全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第2期2006年2月·211·
复方丹参的体外抗氧化活性研究
向志军1，赵广荣1，元英进1，郭治昕2
(1．天津大学化工学院制药工程系，天津300072；2．天津天士力集团研究院，天津300402)
摘要：目的探讨复方丹参的体外抗氧化活性。方法采用DPPH自由基、超氧阴离子、羟基自由基、鳌合亚铁离
子和还原力、过氧化氢的反应体系，检测了复方丹参的体外抗氧化活性，并与维生素C进行比较。结果复方丹参
和维生素C消除DPPH自由基的ECso分别是41．0pg／mL和8．2pg／mL；复方丹参消除超氧阴离子自由基的EC。。
是1．39mg／mL；复方丹参和维生素C抑制羟基自由基产生的EC；。分别是1．73mg／mL和0．58mg／mL；在实验体
系中，未检测到复方丹参螯合亚铁离子的能力；复方丹参和维生素C的还原能力的EC。。分别是0．42mg／mL和
0．08mg／mL。在实验最高质量浓度100pg／mL时，复方丹参和维生素C对过氧化氢的清除率分别为36％和94％。
结论 复方丹参具有较强还原力，能清除DPPH和超氧阴离子自由基的作用，并抑制羟基自由基的产生。复方丹参
的多方面抗氧化活性可能是在治疗心血管疾病效果显著的原因之一。
关键词：复方丹参；抗氧化作用；还原力；清除自由基
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2006)02—0211一03
InvitroantioxidantactivityofCompoundDa shen
XIANGZhi—junl，ZHAOGuang—ron91，YUANYing—jinl，GUOZhi—xin2
(1．DepartmentofPharmaceuticalEngineering，SchoolofChemicalEngineeringandTechnology，TianjinUnivers ty，
Tianjin300072，China；2．ResearchInstituteofTianjinTaslyGroupCo．，Ltd．，Tianjin300402，China)
Keywords：CompoundDanshen；antioxidation；reducingactivity；s avengingfreradicals
活性氧的积累是心血管疾病如心绞痛、心肌梗
死和猝死的危险因子，而流行病学研究表明摄人适
量的抗氧化剂能够降低心血管病的发病概率[1]。抗
氧化剂能直接清除活性氧或抑制更强活性的活性氧
的生成，从而防止活性氧对血管细胞的损伤。因此从
抗氧化的角度研究具有治疗心血管疾病的中药药理
作用，对进一步阐明中药的作用机制具有重要意义。
复方丹参滴丸是对心血管疾病具有显著疗效的中成
药，模型动物的缺血再灌注等氧化损伤研究表明，复
方丹参对缺氧一复氧损伤具有一定保护作用[z]，但还
未见其直接化学抗氧化活性的研究报道。本实验从
消除DPPH自由基、消除超氧阴离子、消除过氧化
氢、抑制羟基自由基的产生、鳌合亚铁离子和还原力
6个方面比较研究复方丹参的抗氧化效果，试图从
体外抗氧化方面揭示复方丹参滴丸在治疗心脑血管
疾病方面的可能机制。
1实验材料
1．1 实验药物：复方丹参(无辅料的复方丹参滴丸)
由天津天士力集团研究院提供。用ddH：O分别精确
配制复方丹参的系列质量浓度(5．0、10．0、20．0、
40．0、60．0、80．0、100．0ptg／mL和1．0、2．0、3．0、
4．0、5．0mg／mL)，冰箱保存，供实验使用。
1．2实验器材：Tu一1900紫外分光光度计。
1．3实验试剂：还原性辅酶I(NADH)、酚嗪二甲
基硫酸盐(PMS)、四氮唑蓝(NBT)，1，1一二苯基一2一
苦基苯基(DPPH)、菲洛嗪(Ferrozine)、六氰合铁
(Ⅱ)酸钾[Potassiumhexacyanoferrate(I)]、菲咯
啉均为Sigma产品。无水乙醇、氯化亚铁(FeCl：·
4H20)，三氯乙酸(TCA)、氯化铁(FeCl。·6H20)、
过氧化氢(H。O。，3l％)、钼酸铵、碘化钾(KI)、硫代
硫酸钠(NaS。O。)、淀粉为分析纯试剂，购于天津化
学试剂厂。
2方法与结果
2．1 药物对DPPH自由基的消除作用：参考
Amarowicz等[31的方法检测药物对DPPH的清除
作用。1。5mL0．25mmol／LDPPH的乙醇溶液与
不同质量浓度的复方丹参等体积混合均匀，静置室
温反应30min，517nm处测定吸光度值(A，)值；以
ddH：O代替药品，517nm处测定A。；药品溶液(1．5
mL药品溶液+1．5mL50％乙醇)在517nm处测
定A。；50％的乙醇水溶液调零。按公式清除率=
[1一(A，一A。)／A。]×100％计算清除率，并计算药
收稿日期：2005—04—29
基金项目：国家自然科学基金资助项且(30371712){天津市医药科技重点攻关项目(023183011)
万方数据
·212· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第2期2006年2月
物清除DPPH的半数有效浓度值EC。。。用维生素C
为正对照，进行平行实验。复方丹参对DPPH自由
基的清除能力见图1。复方丹参对DPPH自由基具
有很强的清除作用，且呈浓度依赖性。相对于维生素
C(EC。。为8．2／‘‘g／mL)，复方丹参的EC。。为41．0
弘g／mL，约是维生素C的5倍。
0 5 10 列40 80
复方丹参／(ug-rnL。)
图1 复方丹参对DPPH自由基的消除活性
Fig．1ScavengingactivityofCompoundDa shen
againstDPPHfreeradicals
2．2药物对超氧阴离子的清除作用：参考Liu等的
方法[4]检测药物清除超氧阴离子的能力。依次加入
120p．mol／LPMS、936pmol／LNADH、300p-mol／L
NTB溶液(用0．1mol／L的pH7．4的磷酸盐缓冲
溶液配制)各0．75mL，建立反应体系，然后加入不
同质量浓度的药物0．3mL，混匀，室温静置反应5
rain。在560nm处测定A1；以ddH20代替药品，560
nm处测定A。；以磷酸盐缓冲溶液代替PMS溶液，
在560nm处测定A。；ddH。O调零。对超氧阴离子清
除率和EC。。的计算方法同前。复方丹参对超氧阴离
子表现出具有较强的清除作用，在1．0、2．0、3．0、
4．0、5．0mg／mL时，清除率分别为45．53％、
59。32％、71．71％、76．51％、84．21％。在供试质量浓
度范围内，随药物质量浓度增加，清除率趋于最大，
其EC50为1．39mg／mL。
2．3 药物抑制羟基自由基产生的能力：参考
Fenton反应体系‘51检测药物抑制羟基自由基产生
的能力。用60pL1．0mmol／LFeCl2，90pL1
mmol／L菲咯啉，2400肛L磷酸盐缓冲溶液(pH
7．8)，150弘L．17mol／LH20：组成反应体系，加入
不同质量浓度的药物，混合后室温反应5min。在
560nm测定A。，以ddH20代替药品，在560nm处
测定A。；以磷酸盐缓冲溶液代替菲咯啉溶液，在560
nm处测定A：，ddH：O调零。药物对羟自由产生的清
除率及其EC。。计算方法同前，见图2。在o～3rag／
mL，复方丹参抑制羟基自由基的能力呈较好的浓度
依赖关系。当质量浓度为5．0mg／mL时，抑制羟基
100
80
逞60
墼
耄40
20
O
0 0．2 05 l 2 3 4 5
复方丹参／(mg·|l】L。1)
图2复方丹参对羟自由基产生的抑制率
Fig．2InhibitingrateofCompoundDa shen
onproductionofhydroxidefreeradicals
自由基产生能力达83．8％。相当于维生素C(EC。。
为0．58mg／mL)，复方丹参对羟自由基的EC。。为
1．73mg／mL，约是维生素C的3倍。
2．4药物对亚铁离子的螯合作用：测定药物螯合亚铁
离子的能力参考Dinis等的方法[6]。在1～5mg／mL，
复方丹参基本上没有表现出螫合亚铁离子的能力。
2．5药物的还原力的比较：药物的还原力检测参考
Oyaizu方法[7]。依次加入0．75mL0 2mol／L磷酸
盐缓冲溶液(pH6．6)、0．75mL1％六氰合铁(Ⅱ)
酸钾和0．75mL不同质量浓度药品，混匀，50℃水
浴20rain。冰浴快速冷却后，加入0．75mL10％三
氯乙酸，于4℃下离心(3000r／min)10rain。取上
清1．5mE加入ddH201．5mL及0．1％FeCl3，混
匀后，室温静置反应10rain。在700nm处测定A。；
以ddH20代替药物，在700nm处测A。；ddH：O调
零。以维生素C质量浓度1．0mg／mL下的A为基
准，按相对还原力=(A。一A。)／(A—A。)×100％计
算相对还原力，并计算药物还原力的EC。。，见图3。
复方丹参还原力较强，EC。。为0．42mg／mL，约是维
生素C(ECso为0．08mg／mL)的5倍。
0 0．05 0．1 0．2 0．4 0．6 08 l
复方丹参／(mg·mL。)
图3复方丹参的相对还原力
Fig．3ReductiveactivityofCompoundDanshen
2．6药物对过氧化氢的消除能力：过氧化氢是一种
强氧化剂，具有良好的扩散性，容易透过细胞膜，并
引起氧化损伤。采用置换滴定法检测过氧化氢浓度。
∞
∞
∞
蚰
加
O
莲斟餐照
∞
∞
∞
∞
∞
O
。￡R隧段茛罂
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第2期2006年2月·213·
分别取0．1mmol／LH：O。1．0mL和不同质量浓度
的药物1．0mL混合，加入2滴3％钼酸铵，2mol／L
H2S0410mL和1．8mol／LKI7．0mL，用0．005
mol／LNaS。O。开始滴定，待体系变黄，加1～2mL
淀粉溶液，滴定到无色即为终点。滴定样品的体积为
y。，滴定过氧化氢所用体积为K，按清除率=(yo—
V。)／v。×100％计算过氧化氢的清除率，见图4。复方
丹参显示出一定的过氧化氢的消除作用，在最高质量
浓度100t-g／mL_1时，对过氧化氢的清除率为36％。
而维生素C在此质量浓度下，清除率已达94％。
100
80
摹60、
褥
鬣
瘿40
20
化氢等活性氧。还原力反映了一种物质作为电子供
体的能力，药物还原力和捕获过氧化氢能力的大小
在一定程度上反映了其预防性抗氧化功能的强弱。
本实验的结果表明，复方丹参具有较强的还原力，其
还原力与较强地抑制羟自由基产生有关，也与一定
的消除过氧化氢有关，但与螯合金属铁离子无关。此
外，复方丹参具有消除包括DPPH自由基和超氧阴
离子等活性氧的能力。本实验结果直接证明了复方
丹参在多方面具有较强的抗氧化活性，这可能是复
方丹参滴丸在治疗活性氧诱发的心脑血管疾病方面
效果显著的原因之一。
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万方数据
复方丹参的体外抗氧化活性研究
作者： 向志军， 赵广荣， 元英进， 郭治昕， XIANG Zhi-jun， ZHAO Guang-rong， YUAN Ying-
jin， GUO Zhi-xin
作者单位： 向志军,赵广荣,元英进,XIANG Zhi-jun,ZHAO Guang-rong,YUAN Ying-jin(天津大学化工学
院,制药工程系,天津,300072)， 郭治昕,GUO Zhi-xin(天津天士力集团研究院,天津
,300402)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(2)
被引用次数： 22次

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