全 文 ：·1062· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月
suchmarkers(SNPs)canbefoundinthemito—
chondrialnad1intron2 sequencesandu edasa
newmolecularmarkerfotheidentificationof上Ⅺn—
drobiumspecies．
References：
[1]MaGX，XuGJ，XuLS，eta1．Surveyandidentificationof
commercialsampleShihu(DendrolffumSw．)(I)D]．Chin
TraditHerbDrugs(中草药)，1995，26：370—372．
E2]DingXY，XuLS，XuH，eta1．Databaseestablishmentof
thewholerDNAITSregionofDendrolnumspeciesof“Feng—
dou”andauthenticationbyanalysisoftheirsequencesFJ]．
ActaPharmSin(药学学报)，2002，37：567—573．
[33XuH，LiXB，WangZT，eta1．rDNAITSsequencingof
HerbaDendroMi(Huangcao)EJ]．ActaPharmSin(药学学
报)，2001，36：777—783．
E4]TengYF，WuXJ，XuH，eta1．AcomparisonofmatKse—
quencesb tweenH rbaDendrobii(Shihu)anditsadulterant
speciesEJ]．JChinaPharmUniv(中国药科大学学报)，
2002，33：280—283．
E5]ZhangM，HuangHR，LiaoSM，eta1．Clusteranalysisof
DendrobiumbyRAPDandesignofspecificprimerforDen—
drobiumcandidumEJ]．ChinaJChinMaterMed(中国中药
杂志)，2001，26：442—447．
[6]MittonJ B，KreiserBR，RehfeldtGE．Primersdesignedto
amplifyamitochondrialad1introninponderosapine，Pinus
ponderosa，limberpine，P．刀exilis，andScotspine，P．
sylvestris[J]．TheoretApptGenet，2000，101：1269-1272．
[7]SperisenC，BtichlerU，GugerliF，eta1．Tandemrepeatsin
plantmitochondrialgenomes：applicationtoanalysisofpopu—
lationdifferentiationinthec iferNorwayspruce[J]．Mol
Ecol，2001，10：257—263．
[8]GugerliF，ScnnJ，AnzideiM，eta1．Chloroplastmicrosatel一
1itesandmitoehondrialad1 ntron2 sequencesindicatecon—
gruentphylogeneticr lationshipsamongSwisstonepine
(Pinuscerebra)，Siberianstonep ne(Pinussibirica)and
Siberiandwarfpine(Pinuspumila)[J]．Mol＆以，2001，
10：1489—1497．
[9]ChapdelaineY，BonenL．Thewheatmitochondrialgenefor
subunit1 oftheNADHdehydrogenasecomplex：atrans-
splicingmodelforthisgene—in—pieces[J]．＆盯，1991，65：
465—472．
[10]DemesureB，SodziN，PetitRJ．Asetofuniversalprimers
foramplificationofpolymorphicnon—- odingregionsfmito—-
chondrialandchloroplastDNAinplants[J]．MolEcol，
1995，4：129—131．
利用浸苗法将野生天麻总DNA导入马铃薯的研究
葛正龙1，周鹤峰2，邵敏1
(1，遵义医学院生物化学教研室，贵州遵义563003；2．遵义医学院珠海校区生物工程系，广东珠海519041)
摘要：目的研究野生天麻总DNA对马铃薯的转化，分析马铃薯转化植株中野生天麻的药用成分天麻素。方法
采用浸苗法将野生天麻总DNA导人马铃薯试管苗，通过紫外扫描法、PCR扩增筛选转化植株，对转化植株进行
SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)蛋白分析，通过TLC法检测天麻素。结果(1)在200株转化的马铃薯中
有21株的紫外扫描图谱与正常对照组有显著差异，且在220nm有明显吸收峰。(2)5’株经PCR扩增出野生天麻抗
真菌蛋白(GAFP)基因。(3)转基因马铃薯与正常马铃薯的蛋白表达有明显差异，并且在转基因马铃薯中有一条与
GAFP相同的条带。而正常马铃薯中无此条带。(4)通过薄层色谱法检测出3株转基因马铃薯表达野生天麻的有效
药用成分天麻素。结论 采用浸苗法进行外源总DNA导入是可行的。
关键词：野生天麻；马铃薯；浸苗法；天麻素
中图分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)07—1062—04
AgeneticransformationstudyofintroducingwildGastrodiaelataDNA
intoSolanumt berosumbysoakingseedlingmethod
GEZheng—lon91，ZHOUHe—fen92，SHAOMinl
(1．DepartmentofBiochemistry，ZunyiMedicalCo lege，Zunyi563003，China；2．DepartmentofBioengineering，
ZhuhaiArea，ZunyiMed calCo lege，Zhuhai519041，China)
Abstract：ObjectiveUsinghesoakingseedlingmethodt introducewildGastrodiadatDNAinto
potatoplantletsandanalyzegastrodinftransformedSolanumt berosum．MethodsAfterthetuber
grownup，thesolutionofgastrodinwasextractedfromthepotatoeswhichweretransformedbywildG．
elataDNA．Thetransformedplantswerescanedbyultraviolet．PCRwasusedtoanalyzeGAFPgeneby
SDS—PAGE．TLCwasusedtoanalyzethgastrodinftransformedS．tuberosum．Results(1)The21
收稿日期：2004—1I-16
基金项目：贵州省省长基金和贵州省科技厅社发基金(2001112)
作者简介：葛正龙(1962一)，男(布衣族)，贵州修文人，副教授，硕士生导师，1985年毕业于遵义医学院临床医学专业，1988--1991年在
北京医科大学生物化学与分子生物学系攻读研究生，并获医学硕士学位，1999--2000年在英国Darham大学做访问学者，研
究方向为药用植物分子生物学。Tel：(0852)8204473Fax：(0852)8204792E—mail：zlongge@hotmail．corn
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月·1063·
transformedplantshadobviousab orptionpeakat220nmin200transformedS．tuberosunr．(2)Thefrag—
mentofwildG．elataGAFPgenewasfoundbyPCRfrom5transformedplants．(3)Theproteinxpres—
sionsintransgenicS．tuberosumwereobviouslydifferentfromhenormalS．tuberosum：abandwasde—
tectedintransgenicS．tuberosumandwildG．elata，butwasn’tdetectedinnormalS．tuberosum．(4)The
expressionofthegastrodinwasdetectedbyTLCfromthreetransformedplants．ConclusionItisfeasible
tousethesoakingseedlingmethodt introduceexogenousDNAintoplants．
Keywords：wildGastrodiadatBlume；SolanumtuberosumL．；soakingseedlingmethod；gastrodin
天麻GastrodiaelatBlume属兰科，是名贵传
统中药，有着非常广泛的药用价值，近年来因为过度
采伐以及病虫害等原因，其资源已受到严重威胁，因
此对珍稀濒危的野生天麻进行可持续利用的研究已
迫在眉睫。自从20世纪70年代周光宇教授提出
DNA片段杂交假设以来，应用“花粉管通道法”、“浸
泡法”等方法将外源DNA导入植物已成为一种新
的有效的遗传转化方法。作为外源基因导入技术之
一的“浸苗法”已在烟草、大豆、蚕豆等作物中得到了
实际应用，并实现了遗传转化。朱生伟等人应用浸苗
法成功地将外源DNA导入烟草，导入后代在形态、
品质和成分等方面已产生广泛的变异[1]。本研究旨
在探索通过转基因植物来生产野生天麻的有效药用
成分的可行性，试图通过转基因技术将野生天麻总
DNA导人马铃薯，培育出具有药用价值或保健作用
的马铃薯新材料和新品系。
1材料与方法
1．1材料：野生天麻，购于遵义，经贵阳中医学院李
涛副教授鉴定。马铃薯(中薯1号)，由遵义农业科学
研究所提供。
1．2野生天麻总DNA的提取：采用本实验室改进
的CTAB法，琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段完整
性，以A—DNA作为相对分子质量参照，电压
4V／cm，电泳4hL2’3j。
1．3野生天麻DNA对马铃薯试管苗的转化[1]：实
验组：选择生长一致的马铃薯壮苗(5～7片真叶)
200株，在超净工作台上，用无菌水将根部冲洗干
净，滤纸吸净水滴，用提取的野生天麻DNA溶液
(质量浓度500／生g／mL)浸泡36h[1]，转到MS高糖
培养基上，温度25℃，暗培养2个半月。对照组：采
用TE液同样条件下处理。
1．4筛选转化植株
1．4．1粗筛(紫外扫描法)：分别取实验组和对照组
试管薯，称质量，液氮研碎，按1：30的质量体积比加
入甲醇，超声1h后静置24h，再超声1h，静置2h，
1000r／min离心10min，取上清液2mL，用紫外分
光光度计在200～300am下进行波长扫描C4,s]。
1．4．2细筛(PCR扩增野生天麻抗真菌蛋白)：分
别提取通过粗筛得到的转化株试管薯总DNA，进行
野生天麻抗真菌蛋白(GAFP)的PCR扩增。GAFP
基因引物参照相关文献设计n]，引物序列如下：上游
5，-AGGGATCGGTTGAATTCGGGC一37，下游
5，-GCCAGACGCCGCCGCTGT一3’。PCR反应条
件：94℃、10min，94℃、1min，52oC、45S，72℃、
45S，72℃、6min，30个循环。PCR产物进行琼脂
糖凝胶电泳[7]。
1．5转基因马铃薯中GAFP基因表达的分析：分
别取实验组和对照组试管薯，按王义琴等[8]方法制
成总的可溶性蛋白溶液。采用5％的浓缩胶，15％的
分离胶，用考马斯亮蓝G250染色[9]。
1．6转基因马铃薯中天麻素成分的分析：分别取实
验组和对照组试管薯，称质量，液氮研碎，按1：30
的比例加甲醇，超声1h后静置24h，再超声1h，静
置2h，1000r／min离心10min，取上清液进行浓缩
处理[4]。以0．5％羧甲基纤维素钠、硅胶H自制薄
板，110℃活化30min，各取样品及天麻素对照品4
弘L点样，以氯仿一甲醇一冰醋酸(6：2：0．15)为展开
剂，展距为15cm，10％磷钼酸乙醇溶液为显色剂，
105oC烘烤6min，观察并拍照[4]。
2结果与分析
2．1 DNA片段的大小：提取的野生天麻DNA样
品在0．3％琼脂糖凝胶上电泳，电压为5V／cm，电
泳3h，以A-DNA作为相对分子质量参照，电泳结
果显示：通过改进的CTAB法所提取的野生天麻
DNA样品为单一条带，且片段大小为50kb左右
(图1)，符合分子导入要求。
2．2紫外扫描图谱分析：对200株转化植株和20
株正常的试管薯甲醇提取液进行紫外扫描，扫描波
长是200300nm，结果显示：有21株转化马铃薯
的紫外扫描图谱与正常马铃薯有显著差异，并且转
化马铃薯的甲醇提取液在220nm处有明显吸收
峰，见图2。
万方数据
·1064· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月
罨
米
醪
l～4、6～10一野生天麻DNA5-2-DNA(48．5kb)
1 4，6 10-wildG． ataDNA5-小DNA(48．5kb)
图1 野生天麻DNA琼脂糖凝胶电泳图
Fig．1Agarosegelelectrophoretogram
ofwildG．elataDNA
3．0
2．5
2．0
1．5
l-0
0．5
O．0
图2正常马铃薯和转化马铃薯紫外扫描图谱
Fig．2UltravioletscanofnormalS．tuberosum
andtransgenicS．tuberosum
2．3 GAFP基因的PCR分析：抗真菌蛋白是野生
天麻皮层中的一种能强烈抑制真菌生长的蛋白，马
铃薯中不存在此蛋白，因此分别以野生天麻总DNA
和通过粗筛的转化植株总DNA为模板，通过PCR
扩增来分析GAFP基因是否已转到马铃薯中，电泳
结果发现在3株转基因马铃薯中扩增出与GAFP
基因位于同一位置(380bp)的条带，结果见图3。
含有GAFP基因，此3株经过SDS—PAGE分析蛋
白表达情况，结果显示：经过转基因的马铃薯植株中
含有GAFP(14kd处)，而正常马铃薯中无此带，且
转基因马铃薯与正常马铃薯的蛋白表达有明显差
异，见图4E9|。
1一野生天麻2一正常马铃薯3，4-转基因马铃薯5一标记
1-wildG．elata2-normalS．tuberosum
3，4-transgenicS．tuberosum5-Marker
图4 SDSPAGE电泳图谱
Fig．4ElectrophoretogramofSDS--PAGE
2．5药用成分分析：天麻素(gastrodin)是野生天麻
的有效药用成分，通过薄层色谱(TLC)法分析转基
因马铃薯、正常马铃薯、野生天麻3者中天麻素，结
果可见：转基因马铃薯中可检测到天麻素，见图5。
、1～3一转基因马铃薯4一天麻素对照品
5一野生天麻6-正常马铃薯
1--3一transgenicS．tuberosum4一gastrodinreferencesubstance
5一wildG．elata6-normalS．tuberosum
图5薄层色谱图谱
Fig．5TLCchromatogram
1～3一转基因马铃薯4一正常马铃薯5一野生天麻6一标记
3 讨论
一
5一。ildG．。z。抛6一M。，k。， 本实验从转化的马铃薯中检测到3株含有
图3 PCR扩增结果 GAFP基因，其转化效率为1．5％，比用农杆菌介导
Fig．3RusultsofPCRamplification 的转化法效率要低，可能原因是：野生天麻的总
乐4转基因马铃薯中GAFP基因表达分析：GAFPDNA导人马铃薯后其基因与受体马铃薯细胞整合
是一种相对分子质量为14kd的蛋白质，通过PCR与转化完全是随机的，缺乏控制机制，因而实现的目
扩增的方法从粗筛的21株马铃薯中细筛得到3株 的性较差，以致转化效率低。尽管采用此法转化效率
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月·1065·
不高，但仍表明：采用浸苗法将野生天麻总DNA导
入马铃薯中的方法是可行的。
GAFP其相对分子质量为14kd，它能强烈抑
制腐生性真菌生长，从而阻止密环菌侵染顶生球茎，
使其得以正常生长。马铃薯中不存在此蛋白，通过
SDS--PAGE发现在转化的植株中有GAFP，说明
GAFP基因已整合到马铃薯基因组中，并且通过基
因表达调控而翻译GAFPL1j。
野生天麻的有效成分为天麻素即对羟基苯一口一D一
葡萄糖吡喃糖苷，它是一种小分子有机物质，其甲醇
液在220nm有最大吸收峰。本实验通过紫外扫描法
从200株转化的马铃薯中检测到21株的扫描图谱与
正常对照组有明显差异，说明天麻的基因在马铃薯中
已经表达并且导致马铃薯发生变异。变异的发生可能
通过受、供体基因同源重组这一整合途径或通过供体
DNA片断插入到受体基因组中[1⋯。
笔者通过薄层色谱法在3株转化的植株中检测
到天麻素，而天麻素不属于蛋白质，说明天麻的基因
在马铃薯中已经表达并且通过一系列复杂的体内代
谢产生了天麻的有效药用成分天麻素。但转基因马
铃薯中含天麻素很少(样品浓缩200倍)，如何提高
转基因马铃薯中野生天麻的有效药用成分——天麻
素的量有待于进一步研究。
References：
[1]ZhuSW，XuZ，ZhuXC，eta1．Apreliminarystudonus—
ingtheseedlingsoakingmethodt inducethegeneticcharac—
tersinflue—curedtobacco[J]．JNortheastAgricUniv(东北
农业大学学报)，1999，30(2)：190—194．
[2]HuangJ，GeX，SunM．ModifiedCTABprotocolusinga
silicam trixforisolationofplantgenomicDNA[J1．Biotech—
niques，2000，28(3)：432—434．
I-3]LiXB，FengB，ZhangZH，eta1．IsolationoftotalDNA
fromplantChinesemedicinalmaterials[J]．Chin77口dit
HerbDrugs(中草药)，2002，33(7)：652—654．
[4]DingL，HuangY．DetectinggastrodinbyTLc—uVinGas—
trodiaelatapatch[J]．ChinTrad tPatMed(中成药)，
1996，18(1)：48—49．
[5]ZhouJ，JiaE，LiuTF．Themethodsfgastrodin
7
Sdetermi—
nationinGastrodiaelataEJ]．PracJMedPharm(实用医药
杂志)，2002，19(9)：713—714．
E63HuZ，HuangQ，LiuX，eta1．Primaryst uctureandcDNA
cloningoftheantifungalproteinGAFP一1fromGastrodia
elata口]．ActaBotYunnan(云南植物研究)，1999，21(2)：
131—138．
[7]WangXC，WillsonAD，GuyD．Molecularc oningof
GAFP一1anantifungalproteinfromGastrodiadata[J]．Acta
BotSin(植物学报)，1999，41(10)：1041一1045．
[8]WangYQ，LiWB，LanHM，eta1．N—terminalsequence
andcDNAsloningofGastrodiaantifungalprotein(GAFP)
fromGastrodia(G．elataBI．f．elata)口]．HighTechnol
Lett(高技术通讯)，2000，10(1)：10一14．
[9]DingGH，ChiCY，XuQJ，eta1．Electrophoreticanalysis
ofproteinsinD1generationafterxogenousDNAintroduced
oftobacco[J]．PlantPhysiol(gi物生理学通讯)，2003，39
(2)：153—155．
[10]PotrykusI，PaszkowskiJ，SaulMW，eta1．Molecularand
generalgeneticsofahybridforeignge eintroducedintotO—
baccobydirectgenetransferEJ]．MolGenGenet，1985，199
(2)：169-177．
雷公藤属3种植物不同群体和个体中雷公藤甲素的研究
黄文华1，郭宝林H，斯金平2，阮秀春2，余竞光1，孙兰1
(1．中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所，北京100094；
2．浙江省丽水市林业科学研究所，浙江丽水 323000)
摘要：目的测定雷公藤属3种植物(雷公藤、昆明山海棠和黑蔓)不同群体和个体中雷公藤甲素(triptolide)，为
评价雷公藤药材质量和寻找雷公藤的优质种质奠定基础。方法建立雷公藤甲素HPLC测定方法，并测定了全国
主要分布区25个群体91个个体的木质部和韧皮部中的雷公藤甲素。结果黑蔓的雷公藤甲素质量分数很低；雷
公藤和昆明山海棠种间的雷公藤甲素差异不明显，个体质量分数木质部为1．0×10“～5．83×10_5；韧皮部为
2．3×10“～1．030×10～。结论雷公藤和昆明山海棠不同个体雷公藤甲素质量分数最高值与最低值相差约50
倍，不同居群雷公藤甲素质量分数最高值与最低值相差10多倍，不同来源的药材质量差异极大，严重影响用药的
安全性；雷公藤甲素质量分数高的居群位于浙江西南部和中部、湖南新宁、贵州雷山和安徽黄山；湖南新宁、贵州雷
山和浙江江山居群中有雷公藤甲素质量分数极高的个体，值得进一步研究，以寻找质量分数高的优良单株。
关键词：雷公藤属；雷公藤；昆明山海棠；黑蔓；雷公藤甲素；高效液相色谱法
中图分类号：R282．6 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)07—1065—04
收稿日期：2004—11—23
基金项目：浙江省林业重大科研项目“木本药材高效栽培技术及有效成分提取工艺的研究”资助项目(2002A01)
作者简介：黄文华(1969一)，女，新疆石河子市人，助理研究员，硕士，中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所工作，从事天然
药物和药用植物资源的科研工作。Tel：(010)·62899728Fax：(OLO)62899717E—mail：hwhzh69@sohu．com
*通讯作者郭宝林Tel：(010)62899732E—mail：guobaolin010@yahoo．eom．cn
万方数据
利用浸苗法将野生天麻总DNA导入马铃薯的研究
作者： 葛正龙， 周鹤峰， 邵敏， GE Zheng-long， ZHOU He-feng， SHAO Min
作者单位： 葛正龙,邵敏,GE Zheng-long,SHAO Min(遵义医学院,生物化学教研室,贵州,遵义,563003)
， 周鹤峰,ZHOU He-feng(遵义医学院珠海校区,生物工程系,广东,珠海,519041)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(7)

参考文献(10条)
1.Zhu S W;Xu Z;Zhu X C A preliminary study on using the seedling soaking method to induce the
genetic characters in flue-cured tobacco[期刊论文]-东北农业大学学报 1999(02)
2.Huang J;Ge X;Sun M Modified CTAB protocol using a silica matrix for isolation of plant genomic DNA
2000(03)
3.Li X B;Feng B;Zhang Z H Isolation of total DNA from plant Chinese medicinal materials[期刊论文]-中
草药 2002(07)
4.Ding L;Huang Y Detecting gastrodin by TLC-UV in Gastrodia elata patch 1996(01)
5.Zhou J;Jia E;Liu T F The methods of gastrodins determination in Gastrodia elata[期刊论文]-实用医
药杂志 2002(09)
6.Hu Z;Huang Q;Liu X Primary structure and cDNA cloning of the antifungal protein GAFP-1 from
Gastrodia elata 1999(02)
7.Wang X C;Willson A D;Guy D Molecular cloning of GAFP-1 an antifungal protein from Gastrodia elata
1999(10)
8.Wang Y Q;Li W B;Lan H M N-terminal sequence and cDNA sloning of Gastrodia antifungal protein
(GAFP)from Gastrodia (G. elata Bl. f. elata)[期刊论文]-高技术通讯 2000(01)
9.Ding G H;Chi C Y;Xu Q J Electrophoretic analysis of proteins in D1 generation after exogenous DNA
introduced of tobacco[期刊论文]-植物生理学通讯 2003(02)
10.Potrykus Ⅰ;Paszkowski J;Saul M W Molecular and general genetics of a hybrid foreign gene
introduced into tobacco by direct gene transfer 1985(02)

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3. 周鹤峰.邵敏.葛正龙.ZHOU He-feng.SHAO Min.GE Zheng-long 利用浸苗法将野生天麻总DNA导入马铃薯的初步
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10. 葛正龙.GE Zheng-long Candida cloacae源脂肪酸醇氧化酶基因的植物表达质粒构建及农杆菌转化研究[期刊
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