全 文 ：·1796· 中草喃 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第12期2006年12月
表8转移率试验结果(席一3)
Table8 Transferringrate(一一3)
备多采用水提法、水醇法、稀醇提取法、石硫法、异戊
醇萃取法、醋酸乙酯萃取法等，这些方法都存在着不
同程度的缺点。本实验通过大孔吸附树脂法对金银
花中总有机酸分离纯化进行了研究，结果表明，本法
具有经济、简单、安全、适合工业大生产等优点，同时
总有机酸转移率高，所得干浸膏中以绿原酸计总有
机酸的量高达64．26％，满足中药5类新药中有关
有效部位的量应高于50％的规定，为金银花以有效
部位为基础的单方制剂的研究和开发提供参考。
References：
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蒲黄炭饮片炮制工艺的规范化研究
严 辉，陈佩东，丁安伟
(南京中医药大学药学院，江苏南京210046)
摘 要：目的 确定蒲黄炭饮片的最佳炮制工艺。方法 采用高效液相色谱法定量总黄酮，结合正交设计对蒲黄炭
的炮制工艺进行研究。总黄酮测定的色谱条件为WatersNove—ParkC18色谱柱(150mm×3．9mm，4肛m)；流动相：
甲醇一四氢呋喃一0．05％三氟乙酸水溶液(16：24：60)；体积流量：0．8mL／min；柱温：30℃，检测波长：360nm。结果
蒲黄炭炮制的最佳工艺为控制温度210℃，炒制8min。结论选择的最佳炮制工艺对于蒲黄炭的制备较为合理。
关键词：蒲黄炭；总黄酮；炮制；正交试验
中图分类号：R284．2；R286．02文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2006)12—1796—03
StandardizationofprocessingmethodforPollenTyphaeCarbonisatus
YANHui，CHENPei—dong，DINGAn—wei
(SchoolfPharmacy，NanjingUniversityofTraditionalChineseMedicine，Nanjing210046，China)
Abstract：ObjectiveToestablishoptimumprocessingmethodforPollenTyphaeCarbonisatus．
MethodProcessingmethodwastudiedbyorthogonaltestndthetotalflavonesw redeterminedby
HPLC．ConditionsofHPLCusedtodeterminethetotalflavoneswere：WatersNove—ParkC1R(150mmX
3．9mm，4扯m)，mobilephas ：MeOH—THF一0．05％TFT(16：24：60)，flowrate：0．8mL／min，column
temperature：30℃，detectionwavelength：360nm．ResultsTheoptimumprocessingmethodwaskir—
bakedfor8minat210℃．ConclusionTheptimizedprocessingmethodisavailablefortheprocessingof
PollenTyphaeC rbonisatus．
Keywords：PollenTyphaeCarbonisatus；totalflav nes；processingmethod；orthogonaltest
蒲黄为香蒲科植物水烛香蒲Typhaangustifo—
liaL．、东方香蒲T．orientalisPresl或同属植物的
干燥花粉。《神农本草经》将其列为上品，味甘、微辛，
性凉，有凉血止血、活血祛瘀、止痛、利尿等功效，主
治血瘀所致经闭、痛经，产后瘀滞腹痛，跌打损伤和
各种出血证。蒲黄的炮制方法有蒸、焙、炒黄、纸包
炒、炒黑等，其中以炒黄、炒炭为主。现代对蒲黄的炮
制方法有炒炭、炒黄、酒炒、醋炒等。《中国药典92005
收稿日期：2006—03—23
基金项目：科技部“十五”攻关课题(2001BA701A55—27)
作者简介：严辉(1980一)，男，江苏扬中人，助教，硕士，主要研究方向为中药资源开发及质量标准研究。
Tel：13512537853E—mail：aplus6798@163．tom
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第12期2006年12月·1797·
年版仅收载有生蒲黄和蒲黄炭两种饮片，且蒲黄炭
无检测标准[1]。本课题组通过药效学实验筛选得出
蒲黄炭中总黄酮是其止血作用的主要活性部位。故
本实验以总黄酮为指标，采用高效液相色谱测定水
解后总黄酮的方法，结合正交设计对蒲黄炭的炮制
工艺进行了研究，筛选出蒲黄炭炮制的最佳条件。
1仪器与材料
Model8868红外线温度测温器(台湾衡欣科技
股份有限公司)；FA一1004电子分析天平(3z海天
平仪器厂)；日本岛津一loA高效液相色谱系统；
SPD一10A紫外检测器；HW2000工作站。
蒲黄药材购自江苏南京，经本校中药鉴定教研
室吴启南教授鉴定为香蒲科植物水烛香蒲T．口咒一
gustifoliaL．的干燥花粉。异鼠李素(批号110860—
200205)、槲皮素(批号10081—9905)、山柰素(批号
100861—200303)对照品购自中国药品生物制品检定
所；其余试剂均为分析纯。
2方法与结果
2．1炒制蒲黄炭的因素水平的确定：根据文献，蒲
黄炭制备工艺中的影响因素有锅的品质，如铁锅、铜
锅还有铝锅，炒制温度与炒制时间。在实验设计时考
虑到蒲黄炭传统工艺中常用铁锅，且铁元素对人体
影响较小，又适合工厂生产，且成本较低，故确定锅
的品质为铁锅；因此选择炒制温度与炒制时间为考
察因素，各因素相应安排了3个水平进行试验(表
1)，选用I。。(34)正交表安排试验。
表1因素及水平
Table1 Factorsandlevels
2．2炒制蒲黄炭的工艺：药材投料量为100g，铁锅
炒制，以数字式红外线测温仪测定铁锅温度，调整液
化气火力大小控制温度。共炒制得9份蒲黄炭样品，
各样品性状见表2。
2．3总黄酮的测定
2．3．1色谱条件：WatersNove—Park色谱柱(150
mm×3．9mm，4肛m)，流动相为甲醇一四氢呋喃一
0．05％三氟乙酸水溶液(16：24：60)，体积流量
0．8mL／min)，柱温30℃，检测波长360nm。
2．3．2对照品溶液的制备：取120℃减压干燥至恒
重的槲皮素、山柰素、异鼠李素对照品适量，精密称
定，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得分别
表2样品性状
Table2 Charactersofsamples
样品 成品性状
浅褐色粉末，气焦香，味微涩
棕褐色粉末，气焦香，味微涩
深褐色粉末，气焦香，味微涩
棕褐色粉末，气焦香，味微涩
黑褐色粉末，气焦香，味微疆
黑褐色粉末，气焦香，味微涩
黑褐色粉末，气焦香，味微涩
黑色粉末，气焦香，味微涩
黑色粉末，气焦香，味微涩
含约槲皮素、山柰素、异鼠李素10、15、60ffg／mL的
混合对照品溶液。
2．3．3供试品溶液的制备：精密称取样品约0．5g
(同时另取本品按《中国药典92005年版一部附录IX
H第一法测定水分)，置250mL烧瓶中，精密加入
甲醇一25％盐酸(4；1)混合液100mL，密塞，称质
量，回流1h，取出，放冷，称质量，以甲醇补足损失
的质量，摇匀，滤过，取续滤液用0．45肛m滤膜滤
过，作为供试品溶液。
2．3．4标准曲线的绘制：分别精密吸取槲皮素、异
鼠李素、山柰素对照品适量，加甲醇制成含0．178、
0．992、0．266mg／mL的溶液作为混合对照品储备
液。分别吸取混合对照品储备液0．3、0．6、1．2、2．4、
4．8、9．6mL稀释定容至10mL，摇匀，分别精密吸
取上述溶液20肛L，注入高效液相色谱仪，以进样质
量对峰面积进行线性回归，计算回归方程。槲皮素：
Y一1．242×107X一9．884×103，r=0．99993，线性
范围：0．1068～3．4176弘g；异鼠李素：Y一8．472×
106X一1．672×104，r=0．99983，线性范围：
0．5952～19．0464弘g；山柰素：Y=1．493×107X一
2．659×104，r=0．99983，线性范围：0．1596～
5．1072 fig。
2．3．5精密度试验：精密吸取混合对照品溶液，按上
述条件进样，连续6次，结果槲皮素、异鼠李素、山柰素
峰面积的RSD依次为0．31％、0．38％、0．45％。
2．3．6稳定性试验：同一份供试品溶液连续测定了
24h，结果表明，3种黄酮苷元在24h内稳定，槲皮
素、异鼠李素、山柰素峰面积的RSD依次为
1．50％、0．57％、1．97％。
2．3．7重现性试验：取同一样品6份，制得供试品
溶液，测定，计算得槲皮素、异鼠李素、山柰素质量分
数的RSD依次为2．07％、0．90％、2．57％。
2．3．8 回收率试验：精密称取含槲皮素0．76rag／
g、异鼠李素4．06mg／g、山柰素1．14mg／g的样品
万方数据
·1798· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第12期2006年12月
约0．25g，加入混合对照品储备液(槲皮素0．178
mg／mL、异鼠李素0．992mg／mL、山柰素0．266
mg／mL)1．2、1．0、0．8mL，制备供试品溶液，测定，
计算回收率。结果槲皮素的平均加样回收率为
98．53％，RSD为2．10％；异鼠李素的平均加样回收
率为101．38％，RSD为1．86％；山柰素的平均加样
回收率为98．51％，RSD为1．37％。
2．3．9样品测定：取9份样品，制备供试品溶液，进
样测定，用标准曲线分别计算出样品中槲皮素、异鼠
李素、山柰素的量，再按总黄酮量一(槲皮素+异鼠
李素+山柰素)×2．51计算，即得总黄酮的量，色谱
图见图1。
A B
2
， 8
J， ；／＼．是 ㈧k． j。／Li厂丁i百i可丌Fi酉而了i百1汀行砭订耵丽
t／min
1一槲皮素 2一异鼠李素 3一山柰素
1-quercetin2- sorahmnetin3-kaempferol
图1 混合对照品(A)和蒲黄炭(B)的HPLC图谱
Fig．1HPLCChromatogramsofmixedreferencesub—
stance(A)andPolleTyphaeCarbonisatus(B)
2．4正交试验设计及结果：见表3。有关试验
数据及其计算分析结果见表4。
表3正交试验结果
Table3 Resultsoforthogonaltest
方差来源
A
B
误差(C+D)
离差平方和 自由度
170．85l30 2
26．6971 2
4．19299 4
方差
85．4256 0
13．348590
1．048248
F值 显著性
81．49378P<0．01
12．73419P<0．05
Fo．05(2，4)=6．94Fool(2，4)=18．00
可见，因素A和B对试验结果有显著的影响，
K，>K：>K。，故因素A选择水平1，即选择加热温
度为210℃；K：>K，>K。，故因素B选择水平2，即
选择炒制时间为8rain。
2．5 验证试验：蒲黄炭炮制的最佳工艺为炒制温度
控制在210℃，炒制时间为8rain。重复最佳工艺，
得到蒲黄炭样品中总黄酮的量为12．18mg／g。
3讨论
目前蒲黄炭的炮制并无统一、规范的工艺要求，
其火候掌握完全依药工技术而定，质量评价亦多是
依靠外观性状指标。由此导致目前炮制工艺无统一
规范质量标准，各地差异较大。因此急需通过实验，
逐步统一规范。本课题组通过药理筛选及定量测定
相结合的方法提出了蒲黄炭炮制的最佳工艺，所提
供的实验方法可靠，测定结果能反映客观实际，是对
蒲黄炭炮制条件和规范的可贵探索，也为蒲黄炭饮
片的质量控制做了初步探索。
总黄酮的测定方式一般有紫外分光光度法和高
效液相色谱法瞳]。紫外全波长扫描显示芦丁与蒲黄总
黄酮的甲醇溶液紫外光谱吻合性不好，因此考虑加显
色剂显色后测定其吸光度值。紫外分光光度法测定总
黄酮一般用的显色剂是NaNO：一A1(NO。3-NaOH系
统或A1C1。一NaAc(KAc)系统。蒲黄总黄酮甲醇提取
液加入NaNO：一A1(NO。)3-NaOH试剂后即产生絮状
沉淀，颜色由淡黄转为橙黄，换成甲醇定容后浑浊度
减轻，但仍然随时间和供试品浓度的增加而增加。芦
丁对照品加入试剂后颜色由淡黄转为樱红色，且非常
澄清。若使用A1C1。一NaAc试剂，则颜色由淡黄转为
亮黄，但仍发现有浑浊现象，而芦丁对照品加入试剂
后颜色由淡黄转为金黄色，澄清。因此，鉴于紫外分光
光度法测定总黄酮有较大误差，未予采用。
鉴于蒲黄中的黄酮类化合物分别是槲皮素、山
柰素、异鼠李素的单糖、双糖、三糖及糖分子上接有
桂皮酰基的苷，其苷元基本是异鼠李素及少量的山
柰素和槲皮素，所以采用将黄酮苷水解，得到的苷元
以HPLC法检测，测得苷元量的总和乘上平均转化
因子2．51，计算总黄酮苷的量。
通过实验比较表明，水解法测定蒲黄炭总黄酮
较为准确。本炮制工艺，将为制定系统合理的蒲黄炭
饮片质量标准奠定基础，为提高中药饮片的质量，保
证临床用药的安全性和有效性提供保障。
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万方数据
蒲黄炭饮片炮制工艺的规范化研究
作者： 严辉， 陈佩东， 丁安伟， YAN Hui， CHEN Pei-dong， DING An-wei
作者单位： 南京中医药大学药学院,江苏,南京,210046
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(12)

参考文献(2条)
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200612014.aspx