全 文 ：浓度降低, 使肠道蠕动减慢, 延长水、电解质、营养物
质在肠道内停留时间, 促进其吸收, 减少腹泻次数和
粪便量。而且, 病毒与受体复合物进入细胞必须有钙
离子的辅助作用, 由于槲皮素拮抗钙离子通道, 使病
毒受体复合物不能进入细胞, 中断了其生活周期, 从
而引起病毒死亡, 这也是槲皮素在体外能够较好地
抑制 HRV 的机制。熊果酸能够刺激 IFN 2Χ的分
泌[5 ] , 增强机体的免疫功能, 提高机体抵抗病毒的能
力, 但其在体外以何种机制发挥抗病毒作用, 还有待
于进一步研究。槲皮素和 2Α2羟基熊果酸在体外显
示了较强的抗 HRV 作用, 但其在体内是否有较强
的抗病毒作用, 由于其代谢过程不明, 有待于进一步
研究。
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龙葵碱对 H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜唾液酸和封闭度的影响
季宇彬, 王胜惠, 高世勇, 邹　翔, 汲晨峰Ξ
(哈尔滨商业大学药物研究所 博士后科研工作站, 黑龙江 哈尔滨　150076)
摘　要: 目的　研究龙葵碱对 H 22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜唾液酸 (SA ) 水平和封闭度的影响。方法　建立 H 22荷瘤小
鼠模型, 荷瘤小鼠分别 sc 生理盐水、环磷酰胺、龙葵碱 (91375、18175、3715 m gökg)。采用比色法测定 H 22小鼠肿瘤
细胞膜 SA 水平和封闭度。结果　龙葵碱可剂量依赖性地降低荷瘤小鼠肿瘤细胞膜 SA 水平和肿瘤细胞膜封闭度。
结论　龙葵碱通过降低 H 22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜 SA 水平和肿瘤细胞膜封闭度起抗肿瘤作用。
关键词: 龙葵碱; H 22荷瘤小鼠; 膜封闭度; 唾液酸
中图分类号: R 286191　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2005) 01 0079 03
Effect of Solanum n ig rum tota l a lka lo id on sia l ic ac id and block ing degree
of tum or cell m em brane in H22 tum or-bear ing m ice
J I Yu2b in, W AN G Sheng2hu i, GAO Sh i2yong, ZOU X iang, J I Chen2feng
(Po stdocto ral P rogramm e, Inst itu te of M ateria M edica, H arb in U niversity of Comm erce, H arb in 150076, Ch ina)
Abstract: Objective　To study the effects of to ta l a lkalo id from S olanum n ig rum (TA SN ) on sia lic
acid (SA ) and b lock ing degree of tumo r cell m em b rane in H 22 tumo r2bearing m ice. M ethods　 H 22 tumo r2
bearing m ice model w as estab lished and H 22 tumo r2bearing m ice w ere given N S, Cytoxan (CTX ) , and
TA SN (9. 375, 18. 75, and 37. 5 m gökg) by sc, respect ively. SA con ten t and b lock ing degree of tumo r cell
m em b rane in H 22 m ice w ere determ ined by ch rom atom etry. Results　TA SN cou ld decrease the SA con ten t
and the b lock ing degree of tumo r cell m em b rane in H 22 tumo r2bearing m ice in a do se2dependen t m anner.
Conclusion　TA SN show s the an t itumo r act ivity th rough decreasing the SA con ten t and b lock ing degree of
tumo r cell m em b rane in H 22 tumo r2bearing m ice.
Key words: to ta l a lkalo id of S olanum n ig rum L. (TA SN ) ; H 22 tumo r2bearing m ice; b lock ing degree
of m em b rane; sia lic acid (SA )
　　龙葵 S olanum n ig rum L. 为茄科一年生草本植
物, 分布于全国各地, 其主要成分为生物碱。民间使用
龙葵治疗肿瘤效果良好。前期抗肿瘤实验结果表明龙
葵碱能够明显延长 H 22荷瘤小鼠的生存时间。本实验
·97·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 36 卷第 1 期 2005 年 1 月
Ξ 收稿日期: 2004205202
基金项目: 国家自然科学基金资助项目 (30400591) ; 黑龙江省自然科学基金资助项目 (D 2004213) ; 哈尔滨市青年科学基金资助项目
(2004A FQ XJ035)。
观察其对 H 22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜 SA 水平和封闭
度的影响, 从而揭示其抗肿瘤的作用机制。
1　材料与仪器
111　药品及试剂: 龙葵碱, 纯度 98% , 由黑龙江省药
品检验所提供; 环磷酰胺, 江苏恒瑞医药股份有限公
司产品, 批号 03081321; NADH , Sigm a 公司产品。
112　动物及瘤株: 昆明种小鼠, 雌雄各半, 体重
(20±2) g, 由哈尔滨市兽医研究所动物室提供; H 22
瘤株, 购于哈尔滨肿瘤医院肿瘤研究所。
113　仪器: 日本岛津 R F—540 荧光分光光度计; 紫
外 721 分光光度计, 山东高密分析仪器厂; 水平高
速离心机, 北京医用离心机厂; 低温超速离心机, 美
国贝克曼公司; 超净工作台, 苏州净化设备厂; 恒温
水浴箱, 厦门医疗电子仪器厂。
2　方法
211　分组、模型的建立及给药: 小鼠随机分为 5 组,
每组 10 只, 雌雄各半, 分别为生理盐水组, 环磷酰
胺 (30 m gökg) 组, 龙葵碱低、中、高剂量 (91375、
18175、3715 m gökg) 组。无菌条件下抽取生长良好
的 H 22荷瘤小鼠腹水, 以生理盐水 (1∶4) 稀释后,
于每只 012 mL 接种于各组小鼠腹腔, 接种 24 h
后, 各组小鼠 sc 相应剂量药物。每天 1 次, 共 7 d。
212　肿瘤细胞膜 SA 水平的测定: 从已接种腹水癌
细胞 1 周后的小鼠腹腔中, 取腹水约 1 mL , 用生理
盐水约 10 mL 洗涤 1 次, 1 000 röm in 离心 10 m in,
用约 10 mL PBS 溶液洗涤 1 次。若腹水中有红细
胞, 应多洗 2 次, 将红细胞除去。然后将腹水癌细胞
以 1×107ömL 悬浮在含有 10% 小牛血清的 Eagle
液中。用台盼蓝检查, 95% 以上细胞是活细胞。取活
细胞 1 mL , 加 9 倍生理盐水, 用匀浆器制成 10% 匀
浆液, 3 000～ 3 500 röm in 离心 10 m in 后取上清液
012 mL 进行测定, 同时测定组织蛋白。具体操作步
骤为: 测定管中加入样品 012 mL , 氧化剂 012 mL ,
52甲基苯二酚 410 mL ; 标准管中加入 1 mmo löL
SA 标准 0. 1 mL , 氧化剂 0. 2 mL , 52甲基苯二酚
4. 0 mL ; 空白管中加入蒸馏水 011 mL , 氧化剂 012
mL , 52甲基苯二酚 410 mL , 混匀, 100 ℃ 水浴 15
m in, 流水冷却后, 3 500 röm in 离心 10 m in, 取上清
液, 用分光光度计于 560 nm 波长处, 空白管调零读
取各管吸光度 (A ) 值。
213　肿瘤细胞膜封闭度的测定
21311　影泡的制备及影泡的重新封闭: 从已接种腹
水癌细胞 1 周的小鼠腹腔中, 取腹水约 1 mL , 用生
理盐水约 洗涤 次 ö 离心
m in, 弃上清液后加入 4 mL 双蒸水, 放入冰箱 4 ℃
过夜, 得到肿瘤细胞影泡, 取出后双蒸水洗 3 次, 将
洗过的影泡放在等渗溶液中, 37 ℃ 保温 1 h 即获得
封闭影泡[1 ]。
21312　NADH 2细胞色素 C 氧化还原酶活性的测
定: 按 Zam udio [2 ]法进行: 取 4 个试管, 分别为不加
皂素空白管 (A ) , 不加皂素样品管 (B ) , 加皂素空白
管 (C) , 加皂素样品管 (D )。首先在A、B、C、D 管中
都加入 016 mL 封闭影泡, 第 2 步加入 5p 8. 4 的
PBS, A 管 214 mL , B 管 212 mL , C 管 212 mL , D
管 210 mL ; 第 3 步 A、B 管不加试剂, C、D 管加入
011% 皂素各 012 mL ; 第 4 步A、C 管不加试剂,B、
D 管加入 5 mmo löL K 3Fe (CN ) 6各 011 mL。放置
10 m in; 第 5 步 A、C 管不加任何试剂,B、D 管各加
6 mmo löL NADH 0. 1 mL , 加完计时 1 m in 后, 混
匀, 在波长 420 nm 处比色, 以加入NADH 为起点,
记录反应开始 6 m in 内的吸光度值 (每隔 1 m in 记
录 1 次)。上述反应在 25 ℃ 进行。比色对照, 除不
加NADH 溶液外其他操作同上。
21313　封闭度计算: 影泡封闭度 (% )按下式计算。
封闭度= (加表面活性剂酶活力- 不加表面活性剂酶活
力) ö加表面活性剂酶活力×100%
3　结果
311　龙葵碱对 H 22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜 SA 水平
的影响: 结果见表 1。与生理盐水组比较, 龙葵碱可
使荷瘤小鼠肿瘤细胞膜上 SA 水平有明显的降低
(P < 0101) , 其中以高剂量组效果最为明显。环磷酰
胺组也有同样的作用。
表 1　龙葵碱对 H22荷瘤小鼠肿瘤细胞 SA 水平和
封闭度的影响 (x±s, n= 10)
Table 1　Effect of TASN on SA level and block ing
degree of tumor cell membrane in H22
tumor-bear ing m ice (x±s, n= 10)
组　别 剂量ö(m g·kg- 1) SA ö(mmo l·L - 1) 封闭度ö%
生理盐水　　　- 01280±01030 6614±1199
环磷酰胺　　　30 01183±010373 3 5814±31333 3
龙葵碱 91375 01176±010453 3 6113±21563 3
18175 01173±010453 3 5610±31073 3
3715 01116±010413 3 5018±41033 3
　　与生理盐水组比较: 3 3 P < 0101
　　3 3 P < 0101 vs N S group
312　龙葵碱对 H 22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜封闭度的
影响: 结果见表 1。与生理盐水组比较龙葵碱可明显
降低 H 22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜封闭度, 差异显著
(P < 0101) , 且呈量效相关, 回归方程 为 Y =
。
·08· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 36 卷第 1 期 2005 年 1 月
4　讨论
　　SA 是细胞膜上糖蛋白和糖脂链末端的残基,
广泛分布于哺乳动物细胞 (包括红细胞) 膜表面,
为细胞负电荷的主要来源, 亦为细胞膜受体的重要
成分[3, 4 ] , 参与细胞分化, 癌细胞的转移, 细胞的识
别、黏附和接触抑制等生理过程。因此, 细胞膜上
SA 含量的改变将导致细胞内一系列生物学变化。
同时 SA 也是红细胞 C3b 受体 (CR 1) 的重要成
分, 除红细胞外, 机体的其他组织细胞膜上也存在一
定水平的 SA。研究发现随着肿瘤的生长, 腹水和血
清中 SA 水平增加, 并与肿瘤的生长和类型呈相关
性, 细胞膜表面 SA 水平与肿瘤的恶性程度有关。肿
瘤细胞比正常细胞更易产生 SA [5 ]。研究表明 SA 在
肿瘤的病理过程中具有“抗识别作用”, 许多癌化的
细胞的表面富含 SA 黏蛋白[6, 7 ] , 其水平高达膜上蛋
白总水平的 015% , 而在正常细胞表面, 这类成分没
有或很少, 因此认为这是癌细胞逃避免疫攻击的机
制, 并且和癌细胞的转移有关[8 ]。将癌细胞分离出
来, 用唾液酸苷酶除去细胞表面的 SA , 再注入体
内, 结果导致体内原有的癌细胞解体或消失[9 ]。本实
验结果表明龙葵碱使荷瘤小鼠肿瘤细胞膜上 SA 水
平明显降低。由此推测龙葵碱可能属抗肿瘤药物中
的代谢药, 主要影响 DNA 的合成, 文献报道可与
DNA 结合的药物和一些抗代谢药可抑制肿瘤产生
SA [9 ]。其机制是直接与DNA 结合而影响DNA 合
成酶, 进而影响 SA 的合成。
细胞膜 SA 水平与细胞膜活性密切相关, 因此
进一步研究对肿瘤细胞膜活性的影响就显得非常重
要。细胞膜在等渗溶液中能重新封闭起来, 恢复对大
分子和阳离子的通透屏障, 形成封闭影泡。测定红细
胞膜重新封闭能力的指标即封闭度。实验结果表明:
龙葵碱与环磷酰胺均可明显降低 H 22小鼠肿瘤细胞
膜封闭度, 提示细胞膜活性降低, 其结果有可能导致
肿瘤细胞的解体和死亡。
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银耳多糖对小鼠脾脏淋巴细胞蛋白激酶 C 活性的影响
胡庭俊, 梁纪兰, 程富胜, 陈炅然Ξ
(中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 农业部新兽药工程重点开放实验室, 甘肃 兰州　730050)
摘　要: 目的　观察银耳多糖 (T PS) 体外对小鼠脾脏淋巴细胞蛋白激酶 C (PKC) 活性的影响, 探讨 T PS 对免疫细
胞信息传递系统的效应。方法　应用反向离子对高效液相色谱法测定小鼠脾脏淋巴细胞 PKC 活性。结果　T PS 能
促进体外培养的小鼠脾脏淋巴细胞 PKC 活性。结论　T PS 的免疫调节作用与淋巴细胞的信号传导系统密切相关。
关键词: 银耳多糖; 淋巴细胞; 蛋白激酶 C
中图分类号: R 28515　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 01 0081 04
·18·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 36 卷第 1 期 2005 年 1 月
Ξ 收稿日期: 2004204215
基金项目: 国家自然科学基金资助项目 (39970556)
作者简介: 胡庭俊 (1965—) , 男, 博士, 研究员, 主要从事中药免疫药理研究工作。