全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月·1021·
极差值和方差分析结果表明，3种因素对番泻
苷A提取率的影响程度依次为B>A>C。由于提取
次数对提取率的影响不明显，且多次提取增长了提
取的时间，增加了溶剂的用量，故提取次数确定为2
次。3种因素的优化组合为A。B2C。，即每次lo倍原
料量的50％乙醇为溶剂，室温浸提24h，提取2次。
2．2．5验证试验：按上述确定的提取工艺条件，取
10g药材中粉，精密称定，用10mL50％乙醇室温
浸提24h，提取2次，提取液合并，定容至25mL，测
定番泻苷A的质量浓度为1．35mg／mL，计算得提
取率为91．2％(咒一4)。
3讨论
3．1 番泻苷包括番泻苷A、B、C、D等o]，由于番泻
苷类对照品不易得到，而此类物质物理、化学性质相
近，所以暂以番泻苷A为考察指标，建立测定方法，
优选番泻苷类化合物的提取工艺。
3．2《中国药典>)2000年版一部，采用比色法测定
番泻叶中总蒽酮，方法需多次回流、萃取，操作复杂。
通过多种流动相：水一甲醇、水一乙腈、水一乙腈一磷酸盐
缓冲液等的优化，本研究建立了HPLC测定番泻叶
中番泻苷A的方法，此方法简单、准确、快速。可作
为番泻叶中番泻苷A测定的方法。
3．3通过提取温度的选择试验可以明显看出番泻
苷类物质在较高温度下不稳定。因此建议在进行
HPLC测定时，番泻苷A对照品不宜过久放置，样
品保存时温度不应超过60℃。
References：
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HPLC法测定丹芩滴丸中黄芩苷、隐丹参酮和丹参酮ⅡA
刘 刚，王杰松，姜 韧，薛克昌，徐冰心，谭生建
(中国人民解放军第306医院药剂科，北京100101)
丹芩滴丸由丹参和黄芩等经提取加工制备而
成，具有抗菌、抗炎和镇痛等作用，临床用于耐青霉
素、红霉素、金霉素的金黄色葡萄球菌、乙类链球菌
和绿脓杆菌等感染所致的外耳道炎、外耳道疖肿、中
耳炎等。黄芩苷、隐丹参酮和丹参酮ⅡA为丹芩滴丸
中抗菌、抗炎的活性成分。因此本实验建立了高效液
相色谱法同时测定丹芩滴丸中黄芩苷、隐丹参酮和
丹参酮ⅡA的方法。
1仪器与试药
高效液相色谱仪：含2800液相色谱泵，7215型
手动进样器，BIO～DIMENSION紫外可见分光光度
检测器(美国B10一RAD公司)；TL9900色谱数据
工作站(北京泰乐公司)。
黄芩苷对照品(批号：0715—9708)、隐丹参酮对
照品(批号：0852—9902)和丹参酮ⅡA对照品(批号：
0766—200010)购自中国药品生物制品检定所。丹芩
滴丸由本院制剂室制备(批号：20030208、20030209、
20030211)。乙腈为色谱纯。
2方法与结果
2．1对照品溶液的制备：分别精密称取黄芩苷、隐
丹参酮和丹参酮1IA对照品24、10、12mg，置100
mL棕色量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。
精密量取5mL，置10mL棕色量瓶中，加乙醇稀释
至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液，分别含黄芩苷
120t-g／mL、隐丹参酮50／．tg／mL和丹参酮ⅡA60
tlg／mL。
2．2供试品溶液的制备：取丹芩滴丸20粒，研匀，
精密称定125mg，置50mL锥形瓶中，精密加入乙
醇25mL，称定，超声5min使溶解，擦干瓶壁，补足
减失的乙醇，摇匀，即得。
2．3色谱条件和系统适用性试验：MZC。。分析色
谱柱(250mlrl×4．6mm，5肛m)，C18保护柱(北京分
析仪器厂，5．0mm×4．6mm，5肛m)；流动相A为
85％乙腈水溶液(含0．5％三乙胺，磷酸调pH3．o)，
流动相B为!o％乙腈水溶液(含0．5％三乙胺，磷酸
调pH3．o)，梯度洗脱，程序为o～15min，A20％～
收稿日期：2004—11-22
作者简介：刘 刚(1961～)，男，北京人，副主任药师，解放军306医院药剂科副主任，主要从事药物分析研究。
Tel：(010)6635618763561 2
万方数据
·1022· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月
100％，B80％～o％；体积流量：1．0mL／min；检测
波长：270am。在此色谱条件下，测得黄芩苷、隐丹
参酮、丹参酮ⅡA对照品、阴性样品(PEG6000、PEG
1000、丙二醇质量比按7：63：10加热熔化混合而
成)和丹芩滴丸色谱图见图1。可见黄芩苷、隐丹参
酮和丹参酮ⅡA保留时间分别为6．7、19．3、22．8
min，与各自相邻峰的分离度均大于1．5，理论板数
分析为3600、7500和6300。
B
4 8 121620244 8 12162024 4 8 12162024
f／rain
1一黄芩苷2一隐丹参酮3一丹参酮1A
1-baicalin2一cryptotanshinone3-tanshinoneIA
图1混合对照品(A)、缺丹参和黄芩的阴性
样品(B)和丹芩滴丸(c)的HPLC图
Fig-1HPLCchromatogramsfmixedreference
substances(A)，negativesample(B)，
andDanqinDroppingPill(C)
2．4线性关系与最低检出限：取黄芩苷对照品12
mg，置100mg量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，
摇匀，为黄芩苷对照品储备液(含黄芩苷120．0弘g／
mL)；分别取隐丹参酮对照品8mg和丹参酮ⅡA对
照品8mg，置同一100mL量瓶中，用乙醇溶解并稀
释至刻度，摇匀，为隐丹参酮对照品和丹参酮ⅡA对
照品混合储备液含隐丹参酮80．00ptg／mL，含丹参
酮ⅡA78．00肛g／mL)。
将对照品储备液稀释1倍，摇匀，分别取4、8、
12、16、20pL注入液相色谱仪，记录色谱峰面积。以
峰面积对进样量线性回归：黄芩苷回归方程Y一
1．100×106+8．189×107X，r一0．9999，线性范围：
0．2402～1．201弘g；隐丹参酮回归方程Y一
6．954×105+1．472×108X，，．一0．999，线性范
围：0．160o～0．800／29；丹参酮ⅡA回归方程y一
6．579×105+1．371×108X，r一0．9996，线性范
围：0．156O～O．7800肛g。
将对照品储备液适当稀释后进样，以峰高为基
线噪音3倍计算，黄芩苷、隐丹参酮和丹参酮ⅡA最
低检出限分别为0．0051、0．0045、0．0064gg。
2．5精密度试验：取混合对照品溶液，重复进样5
次，每次10弘L，记录色谱峰面积，计算，结果黄芩苷
峰面积RSD为1．2％，隐丹参酮峰面积RSD为
1．4％，丹参酮ⅡA峰面积RSD为1．6％。取丹芩滴
丸供试品溶液，重复进样5次，每次10肛L，记录色
谱峰面积，计算，结果黄芩苷峰面积RSD为1．5％，
隐丹参酮峰面积RSD为1．8％，丹参酮ⅡA峰面积
RSD为2．o％。
2．6重现性试验：取同一批丹芩滴丸，平行5次取
样，制备供试品溶液，进样测定，计算质量分数，结果
黄芩苷的RSD为1．6％，隐丹参酮的RSD为
2．9o／／，丹参酮ⅡA的RSD为2．6％。
2．7稳定性试验：取丹芩滴丸供试品溶液，每隔1
h测定1次，测定5次，计算质量分数，结果黄芩苷
的RSD为1．7％(咒一5)，隐丹参酮的RSD为
1．9％(咒一5)，丹参酮ⅡA的RSD为2．3％(咒一5)。
2．8加样回收率试验：精密量取丹芩滴丸(St号：
20030211)供试品溶液3mL置10mL棕色量瓶中，
用乙醇稀释至刻度，作为回收率测定用空白样品；精
密量取同一供试品溶液3mL置10mL棕色量瓶
中，精密加入黄芩苷对照品储备液4mL(相当于黄
芩苷480．4／_tg)、隐丹参酮和丹参酮ⅡA对照品混合
储备液3mL(相当于隐丹参酮240／zg和丹参酮ⅡA
234弘g)，作为回收率测定用加样样品。同法重复制
备5个加样样品，测定，计算回收率，结果黄芩苷、隐
丹参酮、丹参酮ⅡA的加样回收率分别为97．4％
(RSD为2．4％)、97．3％(RSD为2．1％)、101．6％
(RSD为1．1％)。
2．9样品的测定：分别精密吸取混合对照品溶液和
供试品溶液各10止，注入液相色谱仪，分别记录黄
芩苷、隐丹参酮和丹参酮ⅡA色谱峰面积，采用外标
法计算，测定结果见表1。
表1丹芩滴丸中黄芩苷、隐丹参酮和
丹参酮Ⅱt的测定结果锄一”
Table1 Determinationofbaicalin，cryptotanshinone，and
tanshinoneⅡAinDanqinDroppingPill(一一3)
3讨论
经对混合对照品溶液在线光谱扫描发现，270
nm处黄芩苷、隐丹参酮和丹参酮ⅡA均有较强吸
收，故选270ilm作为测定波长。
在等梯度洗脱条件下，当黄芩苷在7min左右
出峰时，丹参酮ⅡA在30min以后出峰。本实验采
用梯度洗脱，使丹参酮ⅡA在23rain之前出峰，提
高检测效率。
本法操作简便，测定结果准确可靠，可用于丹芩
滴丸中黄芩苷、隐丹参酮和丹参酮ⅡA的测定。
血
万方数据
HPLC法测定丹芩滴丸中黄芩苷、隐丹参酮和丹参酮ⅡA
作者： 刘刚， 王杰松， 姜韧， 薛克昌， 徐冰心， 谭生建
作者单位： 中国人民解放军第306医院,药剂科,北京,100101
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(7)
被引用次数： 4次

引证文献(4条)
1.颜栋林.李萍.兰茜 冠心丹参片微生物限度检查法方法验证[期刊论文]-医药导报 2010(8)
2.原文鹏.刘林娜.马双成 HPLC法测定山丹酮缓释片中丹参酮类成分的含量[期刊论文]-中国药房 2008(9)
3.张静.陈敬华.叶桦珍.庄惠生 隐丹参酮的电化学行为及其测定[期刊论文]-分析试验室 2006(10)
4.黄诗远.陈凤.姚红霞 RP-HPLC法测定湿毒清胶囊中丹酚酸B和黄芩苷的含量[期刊论文]-中国药师 2008(6)


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