全 文 ：·1134· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月
伯糖、木糖、半乳糖和半乳糖醛酸，比例为4．3：
1．5：1：4．0：5．0，糖醛酸的量与比色法所测基本
一致。
PSWlB—b由单一半乳糖组成的半乳聚糖；
PSW4A组成为鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖和半乳糖
醛酸，比例为1：1．4：1．9：0．8；PSw5B中性糖组
成为鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖，比例为1：
1．5：3．4：1．3。
3．4 IR光谱分析和13C—NMR谱：PSWlB—b，
PSW2A一1和PSW3A一1的IR谱中都显示了典型的
糖环结构，810、870cm_1处没有吸收峰，表明不含有
甘露糖。PSW2A一1和PSW3A一1在1730am-1左右
出现吸收峰，说明可能含有糖醛。PSWIB—b的
13C—NMR谱中，d106．43～10．66为B一半乳糖的C一1
吸收峰。PSW2A-1的13C—NMR谱中，d176．02为a一
半乳糖醛酸6位羰基碳的吸收峰，艿109．8～111．8
为a一阿拉伯糖的C一1信号，艿19．18和18．93处的吸
收峰为a一鼠李糖的C一6信号。PSW3A一1在d
178．02出现信号较强的半乳糖醛酸吸收峰，说明含
糖醛酸的量较高，艿110．3处吸收峰为a一阿拉伯糖
产生，艿107．4为13一半乳糖产生，艿101．7处吸收峰
则为鼠李糖的异头碳信号，信号归属参阅文献报
道‘1“。
3．5 药理活性“药理试验结果显示所有样品均无细
胞毒性，PSW3A一1、PSW4A、PSW5具有明显的促
进免疫功能活性。
4 结论
实验结果表明黄精水提物中含有中性多糖、酸
性多糖和糖蛋白复合物，其主要特征是均含有较高
量的半乳糖。免疫活性实验结果初步表明酸性多糖
(PSW2A一1、PSW3A一1)的活性高于中性糖(PSW
1B—b)，而糖蛋白复合物(PSW3A一1、PSW4A、PSw
5B)的活性也高于一般多糖(PSW2A一1、PSW1B—
b)，具体的构效关系待进一步研究。
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补中益气汤的LC—MS分析及其对免疫抑制小鼠的调节作用
高绿春1’2，张金超2”，陈瑶4，柏干荣2，杨梦苏弘，肖培根卜
(1．中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所，北京100094；2．香港城市大学生物及化学系，香港；
3．河北大学化学与环境科学学院化学系，河北保定071002；4．香港城市大学深圳研究院，广东深圳518057)
摘要：目的研究补中益气汤的主要化学成分及其对环磷酰胺免疫抑制小鼠的调节作用。方法采用LC—MS方
法对补中益气汤进行了液相和质谱分析，通过MTT法测定补中益气汤对环磷酰胺免疫抑制小鼠的T、B淋巴细胞
增殖和NK细胞活性的影响。结果补中益气汤中主要化学成分是多糖、黄酮类和皂苷类化合物，能够显著提高环
收稿日期：2005一ll一10
基金项目：国家“863”计划基金资助项目(2003AA222052)
作者简介：高璩春(1980--)，女，河北人，中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所2002级直博生，主要从事生药学研究。
乜一mall：gjlngchun蟛hotmall-com
*通讯作者肖培根E—mail：xiaopg@public．bta．net．en杨梦苏E—mail：BHMYANG@cityu．edu．hk
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月·1135·
磷酰胺免疫抑制小鼠的T、B淋巴细胞增殖能力和NK细胞活性。结论LC—MS方法可以发展成为复方有效成分
研究中一个有效手段，用来阐明复方药理作用的物质基础。
关键词：补中益气汤；LC—MS；免疫；环磷酰胺
中图分类号：R284．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)08—1134一04
LC-MSAnalysisofBuzhongyiqiTanganditsregulatingeffectonimmune—depressedmice
GAOJing—chunl”，ZHANGJin—cha02～，CHENYa04，BAIGan—ron92，YANGMeng—SU2，XIAOPei—genl
(1．InstituteofMedicinalPl ntDevelopment，ChineseAcademyofMedicalScienceandPekingUnionMedicalCo lege，
Beijing100094，China；2．DepartmentofBiologyandChemistry，CityUniversityofHongKong，HongKo ，China；
3．DepartmentofChemistry，CollegeofChemistryandEnvironmentalScience，HebeiUniversity，Baoding
071002，China；4．ShenzhenResearchInstitute，CityUniversityofHongKong，Shenzhen518057，China)
Abstract：ObjectiveTos udythemainchemicalconstituentsinBuzhongyiqiTang(BYT)andits
regulatingeffectonimmune—depressedmicetreatedbycyclophosphomide(CY)．MethodsLC—MSAnaly—
sisofBYT，inhibitoryeffectfT，BlymphocytecellproliferationandNKcellactivitywereobservedby
MTTmethod．ResultsThemainchemicalconstituentsofBYTarepolysarccharides，flavonoids，and
saponins．theysignificantlyimprovethT，BlymphocytecellproliferationandNKactivityinimmune—
depressedmicetreatedbyCY．ConclusionTheLC—MSmethodcouldbeusedinstudyingo active
constituentsinChinesecompoundformulaSOastoelucidatetheirmaterialbasesofpharmacology．
Keywords：BuzhongyiqiTang(BYT)；LC—MS；immunology；cyclophosphomide(CY)
补中益气汤(以下简称BYT)是由黄芪、党参、
炙甘草、白术、当归、大枣、陈皮、柴胡、升麻、生姜10
味药材组成的复方制剂，具有补中益气、升阳举陷之
功效，用于治疗脾胃虚弱、中气下陷症引起的体倦乏
力、食少腹胀、久泄、脱肛、子宫脱垂[1]。现代药理研
究发现BYT具有调节细胞免疫、体液免疫和神经
内分泌功能的作用[2]，同时还具有抗菌以及预防和
治疗肿瘤作用[3~5]，但是其组方规律和免疫调节作
用机制尚未完全阐明。本研究通过LC—MS方法分
析BYT中的主要化学成分，联系各味药的传统以
及现代药理作用，对BYT的免疫学药理机制作初
步的阐释。
1材料
1．1 材料和试剂：昆明种小鼠(4～6周)，购自深圳
光明农场实验动物中心；YAC一1细胞(一种NK细
胞敏感的小鼠淋巴细胞系)由中国医学科学院药物
研究所惠赠；RPMI一1640培养基和小牛血清购自
Gibco公司；MTT、刀豆蛋白(ConA)和脂多糖
(LPS)购自Sigma；环磷酰胺(Cyclophosphomide，
CY)购自江苏恒瑞制药厂；药材购自深圳博爱医院
药店，由肖培根教授鉴定。实验中用于HPLC的化
学试剂均为色谱纯，购自Merck公司。
1．2 主要仪器：ThermoFinniganLC—MS系统；
Bio—RADModel680酶标仪；HetoLy Lab3000冷
冻干燥仪；eppendorf5810R离心机。
2方法
2．1 BYT的制备[6]：按照处方配比取各味药(黄芪
68g、人参68g、白术68g、当归50g、大枣34g、陈
皮34g、柴胡17g、甘草25g、升麻17g、生姜8．5
g)，先用蒸馏水浸泡3h，然后煮沸3h，滤过，收集
滤液；重复操作1次后合并滤液，真空浓缩，浓缩液
冷冻干燥，得冻干粉110．9g，4℃保存，备用。
2．2 LC—MS供试样品制备D]：BYT冻干粉1．0g，
用50mL甲醇超声提取3次，合并提取液，离心10
min(1000r／min)，取上清液，真空浓缩至于，加20
mL色谱甲醇溶解，离心10min(3000r／rain)，上清
液经微孔滤膜滤过即可。
2．3液相色谱及质谱条件：色谱柱：HanbonLichro—
spherC一18柱(250mm×4．6mm，5p．m)；流动相：
(A)酸水(o．5％冰醋酸)、(B)乙腈，线性洗脱：0min，
A—B90：10；60min，A—B0：100；体积流量：1．0
mL／min；检测波长：200～600nm全波长扫描；柱
温：25C；柱后分流0．2mL／min进质谱仪；ESI电
离源，负离子检测，扫描范围：100～1500m／2；喷雾
电离电压：4．5kV；毛细管电压：43V；进样量：5pL。
2．4环磷酰胺免疫抑制模型的建立：小鼠随机分为
5组，每组6只。对照组：第1～14天，ig生理盐水；
模型组：第1～14天，ig生理盐水，并且在第1天ip
200mg／kg环磷酰胺；给药组：第1天ip200mg／kg
环磷酰胺，并且在第1～14天igBYT(按剂量分为
万方数据
·1136· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月
3组，分别为BYTl：500mg／kg；BYT2：1000rag／
kg，BYT3：2000mg／kg3个剂量)。
2．5小鼠脾淋巴细胞悬液制备[8’9]：各组小鼠无菌
取脾，放置到冰冷的PBS中，在200目筛网上用注
射器针芯器轻轻研磨，得细胞悬液，4vc离心5min
(1000r／rain)，弃上清；加入适量红细胞裂解液，吹
匀后，4‘C离心5rain(1000r／min)；用PBS洗涤2
次后将细胞用RPMI一1640培养液配成5×106／mL，
吹匀，备用。
2．6 T、B淋巴细胞增殖实验[9]：脾淋巴细胞悬液以
5×106／mL密度铺96孔培养板，每孔100肛L。加入
ConA和LPS(终质量浓度分别为5弘g／mL、10弘g／
mL)，设空白对照。；37C、5％C0。培养48h后，每
孔加入10弘LMTT溶液(5mg／mL)，继续4h，离
心10min(3000‘r／min)，弃上清，每孔加入100p-L
DMSO，充分震荡后570nm处测定吸光度(A)，根
据公式：增殖率一(给药组A一对照组A)／对照组
A×100％，计算增殖率。
2．7 NK细胞活性测定[8]：混合孔为脾淋巴细胞悬
液(效应细胞，5×106／mL)和YAC一1细胞(靶细胞，
1×105／mL)各100ttL；另设效应细胞孔(脾淋巴细
胞悬液100弘L，5×106个／mL加RPMI一1640完全
培养基100肛L)和靶细胞孔(YAC一1细胞100弘L，
5×106／mL加RPMI一1640完全培养基100肛L)，孵
育4h。每孑L加入10肛LMTT溶液(5mg／mL)，继续
培养4h，离心10rain(3000r／min)，弃上清，每孔加
入100弘LDMSO，充分震荡后570nm处测定A值。
NK细胞活性一(A靶+A效--A混合)／A靶×100％
3 结果
3．1 BYT的LC／MS分析：结果见图l和2。结果表
明BYT的主要成分为多糖、黄酮和皂苷类化合物。
3．2根据UV光谱和质谱推导出的化合物：结果
见表l。
3．3淋巴细胞增殖实验结果：见图3。
3．4 NK细胞活性实验结果：见表2。结果表明
BYT高、中和低剂量组均能提高环磷酰胺免疫抑制
小鼠的NK细胞活性。
4讨论
BYT最早记载于宋金时期李东垣所著的《内外
伤寒惑论·卷中》，具有调补脾胃等功效，临床应用
相当广泛。近年来许多国内外学者进行了大量的实
验研究，证明其能够增强机体免疫力，具有抗肿瘤、
抗感染作用，并能减轻抗癌药的副作用，是一种有效
的生物应答调节剂。
t／min
图1 BYT的HPLC图谱
Fig．1HPLCChromatogramofBYT
J1
67
32．7036．6l
L．』。衅_35349n．喙47．78
uJ
t／min
图2 BYT的总离子流色谱图(ESI一)
Fig．1TotalionchromatogramofBYT
表1根据uV光谱和质谱推导出的化合物 、
Table1 CompoudselucidatedfromUVandMSspectra
表2 BYT对环磷酰胺免疫抑制小鼠NK细胞活性的影晌
Table2 EffectofBYTonactitityofNKcellsin
immune—depressedmicetreatedbyCY
组别 NK活性／％
对照组
模型组
BYTl
BYT2
BYT3
86．84土4．61
58．61士4．13
65．54±6．15。
93．32±3．15⋯
85．59±5．17⋯
与模型组比较：+P<0．05⋯P％0．01
。P 万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月·1137·
与模型组比较：’P。P图3 BYT对环磷酰胺免疫抑制小鼠淋巴细胞增殖的影响
Fig．3EffectofBYTonproliferationoflymphocyte
inimmune—depressedmicetreatedbycY
淋巴细胞是在免疫应答过程中起核心作用的免
疫活性细胞，按其功能可分为T细胞、B细胞和NK
细胞。T和B淋巴细胞可分别在致有丝分裂原
ConA和LPS的刺激下由静止期淋巴细胞转化为淋
巴母细胞，发生有丝分裂而增殖；NK细胞是机体维
持免疫监视功能的主要细胞之一，在免疫调节方面
起重要作用；淋巴细胞检测NK细胞活性水平，可以
反映出整个机体免疫功能状态。
本研究根据已知BYT的各味药的成分报道，
利用质谱技术对BYT的成分进行初步定性分析，
并检测了其免疫调节作用。结果表明，在本实验的剂
量范围内，BYT基本能够显著提高环磷酰胺免疫抑
制小鼠的NK细胞活性和T、B淋巴细胞增殖能力，
说明提高机体免疫力可能是BYT抗肿瘤、抗感染
等生物活性的机制之一；另外，通过LC—MS分析发
现，BYT除了含有多糖类成分，黄酮类和皂苷类也
是BYT的重要组分之一，可能在其免疫活性中发
挥着重要作用。LC—MS方法可以发展成为复方有效
成分研究中一个有效手段，用来阐明复方药理作用
的物质基础。
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复方五仁醇胶囊血清药化学研究
窦志华1，丁安伟¨，王陆军2，罗 琳3，张兵2，施 忠2
(1．南京中医药大学，江苏南京210029；2．南通市第三人民医院，江苏南通226006；3．南通大学，江苏南通226006)
摘 要：目的 对复方五仁醇胶囊进行血清药化学研究，以便与该制剂血清药理学研究结果进行谱效关系分析，阐
明其药效物质基础。方法 以已经建立的高效液相色谱指纹图谱分析方法，比较复方五仁醇胶囊含药血清色谱图
和空白血清色谱图，分辨该制剂给药后血清中产生的药源性成分，进一步比较全方制剂及各缺味、单味制剂给药后
的血清色谱图，分析血中药源性成分的来源，并通过对照品比对对部分成分进行鉴定。结果ig给药后血清中产生
药源性成分13个，13个成分全部来自君药五味子，其中8个为制剂原形成分，包括五味子醇甲、五味子甲素、五味
子乙素，其余5个为代谢产物。结论复方五仁醇胶囊体内直接作用物质很可能出自血清中的13个药源性成分，
收稿日期：2005一10—28
基金项目：江苏省中医药局中医药科学技术研究专项课题(编号H05173)；江苏省南通市社会发展科技计划项目(编号$4006)
作者简介：窦志华(1966一)，男，江苏南通人，副主任中药师，博士研究生，主要从事中药炮制与复方研究工作。
*通讯作者丁安伟 Fel：(025)51997178E—mail：daw@njutcm．edu．cn
万方数据
补中益气汤的LC-MS分析及其对免疫抑制小鼠的调节作用
作者： 高璟春， 张金超， 陈瑶， 柏干荣， 杨梦苏， 肖培根， GAO Jing-chun， ZHANG Jin-
chao， CHEN Yao， BAI Gan-rong， YANG Meng-su， XIAO Pei-gen
作者单位： 高璟春,GAO Jing-chun(中国医学科学院,中国协和医科大学药用植物研究所,北京
,100094;香港城市大学,生物及化学系,香港)， 张金超,ZHANG Jin-chao(香港城市大学,生
物及化学系,香港;河北大学化学与环境科学学院,化学系,河北,保定,071002)， 陈瑶,CHEN
Yao(香港城市大学深圳研究院,广东,深圳,518057)， 柏干荣,杨梦苏,BAI Gan-rong,YANG
Meng-su(香港城市大学,生物及化学系,香港)， 肖培根,XIAO Pei-gen(中国医学科学院,中
国协和医科大学药用植物研究所,北京,100094)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(8)
被引用次数： 4次

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