全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 9期 2016年 5月

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消岩汤对 Lewis肺癌小鼠化疗后骨髓抑制的影响
杨佩颖 1，李小江 2，孔凡铭 2，张 欣 2，苗耀东 1，贾英杰 2*
1. 天津中医药大学，天津 300193
2. 天津中医药大学第一附属医院，天津 300381
摘 要：目的 通过荷瘤动物实验，从外周血血细胞比例、免疫细胞亚型及细胞因子相关指标等方面研究消岩汤对骨髓抑制
的影响。方法 Lewis肺癌细胞接种小鼠，荷瘤小鼠 ip环磷酰胺（CTX）100 mg/(kg·d)，连续 3 d，制备荷瘤小鼠化疗后骨
髓抑制模型。成模小鼠随机分为模型组、消岩汤组、吉粒芬组、消岩汤与吉粒芬联用组（联用组），每组 10只，另取正常小
鼠 10只为对照组，消岩汤组 ig消岩汤水煎液 18.2 g/(kg·d)，分 2次给药，连用 7 d，吉粒芬组 sc吉粒芬 12 μg/kg，连用 7 d，
联用组为两药合用。观察各组小鼠一般血常规、外周血免疫细胞亚群、血清中白细胞介素-3（IL-3）、白细胞介素-6（IL-6）、
促红细胞生成素（EPO）、粒细胞巨噬细胞刺激因子（GM-CSF）的变化。结果 与对照组比较，模型组小鼠外周血白细胞
（WBC）、红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）、血小板数量（PLT）降低（P＜0.05），尤以WBC减少为主（P＜0.05）；模型组
CD3+CD8+T、CD4+CD8+T、CD4/CD8明显降低（P＜0.05）；模型组小鼠血清中 IL-3、IL-6 水平明显降低（P＜0.05）。与模型
组比较，消岩汤组和吉粒芬组WBC数值均增加（P＜0.05），消岩汤组、联用组 CD3+CD8+T、CD4+CD8+T明显提高（P＜0.05），
各组 NK细胞比较无显著差异（P＞0.05），消岩汤组和联用组显著升高小鼠血清中 IL-3、IL-6、EPO、GM-CSF水平，吉粒
芬组显著升高 IL-3、IL-6水平（P＜0.05）。与吉粒芬组比较，联用组小鼠外周血WBC增加更明显（P＜0.05），且 RBC、PLT
增加更显著（P＜0.05），Treg细胞明显减少（P＜0.05）。结论 消岩汤能改善化疗后骨髓抑制小鼠的外周血象，以及 T细胞
亚群的免疫功能，改善化疗后骨髓抑制程度，且消岩汤与吉粒芬联用效果更佳，其机制可能与促进小鼠血清造血因子 IL-3、
IL-6、EPO、GM-CSF的生成，从而缓解化疗导致的骨髓抑制程度有关。
关键词：消岩汤；Lewis肺癌；化疗；骨髓抑制；免疫功能；白细胞介素-3；促红细胞生成素；粒细胞巨噬细胞刺激因子
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2016)09 - 1567 - 05
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.09.020
Effect of Xiaoyan Decoction on bone marrow suppression of mice with Lewis
lung cancer
YANG Pei-ying1, LI Xiao-jiang2, KONG Fan-ming2, ZHANG Xin2, MIAO Yao-dong1, JIA Ying-jie2
1. Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China
2. First Teaching Hospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine Tianjin 300381, China
Abstract: Objective To study the effects and mechanism of Xiaoyan Decoction on bone marrow suppression in mice from aspects of
peripheral blood cell ratio, immune function, and cytokines. Methods A mouse model of bone marrow suppression was established.
Fifty mice were randomly divided into five groups (n = 10): control group, model group, Xiaoyan Decoction group, rhG-CSF group,
and Xiaoyan Decoction combined with rhG-CS group. Lewis-tumor mice in Xiaoyan Decoction group were ig given Xiaoyan
Decoction 18.2 g/(kg·d) twice daily, for 7 d. Lewis-tumor mice in rhG-CS group were treated by sc injection of rhG-CSF. The routine
blood test, immunological functions of peripheral blood and cytokines (IL-3, IL-6, EPO, and GM-CSF) in serum were detected.
Results The bone marrow suppression model was successfully established. Compared with control group, the levels of WBC, RBC,
Hb, and PLT in peripheral blood of model group were decreased, especially in WBC (P < 0.05). There is a remarkable increase in the
level of WBC in Xiaoyan Decoction group and rhG-CS group as compared with model group (P < 0.05). Contrasted with model group,
a significant increasing of CD3+CD8+T cells and CD3+CD8+cells on peripheral blood lymphocytes was observed in Xiaoyan Decoction

收稿日期：2016-02-26
基金项目：国家自然科学基金资助项目（81273937）；天津市科委自然科学基金青年项目（13JCQNJC10900）；天津市抗癌重大专项攻关计划
（12ZCDZSY15800）
作者简介：杨佩颖（1982—），女，主治医师，博士在读，研究方向为中西医结合肿瘤学。Tel: 18602286127 E-mail: 64241781@qq.com
*通信作者 贾英杰（1960—），男，主任医师，博士，教授，研究方向为中西医结合肿瘤学。Tel: (022)27986556 E-mail: jiayingjie1616@sina.com
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group and combined group. The level of Treg cell in combined group was significantly less than that of Treg cell in rhG-CS group (P <
0.05). And there was no difference in NK cell level among all these groups (P > 0.05). The concentration of IL-3 and IL-6 was
dramatically reduced in model group compared with control group (P < 0.05). And it showed an obviously increasing trend in IL-3,
IL-6, EPO, and GM-CSF levels in Xiaoyan Decoction group and combined group, as well as an increase in IL-3, IL-6 levels in rhG-CS
group (P < 0.05). Conclusion It shows that Xiaoyan Decoction combined with rhG-CS can improve the level of WBC and
immunological functions of peripheral blood in bone marrow suppression model mice. And the effect of combination of both drugs is
more significant. This might be related to the effect of promoting the production of serum hematopoietic regulator such as IL-3, IL-6,
EPO, and GM-CSF, and relieving chemotherapy-induced bone marrow suppression.
Key words: Xiaoyan decoction; Lewis lung cancer; chemotherapy; bone marrow suppression; immune function; IL-3; EPO; GM-CSF

化学治疗是治疗恶性肿瘤的主要手段之一，可延
缓肿瘤的进展从而延长患者的生存期。但是化疗引起
的毒副反应却是困扰绝大多数患者的主要原因。其中
骨髓抑制最为常见[1]，约 90%以上的化疗药物均可导
致不同程度的骨髓抑制，包括外周血单系或多系的下
降，严重时不仅可中断疗程影响疗效，甚至可能会造
成严重感染、出血等并发症，甚至导致死亡。西医针
对化疗后骨髓抑制的治疗方法多采用各种造血细胞
集落刺激因子、成分输血及造血干细胞移植等，效果
良好，但费用昂贵，且副反应较多。在中医辨证论治
的理论指导下，用于治疗化疗引起的骨髓抑制的传统
中药，主要以补虚类药物为主，补虚药又分为补气药、
补血药、补阴药、补阳药 4类，其次为活血化瘀药[2]。
治疗原则当以扶正补益为主，以补气养血、滋补肾精
为法，总以补益为要，达到补气、养血、滋阴、扶正
之目的，从而促进、改善骨髓造血功能，升高白细胞，
进而增强免疫功能[3]。近年来随着应用中医药防治化
疗后骨髓抑制逐渐受到重视，中医药拮抗化疗性骨
髓抑制的实验研究也在不断深入，在阐明其作用机
制时，不仅涉及了外周血血象，而且深入到造血因
子、骨髓微环境等各个血液学角度。本研究以扶正
解毒祛瘀法为原则的消岩汤为研究对象，实验研究
表明消岩汤具有抗肺癌作用，可以诱导肺腺癌A549
细胞凋亡[4-5]。方中黄芪、太子参滋阴益气，扶正抗
癌；夏枯草、生牡蛎、白花蛇舌草清热解毒、软坚散
结；姜黄、郁金行气散结、活血祛瘀；蜂房搜剔络脉
中之瘀毒。前期临床及基础研究表明，消岩汤于化疗
前应用能有效缩小瘤体大小，增加抑瘤率，显著改善
患者生活质量，增强患者的免疫功能，其中于化疗前
7 d应用消岩汤效果最佳[6-8]。本实验通过荷瘤动物实
验，从外周血血细胞比例、免疫功能及细胞因子相关
指标等方面研究消岩汤对荷瘤小鼠化疗后骨髓抑制
的影响，分析消岩汤治疗骨髓抑制的机制，为进一步
研究消岩汤缓解骨髓抑制临床研究奠定基础。
1 材料
1.1 实验动物
SPF级健康近交系 C57BL/6小鼠，50只，雌性，
6～8周龄，体质量（20±2）g，由中国人民解放军
军事医学科学院实验动物中心提供，动物合格证号
SCXK-（军）2012-0004。饲养于天津医科大学肿瘤
医院实验动物中心，动物分笼饲养，自由摄食、饮
水，室温（20±2）℃，湿度 20%～40%。
1.2 细胞
小鼠 Lewis肺癌细胞，天津医科大学肿瘤医院
免疫室保存传代。
1.3 主要试剂
DMEM培养液及小牛血清购自 Hyclone公司；
血细胞稀释液、红细胞裂解液、白细胞介素 -3
（IL-3）、白细胞介素-6（IL-6）、促红细胞生成素
（EPO）、粒细胞巨噬细胞刺激因子（GM-CSF）ELISA
kit 试剂盒均购自美国 Biolegend 公司；流式抗体
PerCP-CD3、 FITC-CD3、 PerCP-CD4、 PE-CD4、
FITC-CD8均购自美国 Biolegend公司。
1.4 药物
消岩汤组方药材为黄芪 30 g、太子参 15 g、郁
金 10 g、姜黄 10 g、夏枯草 15 g、白花蛇舌草 15 g、
生牡蛎 30 g、蜂房 15 g。消岩汤水煎液自制，生药
共计 140 g先用凉水浸泡 30 min，用水量为生药量
的 8倍，武火煎沸后，文火煎 30 min，滤出药液；
再加 6倍量水煎沸后文火煎 20 min，滤出药液，合
并 2次煎液，浓缩至 300 mL，生药量为 0.42 g/mL。
重组人粒细胞集落刺激因子注射液（吉粒芬），每
支 75 μg，0.3 mL，杭州九源基因工程有限公司；注
射用环磷酰胺，每支 200 mg，江苏恒瑞医药股份有
限公司生产，溶于 10 mL生理盐水中。
2 方法
2.1 小鼠 Lewis肺癌化疗后骨髓抑制模型制备
Lewis肺癌瘤株接种于 C57BL/6近交系小鼠右
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腋部皮下 14 d，无菌剥离荷瘤小鼠皮下瘤块，将瘤
组织剪碎，研磨，用生理盐水稀释，调整细胞浓度
为 1×107个/mL，于小鼠右腋部 sc 0.2 mL/只制备
Lewis 肺癌小鼠模型。而后根据相关报道[9]和课题
组前期的实验经验，制备荷瘤小鼠化疗后骨髓抑制
模型。具体操作为荷瘤小鼠 ip环磷酰胺（CTX）100
mg/(kg·d)，连续 3 d均在相同时间内注射，第 3天
停药后 4 h模型即成（依据 CTX药动学过程，4 h
后药物活性消失）。对照组按照 0.02 mL/g用药量，
ip同体积生理盐水。
2.2 实验分组及给药方法
50只小鼠，10只为对照组，另外造模的 40只小
鼠随机分为模型组、消岩汤组、吉粒芬组、消岩汤与
吉粒芬联用组（联用组），每组 10只。消岩汤组给予
消岩汤水煎液 18.2 g/(kg·d)[10]，每次 0.2 mL，每天分
2次 ig给药，连续 7 d；吉粒芬组 sc吉粒芬 12 μg/kg，
连用 7 d；联用组 ig消岩汤及 sc吉粒芬，连续 7 d。
2.3 观察指标
各组小鼠末次给药 1 h后称体质量，摘眼球取
血。取 2 mL全血用 EDTA钾（1.5～2.2 mmol/L）
抗凝，用全自动血细胞分析仪测定外周血白细胞总
数（WBC）、红细胞数（RBC）、血红蛋白量（Hb）、
血小板数（PLT）。采集各组小鼠血液 1 mL，分别
加入含肝素钠的离心管中，1 000 r/min离心 10 min，
收集各组血清 0.1 mL，加入 1 mL 10%溶血素，轻
轻摇匀，静置 10 min，每管加 2 mL的 PBS液洗涤
2 次，分别加入相应的荧光素标记抗体，即 FITC-
抗 CD3、PE-抗 CD4和 PE-抗 CD8，于 4 ℃，避光
反应20 min，采用流式细胞仪检测CD3+T细胞数量、
CD4+和 CD8+T细胞亚群分类、调节性 T细胞（Treg）
数量、自然杀伤细胞（NK）数量。剩余血液取血
清，用 ELISA方法测定各组小鼠血清中 IL-3、IL-6、
EPO和 GM-CSF水平。
2.4 统计学分析
采用 SPSS 22统计软件处理，所有实验数据均
用 ±x s表示，用 One-way ANOVA比较多组间均值
差异，q检验比较两组间差异显著性。
3 结果
3.1 血常规分析
如表 1所示，与对照组比较，模型组小鼠外周
血 WBC、RBC、Hb、PLT 数值降低，尤以 WBC
减少为主（P＜0.05），说明荷瘤小鼠经过化疗后出
现骨髓抑制；与模型组比较，消岩汤组和吉粒芬组
小鼠外周血 WBC 均显著增加（P＜0.05），联用组
小鼠外周血WBC增加较单用组更明显（P＜0.05）。
吉粒芬组小鼠外周血 RBC、Hb、PLT均较模型组显
著增加（P＜0.05），联用组较吉粒芬组 RBC、PLT
增加更显著（P＜0.05）。
表 1 各组小鼠血常规指标比较 ( x±s, n = 10)
Table 1 Comparison on routine blood index of mice in each group ( x±s, n = 10)
组别 剂量/(g·kg−1·d−1) WBC/(×109·L−1) RBC/(×1012·L−1) Hb/(g·L−1) PLT/(×109·L−1)
对照 — 9.93±0.31 10.09±0.12 159.00± 8.54 445.00± 9.54
模型 — 2.18±0.20* 8.48±1.15* 127.00± 3.61* 309.33± 9.61*
消岩汤 18.2 4.25±0.06*# 8.10±1.31* 130.33±13.78* 324.00±33.29*
吉粒芬 1.2×10−5 7.96±0.25# 9.49±0.80# 150.33± 5.51# 344.00±11.14*#
联用 18.2＋1.2×10−5 9.49±0.30#△ 10.48±1.17#△ 157.00±12.53# 420.67±18.88#△
与对照组比较：*P＜0.05；与模型组比较：#P＜0.05；与吉粒芬组比较：△P＜0.05，下同
*P < 0.05 vs control group; #P < 0.05 vs model group; △P < 0.05 vs rhG-CSF group, same as below
3.2 外周血免疫细胞亚群分析
如表 2 所示，与对照组比较，模型组与吉粒芬
组 CD3+CD8+T、CD4+CD8+T、CD4/CD8明显降低，消
岩汤组 Treg 明显减少，差异均显著（P＜0.05），说
明模型小鼠免疫系统受到影响；在 CD3+CD8+T、
CD4+CD8+T 方面，与模型组比较，消岩汤组、联用
组明显升高（P＜0.05），吉粒芬组无显著作用（P＞
0.05）。与吉粒芬组比较，联用组 Treg 细胞明显减
少，差异显著（P＜0.05）。各组 NK 细胞比较差异
不显著（P＞0.05）。
3.3 细胞因子水平比较
如表 3所示，与对照组比较，模型组小鼠血清
中 IL-3、IL-6水平明显降低（P＜0.05）；与模型组
比较，消岩汤组、联用组均能升高 IL-3、IL-6、EPO、
GM-CSF水平（P＜0.05），吉粒芬组显著升高 IL-3、
IL-6水平（P＜0.05）。
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表 2 各组小鼠外周血免疫细胞亚群比较 ( x±s, n = 10)
Table 2 Comparison on immune cell subsets in peripheral blood of mice in each group ( x±s, n = 10)
组别 剂量/ (g·kg−1·d−1) CD3+CD8+T/% CD4+CD8+T/% (CD4/CD8)/% Treg/% NK/%
对照 — 9.84±0.61 8.92±0.12 1.05±0.02 0.18±0.01 2.22±0.01
模型 — 5.43±0.84* 5.30±0.17* 0.52±0.31* 0.15±0.01 2.06±0.06
消岩汤 18.2 9.68±0.31# 9.34±0.46# 0.56±0.05 0.14±0.01* 2.13±0.02
吉粒芬 1.2×10−5 5.16±0.30* 5.52±0.19* 0.65±0.10* 0.18±0.01 2.25±0.06
联用 18.2＋1.2×10−5 9.70±0.23# 8.89±0.52# 0.70±0.05 0.10±0.02△ 2.14±0.02
表 3 各组小鼠血清细胞因子水平 ( x±s, n = 10)
Table 3 Changes on serum cytokine of mice in each group ( x±s, n = 10)
组别 剂量/(g·kg−1·d−1) IL-3/(pg·mL−1) IL-6/(pg·mL−1) EPO/(pg·mL−1) GM-CSF/(pg·mL−1)
对照 — 180.65±1.07 162.93±3.32 33.54±1.52 260.19± 4.00
模型 — 129.91±1.25* 113.30±5.79* 29.60±0.72 194.67± 5.26
消岩汤 18.2 167.33±8.88*# 150.48±0.69# 36.27±0.86*# 242.21±10.40*#
吉粒芬 1.2×10−5 140.76±4.94*# 133.41±1.91*# 28.18±0.32* 210.65±10.61*
联用 18.2＋1.2×10−5 178.58±2.27# 181.36±6.01*# 25.02±1.84# 265.93± 2.29#

4 讨论
骨髓抑制是化疗常见的毒副反应，常引起被动
减量或停药，因此骨髓抑制被认为是化疗成功与否
的关键。除激素、博来霉素、L-门冬酰胺酶以外，
大部分抗癌药物均会引起不同程度的 WBC 下降、
PLT 减少以及贫血等，其中以 WBC 为主，又以粒
细胞减少为著[11]。基因重组人粒细胞集落刺激因子
（ rhG-CSF）和基因重组巨噬细胞集落刺激因子
（rhGM-CSF）是目前常见的两种造血细胞集落刺激
因子。研究[12]表明 rhG-CSF参与化疗后骨髓抑制的
治疗，可明显缩短患者 WBC 数目恢复至正常水平
的时间。李娇等[13]回顾性调查天津医科大学肿瘤医
院进行多西紫杉醇 75 mg/m2，表柔比星 65 mg/m2
与环磷酰胺 500 mg/m2（TEC）化疗方案的浸润性
乳腺癌患者发现，与第 1个周期末次给予化疗药后
24～48 h内未给予 rhG-CSF的患者相比，预防性给
予 rhG-CSF的患者外周血WBC＜4.0×109/L的发生
率和中性粒细胞绝对值（ANC）＜2.0×109/L的发生
率明显降低，化疗延迟率和延迟时间明显降低，以
及发热性中性粒细胞减少症（FN）的发生率和用药
后不良反应均显著减低，差异有统计学意义（P＜
0.05）。并认为对于浸润性乳腺癌患者，第 1周期化
疗后 24～48 h内预防性给予 rhG-CSF，能降低白细
胞减少症的发生，减轻骨髓抑制的程度及持续时
间，降低 FN的发生风险，且能减少 rhG-CSF用药
不良反应的发生。雷双根等[14]认为 rhG-CSF治疗乳
腺癌术后化疗后骨髓抑制，能有效控制肿瘤术后化
疗后骨髓抑制的发生，减少感染机会，能保障化疗
的顺利进行。临床防治骨髓抑制较常用细胞因子，
虽然作用迅速，但维持时间较短，且易引起发热、
骨痛等不良反应，同时加强了化疗药物引起骨髓细
胞损害、刺激恶性细胞生长的可能性[15]。
现代中医研究认为，化疗所致骨髓抑制是恶性
肿瘤在人体虚损的基础上再外加化疗药物带来的
“毒邪”侵犯，故更耗伤人体正气，导致脏腑亏虚、
气血两虚。以扶正解毒祛瘀法为原则的消岩汤，其
中黄芪、太子参、夏枯草、生牡蛎、白花蛇舌草、
姜黄、郁金、蜂房等组成可以益气扶正，解毒祛瘀。
近年来随着应用中医药防治化疗后骨髓抑制逐渐
受到重视，中医药拮抗化疗性骨髓抑制的实验研究
也在不断深入。在 CD3+CD8+T、CD4+CD8+T方面，
与模型组相比，消岩汤组、联用组 CD3+CD8+T、
CD4+CD8+T 明显提高，吉粒芬组无显著差异（P＞
0.05）。T淋巴细胞亚群数量和比率的动态平衡是一
个复杂的过程，其调节机制并不十分清楚，而 CD4+T
和 CD8+T 淋巴细胞的失调是许多疾病的主要表现
特征。CD4+是辅助性 T细胞表面的标志分子，一般
认为 CD4+Th细胞可以分泌 IL-2、IL-4、IL-5、IL-10、
γ干扰素（IFN-γ）等细胞因子，可诱导和增强细胞
和体液免疫应答；CD8+T细胞是杀伤性 T细胞表面
的标志分子，包括抑制性 T淋巴细胞和杀伤性 T淋
巴细胞，可以分泌抑制因子，抑制细胞毒性 T细胞
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（CTL）和 B 淋巴细胞起到负调节作用。本研究发
现与吉粒芬组比较，联用组 Treg细胞明显减少，提
示消岩汤有可能影响了 Treg细胞的表达，进而发挥
免疫调节作用。Treg 细胞可以识别抑制自身肿瘤
细胞的效应细胞的发育和活化，在介导机体肿瘤免
疫耐受中起着重要作用，多项研究也表明，Treg
细胞的数量与肿瘤的预后呈负相关[16-17]。IL-3、
GM-CSF是造血干细胞增殖分化的调节因子，通过
与靶细胞表面的受体结合传递生长、分化信号，调
控造血干细胞生存并向各系血细胞分化成熟[18-19]。
许淑芬等 [20]研究表明中药能够刺激人 IL-3、
GM-CSF的表达，并相互协同作用，从多途径、促
进造血干细胞的增殖与分化。IL-6不仅能够刺激粒
系-单核细胞系集落形成，还可协同促红细胞因子促
进红细胞的形成，同时对巨核细胞成熟释放血小板
也有重要影响[21]。早期红系祖细胞（BFU-E）的增
殖受 EPO、IL-3、巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）
等多种因子的调控，晚期红系祖细胞（CFU-E）则
主要受 EPO 的调节。EPO 可直接作用于激活的 B
细胞，促进 B细胞增殖。因此，本研究采用 Lewis
肺癌小鼠骨髓抑制模型，结果表明消岩汤联合吉粒
芬能改善骨髓抑制小鼠的外周血象，以及 T细胞亚
群的免疫功能，改善化疗后骨髓抑制程度，这可能
与其促进小鼠血清造血因子 IL-3、IL-6、EPO、
GM-CSF的生成，发挥调节、促进骨髓造血功能的
作用，从而缓解化疗导致的骨髓抑制程度有关。
参考文献
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