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Effect of Acorus gramineus and its active component α-asarone on apoptosis of hippocampal neurons in epileptic young rats

石菖蒲及其有效成分α-细辛醚对癫痫幼鼠脑海马神经元凋亡的影响



全 文 :·1196· 中草115ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月
药理与临床
石菖蒲及其有效成分a一细辛醚对癫痫幼鼠脑海马神经元凋亡的影响
杨立彬1,李树蕾,黄艳智3,王宇虹4,梁建民1,张淑琴4
(1.吉林大学第一医院儿科,吉林长春130021;2.吉林大学基础医学院组胚教研室,吉林长春130021;
3.长春市儿童医院,吉林长春 130051;4.哈尔滨医科大学附属第一临床医院神经科,黑龙江哈尔滨150001)
摘要:目的探讨石菖蒲及其有效成分a一细辛醚对戊四氮(PTZ)诱发的幼鼠癫痫发作所激发的海马区神经元
凋亡的影响。方法利用光电镜技术观察癫痫幼鼠海马神经元的病理改变,TUNEL法检测凋亡细胞,免疫组织化
学法检测Bax和Bcl一2的表达情况。结果致痫对照组癫痫幼鼠海马CA-和CA。区大量神经元凋亡;药物治疗后
凋亡细胞数明显减少(P均有明显增加(P(P0.7;其余3组均约为1.0。结论石菖蒲和a一细辛醚可能通过增强Bcl一2表达,抑制幼鼠癫痈发作激发的海马神经
元凋亡。
关键词:石菖蒲;a一细辛醚;癫痫;苯巴比妥钠;凋亡
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2006)08—1196—04
EffectofAcorusgramineusanditactivecomponent(x-asaroneonapopt sis
ofhippocampalneuronsinepilepticyoungrats
YANGLi—binl,LIShu—lei2,HUANGYan—zhi3,WANGYu—hon94,LIANGJian—min4,ZHANGShu—qin4
(1.DepartmentofP diatrics,TheFirstHospitalofJilinUniversity,Changchun130021,China;2.Department
ofHistologyandEmbryology,SchoolofBasicMedicalSciences,JilinUniversity,Changchun130021,China;
3.ChildernHospitalofChangchunCity,Changchun130051,China;4.DepartmentofNeurology,
TheFirstHospitalofHarbinMedicalUniversity,Harbin150001,China)
Abstract:ObjectiveToxploreth ffectofAcorusgramineusanditsactivecomponenta-asaroneon
apoptosisfhippocampalneuronsinyoungratswithepilepsyinducedbypentylenetetrazol(PTZ).Me-
thodsThepathologicalchangesofhippocampalneuronswereobservedbylightmicroscopeandel ctronic
microscope.Theapoptoticc llsweredetectedbvTUNELandthexpressionofBaxandBcl一2wered tect—
edbyimmunohistochemistry.ResultsTherew renumerousapoptosisfh ppocampalneuronsi CAland
CA3regioninyoungratsofepilepsycontr01group.Aftermedication,thenumb rofapoptoticneuronswa
decreasedsignificantly(P<0.01).ThenumberofBcl-2orBaxpositivecellsofCAlandCA3regioninall
offourgroupofepilepticyoungratsinducedbyPTZwasincreasedobviouslycomparedwithnormalcon—
trolgroup(Pasaronegroupswasmorethanthatofepilepsycontrolgroupsignificantly(P<0.01).Butthenumberof
Baxpositivecellswasnomarkedlydifferenceamongtheachgroups.TheratioofBcl-2VSBaxwasap—
proximate6.0in pilepsycontrolgroup,0.7inphenobarbitalsodiumgroup,1.0inotherthreegroups.
ConclusionA.gramineusanda-asaronec uldpreventneuronsfromapoptosisinducedbyepileptica tackin
youngrats.
Keywords:AcorusgramineusSoland.;a—asarone;epilepsy;phenobarbitalsodium;apoptosis
研究发现,癫痫发作所致的早期脑损伤可能为
细胞坏死,而晚期脑损伤伴有程序性细胞死亡‘1|,尤
其在癫痫发作后一周时达高峰‘引。前期研究发现石
菖蒲和a一细辛醚能够有效抑制戊四氮(PTZ)诱发
收稿日期;2005一ll—02
基金项目:吉林省科技厅资助项目(20030430);吉林省中医药管理局资助项目(2004079)
作者简介:杨立彬(1968一),男,吉林省长春市人,医学博士,副教授,副主任医师,硕士生导师,主要从事儿科神经医学。
E—mail:yanglibinl968@tom.com
*通讯作者李树蕾
万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月·1197·
的幼鼠癫痫发作,逆转幼鼠多次惊厥发作对其行为
运动能力和空间学习记忆能力的损害,提示石菖蒲
及其主要成分a一细辛醚对癫痫幼鼠具有脑保护作
用[3]。本实验旨在从蛋白质和DNA水平探讨石菖
蒲及a一细辛醚对癫痫发作激发的幼鼠海马神经元
凋亡的影响,以进一步明确其作用机制。
1材料
1.1动物:3周龄Wistar幼鼠,体重35~40g(长
春市高新医学动物实验研究中心)。
1.2 试剂:石菖蒲冲剂(江阴天江药业有限公司,
批号0307113,每袋含石菖蒲根茎干燥粉末6g)。a一
细辛醚片剂(沈阳天维制药厂,批号030219,每片
含a一细辛醚30mg)。苯巴比妥钠片剂(上海新亚药
业有限公司,批号020608,每片含苯巴比妥钠30
mg)。戊四氮、兔抗大鼠Bcl一2抗体和Bax抗体
(Sigma公司),TUNEL凋亡细胞试剂盒(TBD.
Bio公司)。
1.3 仪器:Olympus光学显微镜,莱卡石蜡切片
机,日立H一600透射电镜。
2 方法
2.1 分组及给药:3周龄Wistar幼鼠ipPTZ60
mg/kg建立癫痫模型,按Racine分级[41判断模型是
否成功。癫痫模型幼鼠随机分为致痫对照组、苯巴比
妥钠组、石菖蒲组、a一细辛醚组,另设正常对照组,每
组各10只。采用ig给药,对照组给予生理盐水(每次
0.5mL),其余各组参考临床用药剂量及人和动物药
物剂量换算法,分别给予苯巴比妥钠18rag/(kg·
d)、石菖蒲2350rag/(kg·d)、d一细辛醚29mg/
(kg·d),每日2次。给药7d后,处死动物,取材
备用。
2.2 HE染色:4%多聚甲醛磷酸盐缓冲液灌注固
定,取大脑,常规石蜡包埋,连续切片,染色。
2.3透射电镜:每组随机选取3只幼鼠的海马,固
定后制作超薄切片。
2.4 TUNEL法:取HE染色切片的邻片,按照试
剂盒说明操作。
2.5 SABC法免疫组织化学检测:取TUNEL标
记切片的邻片。TUNEL法和SABC法,每张切片
分别观察脑海马CA。和CA。区5个高倍镜视野
(400×),计数TUNEL阳性和Bcl一2、Bax阳性细
胞数,以5个高倍视野中阳性细胞总数表示。每只动
物各取3张切片,取平均值。
2.6统计学处理:实验数据以z±S表示,依资料性
质分别进行F方差分析、t检验、q检验。
3 结果
3.1海马CA,和CA。区神经元微细结构改变:正
常对照组神经元细胞轮廓清晰,胞质丰富,嗜碱性,
细胞核圆,居中,核仁清楚。癫痫模型各组神经元界
限不清晰,胞膜皱缩,体积缩小,呈三角形或不规则
形;核浓缩深染,核仁消失;胞浆空化或浓缩变暗,呈
红色神经元表现;神经元周围出现空隙,神经元消失
后遗留“空穴”。其中致病组病变神经元最多,苯巴比
妥钠组和石菖蒲组神经元形态较a一细辛醚组略好。
3.2 海马CA。和CA。区神经元超微结构改变:正
常对照组神经元体积较大,胞质内各种细胞器形态
正常,核膜完整,核膜间隙清晰,核仁清楚。癫痫组神
经元形态异常,其中致痫组可见有大量暗细胞,神经
元体积缩小,细胞膜出现皱褶;核膜不完整、皱缩,核
膜间隙消失,染色质浓集、边集;胞浆电子密度增加,
可见较多自噬性空泡、肿胀的内质网和线粒体;神经
元之间的神经毡疏松。用药后,苯巴比妥钠、石菖蒲、
a一细辛醚组神经元上述病理改变有不同程度的改
善,结构趋于正常。
3.3 海马CA。和CA。区神经元凋亡:正常对照组
的幼鼠海马CA。和CA。区检测到少量TUNEL染
色阳性的凋亡细胞。癫痫发作后1周,幼鼠海马CA。
和CA。区检测到大量TUNEL染色阳性的凋亡细
胞。致痫组最多,与苯巴比妥钠、石菖蒲、a一细辛醚组
比较差异显著(P表1 PTZ致病幼鼠海马CA。和CA。神经元TUNEL阳性
细胞计数(;±s,雄一10)
Table1 NumberofTUNELpositivehippocampalneurons
ofCAlandCA3regioninyoungratswithepilepsy
inducedbyPTZ(;±s,拧一10)
组别
剂量/TUNEL阳性细胞数
(mg·kg一1) CAl CAa
与正常组比较:一Pd0.01;与致炳组比较:ooPd0.01
。。P<0.01VSnormalgroup:△△P<0.01口sepilepsygroup
3.4 海马CA。和CA3区神经元中Bcl一2和Bax的
表达:Bcl一2阳性细胞体积正常,核大而圆。Bax阳性
细胞主要有两种:一种细胞体积正常,核大而圆;另
一种细胞形态不规则,体积小,核固缩。正常对照组
Bel一2和Bax阳性细胞数量较少,其中Bax阳性细
胞以体积正常、核大而圆的细胞为主,Bel一2/Bax的
值约为6.0。癫痫发作后1周,PTZ致痫各组幼鼠海
万方数据
·1198· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月
马CA,和CA。区Bcl一2和Bax阳性细胞数量较正常
对照组均有明显增高(P胞增多尤为显著,并以体积较小、核固缩的细胞为
主,但是致痫对照、苯巴比妥钠、石菖蒲、a一细辛醚组
之间Bax阳性细胞数量差异无显著性,而苯巴比妥
钠、石菖蒲、a一细辛醚3组的Bcl一2阳性细胞数量均
较致痫对照组明显增多(P<0.01)。致痫对照组
Bcl一2/Bax的值约为0.7;苯巴比妥钠、石菖蒲、a一细
辛醚组Bcl一2/Bax的值均约为1.0,见表2和3。
表2 PTZ致瘸幼鼠海马CAl区Bcl一2和Bax阳性
细胞计数(;土s,n一10)
Table2 NumberofBcl一2andBaxpositivehippocampal
neuronsfCAlregioninyoungratswith
epilepsyinducedbyPTZ(i±s,珂一10)
与正常组比较:一P。。P表3 PTZ致瘸幼鼠海马CA3区Bcl一2和Bax
阳性细胞计数(z±S,咒一10)
Table3 NumberofBcl一2andBaxpositivehippocampal
neuronsofCA3regioninyoungratswith
epilepsyinducedbyPTZ(工±S,n一10)
剂量/ Bcl一2/
组别 Bcl一2 Bax
(rag·kg一1) Bax
正常 一
致痫 一
苯巴比妥钠 18
石莒蒲 2350
a一细辛醚 29
与正常组比较:一P<0.01I与致痫组比较:△△P。。P<0.01VSnormalgroup;△△P<0.01wepilepsygroup
4讨论
a一细辛醚是石菖蒲挥发油的主要成分,也是石
菖蒲发挥醒脑开窍和镇静、抗惊厥作用的主要活性
成分[5]。本实验探讨了a一细辛醚抗癫痫作用与神经
元凋亡的关系,为改善癫痫的预后开辟了一条新的
防治及干预途径。
Fujikawa等¨’73报道,癫痫发作所致的脑细胞
坏死具有细胞凋亡的特点,与本实验结果一致。治疗
组凋亡神经元数量较少,说明石菖蒲和a一细辛醚均
能有效抑制癫痫幼鼠海马神经元的凋亡,具有一定
的脑保护作用。这与石菖蒲提取液对脑缺血一再灌注
诱导的神经元凋亡的保护作用[83相吻合。
Bcl一2和Bax是Bcl一2基因家族中与细胞凋亡
关系密切的两个基因。低水平的Bcl一2广泛分布于
发育中和成熟的大鼠脑中,Bcl一2表达的上调反映了
一种保护神经元积极生存的机制。Bax广泛分布于
神经元,不仅能和Bcl一2形成二聚体抑制凋亡,而且
其自身还能形成二聚体诱导凋亡。Bax蛋白过度表
达时,Bax同源二聚体增多,细胞对诱导凋亡的刺激
因素更加敏感[9]。Bcl一2和Bax表达的比例决定了
细胞在受到凋亡刺激信号后是生存还是凋亡‘10]。
本研究结果显示,正常对照组海马区Bcl一2和
Bax阳性细胞很少。致痫组海马区Bax阳性细胞明
显增多,以体积小、核固缩的细胞为主,说明这些神
经元已经发生凋亡。Bcl一2阳性细胞随之代偿性增
多,细胞形态正常,但是较Bax阳性细胞数量少,结
果导致Bcl一2/Bax比值显著降低。药物治疗后,苯巴
比妥钠、石菖蒲、a一细辛醚组Bcl一2和Bax阳性细
胞均明显增多,Bax染色阳性细胞胞体趋于正常,
Bcl一2/Bax值上调。结果提示,癫痫发作可通过增强
Bax表达促进细胞凋亡;中药石菖蒲及a一细辛醚则
可能通过提高Bcl一2的表达,抑制癫痫诱导的神经
元凋亡。与石菖蒲相比,a一细辛醚组TUNEL阳性细
胞略少,提示其保护作用可能略强于石菖蒲。a一细辛
醚具有抗PTZ诱导的癫痫幼鼠海马神经元凋亡的
作用,为开辟a一细辛醚治疗癫痫的临床新用途提供
了理论依据。
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中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月·1199·
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黄蘑多糖对荷瘤小鼠化疗的减毒增效作用
马 岩1,张锐1,于小风2,曲绍春2,徐华丽2,睢大员2+
(1.吉林大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,吉林长春130021;
2.吉林大学药学院药理教研室.吉林长春130021)
摘要:目的研究黄蘑Hohenbueheliaserotina多糖对环磷酰胺(CTx)化疗H::荷瘤小鼠的减毒和增效作用。方
法建立小鼠体内移植性肝癌模型;小、中、大剂量治疗组分别ip黄蘑多糖提取物20、40、80mg/kg,连续给药10
d,测定荷瘤小鼠的生命延长率和化疗药物CTX的毒副作用以及黄蘑多糖对CTX的减毒和增效作用。同时检测黄
蘑多糖对淋巴细胞转化率、IL一2水平等免疫系统功能的影响。结果中、大剂量黄蘑多糖具有抑制肿瘤生长,延长
荷瘤小鼠的生存率的作用。与CTX伍用可发挥协同作用,提高抑瘤率(尸重、白细胞计数及免疫器官指数,与CTX阳性对照组比较均显示显著差异(|P与CTX伍用具有良好的减毒和增效作用,可增强荷瘤小鼠机体免疫力,提高淋转和IL一2的水平(P结论 黄蘑多糖作为生物反应调节剂可提高机体的免疫力,增强CTX的抗肿瘤作用,同时减轻CTX的毒性。
关键词:黄蘑多糖;环磷酰胺;减毒;增效
中图分类号:R286.91 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2006)08—1199一04
Decreasingtoxicityandsynergisticeffe tsofHohenbueheliaserot napolysaccharideext acts
totumor-bearingmicetreatedbycytoxan
MAYanl,ZHANGRuil,YUXiao—fen92,QUShao—chun2,XUHua—li2,SUIDa—yuan2
(1.DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology,SchoolofBasicMedicalScience,JilinUniversity,Changchun
130021,China;2.DepartmentofPh macology,SchoolofPharmacy,JilinUn versity,Changchun130021,China)
Abstract:ObjectiveTostudythtoxicity—decreasingandsyner isticeffectofHohenbueheliaserot na
p01ysaccharidesonH22micetreatedbycytoxan(CTX).MethodsThetumor—bearingmicemodelswith
Hepatoma一22wereestablishedandividedintothreegroups.H.serotinapolysaccharidesextractsweread—
ministeredwithdosagesof20,40,and80mg/(kg·d)throughipfor10d,respectivelyoobserveth ir
lifeprolongabler tes,thesideandtoxicreactionsofCTX,lymphocytetransformations,andIL一2levels.
ResultsThegrouptreatedwithlargeandmediumdosagesshowedH.serotinapolysaccharidescouln—
hibitthetumordevelopmentwithi creasingthesurvivalrate,havegoodsynergismandattenuationoftox—
icitywithCTX,enhancetheinhibitionongrowthofHepatoma(P<0.05,0.01),increasetheweight,
WBCcount,andimmunesystemindexoftumor—bearingmice(尸<0.05,0.01),stimulatetheim ne
system,andimprovelymphocytetransformationandIL一2levels(P<0.05,0.01).ConclusionAsbio—
logicalresponsemodifier,H.serotinapolysaccharidesc nincreasetheactivityofbodyimmunity,improve
theanti~tumoreffectsofCTX。andattenuatetheoxicityofCTXaswell.Theyshouldbestudiedanex—
ploitedfurtherly.
Keywords:polysaccharidesofHohenbueheliaerotina(Schrad.)Sing.;cytoxan(CTX);decreasing
toxicity;synergisticeffect
收稿日期:2005—12-22
基金项目:吉林省科技发展计划项目资助课题(20020803)
作者简介:马岩(1952),女,吉林长春人,教授,主要从事多糖抗肿瘤作用及机制研究。
Tel:(0431)5621905E—mail:mayan@email.jlu.edu.en.
*通讯作者雎大员Tel:(0431)5778520E—mail:dayuansui@163.com
万方数据
石菖蒲及其有效成分α-细辛醚对癫痫幼鼠脑海马神经元凋亡
的影响
作者: 杨立彬, 李树蕾, 黄艳智, 王宇虹, 梁建民, 张淑琴, YANG Li-bin, LI Shu-lei
, HUANG Yan-zhi, WANG Yu-hong, LIANG Jian-min, ZHANG Shu-qin
作者单位: 杨立彬,梁建民,YANG Li-bin,LIANG Jian-min(吉林大学第一医院,儿科,吉林,长春,130021)
, 李树蕾,LI Shu-lei(吉林大学基础医学院,组胚教研室,吉林,长春,130021), 黄艳智
,HUANG Yan-zhi(长春市儿童医院,吉林,长春,130051), 王宇虹,张淑琴,WANG Yu-
hong,ZHANG Shu-qin(哈尔滨医科大学附属第一临床医院,神经科,黑龙江,哈尔滨,150001)
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2006,37(8)
被引用次数: 10次

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