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肉桂醛和柠檬醛对烟曲霉细胞膜中麦角甾醇生物合成的影响
谢小梅，龙凯，方建茹
(江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室，江西南昌 330004)
摘要：目的研究肉桂醛、柠檬醛对烟曲霉中麦角甾醇生物合成的影响。方法将烟曲霉接种在含有不同质量浓
度药物的蔡氏固体培养基中．同时设不加药物为空白对照，置26．5C恒温培养5d。刮取平皿上菌苔，称质量、皂
化、提取烟f}}I霉菌中的难皂化脂，高效液相色谱法测定其中的麦角甾醇。结果柠檬醛质量浓度为0．11t-g／mI一肉
桂醛质量浓度为0．16“g／mL作用于烟曲霉后，麦角甾醇的质量分数显著降低。结论肉桂醛和柠檬醛影响了烟曲
霉中麦角甾醇的生物合成。
关键词：肉桂醛；柠檬醛；烟曲霉；麦角伍醇；高效液相色谱
中囤分类号：R286．02 文献标识码：A 文章编号：02532670(2006)04—05303
Effectsofcinnamaldehydeandcitralonergosterolbiosynthesis
inAspergillusfumigatuscellmembrane
XIEXiaomei，LONGKai．FANGJian—ru
(KeyLaboratoryofModernPreparationCh neseMateriaMediciaofMinistryofEducation．JiangxiUniversity
ofTraditionalChineseMedicine，Nanehang330004，China)
Abstract：ObjectiveToinvestigatetheffectsoftheactiveingredients，cinnamaldehydea dcitral，
onergosterolbi synthesisinAspergillus／imigatuscellmembrane．MethodsSaponificationand
extractionoftheonsaponifiablelipids(NSLs)ofA．如migratuswerecarriedOUtafter26．5Cfor5dof
incubationinCai7sso“dmediumwithvariedconcentrationsofe n amaldehydeandcitralcomparedwith
the ontrolgroupWinthontdrugs．ThecontentsofergosterolinNSLsweredeterminedbyHPI，C．Results
Afterthetreatmentbycinnamaldehyde(O．16／‘g／mL)andcitral(0．11ug／mL)，thecontentsofergosterol
inA．，“migatuseellmembranewasobviouslydecreased．ConclusionCinnamaldehydeandcitral
influencethergosterolbi synthesisinA．^migatuseellmembrane．
Keywords：einnamaldehyde；citral；Aspergillus^migatusFres．； osterol；HPLC
烟曲霉AspergillusrumigatusFre ．是深部真
菌感染的常见病原菌。目前，临床上常用的抗真菌感
染药物如唑类化合物、烯丙胺类等，无一例外是通过
抑制真菌的麦角甾醇生物合成来达到抑菌目的的，
但由于这些药物的不良反应、耐药性及价格昂贵等
原因，在临床上应用受到限制。中药不良反应小，来
鉴鎏是訾：留鬟省蓉辑学基金资助项目。。。。。。。。。，
源广，价格低廉，较少出现耐药等，因此，抗真菌中药
的研究将成为21世纪的中医药研究热点内容之一。
本研究室实验表明中药活性成分肉桂醛和柠檬醛有
良好的抗烟曲霉作用，并对其抗真菌作用机制做了
初步探讨”“]。本实验采用高效液相色谱法测定了
肉桂醛和柠檬醛作用烟曲霉后真菌细胞膜中麦角甾
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第4期2006年4月·531·
醇的变化，以期探讨肉桂醛、柠檬醛是否通过抑制烟
曲霉细胞膜中麦角甾醇的生物合成而起抗菌作用。
1材料和方法
1．1 实验菌株：烟曲霉菌为标准株(CCCCMID
A1)，购自中国医学真菌中心(南京)。
1．2 仪器与试剂：Yknm高教液相色谱仪，美国
Gilching；肉桂醛购自上海双喜香料制剂厂，批号
20020401，质量分数>95％；柠檬醛为德国进口，批
号002489$20085632，质量分数>98％；酮康唑200
mg／片，批号030418108，为西安杨森制药有限公司
生产，临用前将酮康唑研成细粉并溶于二甲亚砜，使
其质量浓度为40mg／mL；麦角甾醇对照品购自美
国Sigma公司，用环己烷配成1．0mg／mL，一20℃
保存；乙腈为色谱纯；皂化剂为新鲜配制的含15％
NaOH的90％乙醇溶液；禁氏培养液“1；其他试剂
均为分析纯。
1．3方法
1．3．1菌液的制备：将试验菌株接种于蔡氏斜面，
26C培养至快速生长早期，活化2次，此时菌苔覆
盖斜面，加入蔡氏液体，吸管吹打菌苔使孢子游离于
培养液中，用500目无菌尼龙网滤过，滤液经血细胞
计数板计数和紫外分光光度计测定，调整孢子浓度
为1×106／mL。
1．3．2不同质最浓度药液的制备：参照文献报
道”4】，于无菌、直径为15CIII的平吼内分别加入柠
檬醛4．55、6．1lpL，肉桂醛3．8l、7．62pL，酮康唑
4、50“l，，将冷却至50‘C左右的蔡氏固体培养基50
mI，迅速倒人上述平皿内，混匀(药物终质量浓度分
别为：柠檬醛0．08、0．1l“g／mL；肉桂醛0．08、0．16
pg／mL；酮康唑3．2、40tlg／mL)，待其凝固。
1．3．3供试品制备：将制备的菌液接种在含有不同
质量浓度药物的蔡氏固体培养基中(孢子终浓度为
1x104／mL)，设不加药物为空白对照，置26．5℃恒
温培养5d，刮取平皿上的菌苔，称菌湿质量。各精密
称取湿菌约0．5g，加PBS2．5mI，和皂化剂6mI。，
混匀，80℃水裕皂化60rain。加石油醚(沸程30～
60℃)6mL提取3次，合并提取液，加水6mL洗涤
两次，醚层于60C水浴挥干，得未皂化脂
(nonsaponifiabIclipids，NSLs)nl，加环已烷溶解使
溶液体积为1mL／g湿菌，20c保存。
1．3．4 高效液相色谱条件：c。。色谱柱；流动相：乙
腈一水(95：5)；体积流量：1．0mL／min；检测波长：
283nm，采用外标法按峰面积进行定量。
1．3．5标准曲线绘制：精密称取25mg麦角甾醇
对照品，用环己烷溶解制成1．0mg／ml。贮备液。用
贮备液分别配制0．5、0．25、0．125、0．0625、
0．0325、0．01625mg／mL对照品溶液，进样20
pL。每个质量浓度进样2次。以峰面积均值为纵坐
标，质量浓度为横坐标做标准曲线，进行心归处理。
1．3．6样品测定：样品分别进样20pL，每个样品
进样2次，测定样品中麦角甾醇的质量分数。
1．3．7统计学处理：组蒯差异用￡检验。
2结果
2．1线性关系的确定：按本实验建立的色谱条件进
样，麦角甾醇的出峰时间在16～17rain。麦角甾醇
在0．5～o．01625mg／mI。线性关系良好，回归方程
为y--47．43636X+0．507256，，一0．9994。
2．2肉桂醛和柠檬醛对烟曲霉细胞膜中麦角甾醇
的影响，以酮康唑为阳性对照，测定了肉桂醛、柠檬
醛作用烟曲霉后麦角甾醇的变化。结果见表l。可
见，柠檬醛较高质量浓度0．11pg／mL、肉桂醛较高
质量浓度0．16pg／mI。作用于烟曲霉后，麦角甾醇
质量分数较相应未用药组降低∽表l用药前后烟曲霉中麦角甾醇的比较恤一3)
Table1 ComparisionofergosterolcontentinA．
肛migatusbetweenpre—andpost—
administrationofdrugs(H一3)
可丰fI压对照组比较；*，’<001
*P3讨论
肉桂醛、柠檬醛是肉桂、山苍子的主要成分，两
者已分别用于化工、食品、粮食防腐、医疗卫生。实验
表明，两者有良好的广谱抗真菌作用“⋯，特别是有
高效的抗烟曲霉作用，但对它们的抗烟曲霉作用机
制研究极少。
麦角甾醇是真菌细胞质膜的重要组成成分，它是
一种准平面体分子，通过与磷脂结合稳定磷脂相，从
而增加膜的稳定性。麦角甾醇的缺乏，必将引起真菌
细胞膜功能异常，甚至发生细胞破裂。目前f临床最常
用的抗真菌药物主要有两性霉素B、氟康唑、酮康唑、
伊曲康唑和特比萘芬o]，它们都是针对真菌细胞膜上
的特有脂质麦角甾醇来发挥其抗真菌作用的。其中，
万方数据
·532· 中苹菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第4期2006年4月
除了两性霉素B是通过与麦角甾醇特异性结合，破坏
真菌细胞膜结构，从而起到抗真菌作用外，其余都是
麦角甾醇的生物合成抑制剂。这类药物虽然作用于麦
角甾醇生物合成过程中的不同环节，但最终都能使真
菌中的麦角甾醇的质量分数下降。
用于检测细胞膜中麦角甾醇的方法有薄层色谱
法、高效液相色谱法等o]。反相高教液相色谱分析法
具有分析速度快、分离效能高、自动化程度好的特点
面被广泛使用。本实验以酮康唑为阳性对照，采用反
相液相色谱法测定了肉桂醛、柠檬醛作用烟曲霉后
细胞膜中麦角甾醇的变化。实验中发现，一定浓度的
药物作用后烟曲霉细胞膜中麦角甾醇较阴性对照组
减少，随着药物浓度的增加，麦角甾醇也随之减少。
表明药物影响了细胞膜中麦角甾醇的生物合成，从
而抑制了烟曲霉的生长繁殖。至于药物抑制了麦角
甾醇生物合成的哪一个环节或多个环节，还有待进
一步研究。通过测定真菌中麦角甾醇，有助于探讨抗
真菌药物的作用机制，为中药活性成分的体外抗真
菌作用研究提供了新方法。
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正交试验法优选酸枣仁中自桦脂酸的提取工艺
赖 玲，扬 昕，医[习，吴孔弦
(华中科技大学同济医学院药学院分析测试中心，湖北武汉430030)
摘要：目的优化酸枣仁中自桦脂酸的提取工艺。方法以白棒脂酸和于浸膏得率为检测指标，采用l。s(3‘)正交
试验，考察乙醇体积分数、溶剂用量、提取时间和提取次数4个影响因素，采用高效液相色谱法进行白桦脂酸测定。
结果乙醇体积分数对提取物中自桦脂酸有显著影响，其他因素影响不显著，最佳提取工艺条件为3倍量95％乙
醇热回流3次，每次2h。结论优选得到的工艺稳定、方法可行。
美键词：酸枣仁；白桦脂酸；正交试验；高效液相色谱
中墨分类号：R284．2，R286．02文献标识玛：B 文章编号：0253—2670(2006)04063203
Orthogonaltestforoptimizingextractiontechniqueofbetulinicac d
inSemenZiziphiSp nosae
LAILing，YANGXin，陌河百j园，wuKong—xian
(TongjiPharmaceuticalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430030-China)
Keywords：SemenZiziphiSp nosae；betulinicacid；orthogonaltest；HPLC
鉴鐾县留：翠辈嚣蓉关学同济医学院科学研究基金资助(01514709)
作者简介：翼，：戋绩警‰；；轰，、要焦棼i毫曩嚣吉菇蓑要喜』基为c妻蓼要剂型
万方数据
肉桂醛和柠檬醛对烟曲霉细胞膜中麦角甾醇生物合成的影响
作者： 谢小梅， 龙凯， 方建茹， XIE Xiao-mei， LONG Kai， FANG Jian-ru
作者单位： 江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室,江西,南昌,330004
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(4)
被引用次数： 3次

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