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Fingerprints of Salvia miltiorrhiza water-soluble components by HPLC compared with fingerprint reference substance

丹参水溶性成分HPLC指纹图谱指纹对照品对照法的研究



全 文 :·360· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月
明方法精密度较好,符合体内药物浓度测定的要求。
3.5 回收率试验:精密量取芍药苷对照品溶液5、
10、20、40pL,室温下分别加入空白血浆50弘L,再
加入甲醇定容,制成一定质量浓度的芍药苷血浆对
照品溶液,摇匀后按血样预处理项下处理、测定,结
果见表1,不同质量浓度下均有大而稳定的回收率。
表1血浆中芍药苷的回收率试验(露一3)
Table1 Recoveriesofpaeoniflorininplasma锄一3)
3.6血药浓度的测定:取已制备好的血浆样品,按
上述色谱条件测定,由标准曲线计算出芍药苷的血
药浓度。小鼠ig赤芍提取物后血浆中芍药苷质量浓
度为(42.28-1-4.43)ng/弘L(卵一10),ig赤芍胡椒复
方后血浆中芍药苷质量浓度为(78.56±5.61)ng/
ttL(行一10)。
4讨论
目前复方给药后血浆中药物效应成分可以定量
的理论已经提出,但研究中药的体内代谢及中药主
要有效成分体内检测方法是一个比较薄弱的方面。
本研究参考有关文献[1~3],经反复对比试验,最后选
定甲醇一水(38:62)为流动相,在此条件下,小鼠血
浆中芍药苷与血浆中蛋白杂峰、内源性物质、芍药提
取物的其他成分以及这些成分的体内代谢物和结合
性成分均能很好的分离,峰形良好,且主峰时间适宜
(芍药苷保留时间约13rain)。本方法最低检测质量
浓度为1.49ng//-L,平均回收率大于90%,日内、日
间RSD均小于10%,精密度好,符合体内药物浓度
测定的要求。
在血液样品处理中筛选了甲醇、乙醇、加热等方
法,最终采用乙醇沉淀蛋白,操作程序简便,样品损
失率低。本检测方法的建立为活血温里复方中活血
药主要有效成分血药浓度和生物利用度的研究提供
了可靠的检测方法。
致谢:四川大学周文铨教授,四川省肿瘤研究所
董昱研究员、唐小海主任医师对本研究工作的支持。
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丹参水溶性成分HPLC指纹图谱指纹对照品对照法的研究
宋敏,杭太俊’,张正行
(中国药科大学药物分析室,江苏南京 210009)
摘要:目的建立HPLC法测定丹参药材水溶性成分的指纹图谱标准,确定指纹对照品对照法的作用,实现丹参
药材指纹图谱标准的重现与易控。方法采用C。。色谱柱,甲醇一1.o%冰醋酸溶液梯度程序洗脱,体积流量为1.0
mL/min。以丹参对照药材制备指纹对照品进行色谱系统适用性试验,考察梯度洗脱程序、流动相酸度以及色谱柱
填充剂对指纹图谱重现性的影响。结果建立的指纹图谱测定系统,对丹参水溶性成分分离良好,选择色谱图中15
个特征峰作为指纹峰。将不同产地的10批药材的指纹图谱与同时测定的指纹对照品图谱进行比较,结果即使改变
色谱柱填充剂也可以获得一致的相似性评价结论。结论 色谱指纹图谱可以体现药材中多个成分的信息,但色谱
系统的变化对指纹图谱的重现性有很大的影响,而且在不同的色谱柱条件下所得的指纹图谱结果不尽相同。因而
为了实现指纹图谱标准的重复可控,应同时规定指纹图谱测定的色谱系统适用性条件和指纹对照品。
关键词:丹参;高效液相色谱法;指纹图谱;指纹对照品
中图分类号:R286.02 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2005)03—0360—05
收稿日期:2004—05—18
作者简介:宋敏(1977一),女,重庆人,博士研究生,研究方向为色谱与光谱分析。
Tel:(025)83271090E—mail:eqsongmin@sina.com
*通讯作者
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月·361·
FingerprintsofSalviamiltiorrhizawater—solublecomponents
byHPLCcomparedwithfingerprintreferencesubstance
SONGMin,HANGTai—jun,ZHANGheng—xing
(DepartmentofPharmaceuticalAnalysis,ChinaPharm ceuticalUniversity,Nanjing210009,China)
Abstract:ObjectiveToestablisha stableandreliableHPLCmethodandfingerprintreference
substanceforthemeasurementofthefingerprint。theprac icalqu itycontrol,andassayofthewater—
solublecomponentsofSalviarniltiorrhiza.MethodsThHPLCwasrunonC18columnswithmethanol一
1.0%glacialaceticacidsolutionasmobilephaseingradientelutionm deat8flowrateof1.0mL/min.
Thechromatographicsystemsu tability,thegradi ntelutionm de,mobilephasacidity,andtheffectof
columntypeonfingerprintrepeatabilityweretested.ResultsTheHPLCfingerprintsofthewater—soluble
extractofreferenceS.miltiorrhizawereobtainedwithverygoodresolutionundertheestablished
chromatographicsystem.Fifteenpeaksinthechromatogramswe eselectedforthefingerprint
identificationandqualitycontrolofS.miltiorrhiza.ThequalityoftenbatchesofS.miltiorrhizasamples
fromdifferenthibitatswereassessedbycomparingtheirchromatographicfingerprintswiththereference
fingerprintsobtainedatthesametime,andthesimilarityshowedno ifference,eventhoughthecolumn
fillerwaschanged.ConclusionBecausethinherentcomplexityofmedicinalmaterialcomponentshas
beenreflectedbychromatographicfingerprints,therearemanyfactorsaffectingthefingerprint
repeatabilityforthechangesofcolumntype.TheresultsofthequalityassessmentofS.miltiorrhiza·
usingfingerprintsfromdifferentcolumns,arenotallcoincidence.Inordertoobtainthecomparableand
repeatableresultsindifferentlaboratories,itismuchpracticalwithbothadefinedchromatographicsystem
suitabilityandafingerprintreferencesubstance.
Keywords:SalviamiltiorrhizaBunge;HPLC;fingerprints;fingerprintreferencesubstances
丹参是唇形科植物丹参Salviamiltiorrhiza
Bunge的干燥根及根茎。其分布广泛,以安徽、山西
等地产量最大。但传统认为四JII龙安、中江、平武栽
培者质优。丹参主要含有脂溶性和水溶性两类活性
成分。前者具有抗菌、抗炎及扩张血管作用;后者用
于治疗冠心病、栓塞和中风。
指纹图谱是控制天然药物质量的有效方式之
一。目前丹参水溶性成分的指纹图谱研究已有较多
报道,大多以固定色谱系统条件下的相对保留时间
和相对峰面积为主要指标对指纹图谱进行评
定[1~4]。但是仅仅固定色谱系统,并不足以保证指纹
图谱的耐用性,难以在不同实验室重现。解决该难点
的新思路和设想时有报道,如对中药挥发性成分的
系列正构烷烃为参照的保留指数法[5]、用代表性的
样品等量混合后形成的“对照指纹图谱”用以进行样
品指纹图谱与标准之间的相似度比较法[6]。本实验
用“指纹对照品”(由典型对照药材或典型的代表性
样品,按指纹图谱标准建立的方法与条件制备的供
指纹图谱测定作对照的具有代表性的提取物)[6],对
丹参指纹图谱测定的色谱系统适用性条件进行了研
究,考察了梯度洗脱程序、流动相酸度、以及色谱柱
型号与品牌对指纹图谱重复性的影响。并在不同色
谱柱系统下,以指纹对照品为参比评价不同产地丹
参药材与其相似度。
1仪器与试药
WatersAlliance2695高效液相色谱系统(沃特
斯科技公司),AgilentHP1100LC—MSD色谱系统
(安捷伦科技公司)。甲醇、冰醋酸均为AR试剂,纯
净水自制。色谱柱分别为ShimpackC。。(150mm×
6.0mm,5“m)、ZorbaxC18(250mm×4.6mm,5
弘m)、LichrospherC18(250mmX4.6mm,5肛m)、
WatersC18(250mm×4.6mm,5弘m)、WaterC18
(150mm×4.6mm,5肛m)。
丹参药材分别于2000--2003年购自四川I、河
北、内蒙、云南、重庆、安徽6个省市的丹参栽培基地
或药材公司,由南京师范大学生命科学院龚祝南教
授鉴定,见表1。丹参对照药材购自中国药品生物制
品检定所(批号:0923—200006)。
2方法与结果
2.1供试品溶液的制备:称取丹参药材粗粉5.0g,
加600mL水,煮沸3h,抽滤,用适量水洗涤残渣,
合并滤液,再用0.45/ml滤膜抽滤。减压回收至约
60mL,定量转移至100mL量瓶中,用水稀释至刻
度,摇匀,即得。
2.2指纹对照品溶液的制备:取丹参对照药材同法
制备,即得。
万方数据
·362· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月
表1丹参药材来源
Table1 OriginofdifferentS.miltiorrhiza
样品号 产地 品种
2.3色谱条件及系统适用性试验:用十八烷基硅烷
键合硅胶为填充剂;甲醇一冰醋酸溶液为流动相进行
梯度程序洗脱;体积流量为1.0mL/min;柱温为30
cC;检测波长为25412m。理论板数以丹参酸乙色谱
峰计算不低于3000。
2.4指纹图谱的测定:在规定的条件下,取供试品
溶液或对照品溶液各20肛L,分别注入色谱仪,记录
色谱图,以相对峰面积大于0.6%和峰分离度大于
0.8为限度,选取特征成分色谱峰作为指纹特征峰。
以丹参酸乙为参比物质计算相对保留时间(a),相对
峰面积(AR)为入选峰面积归一化值。根据《中药注
射剂色谱指纹图谱实验研究技术指南(试行)》要求,
按夹角余弦法计算指纹图谱相似度(degreeof
similarity,DS)表示色谱指纹图谱的一致性。
2.5 梯度洗脱程序试验:采用ShimpackC。。色谱
柱,甲醇(A)一1.0%冰醋酸溶液(B)梯度程序洗脱,
I:0min(5%A)~90rain(95%A),Ⅱ:0min
可检出12个特征成分色谱峰,然而指纹图谱的相似
度仍良好(DS>0.90)。所以仅以指纹图谱的相似度
进行判定尚不够全面。
0 15 )U 45 60 75
时间t/rain
图1 ShimpackC,。柱上丹参水溶性成分
HPLC指纹图谱
Fig.1HPLCfingerprintsofS·miltiorrhizawater-
solublecomponentsatShimpackClsolumn
2.6流动相酸度变化考察:在其他色谱条件均相同
的条件下,以梯度程度Ⅲ进行洗脱,改变流动相组
成,分别以甲醇(A)-0.9%冰醋酸溶液(B)、甲醇
(A)一1.OH冰醋酸溶液(B)、甲醇(A)一1。1%冰醋酸
溶液(B)为流动相,测定丹参指纹对照品溶液的指
纹图谱。结果表明,各色谱峰的a比较稳定,RSD均
小于2.o%。以流动相为甲醇(A)一1.oH冰醋酸溶液
(B)时所得的色谱图为参比,计算流动相为甲醇
(A)一0.9%冰醋酸溶液(B)和甲醇(A)一1.1%冰醋酸
溶液(B)时所得的色谱图的相似度,结果相似度均大
于0.998。可见流动相酸度的微小变化不影响丹参水
溶性成分指纹图谱的相对保留时间和相对峰面积。
(5%A)~70rain(95%A)~85min(95%A),Ⅲ:2.7 色谱柱的选择:分别在ShimpackC。。(150
0min(5%A)~80min(61%A)~90min(95%mm×6.0mm,5gm)、ZorbaxC】8(250mmX4.6
A),分别对丹参指纹对照品溶液进行指纹图谱分 mm,5pm)、LichrospherC。8(250mm×4.6mm,5
析,比较其a和AR的变化。典型图谱见图1,结果见btm)、WatersC18(250mm×4.6mm,5弘m)和
表2。表明在不同的梯度程序洗脱下,特征成分的a WaterC。。(150mm×4.6mm,5弘m)柱上,以A—B
及An均有较明显的变化,梯度程度I、Ⅲ可检出丹 按梯度程序Ⅲ,对丹参指纹对照品溶液进行测定,考
参水溶性成分中15个特征成分色谱峰,梯度程序Ⅱ 察色谱柱变化对指纹图谱的影响。
表2不同梯度条件下丹参水溶性成分HPLC指纹特征的比较
Table2 ComparisonofHPLCfingerprintsofS.miltiorrhizawater—solublecomponentsunderdifferentgradientelution嚣塞霉特征—1———了——————了——1———i——了—j兰F!—丐——1五——了_——五——ir而相似度(DS)
I a 0.2590.2950.3760.680.7690.8410.880.8940.9190.950.961 .0001.050I.0741.168
0.948
以R/%3.395.47 9.6I 2.19 0.905.04 1.71 0.9416.246.881.0142.320.71 1.96 1.61
I a 0.1690.1920.26i0.6110.7290.8150.8750.8950.9090.9320.9541.000一 一 一
0.989
AR/%3.206.45 8.47 2.801.00 5.42 1.700.6318.294.10 9.4638.480.000.000.00
■ a 0.2090.2370.3130.6420.7480.8220.8710.8880.9070.9240.9461.000I.0531.0831.177
1.000
AR/%3.326.64 9.14 2.96 0.74 5.201.720.6318.534.8211.7531.210.64 1.121.59
a的RSD/%21.2321.2321.31 8.205.29 2.70 1.620.570.44 0.73 1.42 0.79 0.000.19 0.62
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月·363·
结果表明在ZorbaxC18(2501Timx4.61Tim,5
肛m)色谱柱上可检出丹参水溶性成分中13个色谱
峰,而在其他4种色谱柱上可检出15个色谱峰。在
WatersC18(250mm×6.0mm,5弘m)柱上所得指纹
图谱中色谱峰分离度最好。色谱图见图1~4。
WatersC18与ShimpaekC18(150mm×6.0mm,5
弘m)柱上测得的HPLC指纹图谱比较,分离得到的
8号和9号色谱峰的出峰顺序不同;而在ZorbaxC。。
(250mlTl×4.61Tim,5肚m)柱上则有多个成分峰被
合并,包括ShimpackC18(150mm×6.0mm,5弘m)
色谱柱上分离得到的10号和11号峰。计算不同色
谱柱上测得指纹图谱的相似度,结果见表3。表明色
谱柱的变化对丹参指纹图谱的相对保留时间和相对
峰面积均有较明显的影响,然而计算所得的相似度
均大于0.90。
11
0 15 30 45 50 75
时间,/min
图2 ZorbaxC。s柱上丹参水溶性成分HPLC指纹图谱
Fig.2HPLCfingerprintsofS.miltiorrhizawater—
solublecomponentsatZorbaxC18column
O 15 30 45 60 75
时问t/min
图3 WatersC18(250mm×4.6mm,5vm)柱上
丹参水溶性成分HPLC指纹图谱
Fig.3HPLCfingerprintsofS.miltiorrhizawater—
solublecomponentsatWatersC18(250mm×
4.6mm,5vm)column
时间t/rain
图4 WatersC18(150mm×4.6mm,5um)柱上
丹参水溶性成分HPLC指纹图谱
Fig.4HPLCfingerprintsofS.miltiorrhizawater—
solublecomponentsatWatersC18(150mm×
4.6mm,5vm)column
表3在不同色谱柱上丹参水溶性成分HPLC指纹特征的比较
Table3 ComparisonofHPLCfingerprintsofS.miltiorrhizawater—solublecomponentsobtainedatdifferentcolumns
色谱柱 特征—————————————————————————』生二!—————————一1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 “ 12 14
相似度
(DS)
ShimpackC】8 d 0.2080.2370.3lZ0.6420.706
(150Inm×6.0mm.5pm) AR/%1.410·744.081·18 2.41
LichrosperC18 a 0.2210.2520.3320.6540.713
(250mm×4川m6,5pm)AR/%2.465.75 7.89l·91 1.32
ZorbaxC】8 a 0.1630.1790.2560.5830.688
(250mm×4.omm6,5p )AR/%1.500·664.921·48 1.61
WatersC】8 a 0.1290.1420.2010.5550.642
(150mm×4.6nlm.5pm) AR/%1.431.11 3.871·21 2.04
WatersC18 n 0.1440.1710.2410.5960.664
(250mm×4.6film,5pm) AR/%1.390.78 4.25I·29 2.25
a的RSD/%23.1223.6919.916.824.33
MS鉴别丹参素 原儿茶醛
0.7480.8250.
2.75 3.732.
0.7550.8300.
2.03 4.941.
0.7370.7950.
1.71 4.27 2.
0.6890.7790.
1.7 4.3313.
0.7080.8010.
2.19 4.3413.
3.83 2.64 1.
紫草酸
0.9090.933
0.48 6.54
0.9170.950
8.22 6.29
0.9150.95
7.55 3.31
0.9030.93
2.527.1
0.9150.934
2.3l 6.07
0.641.03
丹酚酸C
0.9481.0001.08
9.3 50.1 1.43
.9581.0001.06
3.0040.930.44
—— 1.000——
0.0056.550.00
0.9511.0001.06
6.4149.342.61
0.9561.0001.04
6.6849.483.03
0.490.00 1.53
迷迭香酸丹参酸乙
1
1.0
2.6
1.O
0.9
1.1
2.3
1.0
2.1
1.0
2.O
1.7
0.964
0.904
0.937
1.000
1.000
2.8指纹对照品对照法指纹图谱比较:分别在不同
色谱柱上,以甲醇(A)一1.O%冰醋酸溶液(B)按梯度
程序皿洗脱,以丹参指纹对照品为参比,对10批不
同来源的丹参药材进行指纹图谱测定分析。结果见
表4。即使在不同的色谱柱条件下,以相应指纹对照
品为参比,测得各药材的相似度结果也高度一致
(RSD<0.6A)。表明以指纹对照品对照法进行指纹
图谱质量分析具有更好的耐用性。10批不同来源的
¨一Ⅲ曲m%Ⅲ孙Ⅲ趴Ⅲ钉%
1
O;1
1
O
1
O
2
7●
l
9
7
∞盯盯虬舳盯舶拍盯舾博
万方数据
·364· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月
丹参药材中,除大紫丹参外均与指纹对照品有较好
的相似性(DS>0.96)。大紫丹参与指纹对照品有较
大差异,这与药材鉴定结果及相关文献相符[7]。大紫
丹参为非正品丹参,仅在云南等地区作为习用品使
用。因此指纹对照品与供试品药材随行测定,可以评
定不同来源的药材质量。
表4 不同色谱柱上指纹对照品对照法测定丹参
水溶性成分HPLC指纹图谱的相似度
Table4 Comparisonof imilarityofdifferentS.
miltiorrhizawater-solublecomponents
obtainedatdifferentcolumnswith
referencetorespectiveref rence
chromatographicfingerprints
样shi“pack
c18妣1c18 w8‘。‘8c18
w8‘erscl8均RsD
(150mm× (250mm× (250mm× (150mmX
品 值 /%
6.Omm,5tlrn)4.6mill,5m)4.6ibm,5m)4.6mm,5阻)
0.996
0.967
0.960
0。986
0.246
0.992
0.989
0.979
0.975
1.000
O.9970.222
0.9710.445
0.9630.494
0.9820.443
0.282 2.835
0.9920.382
0.9890.429
0.980.385
0.9730.541
1.000
2.9 指纹图谱特征成分鉴别:采用ShimpackC,。
(150ITIITI×6.0nllTI,5mn)柱,甲醇一1.o%冰醋酸溶
液按梯度程序Ⅲ洗脱,对丹参水溶性成分进行API—
ESI测定鉴定。API—ESI工作参数:干燥氮气温度
350℃,流量10.0L/min,雾化器压力275.8kPa
(40Psi),裂解电压70eV,毛细管电压4000V,扫
描质量范围m/z100~1000。在酸性条件下由于丹
参水提液中含有大量酚酸性成分,在质谱负离子检
测时有较强的响应。液一质联用测定时分别进行负离
子和正离子扫描测定。根据各峰的质荷比及相关文
献[8]对其进行归属确认:0c一0.208(1号峰),为丹参
素,[M—HI—m/z197,[2M—H]一m/z395;o【一0.312
(3号峰),为原儿茶醛,[M—HI—m/z137;a一0.825
(7号峰),为紫草酸,[M—H]一m/z537,[M+Na]+
m/z561,[2M+Na]+m/z1 099;a一0.909(9号
峰),为丹酚酸C,[M—HIm/z493;a一0.948(11
号峰),为迷迭香酸C,[M—H]一m/z359,[M+Na]+
m/z383,[2M+Na]+m/z743;o【一1.000(12号
峰),是HPLC—UV色谱图中最大的吸收峰,为丹参
酸乙,[M—HI—m/z717’[M+Na]+m/z741,脱去
一分子丹参素所形成的碎片离子优/z521。
3讨论
3.1丹参水溶性成分提取时,分别煮沸1.5、3.o、
4.5h。结果表明煮沸3.0h时丹参药材中水溶性成
分提取基本达到平衡。
3.2实验结果表明同一样品在不同的色谱系统中
所得的指纹图谱结果不尽相同。梯度洗脱程序及色
谱柱型号品牌等对指纹图谱检出的色谱峰数、相对
保留时问和相对峰面积均有明显影响。因此,采用指
纹对照品进行色谱系统适用性考察,以此消除在不
同的条件下(色谱系统、实验室等)影响指纹图谱重
复性和耐用性的因素很有必要。
3.3在不同的色谱柱条件下,以同时测定的指纹对
照品的指纹图谱为参比进行相似度计算评定不同来
源丹参药材的质量,相似度评定结果基本一致。显示
了指纹对照品和色谱系统适用性条件的同时约定,
对中药指纹图谱标准法质量控制的重要作用。对于
中药制剂的指纹图谱标准,可同样用其指纹对照品
进行质量控制。
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万方数据
丹参水溶性成分HPLC指纹图谱指纹对照品对照法的研究
作者: 宋敏, 杭太俊, 张正行, SONG Min, Hang Tai-jun, ZHANG Zheng-xing
作者单位: 中国药科大学,药物分析室,江苏,南京,210009
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2005,36(3)
被引用次数: 13次

参考文献(8条)
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本文读者也读过(10条)
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2. 周欣.王道平.梁光义.张雪琴.张中林.ZHOU Xin.Wang Daoping.LIANG Guangyi.Zhang Xueqin.ZHANG Zhonglin
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引证文献(14条)
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3.王永来.刘志承.吕萍.刘纪青 天麻药材HPLC指纹图谱研究[期刊论文]-中国医药导刊 2011(3)
4.储德韧.周群.郁露.孙素琴 红外光谱阵列相关系数法在丹参鉴别中的应用[期刊论文]-光谱学与光谱分析
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5.黄小玲.杨春燕.袁慧文 天麻药材高效液相色谱指纹图谱研究[期刊论文]-中国药业 2011(2)
6.唐旭利.刘静.李国强.钟惠民 丹参药材水溶性成分HPLC化学指纹图谱研究[期刊论文]-中成药 2008(3)
7.张益嘉.吴铁.周湘君.刘力名 丹参和丹酚酸B对抗泼尼松致大鼠皮肤衰老作用的观察[期刊论文]-中国医院药学杂
志 2008(20)
8.雷敏.宋敏.王爽.杭太俊 丹参制剂中丹参水溶性成分的指纹对照法质量分析[期刊论文]-中国药科大学学报
2008(3)
9.王立萍.周凤琴 近十年来丹参指纹图谱的研究进展[期刊论文]-齐鲁药事 2009(2)
10.陈珺.SONG Min.张钰.ZHANG Si-yun.杭太俊 粉葛与野葛中异黄酮的HPLC指纹对照和比色测定[期刊论文]-中国
新药杂志 2008(14)
11.孙国祥.孙金山.赵新 丹参水溶性成分HPLC数字化指纹图谱研究[期刊论文]-中南药学 2008(3)
12.颜克英.高景莘.吴晓青 论何首乌质量控制模式的创新与发展[期刊论文]-中国现代药物应用 2009(7)
13.李锐碧 香丹注射液化学成分与制备工艺研究[学位论文]硕士 2006
14.乔雪.徐曼.韩健.果德安 中药复方冠心Ⅱ号的化学成分及药理研究进展[期刊论文]-世界科学技术-中医药现代
化 2007(3)


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