二烯一3一醇0．52390 硬脂酸 1．377
29 未鉴定0．09660 艘甾烷一3，5-二烯0．5929l 4一丙基一十七烷0．0542
30 棕榈酸(十六酸) 23．180 61 麦角甾烷一5，7-二烯一3博0．03992 十九酸甲酯0．674
3l 十三酸甲酯0．04162 二十四烷0．02693 亚麻酸 1．235
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月·675·
表2粗吻海龙抗肿瘤活性组分A2GC★MS分析结果
Table2 GC-MSAnalysisonanti—tumoractivefractionA2 fT．serratus
峰号 懒名称 嚣 蜂号 懒名称 兹 峰号 懒名称 篇
1 3-甲基一丁酸0．48421 4一酰胺吡啶4．41541 2一甲基一十一醛0．065
2 2，3-丁二醇 5．246 22 4一壬醇 2．733 42 十八酸十八酯 1．094
3 戊酸0．20523 1一甲基一4一硝基一吡唑0．34743 3一烯一二十二酸 ．0．108
4 2一戊醇0．64224 4一甲基一5一癸醇 1．358 44 邻苯二酸二辛酯0．281
5 4-甲基一环己酮0．73625 十四酸 2．758 45 2(E)一己烯醛0．050
6 丁酸 1．529 26 棕榈酸乙酯0．10246 未鉴定0．266
7 4-甲基一4一已烯一3一酮0．41527 棕祸酸 18．639 47 壬胺0．285
8 2-甲基一2一丙烯酸乙酯0．07428 6一己基一四氢呋喃一2一酮0．47248 胆甾一4，6一二烯一3一醇0．714
9 2，3，5-三甲基一己烷0．53229 邻苯二酸二丙酯0．252’49 4一甲基一胆甾醇一8，24一二烯一3一醇 10．547
10 三乙酸甘油酯0．30030 油酸 6．118 50 4，7，10一三烯一十六酸甲酯0．101
1l 庚烷0．15431 十六酸乙酯0．66551 戊酰胺0．086
12 未鉴定0．60632 十六酸 1．188 52 胆甾一4·烯一3一酮0．375
13 2一乙基一己醇0．88233 十七酸 6．248 53 三十二烷 2．004
14 2一戊醇0．19734 Ii(E)一十六酸乙酯0．30654 二十六醇0．462
15 苯乙酸0．38835 十四酸乙酯0．43155 十八酸甲酸 2．343
16 未鉴定 3．594 36 十二酰胺0．32356 十六酸十四酯 4．066
17 3一甲基一庚醇0．20537 十三酸 3．340 57 2一丙基一癸醇0．584
18 3，5-二甲基一3一己醇 4．663 38 未鉴定0．10758 1一十九烯 1．165
19 癸烷0．49839 1(z)，4(z)，6(z)，9(Z)一十九碳四烯0．16359 胆甾一5一烯一3一醇十四酸酯0．541
20 2一庚醇0．40340 9(z)-十八烯一1一醇0．15960 三十酸 2．968
性大分子抗肿瘤作用研究正在进一步研究中。
用石油醚和醋酸乙酯分别萃取醇提物得到的
A。、A。组分主要是低极性的化合物，GC—MS分析的
结果也证实了这一结果。从石油醚提取物中检出89
个化合物，其中18个甾类化合物，主要为胆甾酮、胆
甾醇、麦角甾醇；其余71个成分主要为不饱和脂肪
酸、高级脂肪酸及其酯。值得注意的是石油醚提取物
中含有大量不饱和脂肪酸、角鲨烯，醋酸乙酯提取物
中油酸、4一甲基一胆甾醇一8，24一二烯一3一醇等的量也较
大，粗吻海龙脂溶性成分值得进一步深入研究。
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万方数据
粗吻海龙抗肿瘤活性部位研究
作者： 王梦月， 秦孙星， 张朝晖， 何云瑾， 李晓波
作者单位： 王梦月,秦孙星,何云瑾,李晓波(上海交通大学药学院,上海,200030)， 张朝晖(江苏大学药
学院,江苏,镇江,212001)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(5)

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