全 文 ：·1200· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第8期2005年8月
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龙葵碱对荷瘤小鼠肿瘤细胞DNA和RNA的影响
季宇彬，王宏亮，高世勇
(哈尔滨商业大学药物研究所博士后科研工作站，黑龙江哈尔滨 150076)
摘 要：目的观察龙葵碱对s。和H：。荷瘤小鼠肿瘤细胞DNA和RNA的影响。方法将sm和Hz。荷瘤小鼠分
为龙葵碱37．50、18．75、9．37mg／kg组、阴性对照组和环磷酰胺(30mg／kg)组，各组SC给药。利用激光共聚焦扫
描显微镜，分别测定各组肿瘤细胞中的DNA和RNA。结果龙葵碱(37．50、18．75mg／kg)组对S-so和Hzz小鼠肿
瘤细胞RNA和DNA的比值均有明显的降低作用。结论龙葵碱降低S。。。和Hzz小鼠肿瘤细胞RNA和DNA的
比值可能是其抗肿瘤作用机制之一。
关键词：龙葵碱；肿瘤细胞；DNA；RNA
中图分类号：R286．91 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)08—1200—03
EffectofsolanineonDNAandRNAintumorcelloftumor—bearingmice
JIYu—bin，WANGHong—liang，GAOShi—yong
(PostdoctoralPr gramme，InstituteofMateriaMedica，HarbinUniversityofCommerce，Harbin150076，China)
Abstract：ObjectiveToobserveth ffectsof olanineoDNAandRNAlevelintumorcellofS180
andH22tumor—bearingmice．MethodsS180andH2zmiceweredividedintosolanine(37．50、18．75，and
9．37mg／kg)groups，negativecontrolgroupandcytoxan(30mg／kg)group，whomweregivendrugsby
SC．LevelsofRNAandDNAintumorcellmembraneinev rygroupswereexamined，respectivelybylaser
scanningconfocalmicrotechnictechnology．ResultsSolanine(37．50、18．75mg／kg)groupseducedthe
ratioofRNAandDNAintumorcellofbothS】80andH22mice．ConclusionSolaninecanreducetheratio
ofRNAandDNAintumorcellofS180andH22mice，whichmaybeoneofthemechanismsofsolanine
7
S
antitumoreffect．
Keywords：solanine；tumorc ll；DNA；RNA
龙葵碱是从茄科植物龙葵SolanumigrumL．
的全草或未成熟的果实中提取分离出的一种生物
碱。前期研究发现龙葵碱能显著延长H。。荷瘤小鼠
的生存时间[13，并能显著降低H。。荷瘤小鼠肿瘤细
胞膜流动性及膜蛋白水平[2]。为进一步研究龙葵碱
抗肿瘤作用机制，本实验研究龙葵碱对荷瘤小鼠肿
瘤细胞RNA和DNA的影响。
1材料
1．1 药物：龙葵碱(质量分数99．5％)，由黑龙江
省药品检验所提供；环磷酰胺，江苏恒瑞医药股份有
限公司，批号：03081321。
1．2动物及瘤株：昆明种小鼠，体重(20±2)g，雌
雄各半，购于哈尔滨医科大学动物中心，许可证号
001010006。S。。。和H：。瘤株购于黑龙江省肿瘤医院。
1．3试剂及仪器：吖啶橙(AO，MolecularProbes，
Inc．)；生理盐水；细胞计数板：激光扫描共聚焦显微
镜，德国Leica；HH—S恒温水浴；LD。一2A型台
式低速离心机(北京医用离心机厂)；QL一861型
涡旋混合振荡器(上海博停经贸有限公司)；尤尼
柯紫外可见分光光度计。
2方法
2．1 分组、给药与造模：选用成熟昆明种小鼠50
收稿日期：2004—12-05
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30400591，30271598)；黑龙江省自然科学基金资助项目(D2004—13，C0309)；哈尔滨市青年科
学基金资助项目(2004AFQXJ035)；哈尔滨市科学研究基金(2004AFQXJ034)
作者简介：季宇彬(1956一)，男，博士，教授，博士生导师，研究方向为分子药理学与肿瘤药理学。
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第8期2005年8月·1201·
只，体重(20±2)g。随机分成5组，分别为龙葵碱
(37．50、18．75、9．37mg／kg)组、环磷酰胺(30mg／
kg)组和阴性对照组，每组10只小鼠。龙葵碱组分
别SC龙葵碱37．50、18．75、9．37mg／kg，环磷酰胺
组SC环磷酰胺30mg／kg，阴性对照组SC同体积生
理盐水。接瘤方法按文献方法进行[3]。接种后无菌连
续给药7d。
2．2样品制备：停药后次日，在冰台上处死小鼠，取
出肿瘤细胞，加培养液洗涤离心(800r／min)。离心
后弃上清液，留取下层细胞，再用培养液制备成一定
浓度的细胞悬液。
2．3黏附细胞：将1％明胶液滴加到载玻片一面，
37‘C培养箱中干燥，待用。在带胶面载玻片上滴加
细胞悬液，放置37C培养箱中贴壁10～15min，同
时以光学显微镜观察贴壁情况。然后以培养液冲洗
2～3次，洗去非贴壁细胞。
2．4 荧光染色：AO染色，AO可对细胞内DNA、
RNA双重染色，DNA在506nm发射绿色荧光；
RNA在650nm发射红色荧光。滴加0．01％AO
染料12肛L，避光37℃孵育15min，用培养液冲去
多余染料。
2．5 观察方法：将载玻片置于ACASUltima312
倒置显微镜上，使用488nm氩离子激光激发荧光
染料AO，在高倍镜(40×，NA0．55)下进行检测。
进入Z—Image程序，在光学显微镜下直接寻找贴壁
良好的细胞。扫描参数为：小孔孔径225p．m，X轴扫
描点数200，Y轴扫描点数150，扫描步径0．3pm，
z轴扫描次数1，镜扫描速度20mm／s，扫描强度
50％，激光强度4．2mW，每点采样次数24，检测器
1和检测器2灵敏度均为45％。激光沿Z轴扫描，
获得细胞断层的扫描信息。
2．6统计学方法：DNA和RNA及相对比值由计
算荧光像素数的方法量化，数据用SPSSll．0进行
方差分析，数据用．25±S表示。
3 结果
3．1 龙葵碱对S。。。小鼠肿瘤细胞膜RNA和DNA
荧光像素比值的影响：实验结果表明，龙葵碱37．50
和18．75mg／kg与阴性对照组比较，差异非常显著
(P比较无统计学意义，龙葵碱可以降低S。。。小鼠肿瘤
细胞RNA和DNA荧光像素比值，即降低S。。。小鼠
肿瘤细胞RNA和DNA的比值。见表l。
3．2龙葵碱对H。。小鼠肿瘤细胞膜RNA和DNA
荧光像素比值的影响：龙葵碱37．50和18．75mg／
kg组与阴性对照组比较差异非常显著(P龙葵碱9．37mg／kg组与阴性对照组比较无统计学
意义，可见龙葵碱降低了H：。小鼠肿瘤细胞RNA和
DNA荧光像素比值，即降低了H。：小鼠肿瘤RNA
和DNA的比值。见表1。
表1龙葵碱对S,so和H：：小鼠肿瘤细胞
RNA和DNA比值的影响
Table1 EffectofsolanineonratioofRNAandDNA
intumorcellofS180andH22mice
组别
剂量／ 动物／细胞／RNA和DNA荧光像素比值(j±s)
(mg·kg一1)只个 S180 H22
对照 一
环磷酰胺30
龙葵碱 37．50
18．75
9．37
1000．953±0．0273 0．907士0．0227
1000．616±0．0143+’0．422±0．0241’’
1000．556±0．0226‘’0．341±0．0187+。
1000．352士0．0286’’0．659±0．0316’+
1000．882土0．0155 0．842士0．0203
与对照组比较：～P++P<0．01VScontrolgroup
4讨论
激光共聚焦显微术(1aserconfocalmi—
croscopy，LCM)是一项新兴的生物显微技术，是利
用荧光物质标记组织或细胞的某一部分，然后用确
定波长的入射光扫描样品不同层面，并收集荧光物
质被激发出的荧光，用计算机系统进行分析，把各个
层面的荧光图像叠加起来，形成立体图像。激光扫描
共聚焦显微镜(1aserscanningconfocalmicro—
scope，LScM)是近10年发展起来的一种新型高
精度的显微镜系统，它对于组织和细胞内部微细结
构的观察以及生物样品的定性、定量和定位观察均
具有极大的优越性_]，现已广泛应用于荧光定位、定
量测量、共聚焦图像分析、三维图像重建和活细胞动
力学参数等方面。LSCM是在荧光显微镜成像基础
上加装了激光扫描装置，利用计算机进行图像处理，
使用紫外或可见光激发荧光探针，从而得到细胞或
组织内部微细结构的荧光图像，在亚细胞水平上观
察诸如Ca2-、pH值、膜电位等生理信号及细胞形态
的变化，成为形态学、分子细胞生物学、神经科学、药
理学、遗传学等领域中新一代强有力的研究工
具[5~9]。LSCM采用了点光源代替场光源，使探测点
与照明点共轭，有效抑制了同一焦平面上的杂散荧
光，抑制了来自非焦平面的荧光，提高了图像的信噪
比，使图像的清晰度和纵向分辨率比普通光学显微
镜明显升高，对细胞进行无损伤光学切片。由于以上
特征使其具备了普通显微镜和荧光显微镜的功能，
并配有电子摄像和微机图像数字分析系统，结合特
异的荧光抗体进行一系列亚细胞水平结构和功能的
万方数据
·1202· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第8期2005年8月
研究，是目前先进的细胞形态、功能研究手段[1⋯。
本实验所采用的荧光探针为Ao，它可以对活
细胞进行染色。AO染料具有可以被可见光激发，及
激光淬灭率低的特点。LSCM利用AO渗透到细胞
内部，有选择性地与活细胞的不同成分结合，图像中
DNA为绿色荧光，RNA为红色荧光，计算机对获
得的细胞荧光强度进行分析，不仅能得到较光学显
微镜分辨率高的细胞形态的组分分布的清晰图像，
而且可动态观察细胞内代谢的变化。可以处理活的
标本，不会对标本造成物理化学性质的破坏。
通过激光束对样品进行扫描建立的共聚焦图
像[1]，不仅显示出不同切面DNA和RNA分布和比
值的变化，而且更直观地显示细胞受损后DNA和
RNA的变化。更接近细胞的生活状态。本实验结果
表明小鼠sc龙葵碱剂量达到37．50mg／kg时，S。。。
和H：：小鼠肿瘤细胞RNA水平明显降低，DNA水
平明显增高，表明肿瘤细胞内DNA转录形成RNA
的代谢受到抑制，这也意味着肿瘤细胞内基因产
物——蛋白质的合成受阻，从而抑制肿瘤细胞的生
长。给药组RNA和DNA的比值与阴性对照组比
较差异显著(P<0．01)，证明37．50、18．75mg／kg
龙葵碱对S。。。和H：：小鼠肿瘤细胞DNA和RNA的
代谢有逆转作用。
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西红花酸对体外蛋白质非酶糖基化的抑制作用
王雅娟，钱之玉+，沈祥春
(中国药科大学药理教研室，江苏南京210009)
摘要：目的研究西红花酸对体外蛋白质非酶糖基化的影响。方法 以牛血清白蛋白(BSA)质量浓度、葡萄糖
质量浓度及温孵时间为3因素，采用3因素4水平正交设计，通过方差分析寻找体外非酶糖基化的最适反应体系，
以此最适体系观察西红花酸对非酶糖基化的影响。结果糖基化蛋白产量与BSA质量浓度、葡萄糖质量浓度、温
孵时间呈正相关；方差分析结果提示，5g／LBSA、4．5mg／mL葡萄糖及14d的温孵时间为蛋白质体外非酶糖基化
的最佳条件；荧光值测定和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGEs)均表明西红花酸对体外蛋白质非酶糖基化具有显
著的抑制作用。结论西红花酸对体外蛋白质的非酶糖基化具有明显的抑制作用；这可能是西红花酸具有广泛的
心血管药理活性及改善胰岛素抵抗的重要机制之～。
关键词：西红花酸；非酶糖基化；正交设计；聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGEs)
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)08—1202—04
收稿日期：2005—01—31
作者简介：王雅娟(1980)，女，安徽合肥人，中国药科大学硕士研究生，主要研究方向为生化药理与中药新药研发。
*通讯作者钱之玉Tel：(025)83271322
万方数据
龙葵碱对荷瘤小鼠肿瘤细胞DNA和RNA的影响
作者： 季宇彬， 王宏亮， 高世勇， JI Yu-bin， WANG Hong-liang， GAO Shi-yong
作者单位： 哈尔滨商业大学药物研究所,博士后科研工作站,黑龙江,哈尔滨,150076
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(8)
被引用次数： 21次

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