全 文 ：·174· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月
灵芝多糖肽中单糖的组成
王赛贞1，林树钱1，林志彬1’2，陈颖1
(1．福州绿谷生物药业技术研究所，福建福州 350002；2．北京大学医学院药理系，北京100083)
摘 要：目的 从灵芝Ganodermalucidum子实体中分离得到的GL—PPT：、GL—PPT。和GL—PPT。3种多糖肽，对
其单糖组成和摩尔比进行比较。方法多糖肽经三氟乙酸水解后，用1一苯基一3一甲基～5一吡啶啉酮(PMP)衍生化，在
高效液相245am紫外检测，使用KH：PO。(pH5．o)一乙腈(83．5：16．5)等度洗脱，9种单糖的色谱峰分离清晰，大
多呈基线分离。结果经实验确定GL—PPT：、GL—PPT。和GL—PPT。均由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿
拉伯糖、木糖、岩藻糖和葡萄糖醛酸等9种单糖组成。结论 灵芝子实体活性成分多糖肽中的核糖系属首次报道。
关键词：灵芝；灵芝多糖肽；单糖
中图分类号：R284．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)02一0174—03
MonosaccharidecompositionofGanodermalucidumpolysaccharidepeptides
WANGSai—zhenl，LINShu—qianl，LINZhi—binl～，CHENYin91
(1．FuzhouGreenValleyInstituteofBiopharmaceuticalT chnology，Fuzhou350002，China；2．Department
ofPharmacology，SchoolofBasicMedicalScience，PekingUniversity，Beijing100083，China)
Abstract：ObjectiveTocomparethemonosaccharidecompositionandm larratioofGL—PPT2，GL—
PPT3，andGL—PPT4，whicharethreepolysaccharidepeptidesisolatedfromthefruitbodyofGanoderma
lucidum．MethodsThep01ysaccharidepeptidesw rehydrolyzedbytriflouroaceticacid，thenderivatized
bytrichloro—aldehyde一1一pheny一3一methyl一5一pyrazolone(PMP)，anddeterminedbyHPLCmethodwiththe
245nmdetectionwavelength．Gradientelutionw ththesolutionofKH2P04(pH5．O)～acetonitrile(83．5：
16．5)resultedinbaselineseparationofni emonosaccharides，ofwhicht echromatographicpe kswere
veryclear．ResultsGL—PPT2，GL—PPT3，andGL—PPT4comprisetheninemonosaccharidesofmanno e，
ribose，rhamnose，glucose，galactose，arabinose，xylose，galactose，andglucuronicacid．C nclusion
TheriboseinpolysaccharidepeptidesofG．1ucidumisfirstreported．
Keywords：Ganodermalucidum(Leyss．exFr．)Karst．；Ganodermalucidupolysaccharidepep—
tides；monosaccharides
灵芝在我国已有千年的药用历史，现代药理研
究表明，灵芝具有抗肿瘤、免疫调节、降血糖、抗衰老
等广泛药理活性[1]。在探讨灵芝抗肿瘤和免疫调节
作用的同时，发现灵芝多糖肽GL—PPT：、GL—PPT。
和GL—PPT。是其有效成分[2]。本研究报道这3个组
分中单糖的组成。
1仪器与试剂
Waters2695型高效液相色谱仪；Wanters2487
紫外检测器，Waters色谱工作站。衍生化试剂：1一苯
基一3一甲基～5一吡啶啉酮(PMP，Sigma公司)，三氟乙
酸(C级，上海化学试剂公司)。单糖对照品：葡萄糖
(Glu，Service公司)、甘露糖(Man，Dr．
Ehrentorfer)、半乳糖(Gal，GioSharp公司)、鼠李糖
(Rham，BioSharp公司)、阿拉伯糖(Gal，BioSharp
公司)、核糖(Rib，国药集团化学试剂公司)、木糖
(Xyl，上海化学试剂二厂产品)、岩藻糖(Fuc，Fluka
Biochemika公司)、葡萄糖醛酸(GlcuA，国药集团化
学试剂有限公司)；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分
析纯。
2 实验方法[3~73
2．1 提取：经乙醇回流提取过的破碎灵芝，用水加
热提取并浓缩至1g／mL，醇沉，离心收集沉淀物，即
为粗多糖，其得率为药材的2．3％。将粗多糖溶于
水，透析48h，浓缩袋内液，醇沉多糖，即得GL—PP，
收稿日期：2006—0428
基金项目：上海绿谷集团有限公司科研基金资助项目
作者简介：王赛贞(1946一)，女，福建人，高级工程师，主要从事药用真菌化学成分的研究和灵芝产品质量控制工作。
Email：WSZl010@sohu．corn
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月·175·
得率为0．72％。
2．2分离纯化：1％GL—PP水溶液，进行乙醇分级
沉淀。收集33％乙醇沉淀物，即得GL—PP一1多糖肽。
用DEAE—Cellulose和Bio—GelP一10柱色谱，先后用
pH5．6，0．2mol／L醋酸缓冲液一NaCl(0．1、0．3、
0．5、1．0mol／L)依次洗脱，收集4个组分的洗脱液。
经透析醇沉，即得GL—PPT，～GL—PPT。。由于GL—
PPT，为多糖，将另作报道。
2．3纯度鉴定：用北京龙智达公司提供GPC凝胶
色谱软件(药典版)，TSK—gelG3000SWXI。柱，面
积归一化法计算，纯度在87％～95％。
2．4 色谱条件：色谱柱Noua—PakC18(150mm×
3．9Film，4tLm)；流动相：0．05mol／LKH2P04(pH
5．O)一乙腈(83．5：16．5)，检测波长：245nm；体积流
量：1．0mL／min；进样体积：10弘I。，柱温：45℃。
2。5 多糖的水解：取GL—PPT：、GL—PPT。和GL—
PPT。各10mg于安瓿瓶中，分别加1mL水溶解和
1mL4mol／L三氟乙酸，封管后于110℃烘箱中水
解3h，得水解液。
2．6供试品的衍生化标记：各取上述50pL水解液
置试管中，真空55℃抽于，向干燥试管中依次加入
0．5mol／LPMP甲醇液20弘L和0．3mol／I。NaOH
20肛L，混匀后置70℃水浴中加热反应30min，取
出，室温放置10min；再加入25肛L盐酸(0．3tool／
L)中和，混匀后用0．5mL乙酸异戊酯萃取，涡旋3
min，离心15min，弃去有机层，再萃取1次得到下
层，加水150肛L混匀并离心15min。溶液过0．45
／．tm微孔滤膜，取滤液10弘L，用于HPLC分析。与甘
露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、木
糖、岩藻糖和葡萄糖醛酸9种标准品衍生化色谱图
比较确定单糖的种类。
3 结果
3．1 标准单糖PMP衍生物的HPLC分离：9种标
准单糖经PMP衍生化后，进行等度洗脱，仪器运行
35min。结果各单糖的色谱峰分离清晰，除阿拉伯
糖、木糖外，其余基本成基线分离(图1)。
3．2 GL—PPT。、GL—PPT。和GL—PPT。多糖肽的单
糖组成分析：GL—PPT：、GL—PPT。和GL—PPT。的
PMP衍生化物，用上述色谱条件检测，对照标准糖
的色谱峰表明，3种多糖肽中单糖均由葡萄糖、核
糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、甘露糖、半乳糖、阿拉伯
糖、木糖和岩藻糖组成。其摩尔比为GL—PPT。：
Man—Rib—Rha—GlcuA—Gtu—Gal—Ara—Xyl—Fuc一22
0．64：0．092：0．44：26：1：0．11：0．36：0．24；
0 5 10 15 20 25 30
t／mln
1一甘露糖2一核糖3一鼠李糖4一葡萄糖醛酸5一葡萄糖
6一半乳糖7一阿拉伯糖8一木糖9一岩藻糖(下图同)
1-mannose2-ribose3-rhamnose4-glucuronicacid
5-glucose6-galactose7-arabinose8-xylose
9-fueose(Followingfiguresareame)
图1单糖对照品PMP衍生物的HPLC色谱图
Fig．1HPLCChromatogramofPMPderivatives
ofmonosaccharidereferencesubstances
GL—PPT3：Man—Rib—Rha—GlcuA—Glu—Gal—Ara—Xyl—
FUC一2．62：0．64：0．088：0．33：28．57：1：
O．95：0．43：0．31；GL～PPT。：Man—Rib—Rha—
GlcuA—Glu—Gal—Ara—Xyl—Fue一3．1：0．8：0．26。
o．15：20：1：0．12：0．32：0．34(色谱图见图2～
4)。该结果显示，3种多糖肽具有类似的单糖组成，
尤以葡萄糖量为最高，达78％～85％，其次为甘露
糖7％～12％，两种糖的量高达90％～92％，其余7
种糖仅含8％～10％。因此，灵芝多糖肽中单糖系以
葡萄糖为主的杂多糖。
4讨论
GL—PPT2、GL—PPT3和GL—PPT。是从GL—PP
址
O
图2 GL—PPT：酸水解样品PMP衍生物的HPLC色谱图
Fig．2HPLCChromatogramofPMPderivatives
ofacidhydrolysatesofGL-PPT2
55
78 9
5 10 15 20 25
t／mln
图3 GL—PPT，酸水解样品PMP衍生物的HPLC色谱图
Fig．3HPLCChromatogramofPMPderivatives
ofacidhydrolysatesofGL—PPTs
一加
{}
：3|】-如三一||_筋
堡
}；}，湎器T砷
m=：挝可～
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3帝一建一i；坚m<||}5
万方数据
·176· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月
{l
l{
；j
H
{1
il
4J喱78 9Ⅲ、——f-F～一一—r4‘1一一⋯一
0 5 10 15 20 25 30 35
t／min
图4 GL—PPT。酸水解样品PMP衍生物的HPLC色谱图
Fig．4HPLCChromatogramofPMPderivatives
ofacidhydrolysatesofGL—PPT4
中提取分离出的多糖肽，系灵芝的活性成分之一。用
柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成
结果表明，3种多糖肽均由9种单糖组成。经文献查
新对比，灵芝多糖肽中单糖组成含有核糖为首次报
道。这可能由于灵芝子实体表面附有灵芝孢子，在
提取分离过程中，也带入孢子多糖肽所致。
从灵芝子实体中分离出灵芝活性成分，GL—
PPT：、GL—PPT。和GL—PPT。的水解物与PMP衍
生化，所得单糖衍生物具有很强的紫外吸收。采用高
压液相245Dm紫外检测，使用等度洗脱方法，实现
较好的分离并具有良好的峰形，可以一次性完成由
杂单糖组成多糖的分析工作。
Referenees：
[1]LinZB．ModernStudiesonGanoderma(灵芝的现代研究)
[M]．Beijing：PekingUnionMedicalCo lege，2001．
E2]CaoQz，LinzB．Antitumorandanti—angiogenicactivityof
GanodermalucidumpolysaccharidespeptideEJ3．ActaPh r—
macolSin(中国药理学报)，2004，25(6)：833—838．
E33LinSQ，WangSz，LinzB，eta1．Isolationnddentifica—
tionofactivecomponentsofGanodermalucidumc ltivated
withgrassandwoodlogI．Extraction，purificationand
characterizationofglyc peptideEJ]．ChinTraditHerbDrugs
(中草药)，2003，34(10)：872—874．
[43YusL．HPLCMethodandApplication(高效液相色谱方法
及应用)EM3．Beijing：ChemicalIndustryPress，2000．
1-s]ZhangWJ．BiochemicalTe hnologyofCompoundPolysac—
charide(复合多糖生化技术)[M]．Shanghai：ShanghaiSci—
entitleandTechnicalPub ishers．1987．
[6]WeiYA，FangJN．Determinationofhom geneityand
molecularweightofpolysaccharidesbyHPGPCIJ]．Acta
PharmSin(药学学报)，1989，24(7)：532—536．
[72MaDY，ChenJ，LiP，eta1．Analysisofmonosaccharide
compositionsinp lysaccharidesbypre-columnderivatization
highperformanceliquidhromatography口]．ChinJ Anal
Chem(分析化学)，2002，30：702—705．
岷山红三叶草化学成分的研究
陈学福，隽惠玲，史高峰，王金波
(兰州理工大学石油化工学院，甘肃兰州 730050)
红三叶TrifoliumpratenseL．又名红车轴、红
花苜蓿、红荷兰翘摇等，为豆科三叶草属多年生草本
植物，原产于小亚细亚与东南欧，广泛分布于温带及
亚热带地区，我国也有大面积种植，主要分布于甘
肃、湖北、重庆等地。民间用其花序煎剂治感冒和肺
结核、祛痰、利尿和消炎，外敷治脓肿、烧伤和眼疾
等，并有应用花、种子、植株及根部制膏、浸膏、糊剂、
煎剂和泡茶饮用，来治疗肠胃疾病[1]。近期研究发
现，红三叶还具有抗癌，抗氧化，调节人体激素平衡，
改善骨质疏松、妇女更年期综合征，清除自由基等作
用E2～43。鉴于其独特的药理功效及广阔的应用前景，
笔者对岷山红三叶草的化学成分进行了系统的分析
和研究，从中分离得到8个化合物，运用现代波谱分
析技术，确定其结构分别为：正二十四烷(tetra—
cosane，I)、十四烷酸(myristicacid，Ⅱ)、p谷甾醇
(8一sitosterol，Ⅲ)、胡萝卜苷(daucosterol，IV)、芒柄
花素(formononetin，V)、鹰嘴豆芽素A(biochanin
A，Ⅵ)、芒柄花苷(ononin，Ⅶ)、D一3～甲氧基一手一肌醇
(D一3一O—methyl—chiro—inositol，Ⅶ)。其中化合物
I～Ⅳ和Ⅷ为首次从该植物中分离得到。
1仪器和材料
x一4型显微熔点测定仪，温度计未校正；
Nexus670FT—IR型傅里叶变换红外光谱仪；LCQ
DecaXPplus型质谱仪(ESI源)；VarianINOVA一
400型核磁共振波谱仪，TMS为内标。色谱用硅胶
(青岛海洋化工厂，160～200目，200～300目)，薄
层色谱硅胶GF。。。(青岛海洋化工厂)。岷山红三叶草
由甘肃省岷县牧草研究所提供。
收稿日期：2006—06—18
作者简介：史高峰(1963一)，男，博士，教授，现主要从事天然药物研究与开发、天然有机合成、生物化工等方面工作。
Tel：13109391608E—mail：shigaofeng@lut．cn
万方数据
灵芝多糖肽中单糖的组成
作者： 王赛贞， 林树钱， 林志彬， 陈颖， WANG Sai-zhen， LIN Shu-qian， LIN Zhi-bin，
CHEN Ying
作者单位： 王赛贞,林树钱,陈颖,WANG Sai-zhen,LIN Shu-qian,CHEN Ying(福州绿谷生物药业技术研究
所,福建,福州,350002)， 林志彬,LIN Zhi-bin(福州绿谷生物药业技术研究所,福建,福州
,350002;北京大学医学院,药理系,北京,100083)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(2)
被引用次数： 6次
参考文献(7条)
1.Lin Z B 灵芝的现代研究 2001
2.Cao Q Z;Lin Z B Antitumor and anti-angiogenic activity of Ganoderma lucidum polysaccharides
peptide[外文期刊] 2004(06)
3.Lin S Q;Wang S Z;Lin Z B Isolation and identification of active components of Ganoderma lucidum
cultivated with grass and wood log Ⅰ.Extraction,purification and characterization of glycopeptide
[期刊论文]-中草药 2003(10)
4.Yu S L 高效液相色谱方法及应用 2000
5.Zhang W J 复合多糖生化技术 1987
6.Wei Y A;Fang J N Determination of homogeneity and molecular weight of polysaccharides by HPGPC
1989(07)
7.Ma D Y;Chen J;Li P Analysis of monosaccharide compositions in polysaccharides by pre-column
derivatization high performance liquid chromatography[期刊论文]-分析化学 2002(6)
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2. 林树钱.王赛贞.林志彬.林跃鑫 草栽与段木栽培的灵芝活性成分的分离与鉴定 I.多糖肽成分的提取、纯化及性
质[期刊论文]-中草药2003,34(10)
3. 林树钱.王赛贞.林志彬.林树光 草栽灵芝多糖肽提取条件的研究[期刊论文]-浙江中医杂志2007,42(2)
4. 林树钱.王赛贞.林志彬.林树光.LIN Shuqian.WANG Saizhen.LIN Zhibin.LIN Shuguang 灵芝活性多糖肽GL-
LPP3的化学组成分析[期刊论文]-食用菌学报2007,14(1)
5. 林树钱.王赛贞.林志彬.林树光 草栽灵芝多糖肽提取条件研究[期刊论文]-食用菌学报2003,10(1)
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1.王赛贞.林冬梅.林占熺.林志彬.林树钱.罗虹建 RP-HPLC和UV-VIS法测定灵芝不同收获期的多糖肽和灵芝酸[期刊
论文]-药物评价研究 2012(3)
2.逯南南.石丽花.刘辉.刘志河.耿越 马尾松花粉多糖中单糖组分的HPLC分析[期刊论文]-中国野生植物资源
2008(2)
3.宋刚.干信 共生发酵魔芋飞粉制备甘露聚糖肽及其性能检测[期刊论文]-化学与生物工程 2008(5)
4.杨占涛.刘超.李月.黄平.徐永航 灵芝多糖的研究现状[期刊论文]-安徽农业科学 2008(20)
5.宋莉.师俊玲 灵芝多糖结构分析方法研究进展[期刊论文]-安徽农业科学 2012(10)
6.陈克克 地瓜儿多糖的单糖组成实验中两种流动相的比较研究[期刊论文]-陕西农业科学 2009(5)
本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200702005.aspx