全 文 ：·208· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月
正交试验优选了哥王的提取工艺
陈 爽，邵曼莉，杨振宇，杜智敏+
(哈尔滨医科大学附属二院临床药物研究所，黑龙江哈尔滨 150086)
摘要：目的研究影响了哥王提取的各种因素，确定最佳提取工艺。方法采用正交试验，考察乙醇提取次数、加
醇量、醇体积分数、提取时间4个因素的影响，以乙醇浸膏收率、总黄酮的质量分数、抗炎效果为指标优选了哥王的
乙醇提取工艺。结果在所考察的因素中，对乙醇浸膏收率、总黄酮的质量分数、抗炎效果影响程度均为醇体积分
数>提取次数>提取时间>加醇量。3方面因素，以抗炎效果为主要指标，确定最佳提取工艺为A。B。C。D。，即75％
乙醇10倍量提取2次，每次4h。结论本实验采用的方法和指标适合于了哥王的提取。
关键词：了哥王；总黄酮；抗炎；正交试验
中图分类号：R284．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)02—0208—03
OptimumextractingtechnologyofWikstroemiaindicbyorthogonaltest
CHENShuang，SHAOMan—li，YANGZhen—yu，DUZhi—rain
(InstituteofClinicalPharmacy，theSecondAffiliatedHospitalofHarbinMedicalUniversity，Harbin150086，China)
Keywords：Wikstroemiaindica(L．)C．A．Meyer；totalflavones；antiinflammation；orthogonaltest
了哥王Wikstroemiaind ca(L．)C．A．Meyer
始载于《岭南采药录》，为瑞香料荛花属植物，苦寒、
微辛、有毒，清热解毒、化痰散结、通经利水，可用于
治疗扁桃体炎、腮腺炎、淋巴结炎、支气管炎、哮喘、
肺炎、风湿性关节炎、跌打损伤、麻风、闭经、水肿等
疾病口’2]。了哥王含有小麦黄素、羟基芫花素、酸性树
脂、挥发油、皂苷、多糖类、黄酮类等成分。其中黄酮
类成分有抗菌、抗炎、镇痛等作用[2‘3]。目前文献报道
了哥王提取溶剂有水、石油醚、乙醇、甲醇等H’5]。了
哥王对二甲苯所致小鼠耳部炎症有抑制作用[6]。为
探索药材有效成分提取的最大化，本实验用乙醇提
取，乙醇浸膏收率、总黄酮质量分数、抗炎效果为指
标，考察影响了哥王提取的主要因素，寻求最佳的提
取工艺条件。
1材料、试剂与仪器
了哥王购自安徽毫州敬德药业公司，经哈尔滨
医科大学附属二院临床药物研究所金瑞教授鉴定为
瑞香科荛花属植物了哥王W．indica(L．)C．A．
Meyer，取茎干燥粉碎后备用。芦丁对照品购自中国
药品生物制品检定所。其余试剂均为分析纯。
紫外可见分光光度计(日本岛津UV一2201
型)；超声波仪(昆山市超声仪器有限公司KQ2200E
型)；电子分析天平(日本岛津AEU一210型)；电热
恒温干燥箱(上海市跃进医疗器械一厂)。
昆明小鼠(哈尔滨医科大学动物中心)。
2方法与结果
2．1 因素水平的确定：采用L。(34)设计实验，以不
同倍数的乙醇、提取次数、醇体积分数、提取时间为
指标进行比较，因素水平安排见表1。
表1因素水平
Table1 Factorsandlevels
2．2 乙醇浸膏收率的测定：取了哥王粗粉50g，按
正交表中规定的条件进行回流提取，提取液滤过，回
收乙醇，浓缩成稠膏状，干燥至恒重，得干膏，称质
量，计算醇浸膏收率j
2．3总黄酮的测定
2．3．1供试品溶液制备：精密称取正交试验下的干膏
1g，置锥形瓶中，用石油醚超声脱脂3次，每次2h，弃
去石油醚层。剩余残渣挥于溶剂，加入甲醇45mL密
闭放置14h，水浴回流提取2h，放冷，滤过，滤液置于
50mL量瓶中，加甲醇至刻度，即得供试品溶液。
收稿日期：2006—04—12
作者简介：陈爽(1980一)，女，河南鹤壁人，硕士研究生，研究方向：新药研发与药代动力学。
Tel：(0451)86692623E—mail：chenshuan91215@tom．corn
*通讯作者杜智敏Tel：(0451)86605353E—mail：dzml956@126．corn
万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月·209·
2．3．2对照品溶液的制备：精密称取120℃干燥恒
重的芦丁对照品10mg，加甲醇溶解并定容至50mL
量瓶中，即得0．2mg／mL的对照品溶液。
2．3．3标准曲线的制备：分别取对照品溶液0．0、
法测定吸光度，按回归方程计算总黄酮的质量分数。
2．4抗炎效果的测定：采用二甲苯致小鼠耳部炎症
试验‘7|。小鼠18～22g，雄性，100只，随机分为10
组，每组10只。其中9组为实验组，分别ig给予提
2．0、4．0、6．0、8．0、10．0、12．0mL于25mL量瓶 取的醇浸膏，药物溶液浓度为8％，剂量为
中，加5％亚硝酸钠1．0mL，静置6min，加10％硝1．6g／kg，给药容积为0．4mL／20g；另l组为对照
酸铝1．0mL，静置6min后，加4％氢氧化钠10．0组，给予等体积的蒸馏水。每天ig给药一次，连续3
mL，加甲醇至刻度，摇匀，静置15min，进行全波长d。末次给药后1h，每鼠右耳两面均匀涂loo％二甲
扫描，在510nm处均有最大吸收。以该波长处吸光 苯致炎剂0．02mL致炎，左耳作对照。1h后处死小
值为横坐标，样品质量浓度(mg／mL)为纵坐标，得鼠，沿耳廓基线剪下两耳，用直径9mm打孔器打下
标准曲线回归方程为C=1．9649A+0．0035，，．一 双耳同一部位圆片，电子分析天平称重，计算肿胀度
0．9997，线性范围为0．4～2．4mg／mL。 (肿胀度一右耳片质量一左耳片质量)。对9组实验
2．3．4精密度试验：分别精密吸取的供试品溶液 组与蒸馏水组肿胀度进行t检验。
1．0mL，按实验方法操作测定5次吸光度，结果 2．5 正交试验结果与分析：试验结果见表2。方差
RSD分别为2．17％。 分析结果见表3。可见各组乙醇提取物对二甲苯所
2．3．5稳定性试验：取供试品溶液室温放置4、8、 致小鼠耳部炎症都有抑制作用，与蒸馏水组比较，第
12、16、20、24h测定吸光度，RSD为1．29％，说明供3、5、7组有显著性差别(P
于25mL量瓶中，加入芦丁对照品溶液 顺序均为醇体积分数>提取次数>提取时间>加醇
(0．2mg／mL)0．5mL，制备供试品溶液，测定吸光 量。方差分析表明：醇体积分数对浸膏收率、肿胀度
度，计算得平均回收率分别为99．12％(RSD为有显著影响，而其余3因素对结果影响不显著。以抗
1．66％)(，z一5)。 炎作用为主要指标，确定提取最佳条件为
2．3．7样品测定：精密吸取供试品溶液1．0mL，依 A。B。C。D：，即75％乙醇10倍量提取2次，每次4h。
表2提取工艺正交设计试验结果
Table2 Resultsofextractingtechnologyby rthogonaltest
实验号 A B C D 浸膏收率／％ 总黄酮／％ 肿胀度(_士s)／mg
浸膏收率
总黄酮
肿胀度
J
4
8
0
蒸馏水组
37．38
45．58
39．20
8．20
28．16
25．54
23．89
4．27
7．5
8．O
8．5
1．O
40．68
39．34
42．86
3．52
26．03
24．23
27．33
3．1
8．1
8．2
7．7
0．5
43．04
47．92
31．92
16．00
27．89
30．59
19．11
11．48
7．6
7．O
9．4
2．4
38．50
43．36
41．02
4．86
24．25
27．58
25．76
3．33
8．3
7．6
8．1
O．7
12．24
15．04
10．10
17．44
10．82
17．32
11．00
13．48
15．44
与蒸馏水组比较：’P
*
*
*
*
*
2
3
O
5
0
5
2
1
4
5
●
●
●
●
●
●
●
●
●
1▲1
1
1i
1
1}l士±±土±±±土+一士
5
1
9
4
3
3
2
8
5
5
●
●
●
●
●
●
●
●
●
●
2
2
2
2
3
2
3
2
2
4
鼠＆鼠R鼠＆恐R鼠&配R
万方数据
·210· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月
表3方差分析
Table3 Analysisofvariance
方差来源 SS
浸膏收率
总黄酮
肿胀度
A
B(误差)
C
D
总和+
A
B(误差)
C
D
总和
A
B(误差)
C
D
总和
11．7475
2．1043
44．8299
3．9384
62．6201
3．091
1．6156
24．0188
1．8535
30．5790
0．1667
0．0467
1．040
0．0867
1．3401
1．5456
0．8079
12．0094
0．9268
5．58
1．00
21．30
3．56
1．00
22．22
，’o 05(2，2)一19．00
2．6 验证试验：按A。B。C。D：的条件进行提取3次，
结果浸膏得率平均为17．98％，总黄酮的质量分数
平均值为11．14％，肿胀度为(1．9±1．1)mg。由实
验结果看出，利用正交试验方法确定的A，B。C。D：为
最佳的工艺条件。
3讨论
了哥王用乙醇为提取剂，有利于黄酮类化合物
的溶出且可提出水溶和脂溶的成分，乙醇毒性小，来
源方便。乙醇体积分数对总黄酮影响最大，75％乙醇
提取黄酮类化合物较多，体积分数增加，提取量下
降，可能由于以下两种原因。一方面醇体积分数增
加，植物细胞皱缩，不利于黄酮类成分溶出；另一方
面提取液颜色加深，说明一些醇溶性的杂质、色素等
成分溶出量增加，可能这些成分与黄酮类化合物竞
争乙醇～水分子结合，导致提取率下降。
通过正交试验已考察到醇体积分数对浸膏收
率、抗炎效果有显著影响，75％乙醇提取量较多，抗
炎效果好，提取黄酮类化合物较多，所以确定乙醇体
积分数为75％。由于加醇量对结果影响最小，虽然
乙醇6倍量节约能源，但10倍量更有利于有效物质
的浸出。所以正交试验优选出最佳提取条件为
A，B。C。D：，即用75％乙醇，加10倍量，提取2次，每
次4h。由实验结果看出，不同工艺条件所获得乙醇
浸膏收率可相差7．34％，总黄酮的质量分数可相差
5．81％，肿胀度可相差1．2mg。
有研究表明了哥王中黄酮类成分有抗炎作用，
所以本实验以总黄酮质量分数为指标，结果看出肿
胀度与浸膏得率无关，而与总黄酮质量分数有关，再
次证明了黄酮类化合物有抗炎作用。
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何首乌清蒸工艺研究
赵荣华，赵声兰，解奉江，饶高雄，毛晓健
(云南中医学院中药炮制研究中心，云南昆明 650200)
何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum
multiforumThunb．的干燥块根。何首乌的炮制对其
化学成分和药理作用均有一定的影响。何首乌常用
的方法为清蒸法。何首乌中结合蒽醌随着蒸制时间
的延长而减少，结合蒽醌水解反应属于一级反应，反
应物为游离蒽醌‘引。常用的清蒸炮制方法费时费
力Ⅲ，而高温炮制则时间短。因此本实验以结合蒽醌
的量和淀粉糊化程度为指标，研究了120℃下长、
收稿日期：200604—06
基金项目：国家中药现代化科技产业(云南)基地建设专项基金资助项目
作者简介：赵荣华(1958～)，男，昆明人，中药炮制研究中心主任，主要从事中药炮制方面的研究。
Tel：(0871)6212611E～mail：zharh@tom．net
万方数据
正交试验优选了哥王的提取工艺
作者： 陈爽， 邵曼莉， 杨振宇， 杜智敏， CHEN Shuang， SHAO Man-li， YANG Zhen-yu， DU
Zhi-min
作者单位： 哈尔滨医科大学附属二院临床药物研究所,黑龙江,哈尔滨,150086
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(2)
被引用次数： 4次
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