全 文 ：·888· 中草喃ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第6期2006年6月
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淫羊藿苷伍用三七总皂苷对小鼠免疫功能的调节作用
肖幸丰，王志强，楼宜嘉+
(浙江大学药学院，浙江杭州31．0031)
摘要：目的研究淫羊藿苷(icariin，ICA)伍用三七总皂苷(Panaxnotoginsengsaponins，PNS)对小鼠免疫功
能的调节作用，为该组合药物改善阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease，AD)动物模型空间学习记忆能力的作用机
制提供部分宴验依据。方法采用血清药理学方法观察小鼠连续igICA+PNS[(40上320)、(80+640)、(160十
1280)mg／kg]、单用ICA(80mg／kg)和PNS(640mg／kg)7d制得的含药血清对伴刀豆蛋白A(ConA)和脂多
糖(LPS)诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖、IL一2分泌的影响。并观察脏器指数的变化。结果1CA伍用PNS[(80+
640)、(1∞+1280)mg／kg]具有较强的协同作用，其含药血清能明显促进ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖
(尸<0．01、0．05)，量效曲线呈倒U形；含药血清对LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖无显著促进作用(尸>0．05)。
1cA+PNS[(80+640)和(160—1280)mg／kg]舍药血清能明显促进1L一2生成(P于单用，提示具有较强的协同作用，其量效曲线亦呈倒u形分布。单用ICA、PNS或两者合用均未明显影响小鼠脏
器指数(P>o．05)。结论ICA伍用PNS对小鼠免疫系统具有一定的选择性调节作用．主要增强T细胞功能。
关键词：淫羊藿苷；三七总皂昔；免疫调节作用；血清药理学
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：02532670(2006)0688804
Immunoregulationofiear inc mbinedwithPanaxnotoginsengsaponinsinmice
XIA0Xing—feng，WANGZhi—qiang，I。0UYi—jia
(CollegeofPharmaceuticalSciences，ZhejiangUniversity，Hangzhou310031，China)
Abstract：ObjectiveToinvestigatetheregulatoryeffectsoficariin(ICA)combinedwiththePa ax
notoginsengsaponins(PNS)onimmunologicalfun tioninmiceandprovidesomeexperimentalevidences
forthecombinationmechanismimprovingthespatiallearningandmemoryabilitiesofAlzheimer’sdisease
(AD)animalmode ，MethodsBasedon erumpharmacologicalmethod，theICRmicewereindividually
igadministratedwithICA+PNS[(40+320)，(80+640)，and(160+1280)mg／kg]orIcA(80mg／kg)，
andPNS(640mg／kg)onlyfor7d．Drugcontainingserumwaspreparedandeffectson pleenlymphocyte
proliferationofBable／cmiceinducedbyconcanavalin—A(ConA)or¨pop01ysaccharide(I，PS)andoninter一
1eukin一2(II，一2)secretionwereobserved抽vitro．Meanwhile，theimmuno ogicalrgani dexesoftreated
micewereevaluated．ResultsDr gcontainingserumofICA+PNS[(80+640)and(160+1280)mg／
kg]couldimprovethespleenlymphocyteproliferationinducedbyConA(Pfeetcurveswereshapelysimilarto“n”．ProliferationofspleelymphocyteinducedbyLPSintested
groupscouldnotbeenchanced(P>0．05)．Drug—containingserumofICA+PNS[(80+640)and(160+
1280)mg／kg]couldimproveIL2production(P<0．01)．IcAcombinedwithPNSshowedsynergistic
effectandanupsideownUshapeddose—effectcurve．Comparedwiththcontrolgroup，however，there
werenosignificantdifferencesi theimmunologicalrgani dexesofallgroupsadministratedbyICA，
PNSorthecombinationof hetwo(P>0．05)，respectively．ConclusionICAcombinedwithPNSc uld
收稿日期：2005—10—14
基金项目：目家自然科学基金资助项目(30472112)；浙江省中医药管理局重点资助项日(2002KF001)；浙江省科技厅计划项目
(2004C33106)
作者简介：肖幸丰(J978)，男，浙江大学硕十研究生，研究方向为中药药理学。Tel：(0571)87230372Email：xiaoxf21st@sina．com
*通讯作者楼R嘉Tel／Fax：(0571)87217206E—mail：yijialou@z】ued ．cn
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第6期2006年6月·889·
improveimmunologicalfunctionselectivelyandpromoteTcellfunctioninmice．
Keywords：Icariin(ICA)；Panaxnotoginse gs ponins(PNS)；immunoregulatoryeffects；serum
pharmacology
淫羊藿和三七均为补益中药，淫羊藿苷(icari—
in，ICA)和三七总皂苷(Panaxnotoginseng
saponins，PNS)分别为其主要有效成分。近年来以
淫羊藿或三七为主伍用其他药材改善阿尔茨海默病
(Alzheimer’Sdisease，AD)患者临床症状以及动物
AD模型行为的研究时有报道口Ⅲ。同时也有研究表
明两药材及其活性成分分别具有增强免疫作用n1“。
鉴于AD的发病机制虽然迄今未明，但许多环节构
成的病理过程已获得认同o]，其中免疫功能与发病
相关的学说已获得多数研究资料支持”“]。本课题
组前期研究结果显示，ICA伍用PNS能显著改善p
淀粉肽大鼠侧脑室注射所致的空间学习和记忆障
碍o]。本实验采用血清药理学方法初步观察ICA伍
用PNs对小鼠免疫功能的影响，旨在为该组合药物
改善AD动物模型空间记忆障碍的作用机制提供
部分实验依据。
1材料
1．1药物：淫羊藿苷(ICA，质量分数50．o蛎)。三
七总皂苷(PNS)，质量分数(92．4±o．8)％，均为本
研究室提取纯化制备，经浙江大学药学院药物分析
和代谢研究室测定。
1．2动物：ICR小鼠，雌雄各半，体重18～20g，浙
江省医学科学院实验动物中心提供，二级，动物合格
证号：SCXK(浙)2003—0001。Bable／c小鼠，雄性，
体重18～20g，上海斯莱克实验动物有限责任公司
提供，动物合格证号：SCXK(沪)2003—0003。
1．3试剂：伴刀豆蛋白A(ConA)、脂多糖(LPS)
和MTT为Sigma产品。RPMI—1640细胞培养基为
Gibco产品。小牛血清购自杭州四季青生物工程有
限公司。
1．4仪器：1851型层流超净工作站，ThermoElec—
tron公司；Medimachine，丹麦DAKO产品；
Labofuge400R离心机，Heraeus公司；Elx800型台
式酶标仪，Bio—Tek公司。
2方法
2．1 动物分组及给药：根据血清药理学研究要
求“⋯，并参考前期ICA伍用PNS改善p淀粉肽大
鼠侧脑室注射所致的空间学习和记忆障碍药效学实
验剂量o]，动物按以下方法分组给药：ICA+PNS
组，剂量分别为：(40+320)、(80+640)、(160+
1 280)mg／kg。另设单用1CA80mg／kg和PNS
640mg／kg及(蒸馏水)对照组，每组10只动物。各
组均连续ig给药7d，给药体积均为0．2mL／10g。
2．2小鼠含药血清制备及免疫器官脏器指数测定：
第7日给药前称体重，给药后1h无菌摘眼球取血，
并立即颈椎脱臼处死，摘取脾脏和胸腺，称质量。取
得的血液3000r／min离心10min，无菌分离血清
后，经56C、30rain灭活，4℃保存。
2．3 BALB／c小鼠脾淋巴细胞悬液制备：BALB／c
小鼠颈椎脱臼处死，用75％酒精浸泡消毒，无菌取
出脾脏，剪成1～2mm小块．加3～5mI，Hank’S
液后用Medimaehine处理成单细胞悬液，1000r／
min离心3rain，沉淀经0．83％NH；CI处理除去红
细胞，Hank’s液洗2遍，用含10％小牛血清的RP—
MI—1640培养液配成细胞悬液。显微镜下细胞计数，
配成5×105／mL脾淋巴细胞悬液。
2．4含药血清对BALB／c小鼠脾淋巴细胞增殖的
影响：在96{L培养板中每孔加入脾淋巴细胞悬液
100pL，再加入6Pg／mLConA溶液100pI，或8
pg／mLLPS溶液，以及20f-L不同剂量组的含药血
清，各设3个复孔。37℃、5％CO：培养48h。培养
结束前4h每孔加入10pL5mg／mLMTT，培养
结束弃去上清液，每孔加入100,uLDMSO，充分振
荡后静置10min，酶标仪测定570nm波长处吸光
度(A。)值。
2．5含药血清对BALB／c小鼠脾细胞分泌白细胞
介素2(II。一2)的影响：按2．3项方法制备脾淋巴细
胞悬液，调浓度为1．0×10’／mL，加入24孔细胞培
养板中，每孔1mI。，同时加入20pLConA溶液
(终质量浓度3}Lg／mI．)及20pL不同剂量组的含
药血清，培养48h后取七清液，即为待测IL～2样
品。无菌取Bable／e小鼠胸腺，同脾淋巴细胞悬液操
作方法制备5×106／ml。胸腺淋巴细胞悬液。于96
孔培养板中每7L加入100”I．胸腺淋巴细胞悬液、
100p_L待测样品和20“I。ConA(终质最浓度3
p-g／mL)，37℃、5％CO。培养48h， 结束前4h
每孔加入5mg／mLMTT溶液10”L，培养结束弃
去上清液，每孔加入100止DMSO，充分振荡后静
蟹10min，酶标仪测定A。值(以激活的胸腺淋巴
细胞的增殖反映IL2的量)。
万方数据
·890· 中革蒋ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第6期2006年6月
2．6统计学处理：实验数据均以z±s表示，组问昆
著性检验采用ANOvA检验。
3结果
3．1 ICA伍用PNS对小鼠免疫器官脏器指数的
影响：单用1CA(80mg／kg)或PNS(640mg／kg)
及ICA伍用PNS[．(40+320、(80+640)、(】60+
1280)mg／kg]对小鼠体重、脾脏和胸腺脏器指数
均无显著影响(P>O．05)。
3．2含药血清对Bable，，c小鼠脾淋巴细胞增殖的
促进作用：与溶剂对照组比较，ICA伍用PNS
[(80+640)、(160+1280)mg／kg]具有较强的协
同作用．其含药血清能明显促进ConA诱导的小鼠
脾淋巴细胞增殖(P<0．01、0．05)，量效曲线呈倒u
型；单用ICA(80mg／kg)和PNS(640mg／kg)所
得含药衄清能促进脾淋巴细胞增殖，但和对照组比
差异无显著性(P>o．05)。和对照组相比，各剂量组
含药血清对I。PS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖无显
著促进作用(P>0．05)。见表1。
袭1ICA伍用PNS对ConA和LPS诱导的小鼠
脾淋巴细胞增殖的影响“±s，H一10)
TableEffectsofICAcombinedwithPNSonspleen
lymphocyteproliferationofin ceI duced
byConAorLPS(；±f，／／=10)
剂量7
删tw．k—l
ConA诱导的脾淋巴细胞增殖
d5_。 促进率／％
LPS诱导的脾蚌巴细胞增殖
^s70 促进率崩
与对州组}匕较：’P’尸3．3含药血清对Bable／c小鼠脾淋巴细胞分泌
IL2的影响：与溶剂对照组比较，1CA伍用PNS
[(80+640)、(160+1280)mg／kg]具有较强的协
同作用，其含药血清能明显促进IL2产生增加
(P<0．01)，量效曲线亦呈倒u型分布。单用ICA
(80mg／kg)和PNS(640mg／kg)所得含药血清虽
也能促进1I，2产生，但与溶剂对照组比较，无明显
差异(尸>0．05)。见表2。
4讨论
本实验以中药m清药理学方法从量效关系角度
出发，在细胞水平上对[CA伍用PNS的免疫药理
活性进行研究，旨在为该组合药物用于治疗AD提
供部分实验依据。
表2 ICA伍用PNS对小鼠脾淋巴细胞中IL一2分泌的
影响(；士s．H一10)
Table2 EffectsofICACOI]IbinedwithPNSonIL一2
productioninspleenJympbocyteofmice
(i±?，n--10)
与对照组比较：’P+P<0·05一P<0Ⅲ01controlgroup
目前认为，衰老是AD发生最为危险的因素，
而免疫功能减退则是衰老的最明显特征之一。文献
报道“]，AD患者淋巴细胞的某些功能减低，主要表
现为T细胞对有丝分裂原(ConA)刺激的反应降
低等，并与免疫炎症反应具有一定相关性。本研究显
示，IcA伍用PNS能促进ConA诱导的脾淋巴细
胞增殖，并能促进脾淋巴细胞分泌IL2。提示其可
能有免疫促进作用，此作用可能与本课题前期研究
中组合药物改善AD大鼠行为异常有关。
文献报道““，ICA能通过降低抑制性T淋巴
细胞(SuppressorTcell，Ts)影响淋巴细胞转化而
发挥免疫调节作用，提示ICA可能通过抑制Ts细
胞促进体液免疫。本研究所用的PNS主要由人参皂
苷Rg．、Rb-、Re、及三七皂苷R。组成，其中人参皂苷
Rg．、Rb。是其主要成分。文献报道“]，PNS主要成分
人参皂苷Rg。主要经肠道细菌代谢成Rh被吸收
的。Rg，本身具有促进ConA诱导的T淋巴细胞增
殖而不促进B淋巴细胞增殖的作用。而其代谢产物
Rh对ConA诱导的T淋巴细胞增殖有抑制作用，
且不促进B淋巴细胞增殖。此外，经证实人参皂皆
Rb，、Re对ConA诱导的’I、淋巴细胞增殖有显著的
促进作用”。这磐研究提示选择性地促进T淋巴细
胞增殖作用主要与ICA，人参皂苷Rb．、Re或其代
谢产物有关。本研究结果显示。单用1CA和PNS均
无上述作用，但两者伍用后，则体现协同促进作用，
提示1CA伍用PNS可能有利于改善AD患者免疫
功能异常。
本研究结果还表明，ICA伍用PNS能显著提
高脾细胞IL、2的产生，而单用其巾任何一种，均无
显著促进作用。由于II。2对自然杀伤(NK)细胞、
抗体依赖性杀伤细胞和淋巴因子激活的杀伤
(I。AK)细胞等均有促进其分化增殖作用。提示
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第6期2006年6月·891·
ICA伍用PNS对AD形成过程中淋巴细胞由于免
疫衰老所致其数量减少的改善有重要意义。
本研究量效关系中呈现的免疫调节作用，在高
剂量体现回落的趋势，该作用可能与两者伍用的多
靶点多层次作用特点有关。
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鼠可能的治疗作用。方法耐和rds新生鼠各84只，随机分为两组，实验组和对照组，每组42只小鼠。实验组小
鼠从出生当天开始，lp盐酸川芎嗪80mg／kg，每日2次，至出生后35d；对照组ip等量生理盐水。分别于0d和注
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收稿Et期：20051113
徽异：瓣l戮篡萋粪瓢萋3是嚣张发№oTe俐l：(0⋯20)87⋯330289雠E-嘲maitt—tier，⋯163⋯,netTel 020)87330289Emaildengx961@163t。黼⋯一为视网膜班性的药物治疗研究和眼科药物的开
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口
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凹
加
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万方数据
淫羊藿苷伍用三七总皂苷对小鼠免疫功能的调节作用
作者： 肖幸丰， 王志强， 楼宜嘉， XIAO Xing-feng， WANG Zhi-qiang， LOU Yi-jia
作者单位： 浙江大学药学院,浙江,杭州,310031
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(6)
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引证文献(9条)
1.王明军 有效部位配伍模式的现代中药疗效与安全性再评价[期刊论文]-中国医院药学杂志 2008(11)
2.王明军 试论现代中药衍生的有效部位配伍新药模式[期刊论文]-中国中西医结合杂志 2008(1)
3.徐爱丽.张阳.周丽苹.陈文芳 淫羊藿总黄酮对MPP+诱导MES23.5细胞损伤保护作用[期刊论文]-青岛大学医学院学
报 2010(6)
4.郭爱伟.朱静.陈纷纷.周杰珑 中草药的免疫调节作用研究进展[期刊论文]-动物医学进展 2008(11)
5.李娌.王学美 淫羊藿苷药理作用研究进展[期刊论文]-中国中药杂志 2008(23)
6.姚茹冰.赵智明.蔡辉 活血化瘀中药三七抗炎及免疫调节作用研究进展[期刊论文]-中西医结合心脑血管病杂志
2009(6)
7.贾亮亮.袁丁.王洪武.何毓敏.张长城 淫羊藿苷药理作用的研究进展[期刊论文]-现代生物医学进展 2010(20)
8.盛华刚 中药组分配伍模式的研究进展[期刊论文]-中国实验方剂学杂志 2013(16)
9.孟宁.孔凯.李师翁 淫羊藿属植物化学成分及药理活性研究进展[期刊论文]-西北植物学报 2010(5)


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