全 文 ：阳性, 经查阅 Saldt ler 光谱,该化合物 IR、ESI-MS、
1
H-NMR和13C-NMR数据与熊果酸的数据均一致。
化合物Ⅳ: 白色无定形粉末(甲醇) , mp 301～
302 ℃; Liebermann-Burchard 反应阳性, M olish 试
验显紫红色; 其 IR、ESI-MS、1H-NMR和13C-NMR
数据与文献报道[ 5]的 -胡萝卜苷数据一致。
化合物Ⅴ:白色鳞片状结晶(石油醚) , mp 59～
61 ℃, 热溶于石油醚、环己烷; EI-M S m / z : 408、
351、309、267、211、169、113、57( 100)、43。呈现一系
列相差 CH2的碎片峰,显示典型饱和长链脂肪烃的
特征; 其 IR 数据、T LC 的 Rf 值均与二十九烷对照
品一致,混合熔点不下降。
化合物Ⅵ: 白色针晶(石油醚) , mp 140～141
℃; L iebermann-Burchard 反应阳性, Mo lish 试验呈
阴性;其 IR 数据、TLC 的 Rf 值均与 -谷甾醇对照
品一致,混合熔点不下降。
References:
[ 1] Delectis Flor ae Reipu blicae Popularis S inicae, Agendae
Academiae Sinicae Edit s . Flora Reip ublic ae Pop ularis S ini cae
( 中国植物志) [ M ] . T omus 69. Beijing: S cience Pres s,
1997.
[ 2] Kimu ra K, Okud a T, Takano T . S tu dies on the const ituents
of Catalp a ovata G. Don I. Active principles of f ruit s [ J] .
Zakgaku Zasshi, 1962, 83( 6) : 635-638.
[ 3] El-Nagg ar Beal. Iridoids, a review [ J] . J N at P rod, 1980,
43( 6) : 658-663.
[ 4] Shaaban F El-Nagar, Raymond W D. Specios ide: A n ew
irid oid glycos ide f rom Catalp a sp eciosa [ J] . J N at P rod ,
1980, 43( 4) : 524-526.
[ 5] Informat ion Center of Chinese Herbal M edicine, State
Pharmaceut ical Administat ion of C hina. H andbook of A ct iv e
Comp onent s in P hytomed icine (植物药有效成分手册) [ M ] .
Beijing: Peoples M edical Publ ish ing House, 1986.
短柱金丝桃中的黄酮及螺内酯成分
罗 蕾1 ,李祖强2* ,马国义3
( 1. 云南师范大学化学化工学院, 云南 昆明 650091; 2. 云南大学 实验中心,云南 昆明 650091;
3. 悉尼大学 药学系,澳大利亚 悉尼)
摘 要 :目的 研究金丝桃属植物短柱金丝桃 Hyp er icum hook er ianum 的化学成分, 并通过药理实验寻找活性成
分。方法 在细胞毒筛选结果指导下, 同步对短柱金丝桃的活性部位进行化学成分分离纯化。经多次柱色谱、重结
晶, 得到纯化合物;并通过理化数据测定及波谱分析,鉴定化合物结构。结果 从短柱金丝桃的有效部位中分离鉴
定出 7 种化合物, 分别是:槲皮素( quercetin,Ⅰ)、木犀草素( luteolin, Ⅱ)、芹菜素( apigenin, Ⅲ)、金丝桃苷 ( hyperin,
Ⅳ)、黄芪苷( astr ag alin,Ⅴ)、螺内酯类化合物: 金丝桃内酯 A( hypero lactone A , Ⅵ)和金丝桃内酯 C( hyper olactone
C, Ⅶ)。结论 上述化合物均为首次从该植物中分离得到,化合物Ⅲ和Ⅴ为首次从该属植物中分离得到;通过细胞
毒试验发现, 短柱金丝桃的氯仿及醋酸乙酯提取物、槲皮素及木犀草素具有细胞毒性。
关键词: 短柱金丝桃;细胞毒性; 黄酮;螺内酯
中图分类号: R284. 1 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2005) 01 0017 04
Flavonoids and spiro-lactones from Hyp ericum hookerianum
LUO Lei1, L I Zu-qiang 2, MA Guo-y i3
( 1. Co llege o f Chemist ry and Chemical Eng ineering , Yunnan Normal Univer sity , Kunming 650091, China; 2. Exper imental
Center of Yunnan Univ ersit y, Kunming 650091, China; 3. Faculty o f Pharmacy, Univer sity of Sydney , NSW, Austr alia)
Abstract: Objective To study the chemical const ituents in plants of Hyp ericum hookerianum and
their act ivities by pharmacolog ical experiment . Methods Cytotox icity screening of the ext racts fr om H .
hook erianum were carried to iso late and purify the chemical const ituents. T he chemical st ructures were
ident if ied by physicochemical propert ies and spect ral data analysis. Results Seven compounds w er e isola-
ted and established as quercet in (Ⅰ) , luteolin (Ⅱ) , apigenin (Ⅲ) , hyperin (Ⅳ) , ast ragalin (Ⅴ) , hyper-
olactone A (Ⅵ) , and hyperolactone C (Ⅶ ) . Conclusion All the compounds ar e isolated f rom H .
·17·中草药 Chinese T raditional and Herbal D rug s 第 36 卷第 1 期 2005年 1月
收稿日期: 2004-03-16基金项目:云南省应用科学基金( 1999B004M ) ;云南省国际合作项目( GH2001121)作者简介:罗 蕾( 1961- ) ,女,副教授,主要从事抗癌活性天然产物研究。
* 通讯作者 Tel: ( 0871) 5033216 E-mail: Zuqian g Li@yun. edu . cn
hook erianum fo r the f ir st t ime. Compounds Ⅲ and Ⅴ are isolated fr om the plants of H yp ericum Linn. for
the f irst t ime. In addit ion, the f ract ions by chlorform and ethylacete ex t ract ing, quercet in, and luteol in
po ssess the cytotox icity.
Key words : Hypericum hookerianum Wight et Ar n. ; cytotox icity; flavonoid; spiro-lactone
短柱金丝桃 Hyp ericum hook erianum Wight et
Arn. 为藤黄科金丝桃亚科金丝桃属植物[ 1] ,民间用
于治疗各种炎症及无名肿痛。关于短柱金丝桃植物
的化学成分, 至今未见报道。本项目的化学成分研究
是在细胞毒活性筛选指导下, 同步进行的。用 L 1210
细胞系对短柱金丝桃全株的 95%乙醇提取物及溶
剂分割的组份进行细胞毒性试验,结果表明,氯仿和
醋酸乙酯分割的组份有一定的细胞毒性。对氯仿和
醋酸乙酯组份分离提纯,得 12 个单体。通过理化数
据测定及波谱分析( IR、UV、MS 及 NMR) ,鉴定出
其中的 7种化合物,分别是:槲皮素( quercet in, Ⅰ)、
木犀草素( luteolin,Ⅱ)、芹菜素( apig enin,Ⅲ)、金丝
桃 苷 ( hyperin, Ⅳ )、黄 芪 苷 ( ast ragalin, Ⅴ )、
hypero lactone A (Ⅵ)和 hyperolactone C (Ⅶ)。用
L 1210细胞系对化合物进行细胞毒性试验, 槲皮素和
木犀草素具有细胞毒性。
1 仪器和材料
熔点用北京产 X- 6型显微熔点测定仪测定,
温度未校正。IR用美国 BIO-RAD 公司- 40型测
定, KBr 压片。 1H-NMR、13C-NMR及 DEPT 用
Br ucker 公司 AVANCE DRX 500 型测定, T MS 为
内标。MS 用英国VG 公司 Outspect- 3000型测定。
UV 用日本日立 V - 3400型紫外分光光度仪测定。
柱色谱用 200～300 目硅胶(青岛海洋化工厂生产)
及 60H 硅胶(德国 Merck 公司生产) , TLC 用德国
Merck公司硅胶 60 F254。
短柱金丝桃采自滇东北地区, 由昆明植物研究
所徐廷志教授鉴定, 拉丁学名为 H . hookerianum
Wight et Arn.。该品种为首次在滇东北发现。
2 提取和分离
干燥的短柱金丝桃全株粉碎样 5 kg , 95%乙醇
浸泡 30 d,提取浸膏( H0 , 260 g )。用等重硅藻土加
95%乙醇混合均匀, 于水浴上炒干, 称质量,样品质
量 220 g, 用石油醚、氯仿及醋酸乙酯-甲醇( 1∶0、
8∶2、1∶1、0∶1)在索氏提取器中分步萃取,得组份
H1、H2、H3、H4、H5及 H6。
合并活性组份 H2 和 H3( 80 g ) , 用 200～300目
硅胶多次柱色谱, 以石油醚-醋酸乙酯-甲醇作洗脱
剂。后用 60H 硅胶真空抽提层析及重结晶, 纯化得
12个单体(以 T LC检测)。
3 细胞毒活性筛选
对分离过程中产生的粗提物组份及单体进行体
外试验(在悉尼大学癌症医学系药理实验室实施)。
分别称取 10 mg 的各种样品,选择 L 1210癌细胞
系,用染料排斥试验法测定细胞毒活性。部分结果列
入表 1。
表 1 样品对培养的 L1210癌细胞系生长抑制率
Table 1 Growth inhibitory rate of samples
in cultured L1210 cell
样品 不同浓度( g·mL - 1)下的抑制率/ %
1 10 100
IC 50/
( g·mL- 1)
H0 10 70 95 8. 0
H1 5 30 70
H2 20 80 100 5. 5
H3 15 75 95 6. 0
H4 10 30 70
H5 8 20 40
H6 3 10 35
Ⅰ 20 75 90 6. 0
Ⅱ 22 78 92 5. 8
Ⅲ 15 60 70 9. 2
4 结构鉴定
化合物Ⅰ: 黄色针晶(丙酮) , mp 310～315 ℃
(分 解 )。 IR、UV、EI-M S、1H-NMR、13C-NMR、
DEPT 数据与文献报道[ 2]的槲皮素对照基本一致,
故将化合物Ⅰ确定为槲皮素。
化合物Ⅱ: 黄色针晶(乙醇) , mp 327 ～330 ℃
(分解)。UV、EI-MS、1H-NMR及13C-NMR、DEPT
数据与文献报道 [ 3]的木犀草素对照基本一致, 故将
化合物Ⅱ确定为木犀草素。
化合物Ⅲ:黄色粉末(乙醇) , mp 342～ 345℃。
IR、UV、EI-M S、1H-NMR及13C-NMR、DEPT 数据
与文献报道[ 4]的芹菜素对照基本一致, 故 将化合物
Ⅲ确定为芹菜素。
化合物Ⅳ: 淡黄色结晶(甲醇) , mp 228～230 ℃
(分解)。IR、UV、1H-NMR及13C-NMR、DEPT 数据
与文献报道[ 5]的金丝桃苷对照基本一致, 故将化合
物Ⅳ确定为金丝桃苷。
化合物Ⅴ: 淡黄色针晶(甲醇) , mp 165～167
℃。IR、UV、FAB-M S、1H-NMR及13C-NMR、DEPT
数据与文献报道 [ 6]的黄芪苷对照基本一致, 故将化
·18· 中草药 Chinese T raditional and Herbal D rug s 第 36 卷第 1 期 2005年 1月
合物Ⅴ确定为黄芪苷。
化合物Ⅵ:无色粒晶(丙酮) , mp 56～57 ℃。由
HREI-M S m/ z : 250. 121 6[ M ] + ,得分子式C14H18O4
(计算值: 250. 120 5)。EI-M S m/ z ( % ) : 250[ M ] + ,
193, 177, 167, 153, 95, 81。UV M eOHmax nm ( log ) : 210
( 3. 54) , 268( 3. 97)。IR KBrmax ( cm - 1) : 1 795, 1 700示
有 2 个 C= O。仔细审核化合物Ⅵ的1H-NMR (表
2)、13C-NMR及 DEPT (表 3)数据,有 3个 CH3、3个
CH2、3个 CH、5个季 C(含 2个C= O) ,并对其归属
进行指认。上述数据与文献中的hyperolactone A 对
照[ 7] ,基本一致,是一种螺内酯结构。
化合物Ⅶ: 无色粒晶(丙酮) , mp 102～104 ℃。
由HREI -MS m / z : 270. 088 0 [ M ] + , 得分子式
表 2 化合物Ⅰ～Ⅶ的1H-NMR谱数据( 500 MHz / Hz)
Table 2 1H-NMR data of compounds Ⅰ- Ⅶ ( 500 MHz /Hz)
碳位 Ⅰ
( CD3COCD3)
Ⅱ
( CD3COCD3)
Ⅲ
( CD3COCD3)
Ⅳ
( C5D5N)
Ⅴ
( C5D5N )
Ⅵ
( CDCl3)
Ⅶ
( CDCl3)
1 5. 26 d ( 17. 2) 5. 26 d ( 17. 5)
5. 29 d ( 11. 1) 5. 28 d ( 11. 2)
2 5. 97 dd ( 17. 2, 11. 1) 6. 04 dd ( 17. 8, 10. 7)
3 6. 58 s 6. 80 s
5 12. 29 s ( OH ) 13. 01 s ( OH) 12. 99 s ( OH ) 12. 66 s ( OH)
6 6. 37 d ( 2. 0) 6. 24 d ( 2. 1) 6. 20 d ( 2. 5) 6. 15 d ( 2. 0) 6. 18 d ( 2. 0) 5. 39 s 6. 01 s
8 6. 64 d ( 2. 0) 6. 52 d ( 2. 0) 6. 50 d ( 2. 5) 6. 35 d ( 2. 0) 6. 34 d ( 2. 0)
9 4. 06 d ( 8. 2) Ha 4. 13 d ( 8. 5) Ha
4. 90 d ( 8. 2) Hb 4. 96 d ( 8. 5) Hb
10 1. 43 s 1. 56 s
1′ 2. 71 m
2′ 7. 91 d ( 2. 2) 7. 49 d ( 2. 2) 7. 95 d ( 8. 0) 7. 47 d ( 2. 1) 8. 02 d ( 9. 3) 1. 75 m, 1. 65 m 7. 88 d ( 8. 1)
3′ 6. 94 d ( 8. 0) 6. 88 d ( 9. 3) 0. 99 t ( 7. 1) 7. 54 m
4′ 1. 24 d ( 7. 0) 7. 63 d ( 8. 0)
5′ 7. 09 d ( 8. 7) 7. 00 d ( 8. 4) 6. 94 d ( 8. 0) 6. 77 d ( 8. 0) 6. 88 d ( 9. 3) 7. 54 m
6′ 7. 78 dd ( 2. 2, 8. 7) 7. 47 dd ( 2. 2, 8. 1) 7. 95 d ( 8. 0) 7. 60 d ( 8. 2, 2. 0) 8. 02 d ( 9. 3) 7. 88 d ( 8. 1)
1″ 5. 31 d ( 7. 2) 5. 22 d ( 7. 9)
表 3 化合物Ⅰ～Ⅶ的13C-NMR谱数据( 500 MHz /Hz)
Table 3 13C-NMR data of compounds Ⅰ- Ⅶ ( 500 MHz / Hz)
碳位
Ⅰ
( CD3COCD3)
/ H z DEPT
Ⅱ
( CD3COCD3)
/ Hz DEPT
Ⅲ
( CD3COCD3)
/ Hz DEPT
Ⅳ
( C5D5N)
/ H z DEPT
Ⅴ
( C5D5N )
/ Hz DEPT
Ⅵ
( CDCl3)
/ Hz DEPT
Ⅶ
( CDCl3)
/ H z DEPT
1 118. 77 CH2 119. 19 CH2
2 146. 68 C 164. 11 C 164. 12 C 156. 22 C 158. 91 C 134. 21 CH 134. 24 CH
3 136. 50 C 103. 33 CH 102. 83 CH 133. 43 C 135. 83 C 48. 32 C 50. 03 C
4 176. 30 C 182. 21 C 181. 88 C 177. 36 C 179. 94 C 92. 45 C 93. 16 C
5 161. 99 C 157. 93 C 157. 26 C 161. 14 C 161. 98 C 197. 30 C 196. 71 C
6 98. 83 CH 98. 87 CH 98. 76 CH 98. 66 CH 100. 26 CH 102. 06 CH 100. 39 CH
7 164. 74 C 164. 30 C 163. 74 C 164. 07 C 166. 35 C 200. 20 C 187. 31 C
8 94. 12 CH 93. 85 CH 94. 02 CH 93. 61 CH 95. 26 CH 168. 02 C 168. 22 C
9 157. 48 C 162. 49 C 161. 59 C 156. 18 C 159. 42 C 74. 01 CH2 74. 23 CH2
10 103. 83 C 104. 45 C 103. 60 C 103. 83 C 106. 45 C 19. 18 CH3 19. 60 CH3
1′ 123. 45 C 119. 25 C 121. 36 C 121. 07 C 123. 17 C 37. 03 CH 127. 68 C
2′ 115. 44 CH 113. 23 CH 128. 25 CH 115. 19 CH 132. 75 CH 27. 05 CH2 127. 41 CH
3′ 145. 59 C 145. 67 C 116. 08 CH 144. 89 C 116. 38 CH 11. 02 CH3 128. 93 CH
4′ 147. 99 C 149. 28 C 161. 19 C 148. 39 C 163. 41 C 17. 03 CH3 133. 62 CH
5′ 115. 91 CH 115. 75 CH 116. 08 CH 116. 00 CH 116. 38 CH 128. 93 CH
6′ 121. 06 CH 122. 88 CH 128. 25 CH 121. 87 CH 132. 75 CH 127. 41 CH
1″ 101. 84 CH 104. 46 CH
2″ 71. 27 CH 76. 17 CH
3″ 73. 26 CH 78. 44 CH
4″ 68. 08 CH 71. 88 CH
5″ 75. 93 CH 78. 89 CH
6″ 60. 17 CH2 63. 07 CH 2
·19·中草药 Chinese T raditional and Herbal D rug s 第 36 卷第 1 期 2005年 1月
C16H14O4 (计算值: 270. 089 2)。EI-M S m/ z ( %) :
270 [ M ]
+
, 252, 225, 211, 188, 173, 147, 105, 102,
77。UV MeOHmax nm ( lo g ) : 255( 4. 15) , 308( 4. 41)。IR
KBrmax ( cm- 1 ) : 1 780, 1 710示有 2个 C= O。仔细审核
化合物Ⅵ的1H-NMR(表 2)、13C-NMR及 DEPT (表
3)数据,有 1 个 CH3、2 个 CH2、7个 CH、6 个季 C
(含 2个 C= O) , 并对其归属进行指认。上述数据与
文献中的 hyperolactone B对照[ 7]基本一致, 是一种
螺内酯结构。
References:
[ 1] Delect is Florae Reipubl icae Popularis Sin icae. Flora
Reip ubli cae Pop ularis S inicae (中国植物志) [ M ] . T omus 50
( 2) . Beijing: Science Pres s, 1990.
[ 2] Zh ang X R, Peng S L, Wan g M K, et al . S tudies on the
const ituen ts of Lysimachia conge stf l or a [ J] . Ac ta P harm S in
(药学学报) , 1999, 34( 11) : 835-838.
[ 3] Informat ion Center for C hines e Herbal Medicine, State
Pharmaceut ical Adminis t rat ion of Ch ina. H andbook of A ct iv e
Const ituents in P hy tomedicine (植物药有效成分手册) [ M ] .
Beijing: Peoples M edical Publ ish ing House, 1986.
[ 4] Chen J R, Wang Y F, Qin L G. The stud y of chem ical
const ituen ts of X uel ianhua-T ibetan med icine [J ] . Acta Bot
Yunnan (云南植物研究) , 1989, 11( 3) : 271-274.
[ 5] Yu D Q, Yang J S, Xie J X. Th e H andbook f or A naly tical
Chemistry (Ⅴ) N MR Sp ectum Analysis (分析化学手册(Ⅴ)
核磁共振波谱分析) [ M ] . Beijing: Ch emical and Ind ust ry
Press , 1989.
[ 6] Yu D Q, Yan g J S . T he H and book of Analysis Chemist ry (分
析化学手册) [ M ] . 7th S ection , Beijing: Chemical Ind ust ry
Publ ish ing House, 1999.
[ 7] Aramaki Y, Chiba K, Tada M . S piro-lactones,
h yperolactone A - D from Hype ricum chinense [ J] .
P hy tochemistry , 1995, 38( 6) : 1419-1421.
三叶鬼针草活性成分研究
王硕丰1 ,杨本明1 ,李立标2,朱东亮2,何 丹3,王 璐2
( 1. 解放军第 254 医院 药剂科,天津 300142; 2. 第二军医大学 研究生管理大队, 上海 200433;
3. 解放军第 163 医院 药剂科, 湖南 长沙 410208)
三叶鬼针草为菊科鬼针属植物。有清利湿热之
功,多用于治疗咽喉疼痛、肠炎痢疾、尿路感染、小儿
腹泻、慢性支气管炎和神经衰弱等疾病。其主要成分
包括黄酮类、烯炔类、香豆素类、有机酸及其酯、三萜
类、甾体类、挥发油等。
笔者对三叶鬼针草全草乙醇提取物的 CHCl3、
正丁醇部分的化学成分进行了研究,分离获得了 10
个化合物,鉴定了其中 5个化合物的结构, 并发现化
合物Ⅳ和Ⅴ有中等强度的细胞毒性, 结构式见图 1。
图 1 化合物Ⅳ和Ⅴ的化学结构
Fig. 1 Chemical structures of compounds Ⅳ and Ⅴ
1 仪器和试剂
熔点用 ZMD-2熔点仪测定(温度未校正)。EI-
M S 谱用 JM SD 300 型质谱仪测定。1H-NMR和
13
C-NMR用 Bruker AM- 400型核磁共振仪测定。
红外光谱用 Perkin- Elmer 683红外分析仪测定。
RPM I- 1640培养基购自 Gibco 公司。小牛血清购
自杭州四季青公司。色谱用硅胶为青岛海洋化工厂
产品。Sephadex LH-20为 Pharmacia 公司产品。所
用试剂为分析纯。
2 提取与分离
三叶鬼针草 2 kg (干重) , 85%乙醇( 5 L )冷浸 5
次,浸提液真空浓缩直到无醇味,用石油醚萃取除去
叶绿素,然后分别用氯仿、正丁醇萃取得氯仿和正丁
醇部分。对氯仿部分进行反复硅胶柱色谱( CH3OH-
CH2Cl 2 0%～10% )得化合物Ⅰ～Ⅳ。对该部分的低
极性油状物进行薄层制备(正己烷-丙酮= 5∶1)得
化合物Ⅳ和Ⅴ。
3 化合物的理化和光谱数据
化合物Ⅰ: 淡黄色片晶 ( CH2Cl2-M eOH) , HCl-
M g 粉反应阳性。mp 250～251 ℃。1H-NMR、
13
C-NMR光谱数据与金丝桃苷的光谱数据基本一
致[ 1]。
化合物Ⅱ: 淡黄色针晶( EtOAc) , HCl-M g 粉反
应阳性; 1H-NMR ( CHCl3 ) : 4. 2 ( 3H , s) , 3. 8( 3H,
s) , 3. 7( 3H, s) , 6. 9( 1H, s) , 6. 8( 1H, s) , 6. 7( 1H,
·20· 中草药 Chinese T raditional and Herbal D rug s 第 36 卷第 1 期 2005年 1月
收稿日期: 2004-05-16